Name: a reversible silicon oil-induced ocular hypertension model in mice
Uploaded: 2019-11-15T10:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Reversible Silicon Oil-Induced Ocular Hypertension Model in Mice at JoVE.com

Dette arbeidet er støttet av NIH tilskudd EY024932, EY023295, og EY028106 til YH.

Alle prosedyrer er godkjent av den institusjonelle Animal Care og use Committee (IACUC) ved Stanford University.
1. øye hypertensjon induksjon ved intracameral injeksjon av SO
<ol><li>Forbered et glass micropipette for intracameral SO injeksjon ved å trekke en glass kapillær med en pipette avtrekker å generere en micropipette. Skjær en åpning på tuppen av micropipette og gjør spissen enda skarpere med en microgrinder-beveling maskin for å lage en 35 ° − 40 ° skråkant.</li>
	<li...

<ol>
	<li>Chang, E. E., Goldberg, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glaucoma+2.0:+neuroprotection,+neuroregeneration,+neuroenhancement.">Glaucoma 2.0: neuroprotection, neuroregeneration, neuroenhancement.</a> Ophthalmology. 119 (5), 979-986 (2012).</li><li>Tham, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+prevalence+of+glaucoma+and+projections+of+glaucoma+burden+through+2040:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Global prevalence of glaucoma and projections of glaucoma burden through 2040: a systematic review and meta-analysis.</a> Ophthalmology. 121 (11), 2081-2090 (2014).</li><li>Pang, I. H., Clark, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+for+glaucoma+retinopathy+and+optic+neuropathy.">Rodent models for glaucoma retinopathy and optic neuropathy.</a> Journal of Glaucoma. 16 (5), 483-505 (2007).</li><li>Morrison, J. C., Johnson, E., Cepurna, W. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+models+for+glaucoma+research.">Rat models for glaucoma research.</a> Progress in Brain Research. 173, 285-301 (2008).</li><li>McKinnon, S. J., Schlamp, C. L., Nickells, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+retinal+ganglion+cell+death+and+glaucoma.">Mouse models of retinal ganglion cell death and glaucoma.</a> Experimental Eye Research. 88 (4), 816-824 (2009).</li><li>Chen, S., Zhang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Rodent+Model+of+Glaucoma+and+Its+Implications.">The Rodent Model of Glaucoma and Its Implications.</a> Asia Pacific Journal of Ophthalmology (Philadelphia). 4 (4), 236-241 (2015).</li><li>Sappington, R. M., Carlson, B. J., Crish, S. D., Calkins, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+microbead+occlusion+model:+a+paradigm+for+induced+ocular+hypertension+in+rats+and+mice.">The microbead occlusion model: a paradigm for induced ocular hypertension in rats and mice.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 51 (1), 207-216 (2010).</li><li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optic+neuropathy+due+to+microbead-induced+elevated+intraocular+pressure+in+the+mouse.">Optic neuropathy due to microbead-induced elevated intraocular pressure in the mouse.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 52 (1), 36-44 (2011).</li><li>Cone, F. E., Gelman, S. E., Son, J. L., Pease, M. E., Quigley, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+susceptibility+to+experimental+glaucoma+among+3+mouse+strains+using+bead+and+viscoelastic+injection.">Differential susceptibility to experimental glaucoma among 3 mouse strains using bead and viscoelastic injection.</a> Experimental Eye Research. 91 (3), 415-424 (2010).</li><li>Samsel, P. A., Kisiswa, L., Erichsen, J. T., Cross, S. D., Morgan, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+for+the+induction+of+experimental+glaucoma+using+magnetic+microspheres.">A novel method for the induction of experimental glaucoma using magnetic microspheres.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 52 (3), 1671-1675 (2011).</li><li>Ichhpujani, P., Jindal, A., Jay Katz, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silicone+oil+induced+glaucoma:+a+review.">Silicone oil induced glaucoma: a review.</a> Graefes Archieves for Clinical and Experimental Ophthalmology. 247 (12), 1585-1593 (2009).</li><li>Kornmann, H. L., Gedde, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glaucoma+management+after+vitreoretinal+surgeries.">Glaucoma management after vitreoretinal surgeries.</a> Current Opinion in Ophthalmology. 27 (2), 125-131 (2016).</li><li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silicone+oil-induced+ocular+hypertension+and+glaucomatous+neurodegeneration+in+mouse.">Silicone oil-induced ocular hypertension and glaucomatous neurodegeneration in mouse.</a> Elife. 8, (2019).</li><li>Kwong, J. M., Caprioli, J., Piri, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+binding+protein+with+multiple+splicing:+a+new+marker+for+retinal+ganglion+cells.">RNA binding protein with multiple splicing: a new marker for retinal ganglion cells.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 51 (2), 1052-1058 (2010).</li><li>Rodriguez, A. R., de Sevilla Muller, L. P., Brecha, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+RNA+binding+protein+RBPMS+is+a+selective+marker+of+ganglion+cells+in+the+mammalian+retina.">The RNA binding protein RBPMS is a selective marker of ganglion cells in the mammalian retina.</a> Journal of Comparative Neurology. 522 (6), 1411-1443 (2014).</li><li>Smith, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Systematic evaluation of the mouse eye : anatomy, pathology, and biomethods. , (2002).</li></ol>

