Name: automated counterflow centrifugal system for small-scale cell processing
Uploaded: 2019-12-12T12:00:00
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이 작업은 빅토리아 정부의 운영 인프라 지원 프로그램과 경제 개발, 일자리, 운송 및 자원부에서 제공하는 빅토리아 정부 기술 바우처에 의해 지원됩니다. RL은 국가 보건 및 의학 연구 위원회 경력 개발 펠로우십의 수혜자입니다. AL은 호주 대학원 상을 받는 사람입니다.

1. 버퍼 교환을위한 시약 및 셀 의 준비
<ol><li>클래스 2 층류 흐름 후드에서 버퍼 준비(재료 표참조). 주사기와 바늘 조립체를 사용하여 500 mL 식염수 백에서 식염수 50mL를 제거합니다. 이를 50 mL의 20% 인간 혈청 알부민(HSA)으로 대체하여 식염수로 2% HSA를 만들어 세척 완충제 역할을 합니다.</li>
	<li>배양 혈관으로부터 세포를 제거하고 세포 수를 수행하여 트라이판 블루 배제에 의한 시?...

<ol>
	<li>Lopes, A. G., Sinclair, A., Frohlich, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cost+Analysis+of+Cell+Therapy+Manufacture:+Autologous+Cell+Therapies,+Part+1.">Cost Analysis of Cell Therapy Manufacture: Autologous Cell Therapies, Part 1.</a> BioProcess International. 16 (3), (2018).</li><li>Hampson, B., Ceccarelli, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factories+of+the+future:+Can+Patient-Specific+Cell+Therapies+Get+There+from+Here?.">Factories of the future: Can Patient-Specific Cell Therapies Get There from Here?.</a> BioProcess International. 14 (4), (2016).</li><li>Preti, R., Daus, A., Hampson, B., Sumen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+success+for+commercial+cell+therapy+manufacturing.">Mapping success for commercial cell therapy manufacturing.</a> BioProcess International. 13 (9), 33-38 (2015).</li><li>Heathman, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+translation+of+cell-based+therapies:+clinical+landscape+and+manufacturing+challenges.">The translation of cell-based therapies: clinical landscape and manufacturing challenges.</a> Regenerative Medicine. 10 (1), 49-64 (2015).</li><li>Lipsitz, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+roadmap+for+cost-of-goods+planning+to+guide+economic+production+of+cell+therapy+products.">A roadmap for cost-of-goods planning to guide economic production of cell therapy products.</a> Cytotherapy. 19 (12), 1383-1391 (2017).</li><li>Lopes, A. G., Sinclair, A., Frohlich, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cost+Analysis+of+Cell+Therapy+Manufacture:+Autologous+Cell+Therapies,+Part+2.">Cost Analysis of Cell Therapy Manufacture: Autologous Cell Therapies, Part 2.</a> BioProcess International. 16 (4), 12-19 (2018).</li><li>Hanley, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+manufacturing+of+therapeutic+mesenchymal+stromal+cells+with+the+use+of+the+Quantum+Cell+Expansion+System.">Efficient manufacturing of therapeutic mesenchymal stromal cells with the use of the Quantum Cell Expansion System.</a> Cytotherapy. 16 (8), 1048-1058 (2014).</li><li>Leong, W., Nakervis, B., Beltzer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automation:+what+will+the+cell+therapy+laboratory+of+the+future+look+like?.">Automation: what will the cell therapy laboratory of the future look like?.</a> Cell Gene Therapy Insights. 4 (9), 679-694 (2018).</li><li>Galipeau, J., Sensebe, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+Stromal+Cells:+Clinical+Challenges+and+Therapeutic+Opportunities.">Mesenchymal Stromal Cells: Clinical Challenges and Therapeutic Opportunities.</a> Cell Stem Cell. 22 (6), 824-833 (2018).</li><li>Salmikangas, P., Kinsella, N., Chamberlain, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chimeric+Antigen+Receptor+T-Cells+(CAR+T-Cells)+for+Cancer+Immunotherapy+-+Moving+Target+for+Industry?.">Chimeric Antigen Receptor T-Cells (CAR T-Cells) for Cancer Immunotherapy - Moving Target for Industry?.