Name: stereological estimation of cholinergic fiber length in the nucleus basalis of meynert of the mouse brain
Uploaded: 2020-02-05T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Stereological Estimation of Cholinergic Fiber Length in the Nucleus Basalis of Meynert of the Mouse Brain at JoVE.com

Эта работа была поддержана грантами W.З.S. от Медицинской службы исследований и разработок, Департамента по делам ветеранов (Merit Review 1I01 BX001067-01A2), Ассоциацией Альцгеймера (NPSPAD-11-202149), и ресурсами из Биомедицинской биомедицины Среднего Запада Научно-исследовательский фонд.

Все процедуры для использования этих животных были одобрены Канзас-Сити ветеранов дел медицинский центр институционального ухода за животными и использования комитета. Восемнадцатимесячные мыши, переэкспрессирующие шведский метаант бета-амилоидный белок-предшественник (APPswe) и их c57...

<ol>
	<li>Mouton, P. R., Gokhale, A. M., Ward, N. L., West, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereological+length+estimation+using+spherical+probes.">Stereological length estimation using spherical probes.</a> Journal of Microscopy. 206, 54-64 (2002).</li><li>Whitehouse, P. J., Price, D. L., Clark, A. W., Long Coyle, J. T., DeLong, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alzheimer+disease:+evidence+for+selective+loss+of+cholinergic+neurons+in+the+nucleus+basalis.">Alzheimer disease: evidence for selective loss of cholinergic neurons in the nucleus basalis.</a> Annals of Neurology. 10 (2), 122-126 (1981).</li><li>Davies, P., Maloney, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+loss+of+central+cholinergic+neurons+in+Alzheimer's+disease.">Selective loss of central cholinergic neurons in Alzheimer's disease.</a> The Lancet. 2 (8000), 1403 (1976).</li><li>Bartus, R. T., Dean, R. L., Beer, B., Lippa, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cholinergic+hypothesis+of+geriatric+memory+dysfunction.">The cholinergic hypothesis of geriatric memory dysfunction.</a> Science. 217 (4558), 408-414 (1982).</li><li>Savonenko, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Episodic-like+memory+deficits+in+the+APPswe/PS1dE9+mouse+model+of+Alzheimer's+disease:+relationships+to+beta-amyloid+deposition+and+neurotransmitter+abnormalities.">Episodic-like memory deficits in the APPswe/PS1dE9 mouse model of Alzheimer's disease: relationships to beta-amyloid deposition and neurotransmitter abnormalities.</a> Neurobiology of Disease. 18 (3), 602-617 (2005).</li><li>Perez, S. E., Dar, S., Ikonomovic, M. D., DeKosky, S. T., Mufson, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholinergic+forebrain+degeneration+in+the+APPswe/PS1DeltaE9+transgenic+mouse.">Cholinergic forebrain degeneration in the APPswe/PS1DeltaE9 transgenic mouse.</a> Neurobiology of Disease. 28 (1), 3-15 (2007).</li><li>Stokin, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonopathy+and+transport+deficits+early+in+the+pathogenesis+of+Alzheimer's+disease.">Axonopathy and transport deficits early in the pathogenesis of Alzheimer's disease.</a> Science. 307 (5713), 1282-1288 (2005).</li><li>He, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GRK5+Deficiency+Leads+to+Selective+Basal+Forebrain+Cholinergic+Neuronal+Vulnerability.">GRK5 Deficiency Leads to Selective Basal Forebrain Cholinergic Neuronal Vulnerability.</a> Scientific Reports. 6, 26116 (2016).</li><li>JoVE Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lab+Animal+Research.+Anesthesia+Induction+and+Maintenance.">Lab Animal Research. Anesthesia Induction and Maintenance.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2019).