Name: stereological estimation of cholinergic fiber length in the nucleus basalis of meynert of the mouse brain
Uploaded: 2020-02-05T12:00:00
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Este trabajo fue apoyado por subvenciones a W.Z.S. del Servicio de Investigación y Desarrollo Médico, El Departamento de Asuntos de Veteranos (Merit Review 1I01 BX001067-01A2), la Asociación de Alzheimer (NPSPAD-11-202149), y recursos del Midwest Biomedical Fundación de Investigación.

Todos los procedimientos para el uso de estos animales han sido aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales del Centro Médico de Asuntos de Veteranos de Kansas City. Para los experimentos se utilizaron ratones de dieciocho meses de edad que sobreexpresaban la proteína precursora betamiloide mutante sueca (APPswe) y sus camaradas C57/BL6 WT. Los detalles de la cría y el genotipado se dan en He et al.8.
1. Perfusión y procesamiento de tejidos...

<ol>
	<li>Mouton, P. R., Gokhale, A. M., Ward, N. L., West, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereological+length+estimation+using+spherical+probes.">Stereological length estimation using spherical probes.</a> Journal of Microscopy. 206, 54-64 (2002).</li><li>Whitehouse, P. J., Price, D. L., Clark, A. W., Long Coyle, J. T., DeLong, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alzheimer+disease:+evidence+for+selective+loss+of+cholinergic+neurons+in+the+nucleus+basalis.">Alzheimer disease: evidence for selective loss of cholinergic neurons in the nucleus basalis.</a> Annals of Neurology. 10 (2), 122-126 (1981).</li><li>Davies, P., Maloney, A. 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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholinergic+forebrain+degeneration+in+the+APPswe/PS1DeltaE9+transgenic+mouse.">Cholinergic forebrain degeneration in the APPswe/PS1DeltaE9 transgenic mouse.</a> Neurobiology of Disease. 28 (1), 3-15 (2007).</li><li>Stokin, G. 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Anesthesia Induction and Maintenance.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2019).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents.">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e3564 (2012).</li><li>Mouton, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Unbiased Stereology-A Concise Guide. , (2011).</li><li>West, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Getting+started+in+stereology.">Getting started in stereology.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2013 (4), 287-297 (2013).</li><li>West, M. 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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+analysis+of+the+capillary+network+of+aged+APPswe/PS1dE9+transgenic+mice.">Quantitative analysis of the capillary network of aged APPswe/PS1dE9 transgenic mice.</a> Neurobiology of Aging. 36 (11), 2954-2962 (2015).</li><li>Gutierrez-Jimenez, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disturbances+in+the+control+of+capillary+flow+in+an+aged+APP(swe)/PS1DeltaE9+model+of+Alzheimer's+disease.">Disturbances in the control of capillary flow in an aged APP(swe)/PS1DeltaE9 model of Alzheimer's disease.</a> Neurobiology of Aging. 62, 82-94 (2018).</li><li>Gundersen, H. J., Jensen, E. B., Kieu, K., Nielsen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+efficiency+of+systematic+sampling+in+stereology--reconsidered.">The efficiency of systematic sampling in stereology--reconsidered.</a> Journal of Microscopy. 193, 199-211 (1999).</li><li>Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+study+of+the+capillaries+within+the+white+matter+of+the+Tg2576+mouse+model+of+Alzheimer's+disease.">Quantitative study of the capillaries within the white matter of the Tg2576 mouse model of Alzheimer's disease.</a> Brain and Behavior. 9 (4), 01268 (2019).</li><li>McNeal, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unbiased+Stereological+Analysis+of+Reactive+Astrogliosis+to+Estimate+Age-Associated+Cerebral+White+Matter+Injury.">Unbiased Stereological Analysis of Reactive Astrogliosis to Estimate Age-Associated Cerebral White Matter Injury.</a> Journal of Neuropathology Experimental Neurology. 75 (6), 539-554 (2016).</li><li>Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Passive+(amyloid-beta)+immunotherapy+attenuates+monoaminergic+axonal+degeneration+in+the+AbetaPPswe/PS1dE9+mice.">Passive (amyloid-beta) immunotherapy attenuates monoaminergic axonal degeneration in the AbetaPPswe/PS1dE9 mice.</a> Journal of Alzheimer's Disease. 23 (2), 271-279 (2011).</li><li>Gagnon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+Sprouting+of+Dopamine+and+Serotonin+Axons+in+the+Pallidum+of+Parkinsonian+Monkeys.">Evidence for Sprouting of Dopamine and Serotonin Axons in the Pallidum of Parkinsonian Monkeys.</a> Frontiers of Neuroanatomy. 12, 38 (2018).</li><li>Boncristiano, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholinergic+changes+in+the+APP23+transgenic+mouse+model+of+cerebral+amyloidosis.">Cholinergic changes in the APP23 transgenic mouse model of cerebral amyloidosis.</a> Journal of Neuroscience. 22 (8), 3234-3243 (2002).</li></ol>