</a> Pharmaceutical Research. 35 (8), 152 (2018).</li><li>James, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+short-term+gain+can+lead+to+long-term+pain.">How short-term gain can lead to long-term pain.</a> Cell Gene Therapy Insights. 3 (4), 271-284 (2017).</li><li>Rafiq, Q. A., Thomas, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+evolving+role+of+automation+in+process+development,+manufacture+of+cell,+gene-based+therapies.">The evolving role of automation in process development, manufacture of cell, gene-based therapies.</a> Cell Gene Therapy Insights. 2 (4), 473-479 (2016).</li><li>Rafiq, Q. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+Automated+Approaches+for+Cell+and+Gene+Therapy+Manufacture.">Emerging Automated Approaches for Cell and Gene Therapy Manufacture.</a> Cell Gene Therapy Insights. 4 (9), 911-914 (2018).</li><li>Contreras, T. J., Jemionek, J. F., French, J. E., Shields, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Granulocyte+Isolation+by+Continuous+Flow+Centrifugation+Leukapheresis+and+Counterflow+Centrifugation+Elutriation+(CFCL/CCE).">Human Granulocyte Isolation by Continuous Flow Centrifugation Leukapheresis and Counterflow Centrifugation Elutriation (CFCL/CCE).</a> Transfusion. 19 (6), 695-703 (1979).</li><li>Berger, T. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+elutriation+of+monocytes+within+a+closed+system+(Elutra&#8482;)+for+clinical-scale+generation+of+dendritic+cells.">Efficient elutriation of monocytes within a closed system (Elutra&#8482;) for clinical-scale generation of dendritic cells.</a> Journal of Immunological Methods. 298 (1), 61-72 (2005).</li><li>Chen, Y., Hoecker, P., Zeng, J., Dettke, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+of+Cobe+AutoPBSC+and+Gambro+Elutra+as+a+platform+for+monocyte+enrichment+in+dendritic+cell+(DC)+therapy:+Clinical+study.">Combination of Cobe AutoPBSC and Gambro Elutra as a platform for monocyte enrichment in dendritic cell (DC) therapy: Clinical study.</a> Journal of Clinical Apheresis. 23 (5), 157-162 (2008).</li><li>Whitford, W. G., Subramanian, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Continuous Processing in Pharmaceutical Manufacturing. , (2014).</li><li>. SMALL BATCH CELL SEPARATION, WASH &amp; CONCENTRATION Available from: <a target="_blank" href="https://www.scinogy.com/projects">https://www.scinogy.com/projects</a> (2019)</li><li>Yu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+Jurkat+T+Lymphocyte+Leukemia+Cells+by+an+Engineered+Interferon-Alpha+Hybrid+Molecule.">Targeting Jurkat T Lymphocyte Leukemia Cells by an Engineered Interferon-Alpha Hybrid Molecule.</a> Cellular Physiology and Biochemistry. 42 (2), 519-529 (2017).</li><li>Moharram, S. A., Shah, K., Kazi, J. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+Acute+Lymphoblastic+Leukemia+Cells+Display+Activation+of+Different+Survival+Pathways.">T cell Acute Lymphoblastic Leukemia Cells Display Activation of Different Survival Pathways.</a> Journal of Cancer. 8 (19), 4124 (2017).</li><li>Ling, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells+use+IDO+to+regulate+immunity+in+tumor+microenvironment.">Mesenchymal stem cells use IDO to regulate immunity in tumor microenvironment.</a> Cancer Research. 74 (5), 1576-1587 (2014).