Name: a reversible silicon oil-induced ocular hypertension model in mice
Uploaded: 2019-11-15T10:00:00
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すべての手続きは、スタンフォード大学の制度動物ケアと使用委員会(IACUC)によって承認されています。
1. SOのカメラ内注入による眼圧誘発
<ol><li>ピペットプーラーでガラスキャピラリーを引っ張ってマイクロピペットを生成し、カメラ内SO注入用のガラスマイクロピペットを準備します。マイクロピペットの先端で開口部を切り、さらにマイクログラインダーベベルマ?...

<ol>
	<li>Chang, E. E., Goldberg, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glaucoma+2.0:+neuroprotection,+neuroregeneration,+neuroenhancement.">Glaucoma 2.0: neuroprotection, neuroregeneration, neuroenhancement.</a> Ophthalmology. 119 (5), 979-986 (2012).</li><li>Tham, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+prevalence+of+glaucoma+and+projections+of+glaucoma+burden+through+2040:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Global prevalence of glaucoma and projections of glaucoma burden through 2040: a systematic review and meta-analysis.</a> Ophthalmology. 121 (11), 2081-2090 (2014).</li><li>Pang, I. H., Clark, A. 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M., Caprioli, J., Piri, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+binding+protein+with+multiple+splicing:+a+new+marker+for+retinal+ganglion+cells.">RNA binding protein with multiple splicing: a new marker for retinal ganglion cells.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 51 (2), 1052-1058 (2010).</li><li>Rodriguez, A. R., de Sevilla Muller, L. P., Brecha, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+RNA+binding+protein+RBPMS+is+a+selective+marker+of+ganglion+cells+in+the+mammalian+retina.">The RNA binding protein RBPMS is a selective marker of ganglion cells in the mammalian retina.</a> Journal of Comparative Neurology. 522 (6), 1411-1443 (2014).</li><li>Smith, R. 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ここでは、SOのカメラインスインジェクションによってマウスの目に持続的なIOP上昇を誘導するための簡単で効果的な手順を示します。この手順は顕微鏡の下のマイクロディセクションの経験を持つ誰によってすぐに学ぶことができる。障害の主な潜在的なリスクは、角膜切開からのSOの漏出です。しかし、SOを用いた利点の一つは、油滴が目に見えて測定可能であるため、小さすぎて注射後?...