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents.">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e3564 (2012).</li><li>Mouton, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Unbiased Stereology-A Concise Guide. , (2011).</li><li>West, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Getting+started+in+stereology.">Getting started in stereology.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2013 (4), 287-297 (2013).</li><li>West, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Space+Balls+Revisited:+Stereological+Estimates+of+Length+With+Virtual+Isotropic+Surface+Probes.">Space Balls Revisited: Stereological Estimates of Length With Virtual Isotropic Surface Probes.</a> Frontiers in Neuroanatomy. 12, 49 (2018).</li><li>Nikolajsen, G. N., Kotynski, K. A., Jensen, M. S., West, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+analysis+of+the+capillary+network+of+aged+APPswe/PS1dE9+transgenic+mice.">Quantitative analysis of the capillary network of aged APPswe/PS1dE9 transgenic mice.</a> Neurobiology of Aging. 36 (11), 2954-2962 (2015).</li><li>Gutierrez-Jimenez, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disturbances+in+the+control+of+capillary+flow+in+an+aged+APP(swe)/PS1DeltaE9+model+of+Alzheimer's+disease.">Disturbances in the control of capillary flow in an aged APP(swe)/PS1DeltaE9 model of Alzheimer's disease.</a> Neurobiology of Aging. 62, 82-94 (2018).</li><li>Gundersen, H. J., Jensen, E. B., Kieu, K., Nielsen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+efficiency+of+systematic+sampling+in+stereology--reconsidered.">The efficiency of systematic sampling in stereology--reconsidered.</a> Journal of Microscopy. 193, 199-211 (1999).</li><li>Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+study+of+the+capillaries+within+the+white+matter+of+the+Tg2576+mouse+model+of+Alzheimer's+disease.">Quantitative study of the capillaries within the white matter of the Tg2576 mouse model of Alzheimer's disease.</a> Brain and Behavior. 9 (4), 01268 (2019).</li><li>McNeal, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unbiased+Stereological+Analysis+of+Reactive+Astrogliosis+to+Estimate+Age-Associated+Cerebral+White+Matter+Injury.">Unbiased Stereological Analysis of Reactive Astrogliosis to Estimate Age-Associated Cerebral White Matter Injury.</a> Journal of Neuropathology Experimental Neurology. 75 (6), 539-554 (2016).</li><li>Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Passive+(amyloid-beta)+immunotherapy+attenuates+monoaminergic+axonal+degeneration+in+the+AbetaPPswe/PS1dE9+mice.">Passive (amyloid-beta) immunotherapy attenuates monoaminergic axonal degeneration in the AbetaPPswe/PS1dE9 mice.</a> Journal of Alzheimer's Disease. 23 (2), 271-279 (2011).</li><li>Gagnon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+Sprouting+of+Dopamine+and+Serotonin+Axons+in+the+Pallidum+of+Parkinsonian+Monkeys.">Evidence for Sprouting of Dopamine and Serotonin Axons in the Pallidum of Parkinsonian Monkeys.</a> Frontiers of Neuroanatomy. 12, 38 (2018).</li><li>Boncristiano, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholinergic+changes+in+the+APP23+transgenic+mouse+model+of+cerebral+amyloidosis.">Cholinergic changes in the APP23 transgenic mouse model of cerebral amyloidosis.</a> Journal of Neuroscience. 22 (8), 3234-3243 (2002).</li></ol>

Здесь мы демонстрируем метод оценки плотности холинергических волокон в НБМ с помощью космического шара (сферы) зонда. Этот зонд оценивает общую длину волокна в интересуемом регионе. Общая длина может быть разделена по объему региона, чтобы получить плотность волокна. Для оценки объем?...