</li><li>Tanzeglock, T., Soos, M., Stephanopoulos, G., Morbidelli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+mammalian+cell+death+by+simple+shear+and+extensional+flows.">Induction of mammalian cell death by simple shear and extensional flows.</a> Biotechnology and Bioengineering. 104 (2), 360-370 (2009).</li><li>Aguado, B. A., Mulyasasmita, W., Su, J., Lampe, K. J., Heilshorn, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+viability+of+stem+cells+during+syringe+needle+flow+through+the+design+of+hydrogel+cell+carriers.">Improving viability of stem cells during syringe needle flow through the design of hydrogel cell carriers.</a> Tissue engineering. Part A. 18 (7-8), 806-815 (2012).</li><li>Zhu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydroxyethyl+starch+as+a+substitute+for+dextran+40+for+thawing+peripheral+blood+progenitor+cell+products.">Hydroxyethyl starch as a substitute for dextran 40 for thawing peripheral blood progenitor cell products.</a> Cytotherapy. 17 (12), 1813-1819 (2015).</li><li>Schwandt, S., Korschgen, L., Peters, S., Kogler, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cord+blood+collection+and+processing+with+hydroxyethyl+starch+or+non-hydroxyethyl+starch.">Cord blood collection and processing with hydroxyethyl starch or non-hydroxyethyl starch.</a> Cytotherapy. 18 (5), 642-652 (2016).</li><li>Stroncek, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Counter-flow+elutriation+of+clinical+peripheral+blood+mononuclear+cell+concentrates+for+the+production+of+dendritic+and+T+cell+therapies.">Counter-flow elutriation of clinical peripheral blood mononuclear cell concentrates for the production of dendritic and T cell therapies.</a> Journal of Translational Medicine. 12, 241 (2014).</li><li>Mfarrej, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-clinical+assessment+of+the+Lovo+device+for+dimethyl+sulfoxide+removal+and+cell+concentration+in+thawed+hematopoietic+progenitor+cell+grafts.">Pre-clinical assessment of the Lovo device for dimethyl sulfoxide removal and cell concentration in thawed hematopoietic progenitor cell grafts.</a> Cytotherapy. 19 (12), 1501-1508 (2017).</li><li>Abonnenc, M., Pesse, B., Tissot, J. D., Barelli, S., Lion, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automatic+washing+of+thawed+haematopoietic+progenitor+cell+grafts:+a+preclinical+evaluation.">Automatic washing of thawed haematopoietic progenitor cell grafts: a preclinical evaluation.</a> Vox Sanguinis. 112 (4), 367-378 (2017).</li><li>Panes, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expanded+allogeneic+adipose-derived+mesenchymal+stem+cells+(Cx601)+for+complex+perianal+fistulas+in+Crohn's+disease:+a+phase+3+randomised,+double-blind+controlled+trial.">Expanded allogeneic adipose-derived mesenchymal stem cells (Cx601) for complex perianal fistulas in Crohn's disease: a phase 3 randomised, double-blind controlled trial.</a> Lancet. 388 (10051), 1281-1290 (2016).</li><li>Lim, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First-In-Human+Administration+of+Allogeneic+Amnion+Cells+in+Premature+Infants+With+Bronchopulmonary+Dysplasia:+A+Safety+Study.">First-In-Human Administration of Allogeneic Amnion Cells in Premature Infants With Bronchopulmonary Dysplasia: A Safety Study.</a> Stem Cells Translational Medicine. 7 (9), 628-635 (2018).</li></ol>

설명된 자동화된 버퍼 교환 프로토콜은 간단하고 사용자 친화적입니다. 그럼에도 불구하고 이 프로토콜에는 중요하고 특별한 주의가 필요한 몇 가지 주요 단계가 있습니다. 우리의 경험에서, MCS와 같은 더 큰 세포를 가공할 때 (평균 직경 10-15 μm) 각 실행은 최적 세포 회수를 달성하기 위하여 적어도 1 x 107 셀을 포함해야 합니다(그림 4B). Jurkat 세포 (평균...

