Name: stereological estimation of cholinergic fiber length in the nucleus basalis of meynert of the mouse brain
Uploaded: 2020-02-05T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Stereological Estimation of Cholinergic Fiber Length in the Nucleus Basalis of Meynert of the Mouse Brain at JoVE.com

تم دعم هذا العمل من خلال منح إلى W.Z.S. من دائرة البحث والتطوير الطبي، وإدارة شؤون المحاربين القدامى (مراجعة الجدارة 1I01 BX001067-01A2)، وجمعية الزهايمر (NPSPAD-11-202149)، وموارد من الغرب الأوسط الطبية الحيوية مؤسسة البحوث.

وقد تمت الموافقة على جميع إجراءات استخدام هذه الحيوانات من قبل لجنة الرعاية والاستخدام الطبي للمحاربين القدامى في مدينة كانساس سيتي. الفئران البالغة من العمر ثمانية عشر شهرا المبالغة في التعبير عن السويدية متحولة بيتا اميلويد بروتين السلائف (APPswe) وC57/BL6 WT littermates استخدمت للتجارب. وترد تفاص?...

<ol>
	<li>Mouton, P. R., Gokhale, A. M., Ward, N. L., West, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereological+length+estimation+using+spherical+probes.">Stereological length estimation using spherical probes.</a> Journal of Microscopy. 206, 54-64 (2002).</li><li>Whitehouse, P. J., Price, D. L., Clark, A. W., Long Coyle, J. T., DeLong, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alzheimer+disease:+evidence+for+selective+loss+of+cholinergic+neurons+in+the+nucleus+basalis.">Alzheimer disease: evidence for selective loss of cholinergic neurons in the nucleus basalis.</a> Annals of Neurology. 10 (2), 122-126 (1981).</li><li>Davies, P., Maloney, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+loss+of+central+cholinergic+neurons+in+Alzheimer's+disease.">Selective loss of central cholinergic neurons in Alzheimer's disease.</a> The Lancet. 2 (8000), 1403 (1976).</li><li>Bartus, R. T., Dean, R. L., Beer, B., Lippa, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cholinergic+hypothesis+of+geriatric+memory+dysfunction.">The cholinergic hypothesis of geriatric memory dysfunction.</a> Science. 217 (4558), 408-414 (1982).</li><li>Savonenko, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Episodic-like+memory+deficits+in+the+APPswe/PS1dE9+mouse+model+of+Alzheimer's+disease:+relationships+to+beta-amyloid+deposition+and+neurotransmitter+abnormalities.">Episodic-like memory deficits in the APPswe/PS1dE9 mouse model of Alzheimer's disease: relationships to beta-amyloid deposition and neurotransmitter abnormalities.</a> Neurobiology of Disease. 18 (3), 602-617 (2005).</li><li>Perez, S. E., Dar, S., Ikonomovic, M. D., DeKosky, S. T., Mufson, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholinergic+forebrain+degeneration+in+the+APPswe/PS1DeltaE9+transgenic+mouse.">Cholinergic forebrain degeneration in the APPswe/PS1DeltaE9 transgenic mouse.</a> Neurobiology of Disease. 28 (1), 3-15 (2007).</li><li>Stokin, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonopathy+and+transport+deficits+early+in+the+pathogenesis+of+Alzheimer's+disease.">Axonopathy and transport deficits early in the pathogenesis of Alzheimer's disease.</a> Science. 307 (5713), 1282-1288 (2005).</li><li>He, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GRK5+Deficiency+Leads+to+Selective+Basal+Forebrain+Cholinergic+Neuronal+Vulnerability.">GRK5 Deficiency Leads to Selective Basal Forebrain Cholinergic Neuronal Vulnerability.</a> Scientific Reports. 6, 26116 (2016).</li><li>JoVE Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lab+Animal+Research.+Anesthesia+Induction+and+Maintenance.">Lab Animal Research. Anesthesia Induction and Maintenance.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2019).