Количественные оценки длины и/или плотности нервных волокон в головном мозге являются важными параметрами невропатологических исследований. Длина холинергических, дофаминергических и серотонинергических аксонов в различных областях мозга часто коррелирует с конкретными функциями региона. Поскольку распределение этих аксонов, как правило, неоднородно, стереология на основе дизайна используется для предотвращения предвзятости во время отбора проб. Космический шар зонд стереологии был разработан, чтобы обеспечить эффективные и надежные меры линии, как структуры, такие как нейронные волокна в регионе, представляющих интерес1. Зонд делает виртуальную сферу, которая систематически навязывается в ткани для измерения пересечений линий с поверхностью зонда. Поскольку невозможно поместить сферы зондов в ткани для анализа, коммерчески доступное программное обеспечение обеспечивает виртуальную трехмерную (3D) сферу, которая в основном представляет собой ряд концентрических кругов различных диаметров, представляющих поверхность сферного зонда.
Селективная холинергическая нейродегенерация является одной из последовательных особенностей болезни Альцгеймера (AD)2,3,4. Дисфункциональная холинергическая передача считается причинным фактором для когнитивных снижение АД. Холинергическая дисфункция также проявляется во многих других психических расстройствах, таких как болезнь Паркинсона, наркомания и шизофрения. Различные аспекты холинергической нейродегенерации изучаются в животных моделях (например, снижение ацетилхолина5, ChAT белка6, холинергического волокна нейродегенерации в непосредственной близости от амилоидных бляшек6, и снижение холинергических волокон и синаптических варикозы7,8). Дегенерация волокна, как полагают, происходит раньше, чем потеря нейронов, потому что холинергические потери нейронов не всегда наблюдается в исследованиях. Большинство холинергических нейронов находятся в базальном предмозге и стволе мозга, и их аксоны проекта различных областях мозга, таких как кортики и гиппокампа. NBM расположен в базальном предмозге и оказался одним из часто пострадавших областей мозга в AD.
Метод фракционности стереологии основан на систематической случайной выборке ткани на нескольких уровнях. Раздел выборки фракции (SSF) является некомпьютерным основе систематической выборки разделов для фракционного метода стереологии. Фракция выборки (ASF) является фракцией области региона, интересуемого в разделе. Толщина фракции выборки (TSF) является фракция толщины раздела. Космический шар зонд позволяет нам количественно профили интерес в 3D сфере в дробных местах. Здесь мы используем космический шар зонд для оценки общей длины холинергических волокон в NBM мыши мозга, чтобы проиллюстрировать процедуры. Текущий протокол содержит подробную информацию о обработке тканей, методы отбора проб для стереологии, иммуногистохимическое окрашивание с использованием антитела CHAT, и беспристрастной стереологии для оценки длины холинергического волокна и плотности волокна в NBM мыши мозга.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>ABC kit</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>PK6100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-ChAT Antibody</td>
			<td>Millipore, MA, USA</td>
			<td>AB144P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine anti-goat IgG-B</td>
			<td>Santacruz Biotechnology</td>
			<td>SC-2347</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum, Adult</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>B9433</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Lieca Microsystems, Buffalo Grove, IL, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>D5652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene Glycol</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>324558</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>G2025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen Peroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>H1009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immpact-DAB kit</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>SK4105</td>
			<td>Enhanced DAB peroxidase substrate solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Westward Pharmaceuticals, NJ, USA</td>
			<td>0143-9509-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Lieca Microsystems, Buffalo Grove, IL, USA</td>
			<td>AF6000</td>
			<td>Equipped with motorized stage and IMI-tech color digital camera</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optimum cutting temperature (O.C.T.) embedding medium</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences, PA, USA</td>
			<td>62550-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permount mounting medium</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences, PA, USA</td>
			<td>17986-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereologer Software</td>
			<td>Stereology Resource Center, Inc. St. Petersburg, FL, USA</td>
			<td>Stereologer2000</td>
			<td>Installed on a Dell Desktop computer.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizma Base</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>T1503</td>
			<td>Tris base</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizma hydrochloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>T5941</td>
			<td>Tris hydrochloride</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Bayer, Leverkusen, Germany</td>
			<td>Rompun</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylenes, Histological grade</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td>534056</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

stereological estimation of cholinergic fiber length in the nucleus basalis of meynert of the mouse brain