Her viser vi en enkel, men effektiv prosedyre for å indusere vedvarende IOP-høyde i musen øyet ved intracameral injeksjon av SO. Denne prosedyren kan læres raskt av alle som har erfaring i microdissection under et mikroskop. Den primære potensielle risikoen for svikt er lekkasje av SO fra hornhinnen snitt. Men en av fordelene med å bruke SO er at fordi olje dråpe er synlig og målbar, kan vi lett identifisere mus som fikk dråper for liten til å indusere stabilt øye hypertensjon kort tid etter injeksjon og utelu...

Den progressive tap av retinal Ganglion celler (RGCs) og deres axons er kjennetegn på glaukom, en vanlig nevrodegenerative sykdom i Retina1. Det vil påvirke mer enn 100 000 000 individer 40 − 80 år gammel av 20402. IOP er fortsatt den eneste risikofaktoren som påvirkes i utviklingen og utviklingen av glaukom. For å utforske den patogenesen, progresjon, og potensielle behandlinger av glaukom, en pålitelig, reproduserbar, og induserbart eksperimentell øye hypertensjon/glaukom modell som replikerer viktige funksjoner av menneskelige pasienter er avgjørende.
IOP avhenger av vandig humor tilsig til fremre kammer fra ciliary kroppen i bakre kammer og utløp gjennom trabekulær meshwork (TM) i vinkelen av fremre kammer. Når en steady state er nådd, opprettholdes IOP. Når tilsig overstiger eller er mindre enn strøm, øker IOP eller faller hhv. Ved å redusere den vandige strømmen enten ved å okkluderer vinkelen til fremre kammer eller ved å skade TM, har flere glaukom-modeller blitt etablert3,4,5,6,7,8,9,10. Disse modellene er vanligvis forbundet med irreversible øye vevsskade, og den høye IOP i fremre kammeret fører også til uønskede komplikasjoner som hornhinnen ødem og intraokulært betennelse, som gjør Retinal Imaging og visuell funksjon analyser vanskelig å utføre og tolke.
Å utvikle en modell som overvinner disse svakhetene, fokuserte vi på den sudocumented sekundære glaukom forårsaket av silikon olje (så) som oppstår som en postoperativ komplikasjon av menneskelig vitreoretinal kirurgi11,12. SO brukes som en tamponade i Netthinne operasjoner på grunn av sin høye overflatespenning. Men så kan fysisk tette eleven fordi det er lettere enn den vandige og glasslegemet væsker, som hindrer vandig strømme inn i fremre kammeret. Hindringen forårsaker IOP-høyden i bakre kammer på grunn av den vandige humor akkumulering. Dette motiverte oss til å utvikle og karakterisere en roman øye hypertensjon mus modell basert på intracameral så injeksjon og Pupillary blokk13, med viktige funksjoner i sekundær glaukom: effektiv Pupillary blokk, betydelig IOP-høyde som kan gå tilbake til normal etter so fjerning, og glaucomatous neurodegeneration.
Her presenterer vi en detaljert protokoll for så-indusert øye hypertensjon i musen øyet, inkludert så injeksjon og fjerning og IOP-måling.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:915px;" width="915">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">0.5% proparacaine hydrochloride</td>
			<td style="width:232px;">Akorn, Somerset</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td style="width:279px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">10mL syinge</td>
			<td style="width:232px;">BD</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td>Luer-Lok Tip</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:26px;">18G needle</td>
			<td style="width:232px;">BD</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td>with Regular Bevel, Needle Length:25.4 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">2,2,2-Tribromoethanol (Avertin)</td>
			<td style="width:232px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:147px;">CAS# 75-80-9</td>
			<td>50g</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">32G nano</td>
			<td style="width:232px;">BD</td>
			<td style="width:147px;">320122</td>
			<td>BD Nano Ultra Fine Pen Needle-32G 4mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">33G ophalmology needle</td>
			<td style="width:232px;">TSK/ VWR</td>
			<td style="width:147px;">TSK3313/ 10147-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">5mL syinge</td>