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents.">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e3564 (2012).</li><li>Mouton, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Unbiased Stereology-A Concise Guide. , (2011).</li><li>West, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Getting+started+in+stereology.">Getting started in stereology.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2013 (4), 287-297 (2013).</li><li>West, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Space+Balls+Revisited:+Stereological+Estimates+of+Length+With+Virtual+Isotropic+Surface+Probes.">Space Balls Revisited: Stereological Estimates of Length With Virtual Isotropic Surface Probes.</a> Frontiers in Neuroanatomy. 12, 49 (2018).</li><li>Nikolajsen, G. N., Kotynski, K. A., Jensen, M. S., West, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+analysis+of+the+capillary+network+of+aged+APPswe/PS1dE9+transgenic+mice.">Quantitative analysis of the capillary network of aged APPswe/PS1dE9 transgenic mice.</a> Neurobiology of Aging. 36 (11), 2954-2962 (2015).</li><li>Gutierrez-Jimenez, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disturbances+in+the+control+of+capillary+flow+in+an+aged+APP(swe)/PS1DeltaE9+model+of+Alzheimer's+disease.">Disturbances in the control of capillary flow in an aged APP(swe)/PS1DeltaE9 model of Alzheimer's disease.</a> Neurobiology of Aging. 62, 82-94 (2018).</li><li>Gundersen, H. J., Jensen, E. B., Kieu, K., Nielsen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+efficiency+of+systematic+sampling+in+stereology--reconsidered.">The efficiency of systematic sampling in stereology--reconsidered.</a> Journal of Microscopy. 193, 199-211 (1999).</li><li>Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+study+of+the+capillaries+within+the+white+matter+of+the+Tg2576+mouse+model+of+Alzheimer's+disease.">Quantitative study of the capillaries within the white matter of the Tg2576 mouse model of Alzheimer's disease.</a> Brain and Behavior. 9 (4), 01268 (2019).</li><li>McNeal, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unbiased+Stereological+Analysis+of+Reactive+Astrogliosis+to+Estimate+Age-Associated+Cerebral+White+Matter+Injury.">Unbiased Stereological Analysis of Reactive Astrogliosis to Estimate Age-Associated Cerebral White Matter Injury.</a> Journal of Neuropathology Experimental Neurology. 75 (6), 539-554 (2016).</li><li>Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Passive+(amyloid-beta)+immunotherapy+attenuates+monoaminergic+axonal+degeneration+in+the+AbetaPPswe/PS1dE9+mice.">Passive (amyloid-beta) immunotherapy attenuates monoaminergic axonal degeneration in the AbetaPPswe/PS1dE9 mice.</a> Journal of Alzheimer's Disease. 23 (2), 271-279 (2011).</li><li>Gagnon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+Sprouting+of+Dopamine+and+Serotonin+Axons+in+the+Pallidum+of+Parkinsonian+Monkeys.">Evidence for Sprouting of Dopamine and Serotonin Axons in the Pallidum of Parkinsonian Monkeys.</a> Frontiers of Neuroanatomy. 12, 38 (2018).</li><li>Boncristiano, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholinergic+changes+in+the+APP23+transgenic+mouse+model+of+cerebral+amyloidosis.">Cholinergic changes in the APP23 transgenic mouse model of cerebral amyloidosis.</a> Journal of Neuroscience. 22 (8), 3234-3243 (2002).</li></ol>

هنا نشرح طريقة لتقدير كثافة الألياف الكولينية في NBM باستخدام مسبار كرة الفضاء (الكرة). يقدر هذا المسبار إجمالي طول الألياف في المنطقة ذات الاهتمام. يمكن تقسيم الطول الإجمالي على حجم المنطقة للحصول على كثافة الألياف. ولتقدير حجم المنطقة، استُخدمت طريقة عدد نقاط كافاليري. طريقة عدد نقاط كاف?...