Длина холинергических или других нейрональных аксонов в различных областях мозга часто коррелирует с конкретной функцией региона. Стереология является полезным методом количественной оценки нейрональных профилей различных структур мозга. Здесь мы предоставляем программно-основанный протокол стереологии для оценки общей длины холинергических волокон в ядре базалис Айнерт (NBM) базального передних мозгов. Метод использует зонд космического шара для оценки длины. Холинергические волокна визуализированы холиновой ацетилтрансферазой (ChAT) иммуностоинг с хреном пероксидаза-диаминобензидин (HRP-DAB) системы обнаружения. Протокол окрашивания также действителен для оценки клетчатки и клеточного номера в различных областях мозга с помощью программного обеспечения стереологии. Протокол стереологии может быть использован для оценки любых линейных профилей, таких как холиноцептивные волокна, дофаминергические/катехоламинговые волокна, серотониновые волокна, астроцитные процессы или даже сосудистые профили.

Результаты представительи показаны в таблице 1 и рисунке 5. Группа C, которая была расшифрована как группа APPswe (APP), имела значительно более низкую длину волокна(рисунок 5B)и плотность длины волокна(рисунок 5C) срав?...

Watch this Scientific Journal Video about Stereological Estimation of Cholinergic Fiber Length in the Nucleus Basalis of Meynert of the Mouse Brain at JoVE.com

Stereological Estimation of Cholinergic Fiber Length in the Nucleus Basalis of Meynert of the Mouse Brain

Длина нейронного волокна в трехмерной структуре области мозга является надежным параметром для количественной оценки конкретных нейрональных структурных целостности или дегенерации. В этой статье подробно стереологический метод количественной оценки для измерения длины холинергического волокна в ядре базалис Мейнерт у мышей в качестве примера.

Стерологические оценки длины холинергического волокна в ядре базалис Мейнерт мыши мозга

The length of cholinergic or other neuronal axons in various brain regions are often correlated with the specific function of the region. Stereology is a ...