Aquí demostramos un método para estimar la densidad de fibras colinérgicas en el NBM utilizando una sonda de bola espacial (esfera). Esta sonda estima la longitud total de la fibra en la región de interés. La longitud total se puede dividir por el volumen de la región para obtener la densidad de fibra. Para estimar el volumen de la región, se utilizó el método de recuento de puntos Cavalieri. El método de recuento de puntos Cavalieri es un estimador imparcial y eficiente de un volumen de referencia 3D para cual...

Las estimaciones cuantitativas de longitud y/o densidad de las fibras nerviosas en el cerebro son parámetros importantes de los estudios neuropatológicos. La longitud de los axónicos colinérgicos, dopaminérgicos y serotonérgicos en varias regiones cerebrales a menudo se correlacionan con las funciones específicas de la región. Debido a que la distribución de estos axones es generalmente heterogénea, la estereología basada en el diseño se utiliza para evitar sesgos durante el muestreo. La sonda de bola espacial de estereología ha sido diseñada para proporcionar medidas eficientes y confiables de estructuras similares a líneas como fibras neuronales en una región de interés1. La sonda hace una esfera virtual que se impone sistemáticamente en el tejido para medir las intersecciones de línea con la superficie de la sonda. Debido a que es imposible poner sondas de esfera en el tejido para su análisis, el software disponible comercialmente proporciona una esfera tridimensional virtual (3D), que es básicamente una serie de círculos concéntricos de varios diámetros que representan la superficie de la sonda de esfera.
La neurodegeneración colinérgica selectiva es una de las características consistentes de la enfermedad de Alzheimer (AD)2,3,4. Transmisión colinérgica disfuncional se considera un factor causal para el deterioro cognitivo en AD. Disfunción colinérgica también es evidente en muchos otros trastornos mentales como el Parkinson, adicción, y la esquizofrenia. Diferentes aspectos de la neurodegeneración colinérgica se estudian en modelos animales (por ejemplo, reducción en la acetilcolina5, proteína ChAT6, neurodegeneración de fibra colinérgica en las proximidades de las placas amiloideas6,y disminución de fibras colinérgicas y varicosidades sinápticas7,8). Se cree que la degeneración de la fibra tiene lugar antes que la pérdida neuronal, porque la pérdida neuronal colinérgica no siempre se observa en los estudios. La mayoría de las neuronas colinérgicas están en el antecebrano basal y el tallo cerebral, y sus axones se proyectan a varias regiones cerebrales como los cortices y el hipocampo. NBM está situado en el antecebra basal y se encuentra como una de las áreas cerebrales comúnmente afectadas en AD.
El método fraccionador de estereología se basa en el muestreo aleatorio sistemático de un tejido en múltiples niveles. La fracción de muestreo de sección (SSF) es el muestreo sistemático no basado en computadora de secciones para el método de estereología fraccionador. La fracción de muestreo de área (ASF) es el fraccionamiento de un área de la región de interés en la sección. Fracción de muestreo de espesor (TSF) es el fraccionamiento del espesor de una sección. La sonda de bola espacial nos permite cuantificar perfiles de interés en una esfera 3D en ubicaciones fraccionadas. Aquí utilizamos una sonda de bola espacial para estimar la longitud total de las fibras colinérgicas en el NBM del cerebro del ratón para ilustrar los procedimientos. El protocolo actual proporciona detalles sobre el procesamiento de tejidos, métodos de muestreo para la estereología, tinción inmunohistoquímica utilizando el anticuerpo ChAT y estereología imparcial para estimar la longitud de la fibra colinérgica y la densidad de fibra en el NBM del cerebro del ratón.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>ABC kit</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>PK6100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-ChAT Antibody</td>
			<td>Millipore, MA, USA</td>
			<td>AB144P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine anti-goat IgG-B</td>
			<td>Santacruz Biotechnology</td>
			<td>SC-2347</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum, Adult</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>B9433</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Lieca Microsystems, Buffalo Grove, IL, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>D5652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene Glycol</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>324558</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>G2025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen Peroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>H1009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immpact-DAB kit</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>SK4105</td>
			<td>Enhanced DAB peroxidase substrate solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Westward Pharmaceuticals, NJ, USA</td>
			<td>0143-9509-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Lieca Microsystems, Buffalo Grove, IL, USA</td>
			<td>AF6000</td>
			<td>Equipped with motorized stage and IMI-tech color digital camera</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optimum cutting temperature (O.C.T.) embedding medium</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences, PA, USA</td>
			<td>62550-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permount mounting medium</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences, PA, USA</td>
			<td>17986-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereologer Software</td>
			<td>Stereology Resource Center, Inc. St. Petersburg, FL, USA</td>
			<td>Stereologer2000</td>
			<td>Installed on a Dell Desktop computer.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizma Base</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>T1503</td>
			<td>Tris base</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizma hydrochloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>T5941</td>
			<td>Tris hydrochloride</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Bayer, Leverkusen, Germany</td>
			<td>Rompun</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylenes, Histological grade</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td>534056</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