현대 의학의 풍경은 유전자와 세포 기반 치료 (GCT)의 최근 발전을 통해 빠르게 변화하고있다. 번역 연구에서 가장 빠르게 성장하는 분야 중 하나인 GCT 부문은 독특하고 전례 없는 도전에 직면하고 있습니다. 견고한 임상 결과 외에도 효율적이고 비용 효율적인 제조 공정은 소규모 제조1에서달성하기 어려운 GCT의 상업적 성공에 필수적입니다. 세포의 각 배치가 수백 또는 수천 대신 한 환자에 대한 몇 가지 복용량을 생산할 때 시간, 노동 및 품질 보증의 비용이 확대됩니다. 제조 과정이 항체 및 재조합 단백질의 생산에 더 가깝다는 동종 세포 치료와는 달리, 자가 세포 치료는 일반적으로 소규모 수술1로생산된다. 바이오 의약품 제조2에서비교적 새로운 현상으로, 소규모 전지 처리에 대한 옵션은 현재 매우 제한적입니다.
버퍼 교환은 셀 제조에 필수적입니다. 그것은 세포가 배양 배지에서 제거되고 동결 보존 또는 주입을 위해 집중되는 다운스트림 프로세스 의 한개입니다. 현재 소규모 세포 제조는 학술 연구 환경에서와 유사한 프로세스를 적용하는 경우가 많으며 불임 유지를 위해 전문 클린 룸에의존합니다 3. 수동 다운스트림 프로세스는 종종 벤치탑 원심분리기를 사용하여 볼륨 감소 및 버퍼 교환을 위해 펠릿 및 재중단 셀을 사용합니다. 이러한 개방 공정은 비용이 많이 들고 (즉, 노동 및 클린 룸 유지 보수) 및 상업 생산2,3에적합하지 않은 제한된 제조 능력을 가지고있다.
자동화 구현은 제조 효율성을 개선하고 상업적 규모의 생산을 달성하기위한 솔루션으로 제안되었다2. 감마 조사 또는 말단 여과와 같은 생물학적 제제에 사용되는 전통적인 방법을 통해 세포 기반 제품에서는 멸균을 달성할 수 없습니다. 대신, 오염 위험을 줄이기 위해 자동 폐쇄 시스템을 구축하고 운영자는 멸균을 유지하기 위해 클린 룸에 의존4. 또한 공정 자동화는 여러 시스템을 병렬로 실행(확장) 또는 개별 장치의 처리 용량(확장)을 증가시켜 운영자 간의 가변성을 최소화함으로써 확장성 문제를 해결합니다. 또한, 자가 치료의 비용 모델링 분석은 자동화가제조5,6의비용을 줄일 수 있음을 시사한다. 그러나 자동화 된 제조플랫폼이7을 사용한 자가 줄기 세포 임상 시험에서는 비용 이점이 발견되지 않았으며 자동화의 비용 이점은 개별 제조 공정에 따라 달라질 수 있음을 시사합니다.
자동화를 기존 제조 공정에 도입할 수 있는 여러 가지 전략이 있습니다. 이는 완전히 통합된 플랫폼 또는 모듈식 기반 처리 체인을 구현하여 달성할 수 있습니다. CliniMACS 프로디지(밀텐이 바이오텍), 코쿤(옥탄 생명공학), 퀀텀(테루모 BCT)과 같은 자가 세포 제조에 상용화된 여러 완전히 통합된 플랫폼이 있습니다. "GMP-in-a-box"라고도 하는 이러한 통합 플랫폼은 인프라에 대한 요구가 적고 운영이 용이합니다. 그러나, 완전히 통합된 설치의 제조 능력은 시스템에 부착된 인큐베이터에 의해 제한될 수 있다. 예를 들어, 신동체의 배양 능력은 400 mL 챔버8로 제한되고 양자 카트리지는 2.1m2(120 T175 플라스크에 해당)로 설정된 제한표면적을 가지며, 이는 더 높은 세포 용량을 필요로 하는 환자에게 는9,10. 추가적으로, 신동 및 양자는 그들의 사용을 제한하는 공통 특성을 갖는다: 작동 단위는 세포 확장 기간 내내 세포의 단일 배치에 의해 점유되고, 따라서 각단위(11)에의해 제조될 수 있는 배치의 수를 제한한다. 자동화에 대한 모듈식 접근 방식은 상용 제조 공정12,13을시뮬레이션하는 여러 모듈형 단위로 제조 체인을 만드는 것입니다. 이러한 접근법은 배양 장치를 셀 세척 장치로부터 분리하여, 제조 효율을 극대화할 수 있다. 이상적인 가공 장치는12의제조 요구에 적응하고 확장 할 수있는 장치일 것입니다.
