Name: a static self-directed method for generating brain organoids from human embryonic stem cells
Uploaded: 2020-03-04T12:00:00
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Agradecemos ao Yale Stem Cell Core (YSCC) e ao Yale Cancer Center (YCC) pela ajuda. Agradecemos ao Dr. Jung Kim por sua revisão da neuropatologia. Este trabalho foi apoiado pelo Connecticut Regenerative Medicine Research Fund, March of Dimes e NHLBI R01HL131793 (S.G.K.), o Yale Cancer Center e o Yale Cancer Biology Training Program NCI CA193200 (E.B.) e um generoso presente irrestrito de Joseph e Lucille Madri.

1. Manutenção de células-tronco
<ol><li>Mantenha hESCs em uma camada de fator de crescimento reduzido matriz de membrana do porão (ver a Tabela de Materiais, a partir de agora simplesmente referida como matriz) de acordo com as instruções do fabricante.<ol>
<li>Para revestir uma placa de 6 poços ou um prato de 10 cm, misture 100 μL de matriz com 5,9 mL de meio Águia modificado de Dulbecco (DMEM)/F12. Enrole as placas em filme de parafina e armazene durante a noite a 4°C. Use-as no dia seguint...

<ol>
	<li>Northcutt, R. 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A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrigel:+a+complex+protein+mixture+required+for+optimal+growth+of+cell+culture.">Matrigel: a complex protein mixture required for optimal growth of cell culture.</a> Proteomics. 10 (9), 1886-1890 (2010).</li><li>Qian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain-Region-Specific+Organoids+Using+Mini-bioreactors+for+Modeling+ZIKV+Exposure.">Brain-Region-Specific Organoids Using Mini-bioreactors for Modeling ZIKV Exposure.</a> Cell. 165 (5), 1238-1254 (2016).</li><li>Sloan, S. A., Andersen, J., Pasca, A. M., Birey, F., Pasca, S. 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G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minocycline+mitigates+the+effect+of+neonatal+hypoxic+insult+on+human+brain+organoids.">Minocycline mitigates the effect of neonatal hypoxic insult on human brain organoids.</a> Cell Death and Disease. 10 (4), 325 (2019).</li><li>Bergmann, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood-brain-barrier+organoids+for+investigating+the+permeability+of+CNS+therapeutics.">Blood-brain-barrier organoids for investigating the permeability of CNS therapeutics.</a> Nature Protocols. 13 (12), 2827-2843 (2018).</li><li>Mansour, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vivo+model+of+functional+and+vascularized+human+brain+organoids.">An in vivo model of functional and vascularized human brain organoids.</a> Nature Biotechnology. 36 (5), 432-441 (2018).</li><li>Pham, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+human+vascularized+brain+organoids.">Generation of human vascularized brain organoids.</a> Neuroreport. 29 (7), 588-593 (2018).</li><li>Boisvert, E. M., Denton, K., Lei, L., Li, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+specification+of+telencephalic+glutamatergic+neurons+from+human+pluripotent+stem+cells.">The specification of telencephalic glutamatergic neurons from human pluripotent stem cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (74), (2013).</li></ol>

Semelhante a outros modelos organoides, este é um sistema artificial que vem com várias ressalvas. Embora houvesse pouca variação de lote a lote em termos de níveis gerais de expressão, organoides individuais apresentaram diferenças. Por exemplo, a localização das áreas positivas Sox-2 não era idêntica em cada organoide(Figura 3). Embora o qPCR seja adequado para procurar mudanças globais em lotes de células, técnicas adicionais como a RNAseq de célula única serão utilizadas em estudos ...