網膜神経節細胞(RGC)及びその軸索の進行性喪失は、網膜1における一般的な神経変性疾患である緑内障の特徴である。2040年までに40~80歳の1億人以上の個人に影響を及ぼす。IOPは緑内障の発症および進行における唯一の変更可能な危険因子のままである。緑内障の病因、進行、および潜在的な治療法を探索するためには、ヒト患者の主要な特徴を複製する信頼性が高く、再現性があり、誘導可能な実験的高血圧/緑内障モデルが不可欠である。
IOPは、後房内の毛様体から前房への水性液流入と、前房の角度でトラベキュラーメッシュワーク(TM)を通る流出に依存する。定常状態に達すると、IOP は維持されます。流入が流出を超えたり下回ったりすると、IOP はそれぞれ上昇または下降します。前房の角度を閉塞するか、またはTMを損傷することによって水性流出を減少させることにより、いくつかの緑内障モデルが確立された3、4、5、6、7、8、9、10である。これらのモデルは通常、不可逆的な眼組織損傷に関連しており、前房内の高いIOPは角膜浮腫や眼内炎症などの望ましくない合併症を引き起こし、網膜イメージングおよび視覚機能アッセイを行い、解釈することが困難になる。
これらの欠点を克服するモデルを開発するために、ヒトの静脈小体手術11、12の術後合併症として生じるシリコーンオイル(SO)によって引き起こされる十分に文書化された二次緑内障に着目した。SOは、その高い表面張力のために網膜手術のタンポナードとして使用されます。しかし、SOは水性および静脈内液体よりも軽く、前房への水性の流れを防ぐので、瞳孔を物理的に閉塞させることができる。閉塞は水性ユーモアの蓄積のために後部室のIOPの上昇を引き起こす。これは、二次緑内障の主な特徴を持つ、カメラルSO注射と瞳孔ブロック13に基づく新規な眼高血圧マウスモデルを開発し、特徴づける動機となった:効果的な瞳孔ブロック、SO除去後に正常に戻ることができる重要なIOP上昇、緑内障神経変性。
ここでは、SO注射と除去およびIOP測定を含むマウス眼におけるSO誘発性眼圧の詳細なプロトコルを提示する。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:915px;" width="915">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">0.5% proparacaine hydrochloride</td>
			<td style="width:232px;">Akorn, Somerset</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td style="width:279px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">10mL syinge</td>
			<td style="width:232px;">BD</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td>Luer-Lok Tip</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:26px;">18G needle</td>
			<td style="width:232px;">BD</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td>with Regular Bevel, Needle Length:25.4 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">2,2,2-Tribromoethanol (Avertin)</td>
			<td style="width:232px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:147px;">CAS# 75-80-9</td>
			<td>50g</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">32G nano</td>
			<td style="width:232px;">BD</td>
			<td style="width:147px;">320122</td>
			<td>BD Nano Ultra Fine Pen Needle-32G 4mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">33G ophalmology needle</td>
			<td style="width:232px;">TSK/ VWR</td>
			<td style="width:147px;">TSK3313/ 10147-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">5mL syinge</td>
			<td style="width:232px;">BD</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td>Luer-Lok Tip</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">AnaSed Injection (xylazine)</td>
			<td style="width:232px;">Butler Schein</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td>100 mg/ml, 50 ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">artificial tears</td>
			<td style="width:232px;">Alcon Laboratories</td>
			<td style="width:147px;">300651431414</td>
			<td>Systane Ultra Lubricant Eye Drops</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">BSS PLUS Irrigating solution</td>
			<td style="width:232px;">Alcon Laboratories</td>
			<td style="width:147px;">65080050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dual-Stage Glass Micropipette Puller</td>
			<td style="width:232px;">NARISHIGE</td>
			<td style="width:147px;">PC-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:257px;">EZ-7000 Classic System</td>
			<td style="width:232px;">EZ system</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:232px;">VetOne</td>
			<td style="width:147px;">502017</td>
			<td>isoflurane, USP, 250ml/bottle</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">IV Administration sets</td>
			<td style="width:232px;">EXELint/ Fisher</td>
			<td style="width:147px;">29081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">KETAMINE HYDROCHLORIDE INJECTION</td>
			<td style="width:232px;">VEDCO</td>
			<td style="width:147px;">50989-996-06</td>
			<td>KETAVED 100mg/ml * 10ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">microgrind bevelling machine</td>
			<td style="width:232px;">NARISHIGE</td>
			<td style="width:147px;">EG-401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">Miniature EVA Tubing</td>
			<td style="width:232px;">McMaster-Carr</td>
			<td style="width:147px;">1883T4</td>
			<td>0.05&#34; ID, 0.09&#34; OD, 10 ft. Length</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">silicon oil (SILIKON)</td>
			<td style="width:232px;">Alcon Laboratories</td>
			<td style="width:147px;">8065601185</td>
			<td>1,000 mPa.s</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">Standard Glass Capillaries</td>
			<td style="width:232px;">WPI/ Fisher</td>
			<td style="width:147px;">1B150-4</td>
			<td>4 in. (100mm) OD 1.5mm ID 0.84mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TonoLab tonometer</td>
			<td style="width:232px;">Colonial Medical Supply, Finland</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">veterinary antibiotic ointment</td>
			<td style="width:232px;">Dechra Veterinary</td>
			<td style="width:147px;">1223RX</td>
			<td>BNP ophthalmic ointment, Vetropolycin</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a reversible silicon oil-induced ocular hypertension model in mice