التقديرات الكمية لطول و / أو كثافة الألياف العصبية في الدماغ هي معلمات هامة للدراسات العصبية. غالباً ما يرتبط طول الكوليني, الدوبامين, ومحاور عصبية السيروتونية في مناطق الدماغ المختلفة مع وظائف محددة للمنطقة. لأن توزيع هذه المحاور غير متجانسة عموما، ويستخدم الاستريولوجية القائمة على التصميم لتجنب التحيز أثناء أخذ العينات. وقد تم تصميم مسبار كرة الفضاء من stereology لتوفير تدابير فعالة وموثوق بها من الهياكل مثل خط مثل الألياف العصبية في منطقة ذات أهمية1. يجعل المسبار كرة افتراضية يتم فرضها بشكل منهجي في الأنسجة لقياس تقاطعات الخطوط مع سطح المسبار. لأنه من المستحيل وضع تحقيقات الكرة في الأنسجة للتحليل ، فإن البرنامج المتاح تجاريًا يوفر كرة افتراضية ثلاثية الأبعاد (3D) ، وهي في الأساس سلسلة من الدوائر متحدة المركز ذات الأقطار المختلفة التي تمثل سطح مسبار الكرة.
التنكس العصبي الكوليني الانتقائي هو واحد من السمات الثابتة لمرض الزهايمر (AD)2،3،4. ويعتبر انتقال الكوليني المختل ة عاملا مسببا للتدهور المعرفي في AD. الخلل الكوليني هو واضح أيضا في العديد من الاضطرابات النفسية الأخرى مثل باركنسون, الإدمان, وانفصام الشخصية. تتم دراسة جوانب مختلفة من التنكس العصبي الكوليني في النماذج الحيوانية (على سبيل المثال، الحد من أستيل5، بروتين كات6، التنكس العصبي الألياف الكولينية في محيط لويحات اميلويد6، وانخفاض في الألياف الكولينية والدوالي متشابك7،8). ويعتقد أن انحطاط الألياف يحدث في وقت سابق من فقدان الخلايا العصبية, لأن فقدان الخلايا العصبية الكولينية لا لوحظ دائما في الدراسات. معظم الخلايا العصبية الكولينية في الدماغ القاعدي وجذع الدماغ، ومحاورهم المحورية مشروع إلى مناطق مختلفة في الدماغ مثل القشريات والحصين. يقع NBM في الدماغ الأمامي القاعدي ووجد أنه أحد مناطق الدماغ المصابة بشكل شائع في AD.
ويستند أسلوب كسور من stereology على أخذ العينات العشوائية منهجية من الأنسجة على مستويات متعددة. قسم أخذ العينات الكسر (SSF) هو أخذ العينات المنهجية غير المستندة إلى الكمبيوتر من المقاطع لطريقة كسور من stereology. كسر أخذ عينات المنطقة (ASF) هو كسر منطقة من المنطقة ذات الاهتمام في القسم. سمك كسر أخذ العينات (TSF) هو كسور في سمك مقطع. يسمح لنا مسبار كرة الفضاء بتحديد ملامح الاهتمام في كرة ثلاثية الأبعاد في مواقع مجزأة. هنا نستخدم مسبار كرة الفضاء لتقدير الطول الإجمالي للألياف الكوليني في NBM من دماغ الماوس لتوضيح الإجراءات. يوفر البروتوكول الحالي تفاصيل حول معالجة الأنسجة ، وطرق أخذ العينات لعلم الستريولوجيا ، وتلطيخ الهيستوكيميائية المناعية باستخدام الأجسام المضادة ChAT ، والستيريولوجية غير المتحيزة لتقدير طول الألياف الكولينية وكثافة الألياف في NBM من دماغ الماوس.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>ABC kit</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>PK6100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-ChAT Antibody</td>
			<td>Millipore, MA, USA</td>
			<td>AB144P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine anti-goat IgG-B</td>
			<td>Santacruz Biotechnology</td>
			<td>SC-2347</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum, Adult</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>B9433</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Lieca Microsystems, Buffalo Grove, IL, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>D5652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene Glycol</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>324558</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>G2025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen Peroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>H1009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immpact-DAB kit</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>SK4105</td>
			<td>Enhanced DAB peroxidase substrate solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Westward Pharmaceuticals, NJ, USA</td>
			<td>0143-9509-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Lieca Microsystems, Buffalo Grove, IL, USA</td>
			<td>AF6000</td>
			<td>Equipped with motorized stage and IMI-tech color digital camera</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optimum cutting temperature (O.C.T.) embedding medium</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences, PA, USA</td>
			<td>62550-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permount mounting medium</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences, PA, USA</td>
			<td>17986-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereologer Software</td>
			<td>Stereology Resource Center, Inc. St. Petersburg, FL, USA</td>
			<td>Stereologer2000</td>
			<td>Installed on a Dell Desktop computer.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizma Base</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>T1503</td>
			<td>Tris base</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizma hydrochloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>T5941</td>
			<td>Tris hydrochloride</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Bayer, Leverkusen, Germany</td>
			<td>Rompun</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylenes, Histological grade</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td>534056</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