Нейроденеграция при многих неврологических расстройствах является хроническим процессом, потеря нейронного волокна которого часто происходит до потери тела клетки. Стереологическая количественная оценка нейронных волокон в трех измерениях обеспечивает чувствительный и точный метод для обнаружения ранних нейродегенеративных изменений. Эта технология использует надежную и эффективную компьютерную объективную фракционирование космических шаров для измерения длины линейных структур, таких как нейронные волокна в 3D.Демонстрация процедуры будет сделано Прабхакар Сингх, пост-док и наш эксперт в области стереологии, и Дэвид Пэн, научный сотрудник в моей лаборатории. После подтверждения отсутствия реакции на педаль рефлекс в анестезии мыши, транскардиально perfuse с примерно 50 миллилитров ледяной 0,1 молярного DPBS, а затем примерно 25 миллилитров 4%PFA в 0,1 молар PBS. В конце перфузии, после фиксации мозга в контейнере свежих 4%PFA в течение 24 часов при четырех градусах по Цельсию.На следующий день, мыть мозг с тремя от одной до двух минут моет в свежем DPBS за мытье и передачи мозга в 15% сахарозы в 0,1 DPBS раствор на ночь. На следующее утро поместите мозг в 30% раствор сахарозы и 0,1 молярного DPBS в течение 48 часов при четырех градусах по Цельсию. В конце инкубации перенесите мозг в криотомерную камеру, предварительно установленную до минус 20 градусов по Цельсию.Мозги можно хранить в запечатанных трубках и хранить при температуре минус 80 градусов по Цельсию. Для секции встраиваем образец ткани в оптимальную температуру резки, встраивая среду, и монтировать образец на диске образца. Затем приобрети серийные участки толщиной 30 микрометров в корональной плоскости в криотоме, переведя каждый участок в отдельные скважины 24-колодец культуры пластины, содержащей криопротекторный раствор в рамках подготовки к хранению минус 20 градусов по Цельсию.Чтобы определить первые и последние участки каждого мозга, сравните морфологические особенности со стандартным атласом мозга мыши. НБМ начинается с брегмы минус 0,0 миллиметра и заканчивается при минус 1,6 миллиметра. Выбор каждого восьмого раздела дает в общей сложности шесть-семь секций и позволяет соответствующий коэффициент погрешности как для объема, так и для оценки длины волокна.Для иммуногистохимической маркировки секций тканей, после блокирования любого неспецифического связывания с 10%нормальной сывороткой крупного рогатого скота в 0.1%Triton X-100 в Tris-буферном солевом растворе, маркировать секции с первичным антителом интереса в течение 48 часов при четырех градусах Цельсия. В конце инкубации, мыть разделы три раза в течение трех минут в свежем Tris-буферизированный солевой раствор на стирку, а затем инкубации с соответствующим биотинилированных вторичных антител в течение одного часа при комнатной температуре. В конце инкубации, мыть разделы три раза в свежем Tris-буферный солевой раствор, как попродемонстрировано, а затем окрашивание с Avidin биотин пероксидазы комплекса и DAB peroxidase субстрат решение в соответствии с протоколами производителя.После мытья, смонтировать все разделы из одного образца ткани мозга на один желатиновый слайд и позволить образцам высохнуть. Чтобы обезвоживать секции, погрузите образцы два раза в течение пяти минут на разбавление в последовательных восходящих растворов этанола, как указано, а затем очистка с двумя 10-минутными ксиленом моет. Затем используйте соответствующую среду крепления для установки крышки на слайды.Для стереологии откройте новое исследование в программном обеспечении. Откроется окно диалога по инициализации исследования. Заполните информацию об исследовании и подтвердите, что выбирается многоуровневая дробная часть.Дважды нажмите на громкость, чтобы открыть громкость диалоговой коробки. Назовите интересную функцию и выберите зонд подсчета ток региона и нажмите далее. Дважды нажмите на длину и уните название функции.Выберите зонд сферы и нажмите дальше. В поле инициализации, чтобы кодировать группы перед началом исследования, установите общее количество разделов, начиная с первого раздела, содержащего область интереса, до последнего раздела, содержащего область интереса и интервал выборки раздела до восьми. Нажмите рядом, чтобы открыть диалоговую коробку инициализации зонда, которая автоматически установит наименьшее увеличение для выбора и оценки объема региона и подтвердит параметры.Нажмите предварительный просмотр, чтобы проверить, можно ли определить область интереса при выбранном нижнем увеличении. Введите куб 50 000 микрометров на точку для фракции объема региона и нажмите предварительный просмотр и сделать. Под объектом высокого увеличения, установить длину до 63X и двойной щелчок длины, чтобы открыть длину сферы диалог поле.Установите диаметр этой сферы до 10 микрометров и нажмите кнопку сделано. Установите соответствующие значения для области рамы, высоты рамы, зоны охраны и интервала между кадрами. Затем нажмите дальше и следуйте инструкциям, предоставленным программным обеспечением.Чтобы вставить первый раздел, поместите слайд на сцену микроскопа под 5X цель и нажмите зеленую стрелку, чтобы нарисовать произвольные границы вокруг NBM для определения области интереса. Нажмите на зеленую стрелку и сделать, чтобы изменить цель 63X для получения измерения волокна текущей фракции. Появится диалоговая коробка толщиной раздела.Установите верхнюю и нижнюю поверхность раздела для измерения фактической толщины раздела с помощью ручной ручки фокусировки z-оси и нажмите кнопку сделано. Медленно переместите z-ось сверху вниз в высоту рамы секции, чтобы отметить все пересекающиеся волокна на поверхности зонда виртуальной сферы. Когда все волокна были отмечены, нажмите рядом, чтобы перейти к следующему месту.Когда все фракции будут завершены, нажмите зеленую стрелку. Программное обеспечение будет просить, чтобы следующий раздел вставляется. Принесите следующий образец на слайде в фокусе, используя цель 5X и повторите измерение волокна, как только что продемонстрировано.Когда все разделы были измерены, программное обеспечение будет генерировать результат для случая, показывающего коэффициент значений ошибок. Если коэффициент погрешности приемлем, переходите к следующему делу. Если коэффициент ошибки неприемлем, программное обеспечение даст рекомендации по изменению некоторых параметров.Когда все случаи будут завершены, создать результаты для каждого случая и группы. В этом репрезентативном эксперименте шведская группа белков-предшественников мутантов бета-амилоида продемонстрировала значительно более низкую длину волокна и плотность длины волокна по сравнению с их товарищами по помету дикого типа. Результаты также показали, что существенной разницы в объеме НБМ между двумя анализируемыми группами не было.Этот метод требует надлежащего приобретения в правильной ориентации и хороший метод окрашивания с инкубационный период. Стереологический протокол может быть использован для оценки любых линейных профилей, таких как другие нейронные волокна, астроцитные процессы или даже сосудистые профили.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Live Imaging of Mitosis in the Developing Mouse Embryonic Cortex