stereological estimation of cholinergic fiber length in the nucleus basalis of meynert of the mouse brain

La longitud de los axónicos colinérgicos u otros axónicos neuronales en varias regiones cerebrales a menudo se correlacionan con la función específica de la región. La estereología es un método útil para cuantificar los perfiles neuronales de varias estructuras cerebrales. Aquí proporcionamos un protocolo de estereología basado en software para estimar la longitud total de las fibras colinérgicas en el núcleo basalis de Meynert (NBM) del antebrazo basal. El método utiliza una sonda de bola espacial para estimaciones de longitud. Las fibras colinérgicas se visualizan mediante la colina acetiltransferasa (ChAT) inmunomanchado con el líquido rábano peroxidasa-diaminobenzidina (HRP-DAB) sistema de detección. El protocolo de tinción también es válido para la estimación de fibra y número de célula en varias regiones cerebrales utilizando software de estereología. El protocolo de estereología se puede utilizar para la estimación de cualquier perfil lineal como fibras colinoceptivas, fibras dopaminérgicas/catecolaminas, fibras serotonérgicas, procesos de astrocitos o incluso perfiles vasculares.

Los resultados representativos se muestran en la Tabla 1 y la Figura 5. El grupo C, que fue decodificado como grupo APPswe (APP), tenía una longitud de fibra significativamente menor(Figura 5B)y densidad de longitud de fibra(Figura 5C)en comparación con sus "littermates" de tipo salvaje (WILD). Los resultados mostraron que no hubo ninguna diferencia significativa en el volumen del...

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Stereological Estimation of Cholinergic Fiber Length in the Nucleus Basalis of Meynert of the Mouse Brain

La longitud de la fibra neuronal dentro de una estructura tridimensional de una región cerebral es un parámetro confiable para cuantificar la integridad estructural neuronal específica o la degeneración. Este artículo detalla un método de cuantificación estereológica para medir la longitud de la fibra colinérgica dentro del núcleo basalis de Meynert en ratones como ejemplo.