stereological estimation of cholinergic fiber length in the nucleus basalis of meynert of the mouse brain

غالباً ما يرتبط طول المحاور العصبية أو الكولينية الأخرى في مناطق الدماغ المختلفة بالوظيفة المحددة للمنطقة. Stereology هو وسيلة مفيدة لتحديد ملامح الخلايا العصبية من هياكل الدماغ المختلفة. هنا نقدم بروتوكول stereology القائم على البرمجيات لتقدير الطول الإجمالي للألياف الكوليني في نواة basalis من Meynert (NBM) من الدماغ الأمامي القاعدي. تستخدم الطريقة مسبار كرة الفضاء لتقديرات الطول. يتم تصور الألياف الكوليني من قبل أسيتيل ترانسفيز الكولين (ChAT) التلطيخ المناعي مع الفجل بيروكسيديز-ديامينوبنزيدين (HRP-DAB) نظام الكشف. بروتوكول تلطيخ صالح أيضا لتقدير عدد الألياف والخلايا في مختلف مناطق الدماغ باستخدام برنامج stereology. يمكن استخدام بروتوكول الاستريولوجيا لتقدير أي ملامح خطية مثل الألياف الكولينوسيبتيفية ، الألياف الدوبامين / الكاتيوكولامينرجية ، الألياف السيروتونية ، عمليات الخلايا الفلكية ، أو حتى ملامح الأوعية الدموية.

وترد النتائج التمثيلية في الجدول 1 والشكل 5. المجموعة C، التي تم فك رموزها كمجموعة APPswe (APP)، كان لها طول ألياف أقل بكثير(الشكل 5B)وكثافة طول الألياف(الشكل 5C)مقارنة بنوعها البري (WILD) القمامة. وأظهرت النتائج أنه لم يكن ه?...

Watch this Scientific Journal Video about Stereological Estimation of Cholinergic Fiber Length in the Nucleus Basalis of Meynert of the Mouse Brain at JoVE.com

Stereological Estimation of Cholinergic Fiber Length in the Nucleus Basalis of Meynert of the Mouse Brain

طول الألياف العصبية داخل بنية ثلاثية الأبعاد لمنطقة الدماغ هو معلمة موثوق بها لتحديد سلامة الخلايا العصبية الهيكلية محددة أو انحطاط. هذه المقالة تفاصيل طريقة القياس الكمي ستيريولوجية لقياس طول الألياف الكوليني داخل نواة basalis Meynert في الفئران كمثال.

تقدير الألياف الكولينية في النواة باساريس من Meynert من دماغ الفأر

The length of cholinergic or other neuronal axons in various brain regions are often correlated with the specific function of the region. Stereology is a ...