Devido a uma miríade de limitações práticas e éticas, houve muita dificuldade em estudar o cérebro humano. Embora estudos que utilizam roedores tenham sido críticos para nossa compreensão do cérebro humano, o cérebro do rato tem muitas diferenças1,2. Curiosamente, os camundongos têm uma densidade neuronal que é pelo menos 7 vezes menor que o cérebro primata3,4. Embora os primatas estejam mais próximos dos humanos do que os roedores do ponto de vista evolutivo, não é prático para a maioria dos pesquisadores trabalhar com eles. O objetivo deste protocolo era recapitular muitas características importantes do cérebro humano usando um método simplificado e menos caro sem a necessidade de uma matriz de membrana de porão heterologous ou fatores de crescimento exógenos, mantendo a diversidade celular cerebral e a organização celular.
O trabalho formativo do laboratório Sasai utilizou a cultura livre de soro do método de corpos embrionários (SFEBq) para gerar tipos de células neuronais bidimensionais bidimensionais de células-tronco sinalizadas (ESCs)5,6. Muitos métodos organoides cerebrais humanos seguiram um caminho relativamente semelhante das ESCs sinalizadas7,8. Em contraste, este protocolo começa com clusters de ESCs humanos destacados (HESCs), semelhantes aos passos iniciais do trabalho seminal dos laboratórios Thomson e Zhang antes das etapas de revestimento9,10, bem como o passo inicial do protocolo organoide cerebral do laboratório Pasca antes da adição de fatores de crescimento exógenos11. Matrizes de membrana do porão (por exemplo, matrigel) têm sido utilizadas em muitos protocolos organoides cerebrais e tem se mostrado um andaime eficaz8. No entanto, as matrizes de membrana do porão mais comumente utilizadas não vêm sem complicações, pois copurificam com quantidades desconhecidas de fatores de crescimento com variabilidade em lote a lote durante a produção12. Além disso, essas matrizes podem complicar a imagem e aumentar o risco de contaminação e custo.
Embora os organoides cerebrais humanos possam ser usados para responder a muitas perguntas, há certas limitações a ter em mente. Por um ano, a partir de células-tronco embrionárias, os organoides se assemelham mais a cérebros imaturos do que cérebros idosos e, como tal, podem não ser modelos ideais para doenças que ocorrem na velhice, como a doença de Alzheimer. Segundo, enquanto nosso protocolo encontrou marcadores de desenvolvimento cerebral, cérebro médio e hindbrain que são úteis para estudar o efeito de um tratamento ou doença em células de múltiplas regiões cerebrais em concerto, outros protocolos podem ser seguidos para se concentrar em regiões cerebrais específicas13,14. Finalmente, outra limitação dos modelos organoides é a de tamanho, enquanto o comprimento médio de um cérebro humano aproximadamente 167 mm, organoides cerebrais feitos com o uso de agitação crescem até 4 mm8 e os organoides formados por este protocolo crescem para 1-2 mm por 10 semanas. No entanto, este protocolo fornece uma ferramenta importante para estudar o tecido cerebral humano e a interação de múltiplos tipos de células.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 goat anti-mouse</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA</td>
			<td>A11029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 546 goat anti-rabbit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA</td>
			<td>A11035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Supplement</td>
			<td>Gibco, Waltham, MA, USA</td>
			<td>17504-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bFGF</td>
			<td>Life Technologies, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>PHG0263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>A9647</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BX43 microscope</td>
			<td>Olympus, Shinjuku, Tokyo, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI stain</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase</td>
			<td>STEMCELL Technologies, Vancouver, Canada</td>
			<td>07913</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA</td>
			<td>11330-032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS</td>
			<td>Gibco, Waltham, MA, USA</td>
			<td><a href="https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/10010023" target="_blank">10010023</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FluroSave</td>
			<td>MilliporeSigma, Burlington, MA</td>
			<td>345789</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GFAP antibody</td>
			<td>NeuroMab, Davis, CA</td>
			<td>N206A/8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Growth Factor Reduced Matrigel (Matrix)</td>
			<td>Corning, Corning, NY, USA</td>
			<td>356231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H9 hESCs</td>
			<td>WiCell, Madison, WI, USA</td>
			<td>WA09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>9041-08-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iQ SYBR Green Supermix</td>
			<td>Bio-Rad, Hercules, CA, USA</td>
			<td>1708880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iScript cDNA Synthesis Kit</td>
			<td>Bio-Rad, Hercules, CA, USA</td>
			<td>1708891</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Gibco, Waltham, MA, USA</td>
			<td>25030-081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monothioglycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>M6145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mTESR media</td>
			<td>STEMCELL Technologies, Vancouver, Canada</td>
			<td>85850</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 NeuroPlex</td>
			<td>Gemini Bio Products, West Sacramento, CA, USA</td>
			<td>400-163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA</td>
			<td>ND-2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEAA</td>
			<td>Gibco, Waltham, MA, USA</td>
			<td>11140-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Donkey Serum (NDS)</td>
			<td>ImmunoResearch Laboratories Inc., West Grove, PA, USA</td>
			<td><a href="https://www.jacksonimmuno.com/catalog/products/017-000-121" target="_blank">017-000-121</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT</td>
			<td>Sakura Finetek, Torrance, CA, USA</td>
			<td>25608-930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PFA</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences, Hatfield, PA</td>
			<td>RT15710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>qPCR machine</td>
			<td>Bio-Rad, CFX96, Hercules, CA, USA</td>
			<td>1855196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy kit</td>
			<td>Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td>74104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sox2</td>
			<td>MilliporeSigma, Burlington, MA</td>
			<td>AB5603</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TMS-F microscope</td>
			<td>Nikon, Melville, NY, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>T8787-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-low attachment T75 flasks</td>
			<td>Corning, Corning, NY, USA</td>
			<td>3814</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a static self-directed method for generating brain organoids from human embryonic stem cells