Онлайн Визуализация Митоз в развивающихся мышиных эмбриональных Cortex

Although of short duration, mitosis is a complex and dynamic multi-step process fundamental for development of organs including the brain. In the ...

Telomerase Activity in the Various Regions of Mouse Brain: Non-Radioactive Telomerase Repeat Amplification Protocol (TRAP) Assay

Telomerase Activity in the Various Regions of Mouse Brain: Non-Radioactive Telomerase Repeat Amplification Protocol TRAP Assay

Активности теломеразы в различных регионах мозга мыши: нерадиоактивный теломеразы повторить Amplification протокол (TRAP) Анализ

Telomerase, a ribonucleoprotein, is responsible for maintaining the telomere length and therefore promoting genomic integrity, proliferation, and ...

Analysis of Gene Expression Changes in the Rat Hippocampus After Deep Brain Stimulation of the Anterior Thalamic Nucleus

Анализ изменений экспрессии генов в гиппокампе крыс после глубокого мозга стимуляции передней ядра таламуса

Deep brain stimulation (DBS) surgery, targeting various regions of the brain such as the basal ganglia, thalamus, and subthalamic regions, is an effective ...

Stereotaxic Infusion of Oligomeric Amyloid-beta into the Mouse Hippocampus

Стереотаксическая Настой олигомерных бета-амилоида в гиппокампе мыши

Alzheimer&#8217;s disease is a neurodegenerative disease affecting the aging population. A key neuropathological feature of the disease is the ...

Live Imaging of the Ependymal Cilia in the Lateral Ventricles of the Mouse Brain

Живая съемка в эпендимных ресничек боковых желудочков головного мозга мыши

Multiciliated ependymal cells line the ventricles in the adult brain. Abnormal function or structure of ependymal cilia is associated with various ...

Microelectrode Guided Implantation of Electrodes into the Subthalamic Nucleus of Rats for Long-term Deep Brain Stimulation

Микроэлектродные Руководствуясь вживления электродов в субталамического ядра крыс для долгосрочного Глубокая стимуляция мозга

Deep brain stimulation (DBS) is a widely used and effective therapy for several neurologic disorders, such as idiopathic Parkinson&#8217;s disease, ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Запись синаптической пластичности в острой гиппокампа ломтики в малообъемной рециркуляции-, перфузии и погружения типа камерная система

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Stereological Estimation of Dopaminergic Neuron Number in the Mouse Substantia Nigra Using the Optical Fractionator and Standard Microscopy Equipment

Стереологических Оценка числа дофаминергических нейронов в Substantia мыши, с помощью оптических фракционатор и стандартных микроскопии оборудование

In pre-clinical Parkinson&#39;s disease research, analysis of the nigrostriatal tract, including quantification of dopaminergic neuron loss within the ...