الزجر العصبي في العديد من الاضطرابات العصبية هي عملية مزمنة من الألياف العصبية التي غالبا ما يحدث قبل فقدان الجسم الخلية. يوفر القياس الكمي التقليدي للألياف العصبية في ثلاثة أبعاد طريقة حساسة ودقيقة للكشف عن التغير العصبي المبكر. هذه التكنولوجيا تستخدم موثوقة وفعالة على أساس الكمبيوتر غير متحيزة تجزئة كرات الفضاء لقياس أطوال من الهياكل مثل خط مثل ألياف الخلايا العصبية في 3D.إظهار الإجراء سيتم من قبل برابهاكار سينغ، وهو ما بعد الطبيب وخبيرنا في علم الستيريو، وديفيد بنغ، مساعد البحوث في مختبري. بعد التأكد من عدم وجود استجابة لدواسة منعكس في الماوس تخدير، transcardially perfuse مع ما يقرب من 50 ملليلتر من الجليد الباردة 0.1 DPBS الضرس، تليها ما يقرب من 25 ملليلتر من 4٪ PFA في 0.1 PBS الضرس. في نهاية التسريب، بعد إصلاح الدماغ في وعاء من 4٪ PFA الطازجة لمدة 24 ساعة في أربع درجات مئوية.في اليوم التالي، وغسل الدماغ مع ثلاثة واحد إلى اثنين من غسل دقيقة في DPBS الطازجة في غسل ونقل الدماغ إلى 15٪ السكروز في حل 0.1 DPBS بين عشية وضحاها. في صباح اليوم التالي، ضع الدماغ في محلول السكروز بنسبة 30٪، و 0.1 DPBS الضرس لمدة 48 ساعة عند أربع درجات مئوية. في نهاية الحضانة، نقل الدماغ إلى غرفة cryotome تعيين مسبق إلى ناقص 20 درجة مئوية.يمكن الاحتفاظ بالأدمغة في أنابيب مختومة وتخزينها عند درجة حرارة 80 درجة مئوية. للقطع، تضمين عينة الأنسجة في درجة حرارة القطع المثلى تضمين المتوسطة وجبل العينة على قرص عينة. ثم الحصول على أقسام سميكة 30 ميكرومتر المسلسل في طائرة إكليلية في cryotome، ونقل كل قسم إلى آبار فردية من لوحة ثقافة 24 جيدا تحتوي على محلول cryoprotectant استعدادا للتخزين ناقص 20 درجة مئوية.لتحديد القسمين الأول والأخير من كل دماغ، قارن بين الميزات المورفولوجية مع أطلس دماغ الماوس القياسي. يبدأ NBM عند الـbregma ناقص 0.0 ملليمتر وينتهي عند ناقص 1.6 ملليمتر. اختيار كل قسم ثامن تسفر عن ما مجموعه ستة إلى سبعة أقسام ويسمح بمعامل الخطأ المناسب لكل من حجم والألياف طول التقدير.لوضع العلامات المناعية الكيميائية من أقسام الأنسجة، بعد حجب أي الربط غير محدد مع مصل الأبقار الطبيعية 10٪في 0.1٪ تريتون X-100 في محلول ملحي تريس المخزنة، تسمية المقاطع مع الأجسام المضادة الأولية من الفائدة لمدة 48 ساعة في أربع درجات مئوية. في نهاية الحضانة، وغسل أقسام ثلاث مرات لمدة ثلاث دقائق في الملح الطازجة تريس المخزنة في كل غسل، تليها الحضانة مع الأجسام المضادة الثانوية الحيوية المناسبة لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. في نهاية الحضانة، وغسل الأقسام ثلاث مرات في المالحة الطازجة تريس المخزنة كما هو موضح، تليها تلطيخ مع مجمع أفيدين بيوتين peroxidase و DAB بيروكسيديز محلول الركيزة وفقا لبروتوكولات الشركة المصنعة.بعد الغسيل، قم بتركيب جميع الأقسام من عينة أنسجة الدماغ على شريحة هلامية واحدة وتسمح للعينات بالهواء الجاف. لتجفيف المقاطع، غمر العينات مرتين لمدة خمس دقائق لكل تخفيف في حلول الإيثانول التصاعدية المتتابعة كما هو مبين، تليها إزالة مع اثنين من غسلات الزيلين لمدة 10 دقائق. ثم استخدم متوسطة تركيب مناسبة لوضع الأغطية على الشرائح.