			<td style="width:232px;">BD</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td>Luer-Lok Tip</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">AnaSed Injection (xylazine)</td>
			<td style="width:232px;">Butler Schein</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td>100 mg/ml, 50 ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">artificial tears</td>
			<td style="width:232px;">Alcon Laboratories</td>
			<td style="width:147px;">300651431414</td>
			<td>Systane Ultra Lubricant Eye Drops</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">BSS PLUS Irrigating solution</td>
			<td style="width:232px;">Alcon Laboratories</td>
			<td style="width:147px;">65080050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dual-Stage Glass Micropipette Puller</td>
			<td style="width:232px;">NARISHIGE</td>
			<td style="width:147px;">PC-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:257px;">EZ-7000 Classic System</td>
			<td style="width:232px;">EZ system</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:232px;">VetOne</td>
			<td style="width:147px;">502017</td>
			<td>isoflurane, USP, 250ml/bottle</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">IV Administration sets</td>
			<td style="width:232px;">EXELint/ Fisher</td>
			<td style="width:147px;">29081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">KETAMINE HYDROCHLORIDE INJECTION</td>
			<td style="width:232px;">VEDCO</td>
			<td style="width:147px;">50989-996-06</td>
			<td>KETAVED 100mg/ml * 10ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">microgrind bevelling machine</td>
			<td style="width:232px;">NARISHIGE</td>
			<td style="width:147px;">EG-401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">Miniature EVA Tubing</td>
			<td style="width:232px;">McMaster-Carr</td>
			<td style="width:147px;">1883T4</td>
			<td>0.05&#34; ID, 0.09&#34; OD, 10 ft. Length</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">silicon oil (SILIKON)</td>
			<td style="width:232px;">Alcon Laboratories</td>
			<td style="width:147px;">8065601185</td>
			<td>1,000 mPa.s</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">Standard Glass Capillaries</td>
			<td style="width:232px;">WPI/ Fisher</td>
			<td style="width:147px;">1B150-4</td>
			<td>4 in. (100mm) OD 1.5mm ID 0.84mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TonoLab tonometer</td>
			<td style="width:232px;">Colonial Medical Supply, Finland</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:257px;">veterinary antibiotic ointment</td>
			<td style="width:232px;">Dechra Veterinary</td>
			<td style="width:147px;">1223RX</td>
			<td>BNP ophthalmic ointment, Vetropolycin</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a reversible silicon oil-induced ocular hypertension model in mice

Forhøyet intraokulært trykk (IOP) er en godt dokumentert risikofaktor for glaukom. Her beskriver vi en ny, effektiv metode for konsekvent å indusere stabil IOP-høyde i mus som etterligner postoperativ komplikasjon til bruk av silikon (SO) som en tamponade agent i humant vitreoretinal kirurgi. I denne protokollen, SO injiseres inn i fremre kammer av musen øyet å blokkere eleven og hindre tilsig av vandig humor. Den bakre kammer akkumuleres vandig humor og dette i sin tur øker IOP av bakre segmentet. En enkelt SO-injeksjon gir pålitelig, tilstrekkelig og stabil IOP-høyde, noe som medfører betydelige glaucomatous neurodegeneration. Denne modellen er en sann replikere av sekundær glaukom i øye klinikken. For ytterligere å etterligne den kliniske innstillingen, så kan fjernes fra fremre kammer for å gjenåpne drenerings veien og tillate tilsig av vandig humor, som er drenert gjennom trabekulær meshwork (TM) i vinkelen av fremre kammer. Fordi IOP går raskt tilbake til normal, kan modellen brukes til å teste effekten av å senke IOP på glaucomatous retinal Ganglion celler. Denne metoden er grei, krever ikke spesialutstyr eller gjenta prosedyrer, tett simulerer kliniske situasjoner, og kan være aktuelt for ulike dyrearter. Det kan imidlertid være nødvendig med mindre endringer.