Estimación estereológica de la longitud de la fibra colinérgica en el núcleo basalis de Meynert del cerebro del ratón

The length of cholinergic or other neuronal axons in various brain regions are often correlated with the specific function of the region. Stereology is a ...

La neurodenegación en muchos trastornos neurológicos es un proceso crónico del cual la pérdida de fibra neuronal a menudo ocurre antes de la pérdida del cuerpo celular. La cuantificación estereológica de las fibras neuronales en tres dimensiones proporciona un método sensible y preciso para detectar el cambio neurodegenerativo temprano. Esta tecnología utiliza el fraccionamiento imparcial fiable y eficiente basado en computadora de bolas espaciales para medir las longitudes de las estructuras de línea como las fibras neuronales en 3D.La demostración del procedimiento será realizada por Prabhakar Singh, un post-doc y nuestro experto en estereología, y David Peng, el asistente de investigación en mi laboratorio. Después de confirmar una falta de respuesta al reflejo del pedal en el ratón anestesiado, perfunda transcardiariamente con aproximadamente 50 mililitros de DPBS molar 0,1 frío helado, seguido de aproximadamente 25 mililitros de 4%PFA en 0,1 MOLar PBS. Al final de la perfusión, después de fijar el cerebro en un recipiente de 4%PFA fresco durante 24 horas a cuatro grados centígrados.Al día siguiente, lave el cerebro con tres lavados de uno a dos minutos en DPBS frescos por lavado y transfiera el cerebro a una sacarosa del 15% en una solución de 0.1 DPBS durante la noche. A la mañana siguiente, coloque el cerebro en una solución de 30% de sacarosa y 0,1 DPBS molar durante 48 horas a cuatro grados centígrados. Al final de la incubación, transfiera el cerebro a una cámara de criotomo preestilada a menos 20 grados centígrados.Los cerebros se pueden mantener en tubos sellados y almacenarse a menos 80 grados centígrados. Para la sección, incruste la muestra de tejido en un medio de incrustación de temperatura de corte óptimo y monte la muestra en un disco de muestra. A continuación, adquiera secciones de 30 micrómetros de espesor en serie en un plano coronal en el criotomo, transfiriendo cada sección a pozos individuales de una placa de cultivo de 24 pozos que contiene solución crioprotectora en preparación para un almacenamiento de menos 20 grados centígrados.Para identificar la primera y la última sección de cada cerebro, compare las características morfológicas con un atlas de cerebro de ratón estándar. NBM comienza en bregma menos 0.0 milímetros y termina en menos 1.6 milímetros. La selección de cada octava sección produce un total de seis a siete secciones y permite un coeficiente de error adecuado para una estimación de volumen y longitud de fibra.Para el etiquetado inmunohistoquímico de las secciones del tejido, después de bloquear cualquier unión no específica con un suero bovino 10%normal en 0,1%Tritón X-100 en solución salina tamponada Tris, etiquete las secciones con el anticuerpo primario de interés durante 48 horas a cuatro grados Celsius. Al final de la incubación, lave las secciones tres veces durante tres minutos en solución salina fresca tamponada Tris por lavado, seguida de incubación con un anticuerpo secundario biotinilado adecuado durante una hora a temperatura ambiente. Al final de la incubación, lave las secciones tres veces en solución salina fresca tamponada Tris como se demuestra, seguida de tinción con complejo de biotina peroxidasa de Avidina y solución de sustrato de peroxidasa DAB de acuerdo con los protocolos del fabricante.Después del lavado, monte todas las secciones de una muestra de tejido cerebral en un portaobjetos gelatinizado y permita que las muestras se sequen al aire. Para deshidratar las secciones, sumerja las muestras dos veces durante cinco minutos por dilución en soluciones secuenciales ascendentes de etanol como se indica, seguidas de la limpieza con dos lavados de xileno de 10 minutos. A continuación, utilice un medio de montaje adecuado para colocar los cubreobjetos en las diapositivas.Para la estereología, abra un nuevo estudio en el software. Se abrirá un cuadro de diálogo de inicialización del