بالنسبة لعلم الستيرولوجيا، افتح دراسة جديدة في البرنامج. سيتم فتح مربع حوار تهيئة الدراسة. املأ معلومات الدراسة وتأكد من تحديد الكسور متعددة المستويات.انقر نقراً مزدوجاً فوق وحدة التخزين لفتح مربع الحوار حول وحدة التخزين. اسم ميزة الفائدة وحدد المنطقة نقطة عد التحقيق وانقر فوق التالي. انقر نقراً مزدوجاً فوق طول وتوفير اسم الميزة.حدد الفضاء التحقيق وانقر فوق المقبل. في مربع تهيئة الحالة، لتعيين مجموعة التعليمات البرمجية قبل بدء الدراسة، العدد الإجمالي لأقسام بدءاً من القسم الأول الذي يحتوي على منطقة ذات أهمية إلى المقطع الأخير الذي يحتوي على منطقة الاهتمام وفاصل أخذ عينات القسم إلى ثمانية. انقر بجوار لفتح مربع حوار تهيئة التحقيق الذي سيقوم تلقائيًا بتعيين أقل التكبير لتحديد المنطقة وتقدير حجمها وتأكيد الإعدادات.انقر فوق معاينة للتحقق مما إذا كان يمكن تحديد المنطقة ذات الأهمية في التكبير الأدنى المحدد. أدخل 50، 000 مكعب ميكرومتر لكل نقطة لكسر حجم المنطقة وانقر فوق معاينة وفعل. تحت تكبير الكائن عالية، تعيين الطول إلى 63X ومزدوجة انقر فوق طول لفتح مربع الحوار طول المجال.تعيين قطر هذه الكرة إلى 10 ميكرومتر وانقر فوق القيام به. تعيين القيم المناسبة لمنطقة الإطار وارتفاع الإطار ومنطقة الحماية وتباعد الإطار. ثم انقر فوق التالي واتبع الإرشادات التي يوفرها البرنامج.لإدراج المقطع الأول، ضع الشريحة على مرحلة المجهر تحت هدف 5X وانقر فوق السهم الأخضر لرسم حدود عشوائية حول NBM لتحديد منطقة الاهتمام. انقر فوق السهم الأخضر وفعل لتغيير الهدف 63X للحصول على قياسات الألياف من الكسر الحالي. سيظهر مربع حوار سمك المقطع.تعيين السطح العلوي والسفلي من القسم لقياس سمك الفعلي للقسم باستخدام مقبض التركيز دليل محور ع وانقر على القيام به. حرك المحور z ببطء من أعلى إلى أسفل في ارتفاع الإطار من القسم لوضع علامة على جميع الألياف المتقاطعة على سطح مسبار المجال الظاهري. عندما تم وضع علامة على جميع الألياف، انقر بجوار التقدم إلى الموقع التالي.عند اكتمال كافة الكسور، انقر فوق السهم الأخضر. سيطلب البرنامج إدراج القسم التالي. جلب العينة التالية على الشريحة في التركيز باستخدام الهدف 5X وتكرار قياس الألياف كما هو موضح للتو.عندما يتم قياس جميع الأقسام، فإن البرنامج سوف يولد نتيجة للحالة التي تظهر معامل قيم الخطأ. إذا كان معامل الخطأ مقبولاً، انتقل إلى الحالة التالية. إذا كان معامل الخطأ غير مقبول، فإن البرنامج سيقدم توصيات لتغيير بعض المعلمات.عندما يتم الانتهاء من جميع الحالات، توليد نتائج لكل حالة وكل مجموعة. في هذه التجربة التمثيلية ، أظهرت مجموعة بروتين السلائف بيتا الأميلويد المتحولة السويدية انخفاضًا ملحوظًا في طول الألياف وكثافة طول الألياف مقارنة بزملائهم في القمامة من النوع البري. كما أظهرت النتائج أنه لم يكن هناك فرق كبير في حجم البنك الوطني بين المجموعتين التي تم تحليلها.هذه التقنية تتطلب السليم اقتناء في الاتجاه الصحيح وطريقة تلطيخ جيدة مع فترة الحضانة. يمكن استخدام بروتوكول علم المجسمات لتقدير أي ملامح خطية مثل ألياف الخلايا العصبية الأخرى، والعمليات الفلكية، أو حتى ملامح الأوعية الدموية.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Live Imaging of Mitosis in the Developing Mouse Embryonic Cortex