Organoides cerebrais humanos diferenciados de células-tronco embrionárias oferecem a oportunidade única de estudar interações complicadas de múltiplos tipos de células em um sistema tridimensional. Aqui apresentamos um método relativamente simples e barato que produz organoides cerebrais. Neste protocolo, as células-tronco pluripotentes humanas são divididas em pequenos aglomerados em vez de células únicas e cultivadas na mídia básica sem uma matriz de membrana de porão heterologous ou fatores de crescimento exógenos, permitindo que as pistas de desenvolvimento intrínsecas modelem o crescimento organoide. Este sistema simples produz uma diversidade de tipos de células cerebrais, incluindo células gliais e microgliais, células-tronco e neurônios do cérebro, cérebro médio e cérebro traseiro. Organoides gerados a partir deste protocolo também exibem marcas de organização temporal e espacial apropriada demonstrada por imagens de campo brilhante, histologia, imunofluorescência e reação quantitativa quantitativa da cadeia de polimerase em tempo real ( qRT-PCR). Como esses organoides contêm tipos de células de várias partes do cérebro, eles podem ser utilizados para estudar uma infinidade de doenças. Por exemplo, em um artigo recente demonstramos o uso de organoides gerados a partir deste protocolo para estudar os efeitos da hipóxia no cérebro humano. Essa abordagem pode ser usada para investigar uma série de condições de estudo difíceis de estudar, como deficiências neurodesenvolvimentista, distúrbios genéticos e doenças neurológicas.

A Figura 1 mostra imagens representativas de campo brilhante de vários pontos de tempo para demonstrar como são as células/organoides ao longo dos diferentes estágios do protocolo. Os hESCs foram removidos da placa de cultura do tecido, quebrados em pequenos pedaços, e colocados em um frasco de fixação ultra-baixo T75 onde formavam esferas. É importante notar que as células parecem brilhantes e semelhantes em tamanho, sem células escuras e moribundas nos centros desses aglomerados....

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A Static Self-Directed Method for Generating Brain Organoids from Human Embryonic Stem Cells

Esse protocolo foi gerado como um meio de produzir organoides cerebrais de forma simplificada e de baixo custo sem fatores de crescimento exógenos ou matriz de membrana do porão, mantendo a diversidade de tipos de células cerebrais e muitas características da organização celular.

Um método estática auto-direcionado para gerar organoides cerebrais a partir de células-tronco embrionárias humanas

Human brain organoids differentiated from embryonic stem cells offer the unique opportunity to study complicated interactions of multiple cell types in a ...