1970년대로 거슬러 올라가는 카운터플로우 원심분리(CFC) 기술은 세포 처리14에서오랜 역사를 가지고 있습니다. 원심력과 역류력의 균형을 맞추어 세포 농도와 분리를 달성합니다. 전형적으로, 세포 현탁액은 원심력을 행하면서 일정한 유량 하에서 셀 챔버의 좁은 말단으로부터 유입된다(도1A). 유체의 흐름은 원심력과 반대 방향으로 가해집니다. 이를 반류력이라고 하며, 이는 세포 챔버 내에서 그라데이션을 형성한다. 그런 다음 세포 챔버가 원뿔 모양 의 셀 챔버의 끝에서 멀리 넓어짐에 따라 카운터플로우력이 감소합니다. 밀도가 높고 직경이 큰 세포는 침전 속도가 더 높으며, 따라서 원뿔 모양의 세포 챔버의 끝을 향해 힘 평형에 도달합니다. 더 작은 입자는 챔버의 기지를 향해 평형에 도달하거나 챔버에 유지되기에는 너무 작을 수 있으며 멀리 씻겨질 것입니다. CFC 기술은 수지상 세포 치료법15,16에대한 단핵구를 분리하는 것과 같은 혈액 apheresis 제품 처리에 주로 응용되는 것으로 알려져 있다. 완충교환의 관점에서, CFC 기술은 대규모 제조17에만 적용되었으며, 자가 세포 치료의 소규모 제조에 아직 사용되지 않았습니다.
소규모 셀 제조에 적합한 장치의 필요성을 해결하기 위해 자동화된 CFC 장치(재료 표참조)가 최근18개개발되었습니다. 자동화된 셀 처리 장치는 역류 원심분리 기술을 사용하여 세포 이물질을 제거하고 버퍼 교환을 용이하게 합니다. 이 장치는 세포 전달 백에 멸균될 수 있는 일회용 키트로 버퍼 교환을 수행하여 세포를 멸균된 밀폐된 시스템 내에서 처리할 수 있습니다. 여기서, 우리는 자동화된 프로토콜에서 포유류 세포 배양물에서 완충교환을 수행하기 위해 역류 원심 장치의 사용을 조사한다. 이 연구에서는, 우리는 각각 비부착 및 부착 세포 모형을 모델링하기 위하여 Jurkat 세포 및 중간엽 기질 세포 (중간엽 기질 세포)를 사용하여 완충교환 프로토콜을 시험했습니다. Jurkat 세포는 급성 T 세포 백혈병19,20의연구에 자주 사용되는 불멸의 T 세포이다. 중msC는 광범위한 질병에 대한 인체 임상 시험에서 연구된 성인용줄기세포9.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>20 ml Luer lock syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>302830</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20% Human serum albumin (HSA)</td>
			<td>CSL Behring</td>
			<td>AUST R 46283</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-(Dimethylamino)benzaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>156477-25g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>500ml IV saline bag</td>
			<td>Fresenius Kabi</td>
			<td>K690521</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15240112</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated cell counter (Countess)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counting chamber slides</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>C10228</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell stimulation cocktail (500x)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>00-4970-93</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell transfer bags</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>T1BBT060CBB</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTiter AQueous One Solution Cell Proliferation Assay (MTS)</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G3582</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5810R</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM: F12 media</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11320082</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EnVision plate Reader</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10099141</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Interleukin 2 (IL2) Kit</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>Al221C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer (female) fittings</td>