Kort tid etter injeksjonen kan vi lett identifisere mus som ikke produserer stabilt øye hypertensjon på grunn av at dråpene er for liten (≤ 1,5 mm)13. Disse dyrene er ekskludert fra senere eksperimenter. Etter injeksjon prosedyrene, mer enn 80% av så injisert mus ende opp med dråper større enn 1,6 mm. Vi målte IOP av disse muse øynene en gang i uken i 8 uker etter en enkelt så injeksjon. IOP i øyet som får så forble høy, generelt doble IOP av kontralateral kontroll øye, noe som ind...

Watch this Scientific Journal Video about A Reversible Silicon Oil-Induced Ocular Hypertension Model in Mice at JoVE.com

A Reversible Silicon Oil-Induced Ocular Hypertension Model in Mice

Her presenterer vi en protokoll for å indusere øye hypertensjon og glaucomatous neurodegeneration i muse øyne ved intracameral injeksjon av silikon olje og prosedyren for silikon olje fjerning fra fremre kammer for å returnere forhøyet intraokulært Trykk for å Normal.

En reversibel Silicon olje-indusert øye hypertensjon modell i mus

Elevated intraocular pressure (IOP) is a well-documented risk factor for glaucoma. Here we describe a novel, effective method for consistently inducing ...

Glaukom er den ledende årsaken til irreversibel blindhet, preget av retinal ganglion celledød og opto-neurodegeneration. Økning av intraokulært trykk, også kalt okulær hypertensjon, er den mest anerkjente risikofaktoren for glaukom. En enkel, men effektiv okulær hypertensjonsmodell hos eksperimentelle dyr som mus er viktig for å undersøke glaumetre i nevrodegenerasjon og testbehandling for nevrobeskyttelse.Dermed utvikler vi med resultater en museokulær hypertensjonsmodell som nøye etterligner den sekundære glaukom observert hos menneskelige pasienter. Denne modellen gjenskaper trofast det sekundære glaukomet forårsaket av silikonoljeindusert for pupilarblokkering. Prosedyren er enkel IOP-høyden er stabil, og hvis nevrodegenerasjonen forbundet med okulær hypertensjon er alvorlig i museøynene, enda viktigere, er okulær hypertensjon reversibel fordi silikonoljen lett kan fjernes fra museøynene.Å demonstrere prosedyren vil være Dr.Fang Fang, en post-op fyr fra laboratoriet mitt. Til å begynne med, lage et glass mikropipette for intracameral silikon olje injeksjon ved å trekke et glass kapillær med en pipette avtrekker. Klipp en åpning på spissen av mikropipetten og skjerpe spissen ved hjelp av en mikrosliper skråmaskin for å lage en 35 til 40-graders skråkant.Poler kantene på skråkanten og vask den med vann for å fjerne alt rusk. Autoklav mikropipetten før bruk. For å forberede paracentesis nålen for hornhinnen oppføring, fest en 32 gauge nål til en fem-milliliter sprøyte på en lokke lås og ytterligere feste den med tape.Bøy nålespissen, med forsiden opp, ved 30 grader. For å forberede silikonoljeinjektoren, fest og fest en stump ende 18 gauge nål på en 10-milliliter sprøyte. Fest deretter et plastrør med 18 gauge nålen i den ene enden og fyll opp med silikonolje etter behov gjennom den andre enden.Etter å ha bedøvet en ni til 10 uker gammel C57 svart 6J mus, se etter mangel på respons på tå klemme med mangel på bevegelse av whiskers eller halen. Plasser musen i en sidestilling på en operasjonsplattform. Påfør en dråpe 5% proparakainhydroklorid til hornhinnen før injeksjonen for å redusere følsomheten under prosedyren.Bruk 32 gauge paracentesis nålen for å gjøre en oppføring snitt på super temporal kvadrant ca 5 millimeter fra limbus. Tunnel gjennom lagene av hornhinnen i ca 3 millimeter før piercing inn i fremre kammer, vær forsiktig så du ikke berører linsen eller iris. Trekk nålen sakte for å frigjøre omtrent en til to mikroliter av vandig humor fra det fremre kammeret gjennom tunnelen og vent i omtrent åtte minutter for å redusere det intraokulære trykket ytterligere.Mål det kontralaterale kontrolløyet for å bestemme trykket. Sett glassmikropipetten