Os organoides cerebrais humanos são uma ferramenta significativa para estudar a doença em um sistema que é facilmente manipulado e incorpora um ambiente humano e a interação apropriada de vários tipos de células. Essa técnica pode ser aplicada para estudar inúmeras doenças do cérebro, incluindo distúrbios neurodesenvolvimentos, insultos tóxicos e o crescimento e tratamento do câncer no cérebro. A principal vantagem deste protocolo é a capacidade de gerar organoides cerebrais altamente reprodutíveis com uma ampla variedade de tipos de células neuronais.Isso é feito usando um fluxo de trabalho muito simplista que poderia ser realizado pela maioria dos laboratórios. E estes são produzidos de forma temporária e adequada sem a influência de fatores de crescimento especializados ou matrizes indefinidas tornando-o um sistema muito simples e econômico. Para começar, combine 100 microliters de matriz com 5,9 mililitros de mídia Dulbecco's Modified Eagle Medium ou F12 em um tubo cônico de 15 mililitros.Cubra cada poço em uma placa de seis poços com um mililitro da matriz de membrana. Enrole a placa em filme de parafina e armazene durante a noite a quatro graus Celsius. No dia seguinte, aspirar o excesso de mídia de cada poço, enxaguar os poços com F12, e adicionar H9 hESCS em um volume total de dois mililitros de mídia mTeSR1 por poço.Cultura as células de semana a semana. Forneça diariamente com dois mililitros de mídia mTeSR1 e coloque a placa em uma incubadora de oxigênio de 37 graus Celsius com 5% de oxigênio e 5% de dióxido de carbono. Use ferramentas de vidro para eliminar células diferenciadas da cultura entre as passagens.Atualize a mídia diariamente. As células devem ser passagemdas de quatro a seis dias antes de utilizar as células H9 para produção organoide. Para passar as células, comece enxaguando-as com mídia DMEM F12 e aspirando o excesso de líquido.Após a lavagem, adicione a solução protease e incuba as células por 40 minutos para que as colônias flutuem dentro do poço. Em seguida, lave as células três vezes usando dMEM F12 e, se necessário, titulação para tornar as peças menores. Em seguida, distribua as células em uma proporção aproximada de um a oito sobre quatro placas de seis poços e coloque as placas na incubadora e se alimente diariamente.Após quatro a seis dias, as células atingem aproximadamente 80% de confluência. Transicioná-los para uma incubadora regular. Diluir a solução de estoque protease para uma concentração de trabalho adicionando um mililitro da solução de estoque a cinco mililitros de DMEM ou médio F12 por cada placa de seis poços de hESCS.Aspire e remova a mídia de cultura celular, em seguida, cubra o hESCS com a solução protease. Coloque as placas na incubadora por 10 a 15 minutos ou até que as bordas das colônias se parramam e comecem a se separar da matriz, mas antes que elas se recuperem completamente. Incline a placa, aspire a solução protease e lave suavemente as células com dois mililitros de DMEM ou F12 para cada poço três vezes.Certifique-se de que as colônias permaneçam presas à matriz. Por isso, é fundamental que as peças das células ES estejam no tamanho apropriado, então certifique-se de que elas estão em desabilitar pelo tempo apropriado. Se eles estão lá por muito pouco tempo, pode ser muito difícil tirá-los e separá-los.E se eles ficarem lá por muito tempo, eles podem realmente apenas sair durante os passos de lavagem. Adicione cerca de um a 1,5 mililitros de mídia mTeSR fresca para cada poço e lave as células da placa em um tubo cônico de 50 mililitros usando tubulação suave. Aspire e dispense hESCS dentro da placa até atingir aproximadamente 1/30 do seu tamanho original.Agora, os aglomerados da colônia se assemelham a peças de 250 a 350 micrômetros. Transfira as células para um único frasco T75 de fixação ultra baixa contendo 30 mililitros de mídia mTeSR sem bFGF. No dia seguinte, incline o frasco de tal forma que as células vivas se agrupam no canto.Se houver um grande número de células que aderiram ao fundo do frasco, use uma pipeta de 10 mililitros para transferir as células para um novo frasco. Espere ter uma alta população de células mortas nos primeiros dias. Uma vez que as células se instalem, aspire fora da mídia e células mortas deixando cerca de 10 mililitros de mídia contendo as células vivas e adicione 20 mililitros de baixa mídia bFGF complementados com 30 nanogramas por mililitro de bFGF.Depois de dois dias, verifique as células. A maioria das células deve parecer saudável e brilhante. No entanto, se mais de um terço das células parecerem escuras, incline o frasco e substitua 20 mililitros de mídia por 20 mililitros de baixa mídia bFGF complementadas com 20 nanogramas por mililitro de bFGF.No terceiro dia, remova metade da mídia e substitua por 15 mililitros de mídia hESC complementados com 10 nanogramas por mililitro de bFGF. No quinto dia, substitua metade da mídia por 15 mililitros de mídia de indução neural. Depois disso, a cada dois dias, substitua metade do meio por mídia de indução neural.Depois de três semanas na cultura, adicione penicilina-estreptomicina 100X à mídia em uma concentração final de 1X, se desejar. Refrescar metade da mídia dia não. Neste protocolo, os organoides cerebrais formados pareciam brilhantes e semelhantes em tamanho sem células escuras morrendo nos centros desses aglomerados.As células foram gradualmente desmamadas do bFGF. No quinto dia, eles foram colocados em mídia de indução neural e permaneceram nesta mídia durante todo o período cultural. Embora os organoides tenham ficado maiores e, portanto, mais escuros com o tempo, as estruturas neurais semelhantes a rosetas se expandiram, o que indica o início da diferenciação neural e contém características do tubo neural embrionário.Para dar uma olhada mais aprofundada na expressão genética dentro das células, foi realizada a análise qPCR. O transportador de glutamato VLGUT1 foi expresso em duas semanas e meia, aumentou em cinco semanas, e permaneceu consistente durante cinco meses de cultura. Um marcador de cérebro foxg1 foi expresso em níveis baixos até cinco semanas na cultura.O marcador de camada profunda Tbr1 atingiu o pico em torno de cinco semanas e diminuiu posteriormente. Considerando que a expressão do marcador de camada superior Satb2, o marcador ventral Eng1, o marcador da medula espinhal hindbrain Hoxb4, bem como o marcador oligodendrocyte Olig2 aumentaram ao longo do tempo. Em contraste, o marcador de células-tronco Sox2 diminuiu com o tempo.O marcador gliano GFAP atingiu o pico de cinco semanas e permaneceu relativamente constante posteriormente. Lembre-se de tomar o máximo cuidado ao manusear células ES em organoides em estágio inicial para evitar contaminação, pois elas são cultivadas sem antibióticos e também lembre-se de se alimentar de acordo com o cronograma. Após este procedimento, você pode avaliar os organoides usando técnicas como RT-PCR quantitativo para expressão genética e imunofluorescência para expressão e localização de proteínas.Utilizando essa técnica, pudemos estudar a capacidade de uma pequena molécula para aliviar aspectos da lesão hipóxica neonatal humana modelada em uma câmara de hipóxia. É significativo que esses organoides cerebrais humanos se comportem de forma semelhante aos experimentos in vivo do rato.