			<td>CPC</td>
			<td>LF41</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC laptop or PC tablet device</td>
			<td>ASUS</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate reader (SpectraMax i3)</td>
			<td>Molecular Device</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human IFN-&#947;</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>300-02</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotea counterflow centrifuge cell processing device</td>
			<td>Scinogy</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotea single-use processing kit</td>
			<td>Scinogy</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI media</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11875119</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>ProSciTech</td>
			<td>420SS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trichloroacetic acide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T6399-250g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue stain</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>T10282</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin digestion enzyme (TrypLE Express Enzyme)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12604013</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

automated counterflow centrifugal system for small-scale cell processing

유전자 및 세포 기반 치료법의 성공적인 상용화에는 비용 효율적이고 확장 가능한 제조 공정이 필요합니다. 버퍼 교환 및 제품 농도는 대부분의 제조 공정에 필수적인 구성 요소입니다. 그러나 제품 개발의 초기 단계에서이러한 단계는 종종 수동으로 수행됩니다. 버퍼 교환을 위한 수동 막다른 원심분리는 노동 집약적이고 비용이 많이 들며 확장이 가능하지 않습니다. 폐쇄된 자동화 시스템은 이러한 까다로운 단계를 효과적으로 제거할 수 있지만 구현이 어려울 수 있습니다. 여기서는 중소 규모 셀 처리에 적합한 새로 개발된 셀 처리 장치를 설명하고 수동 처리와 대규모 자동화 사이의 격차를 해소하는 것을 목표로 합니다. 이 프로토콜은 유속 및 원심분리 속도를 수정하여 다양한 세포 유형 및 프로세스에 쉽게 적용할 수 있습니다. 우리의 프로토콜은 수동 프로세스에 비해 짧은 처리 시간과 높은 세포 복구를 입증했다. 자동화된 공정으로부터 회수된 세포는 또한 그들의 증식속도를 유지했다. 이 장치는 완충물 교환, 세포 제형 및 냉동 보존과 같은 단계를 수용하기 위해 밀폐 된 제조 공정에서 모듈 식 구성 요소로 적용 할 수 있습니다.

이 프로토콜에서는 Jurkat 셀과 MSC를 대표적인 예로 사용하여 자동화된 버퍼 교환 프로세스를 시연했습니다. 이 과정에서 Jurkat 셀과 MCS는 유속을 제어하는 원심력과 펌프 속도의 차이로 동일한 처리 단계를 공유했습니다(표1). 도 2는 완충교환 과정에서 유동화된 셀 베드가 어떻게 나타날 수 있는지에 대해 카메라에 의해 포착된 대표적인 이미지를 나타낸다. 일반...

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Automated Counterflow Centrifugal System for Small-Scale Cell Processing

자동화는 셀 제조에서 업스케일링 및 비용 관리의 핵심입니다. 이 원고는 소규모 바이오 프로세싱을 위한 완충교환 및 세포 농도 단계를 자동화하기 위한 카운터플로우 원심 세포 처리 장치의 사용을 설명합니다.

소규모 셀 처리를 위한 자동 카운터플로우 원심 시스템

Successful commercialization of gene and cell-based therapies requires manufacturing processes that are cost-effective and scalable. Buffer exchange and ...