forhåndslastet med silikonolje gjennom hornhinnen tunnelen inn i fremre kammer med skråkanten vendt ned i iris overflaten. Skyv sprøytestempelet langsomt for å injisere silikonolje i fremre kammer til oljedråpen dekker det meste av irisoverflaten, ca. 2,3 til 2,4 millimeter i diameter.La mikropipetten stå i fremre kammer i ytterligere 10 sekunder før du trekker den sakte tilbake. Skyv forsiktig øvre øyelokk for å lukke hornhinnen snitt for å minimere silikon oljelekkasje. Og deretter bruke antibiotika salve på øyeoverflaten.Hold musen på varmeputen til den er helt restituert fra anestesi. For å fjerne silikonolje fra fremre kammer, bedøve musen og deretter se etter mangel på respons på tå klemme for å bestemme bedøvelse styrke og mangel på bevegelse av whiskers eller halen. Plasser musen på en operasjonsplattform og fest den i sidestilling med tape.Påfør en dråpe 5% proparacainhydroklorid til hornhinnen for å redusere følsomheten. Ved hjelp av den forhåndsprodusede 32 gauge paracentesis nålen, gjør to snitt i den timelige kvadranten av hornhinnen mellom omtrent to og fem på kanten av silikonoljedråpen. Sett inn en 33 gauge vanning nål koblet til vanning løsning gjennom ett hornhinnen snitt ved maksimal hastighet.Sett inn en annen 33 gauge dreneringsnål festet til sprøyten uten stempel gjennom det andre hornhinnens snitt slik at silikonoljedråpen kan gå ut av fremre kammer mens du vanner med vanningsløsning. Trekk av dreneringsnålen og deretter vanningsnålen. Bruk en glassmikropipette koblet til en Hamilton sprøyte for å injisere en luftboble i fremre kammer for å opprettholde sin normale dybde og trykk for å lukke hornhinnen snitt.Påfør antibiotika salve på begge øynene og hold musen på oppvarming utvinning pad til fullt gjenopprettet fra anestesi. Plasser musen i et induksjonskammer. Bedøve det som beskrevet i manuskriptet og holde hornhinnen fuktig ved å bruke kunstige tårer gjennom hele prosedyren.Vent ca 15 minutter for å la eleven utvide seg fullt ut. Mål IOP i begge øynene ved hjelp av et tonometer i henhold til produktinstruksjonene. Ta tonometeret nær museøyet, og hold avstanden fra spissen av sonden til musen hornhinnen på omtrent tre til fire millimeter.Trykk på måleknappen seks ganger for å generere en avlesning og få tre maskingenererte avlesninger fra hvert øye for å skaffe seg gjennomsnittlig IOP. Utfør immunohistochemistry av hel-mount retinal ganglia celle telle optisk nerve semi-tynne seksjoner og kvantifisering av overlevende aksoner på dyrene ofret på åtte uker etter silikon olje injeksjon. Intraokulært trykk av museøyne med silikonoljedråper større enn 1,6 millimeter ble målt en gang i uken i åtte uker, etter en enkelt silikonoljeinjeksjon.Trykket i øyet som fikk oljen forble høyt, for det meste dobbelttrykket i det kontralaterale kontrolløyet som indikerer effektiv elevblokkering. I en annen gruppe mus ble silikonolje spylt fra fremre kammer to uker etter injeksjonen. Etter å ha ventet en uke for å la hornhinnen gjenopprette, kom intraokulært trykk tilbake til normalt, det samme som kontrolløyet.For å fastslå effekten av silikonoljeindusert okulær hypotensjon på retinale ganglionceller, ble den overlevende somataen i de perifere områdene av retinal hele braketten kvantifisert av RBPMS-farging som viste dramatisk retinal ganglioncelledød etter silikonoljeinjeksjon. De overlevende aksonene i optisk nerve halvtynne tverrsnitt ble kvantifisert av PBD-farging åtte uker etter injeksjonen. Det var en stor axon degenerasjon i silikonolje-indusert okulær hypertensjon.Dyrene kan avbildes med SLOOCT for å bestemme endringen i netthinnen. Den visuelle funksjonen til dyrene kan også analyseres av mønster ERG og OKR. Denne okulære hypertensjonsmodellen vil lette undersøkelsen av de høye IOP-induserte glaumetrene nevrodegenerasjon.Det kan også brukes til å teste lovende nevrobeskyttende terapier preklinisk.