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We describe a robust method to direct the differentiation of pluripotent stem cells into retinal pigment epithelial cells (RPE). The purpose of providing ...

Generation of Standardized and Reproducible Forebrain-type Cerebral Organoids from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Geração de padronizada e reprodutível Forebrain-tipo Organoids Cerebral de humanos induzida por células-tronco pluripotentes

The human cortex is highly expanded and exhibits a complex structure with specific functional areas, providing higher brain function, such as cognition. ...

Engineering Transplantation-suitable Retinal Pigment Epithelium Tissue Derived from Human Embryonic Stem Cells

Engenharia de tecido de epitélio do pigmento da retina transplante-apropriado derivado de células estaminais embrionárias humanas

Several pathological conditions of the eye affect the functionality and/or the survival of the retinal pigment epithelium (RPE). These include some forms ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Na geração de Vitro do Somite derivados de humanos induzida por células tronco pluripotentes

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...

Preparation of Small RNA Libraries for Sequencing from Early Mouse Embryos

Preparação de Pequenas Bibliotecas de RNA para Sequenciamento de Embriões de Camundongos Primitivos

MicroRNAs (miRNAs) are important for the complex regulation of cell fate decisions and developmental timing. In vivo studies of the contribution of miRNAs ...

Generation and Culture of Lingual Organoids Derived from Adult Mouse Taste Stem Cells

Geração e Cultura de Organoides Linguais Derivados de Células-Tronco do Gosto de Rato Adulto

The sense of taste is mediated by taste buds on the tongue, which are composed of rapidly renewing taste receptor cells (TRCs). This continual turnover is ...

A Simplified Method for Generating Kidney Organoids from Human Pluripotent Stem Cells

Um método simplificado para gerar organoides renais a partir de células-tronco pluripotentes humanas

Kidney organoids generated from hPSCs have provided an unlimited source of renal tissue. Human kidney organoids are an invaluable tool for studying kidney ...

Establishing Organoids from Human Tooth as a Powerful Tool Toward Mechanistic Research and Regenerative Therapy

Estabelecendo organoides do dente humano como uma poderosa ferramenta para pesquisa mecanicista e terapia regenerativa

Teeth are of key importance in life not only for food mastication and speech but also for psychological well-being. Knowledge on human tooth development ...