estudio. Rellene la información del estudio y confirme que se ha seleccionado la opción basada en fracciones de varios niveles.Haga doble clic en el volumen para abrir el cuadro de diálogo de volumen. Asigne un nombre a la entidad de interés y seleccione el sondeo de recuento de puntos de región y haga clic en Siguiente. Haga doble clic en longitud y proporcione un nombre de la operación.Seleccione la sonda de esfera y haga clic en Siguiente. En el cuadro de inicialización del caso, para codificar los grupos antes de iniciar el estudio, establezca el número total de secciones que comienzan desde la primera sección que contiene el área de interés hasta la última sección que contiene el área de interés y el intervalo de muestreo de sección en ocho. Haga clic junto a la opción para abrir el cuadro de diálogo de inicialización del sondeo, que establecerá automáticamente la ampliación más baja para la selección de región y la estimación del volumen y confirmará la configuración.Haga clic en vista previa para comprobar si la región de interés se puede identificar en la ampliación inferior seleccionada. Introduzca 50.000 micrómetros de cubo por punto para la fracción de volumen de región y haga clic en vista previa y listo. En el aumento alto del objeto, establezca la longitud en 63X y la longitud de doble clic para abrir el cuadro de diálogo de la esfera de longitud.Establezca el diámetro de esta esfera en 10 micrómetros y haga clic en hecho. Establezca los valores adecuados para el área del marco, la altura del marco, la zona de protección y el espaciado del marco. A continuación, haga clic en siguiente y siga las instrucciones proporcionadas por el software.Para insertar la primera sección, coloque la diapositiva en la etapa del microscopio bajo un objetivo 5X y haga clic en la flecha verde para dibujar un límite arbitrario alrededor del NBM para definir la región de interés. Haga clic en la flecha verde y listo para cambiar el objetivo 63X para obtener las mediciones de fibra de la fracción actual. Aparecerá el cuadro de diálogo Grosor de sección.Establezca la superficie superior e inferior de la sección para medir el grosor real de la sección utilizando la perilla de enfoque manual del eje z y haga clic en hecho. Mueva el eje z lentamente de arriba a abajo en la altura del marco de la sección para marcar todas las fibras que se intersecan en la superficie de la sonda de esfera virtual. Cuando todas las fibras se hayan marcado, haga clic junto para avanzar a la siguiente ubicación.Cuando se hayan completado todas las fracciones, haga clic en la flecha verde. El software le pedirá que se inserte la siguiente sección. Ponga la siguiente muestra en la diapositiva en el foco usando el objetivo 5X y repita la medición de fibra como acaba de demostrar.Una vez medidas todas las secciones, el software generará un resultado para el caso que muestra el coeficiente de valores de error. Si el coeficiente de error es aceptable, proceda al siguiente caso. Si el coeficiente de error no es aceptable, el software proporcionará recomendaciones para cambiar algunos de los parámetros.Cuando se hayan completado todos los casos, genere resultados para cada caso y grupo. En este experimento representativo, el grupo de proteínas precursoras de amiloide beta mutante sueco demostró una longitud de fibra significativamente menor y densidad de longitud de fibra en comparación con sus compañeros de basura de tipo salvaje. Los resultados también mostraron que no había ninguna diferencia significativa en el volumen del NBM entre los dos grupos analizados.Esta técnica requiere la adquisición adecuada en la orientación correcta y un buen método de tinción con el período de incubación. El protocolo de estereología se puede utilizar para la estimación de cualquier perfil lineal como otras fibras neuronales, procesos de astrocitos o incluso perfiles vasculares.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

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Stereological Estimation of Dopaminergic Neuron Number in the Mouse Substantia Nigra Using the Optical Fractionator and Standard Microscopy Equipment

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