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Pharmacology

Medicine

Unit 1

Cardiovascular Drugs: Antihypertensive Drugs

SCIENTISTS IN ACTION

Creation of Reversible Cholestatic Rat Model

Cholestasis is a clinical condition commonly encountered by both surgeons and gastroenterologists. Cholestasis can cause various physiological changes and ...

5/6th Nephrectomy in Combination with High Salt Diet and Nitric Oxide Synthase Inhibition to Induce Chronic Kidney Disease in the Lewis Rat

5/6th Nephrectomy i kombinasjon med høy Salt Kosthold og nitrogenoksidsyntase Hemming å indusere kronisk nyresykdom i Lewis Rat

Chronic kidney disease (CKD) is a global problem. Slowing CKD progression is a major health priority. Since CKD is characterized by complex derangements ...

A Laser-induced Mouse Model of Chronic Ocular Hypertension to Characterize Visual Defects

En laser-indusert Mouse Modell av kronisk okulær hypertensjon å karakterisere Visuelle defekter

Glaucoma, frequently associated with elevated intraocular pressure (IOP), is one of the leading causes of blindness. We sought to establish a mouse model ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Carotisar infusjoner for farmakokinetiske og farmakodynamiske Analyse av Taxaner i Mus

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

A Simple Critical-sized Femoral Defect Model in Mice

En enkel Kritisk store Femoral Defect Model i Mus

While bone has a remarkable capacity for regeneration, serious bone trauma often results in damage that does not properly heal. In fact, one tenth of all ...

A Murine Model of Irreversible and Reversible Unilateral Ureteric Obstruction

En Muse Modell av Irreversible og Reversibel Ensidig ureter Obstruksjon

Obstruction of the kidney may affect native or transplanted kidneys and results in kidney injury and scarring. Presented here is a model of obstructive ...

A Magnetic Microbead Occlusion Model to Induce Ocular Hypertension-Dependent Glaucoma in Mice

En magnetisk mikro Okklusjon modell for å indusere okulær hypertensjon avhengige Glaukom i Mus

The use of rodent models of glaucoma has been essential to understand the molecular mechanisms that underlie the pathophysiology of this multifactorial ...

A Repetitive Concussive Head Injury Model in Mice

En Gjentatte concussive hodeskade Model i Mus

Despite the concussion/ mild traumatic brain injury (mTBI) being the most frequent occurrence of traumatic brain injury, there is still a lack of ...

Shunt Surgery, Right Heart Catheterization, and Vascular Morphometry in a Rat Model for Flow-induced Pulmonary Arterial Hypertension

Shunt Surgery, Høyre hjertekateterisering, og Vaskulær morfometri i en rottemodell for Flow-indusert pulmonal arteriell hypertensjon

In this protocol, PAH is induced by combining a 60 mg/kg monocrotalin (MCT) injection with increased pulmonary blood flow through an aorto-caval shunt ...

Corneal Epithelial Abrasion with Ocular Burr As a Model for Cornea Wound Healing

Hornhinnen Epithelial slitasje med okulær Burr som modell for hornhinnen sårtilheling

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to ...