眼内圧の上昇(IOP)は緑内障の十分に文書化された危険因子である。ここでは、ヒトのビトレチナル手術でタンポネード剤としてシリコーンオイル(SO)を用いた術後合併症を模倣するマウスにおいて、安定なIOP上昇を一貫して誘導するための新規で効果的な方法について説明する。このプロトコルでは、SOは、瞳孔を遮断し、水性ユーモアの流入を防ぐために、マウスの眼の前房に注入される。後室は水性のユーモアを蓄積し、これは順番に後部セグメントのIOPを増加させます。単一のSO注射は、信頼性が高く、十分で安定したIOP上昇を生み出し、これは重大な緑内障神経変性を誘発する。このモデルは眼科医科で二次緑内障の真の複製である。さらに臨床設定を模倣するために、SOは、排水経路を再び開き、前房の角度でトラベキュラーメッシュワーク(TM)を通して排出される水性ユーモアの流入を可能にするために、前房から取り外すことができる。IOPはすぐに正常に戻るので、モデルは緑内障網膜神経節細胞に対するIOPを低下させる効果をテストするために使用することができる。この方法は簡単で、特別な装置や繰り返し手順を必要とせず、臨床状況を綿密にシミュレートし、多様な動物種に適用可能であり得る。ただし、わずかな変更が必要な場合があります。

注射の直後に、SO液滴が小さすぎ(≤1.5mm)13のために安定した眼圧を産生しないマウスを容易に同定できる。これらの動物は、その後の実験から除外されます。注射手順に従って、SO注射マウスの80%以上が1.6mmを超える液滴で終わる。これらのマウス眼のIOPを1回のSO注射後8週間、週に1回測定した。眼を受けるSOのIOPは高いままで、一般に対側対照眼のIOPを2倍にし、有効な瞳孔?...

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A Reversible Silicon Oil-Induced Ocular Hypertension Model in Mice

ここでは、シリコーンオイルのカメラインジェクションによるマウス目の眼圧高血圧および緑内化神経変性を誘導するプロトコルと、眼圧の上昇を戻すための前房からのシリコーンオイル除去の手順を提示する。通常。

マウスにおける可逆シリコンオイル誘発眼圧モデル

Elevated intraocular pressure (IOP) is a well-documented risk factor for glaucoma. Here we describe a novel, effective method for consistently inducing ...