التصوير حية من الانقسام في تطوير الجنينية الماوس اللحاء

Although of short duration, mitosis is a complex and dynamic multi-step process fundamental for development of organs including the brain. In the ...

Telomerase Activity in the Various Regions of Mouse Brain: Non-Radioactive Telomerase Repeat Amplification Protocol (TRAP) Assay

Telomerase Activity in the Various Regions of Mouse Brain: Non-Radioactive Telomerase Repeat Amplification Protocol TRAP Assay

نشاط التيلوميراز في مناطق مختلفة من الدماغ ماوس: التيلوميراز غير المشعة كرر بروتوكول التضخيم (TRAP) الفحص

Telomerase, a ribonucleoprotein, is responsible for maintaining the telomere length and therefore promoting genomic integrity, proliferation, and ...

Analysis of Gene Expression Changes in the Rat Hippocampus After Deep Brain Stimulation of the Anterior Thalamic Nucleus

تحليل التغييرات التعبير الجيني في الفئران الحصين بعد ديب تحفيز الدماغ الأمامي من مهادي نواة

Deep brain stimulation (DBS) surgery, targeting various regions of the brain such as the basal ganglia, thalamus, and subthalamic regions, is an effective ...

Stereotaxic Infusion of Oligomeric Amyloid-beta into the Mouse Hippocampus

تسريب التجسيمي من بلازميدة قليلة القسيمات اميلويد بيتا في الحصين ماوس

Alzheimer&#8217;s disease is a neurodegenerative disease affecting the aging population. A key neuropathological feature of the disease is the ...

Live Imaging of the Ependymal Cilia in the Lateral Ventricles of the Mouse Brain

التصوير المباشر لالبطانة العصبية سيليا في البطينات الجانبية للدماغ الفأر

Multiciliated ependymal cells line the ventricles in the adult brain. Abnormal function or structure of ependymal cilia is associated with various ...

Microelectrode Guided Implantation of Electrodes into the Subthalamic Nucleus of Rats for Long-term Deep Brain Stimulation

مسرى مكروي تسترشد زرع الأقطاب الكهربائية في نواة تحت المهاد الجرذان على المدى الطويل العميق تحفيز الدماغ

Deep brain stimulation (DBS) is a widely used and effective therapy for several neurologic disorders, such as idiopathic Parkinson&#8217;s disease, ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

تسجيل اللدونة متشابك في شرائح هيبوكامبال الحاد تحتفظ في صغيرة الحجم-إعادة التدوير، ونضح-، وغمر من نوع نظام الدائرة

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Stereological Estimation of Dopaminergic Neuron Number in the Mouse Substantia Nigra Using the Optical Fractionator and Standard Microscopy Equipment

ستيريولوجيكال تقدير عدد الخلايا العصبية تتميز في أسود الدماغ الماوس باستخدام فراكتيوناتور الضوئية ومعدات مجهرية القياسية

In pre-clinical Parkinson&#39;s disease research, analysis of the nigrostriatal tract, including quantification of dopaminergic neuron loss within the ...