緑内障は、可逆性失明の主な原因であり、眼球神経節細胞死および検眼神経変性を特徴とする。眼圧の上昇は、眼圧と呼ばれ、緑内障の最も認識された危険因子である。マウスなどの実験動物における単純だが効果的な眼圧モデルは、神経変性の緑頂水計を調査し、神経保護のための治療をテストするために重要である。結果を得て、ヒト患者に見られる二次緑内障を密接に模倣したマウスの眼圧モデルを開発する。このモデルは、瞳孔遮断のためにシリコーン油誘導によって引き起こされる二次緑内障を忠実に複製する。この手順は、IOP上昇が安定している単純であり、眼圧に関連する神経変性がマウス目に重篤である場合、さらに重要なことに、シリコーン油はマウスの目から容易に除去することができるので、眼圧性高血圧は可逆的である。この手順のデモンストレーションは、私の研究室のポストオペフェローであるFang Fang博士です。まず、ピペットプーラーでガラスキャピラリーを引っ張って、イントラケルシリコーンオイル注入用のガラスマイクロピペットを作ります。マイクロピペットの先端の開口部をカットし、マイクログラインダーベベル機を使用して先端を研ぎ、35〜40度のベベルを作ります。ベベルの端を磨き、水で洗ってすべての破片を取り除きます。使用前にマイクロピペットをオートクレーブ。角膜入り口用のパラセンテシス針を準備するには、32ゲージの針をルアーロックの5ミリリットルの注射器に取り付け、テープでさらに固定します。針ベベル先端を面を上げて30度に曲げます。シリコーンオイルインジェクターを準備するには、10ミリリットルのシリンジに鈍い端18ゲージ針を取り付けて固定します。その後、一方の端に18ゲージ針を持つプラスチックチューブを取り付け、もう一方の端を通して必要に応じてシリコーンオイルでいっぱいになります。9〜10週齢のC57黒6Jマウスを麻酔した後、ひげまたは尾の動きの欠如とつま先のピンチへの応答の欠如を確認してください。手術プラットフォーム上の横方向の位置にマウスを置きます。注射の前に5%プロパラカイン塩酸塩の1滴を角膜に塗布し、処置中の感度を低下させます。32ゲージのパラセンテシス針を使用して、四肢から約5ミリメートルの超時間象限で切開を行います。角膜の層を約3ミリメートル貫通してから前房に突き刺し、レンズや虹彩に触れないように注意する。針をゆっくりと引き出して、前房からトンネルを通って約1〜2マイクロリットルの水性ユーモラスを放出し、約8分間待って眼内圧をさらに低下させます。対側制御眼を測定して圧力を決定します。角膜トンネルを通してシリコーンオイルをプリロードしたガラスマイクロピペットを、斜め表面にベベルを下向きにして前房に挿入します。シリンジプランジャーをゆっくりと押し込み、オイル液滴が虹彩表面の大部分(直径約2.3~2.4ミリメートル)を覆うまで、シリコーンオイルを前房に注入します。マイクロピペットを前房に10秒間放置してからゆっくりと引き出します。上まぶたを軽く押して角膜切開を閉じ、シリコーンオイルの漏れを最小限に抑えます。そして、目の表面に抗生物質軟膏を適用します。麻酔から完全に回復するまで、加熱パッドの上にマウスを保管してください。前房からシリコーンオイルを取り除くために、マウスを麻酔し、つま先ピンチに対する応答の欠如を確認して、麻酔強度とウィスカーまたは尾翼の動きの欠如を決定します。手術プラットフォーム上にマウスを置き、テープで横方向の位置に固定します。5%プロパラカイン塩酸塩の1滴を角膜に塗布し、感度を下げます。あらかじめ作られた32ゲージのパラセンテシス針を使用して、シリコーンオイル液滴の端で約2〜5時の間に角膜の側頭象限に2つの切開を行います。最大速度で1角膜切開を通して灌漑液に接続された33ゲージの灌漑針を挿入する。他の角膜切開部を通してプランジャーなしでシリンジに取り付けられた別の33ゲージの排水針を挿入して、シリコーンオイル液滴が灌漑液で灌漑しながら前房を出るようにします。排水針を引き出し、その後、灌漑針を引き出します。ハミルトンシリンジに接続されたガラスマイクロピペットを使用して、空気泡を前房に注入して通常の深さを維持し、角膜切開部を閉じます。両眼に抗生物質軟膏を塗布し、麻酔から完全に回復するまで、加熱回復パッド上にマウスを維持します。マウスを誘導チャンバーに入れます。原稿に記載されているように麻酔をかけ、手順全体に人工涙を塗布することによって角膜を湿らせたままにします。生徒が完全に拡張できるように約15分待ちます。製品の指示に従って眼圧計を使用して両眼のIOPを測定します。眼圧計をマウスの目の近くに持ってきて、プローブの先端からマウス角膜までの距離を約3〜4ミリメートルに保ちます。測定ボタンを6回押して1つの読み取り値を生成し、各目から3つの機械生成測定値を得て平均IOPを取得します。全マウントレチナ・レチナル神経節細胞計数の免疫組織化学を行い、シリコーンオイル注射後8週間で犠牲となった動物に生き残った軸索の定量を行う。1.6ミリメートルを超えるシリコーン油滴を有するマウス眼内圧を、1回のシリコーン油注入後、週1回8週間測定した。油を受け取る眼の圧力は高いままで、主に効果的な瞳孔遮断を示す対側対照眼の圧力の2倍であった。マウスの別のグループでは、シリコーンオイルは、注射の2週間後に前房から洗い流された。角膜が回復するのを1週間待った後、眼圧はコントロールアイと同じ正常に戻った。シリコーン油誘発眼低血圧が神経節細胞のレチナル細胞に及ぼす影響を調べるため、リコーンオイル注入後の劇的な腎細胞死を示すRBPMS染色により、残存する全型マウントの末梢領域の生き残ったソマタを定量した。視神経半薄い断面の生き残った軸索は、注射の8週間後にPBD染色によって定量化された。シリコーン油誘発性高眼圧症には大きな軸索変性があった。動物は、Retinaの変化を決定するためにSLOOCTで画像化することができます。動物の視覚機能は、同様に、パターンERGおよびOKRによってアッセイすることができる。この眼圧モデルは、高IOP誘導緑度計神経変性症の調査を容易にする。また、前臨床的に有望な神経保護療法をテストするために使用することができます。.

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