이 프로토콜은 소규모 셀 제조를 위한 폐쇄형 자동화 완충 교환 및 농도용 솔루션을 제공합니다. 중요한 것은, 완충 교환은 매우 적은 양의 농축 된 제품의 높은 회수 및 전달로 수행 될 수있다. 신규 사용자는 모든 자동화 단계를 따르는 데 어려움을 겪을 수 있습니다.이러한 단계를 프로그래밍하고 매체로 테스트 실행을 수행하는 것은 장치에 익숙해지는 좋은 방법입니다. 완충 교환을 시작하기 전에 클래스 2 라미나르 플로우 헤드에서 주사기와 바늘 어셈블리를 사용하여 500 밀리리터 식염수 백에서 식염수 용액 50 밀리리터를 제거합니다. 이 부피를 20%의 인간 세럼 알부민으로 대체하고 배양 용기에서 관심 있는 세포를 수확하십시오.계산 후 주사기를 사용하여 셀을 전송 가방에 넣고 Luer 잠금을 사용하여 전송 백을 일회용 처리 키트에 연결합니다. 그런 다음 이전에 준비된 워시 버퍼 가방을 일회용 처리 키트에 연결합니다. 자동 버퍼 교환을 설정하려면 장치의 그래픽 사용자 인터페이스를 열고 시작 단추를 클릭합니다.새 프로토콜을 생성하려면 새 프로토콜을 클릭하고 컨트롤을 클릭하여 열고 닫을 밸브, 원심 및 펌프 속도, 펌프 방향 및 동작 트리거를 선택합니다. 모든 매개 변수가 설정된 경우 저장을 클릭합니다. 장치에 연결된 적절한 가방을 걸어서 일회용 처리 키트를 기기에 놓습니다.그런 다음 연결 버튼을 클릭하고 저장된 프로그램을 다운로드합니다. 재생 버튼이 켜지면 프로토콜을 시작할 준비가 되었습니다. 자동 버퍼 교환을 수행하려면 전송 백 튜브에 대한 수동 클램프를 열고 버퍼 교환 프로그램을 시작하려면 먼저 클릭합니다.자동화 6단계가 끝나면 현재 비어 있는 백의 공기에 의해 버블 센서가 트리거되어 프로세스가 일시 중지됩니다. 가방이 실제로 비어 있으면 다음 단계를 눌러 프로세스를 다음 단계로 이동합니다. 자동화된 프로세스가 완료되면 모든 튜브 클램프를 닫고 장치의 문을 엽니다.그런 다음 장치에서 일회용 키트를 제거하고 주사기를 분리하여 후속 분석을 위해 셀을 수집할 수 있도록 합니다. 전형적으로, 유동화된 세포침대는 콘의 중간 및 전면을 향해 축적되는 세포, 세포가 축적되지 않는 챔버의 끝에 작은 공간, 셀 로딩 입구 내에서 보이는 개구부를 가진 이 이미지에서 나타나는 것으로 나타난다. 유동화된 세포 침대는 상이한 점도 또는 밀도에 있는 새로운 완충을 도입할 때 압축될 수 있다.죽은 세포가 작고 가벼우며 유량을 증가시킴으로써 챔버 밖으로 강제될 수 있기 때문에 살아있는 세포를 선택하기 위해 높은 유량이 적용될 수 있다. 버퍼 교환 처리 시간의 자동화된 프로세스는 수동 버퍼 교환 프로세스보다 짧습니다. 이 분석에서, 수동 및 자동화된 프로세스 사이의 회수율은 테스트된 두 가지 유형의 셀에 대해 유사했으며, 세포 생존가능성은 어느 과정에 의해 영향을 받지 않았다.회수된 세포는 처리의 종류에 관계없이 유사한 증식 비율, 사이토카인 을 생성하는 능력 및 ideo 활동을 보여주었습니다. 이 프로토콜은 지침으로만 작동하므로 사용자는 셀 유형 및 버퍼에 따라 유량 및 원심 분리 속도를 프로그래밍해야 한다는 점을 기억하는 것이 중요합니다. 완충교환은 세포배양 확장 또는 냉동보존 및 제형을 따를 수 있는 세포 제조의 중간 단계이다.목표는 전체 프로세스를 둘러싸는 방법을 개발하는 것입니다. 카운터플로우 원심분리는 매우 다재다능한 플랫폼입니다. 향후 연구는 세포 선택에 응용 프로그램을 탐구합니다, 같은 죽은 세포 제거 및 chorisis 제품에서 단핵 세포 격리.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Postproduction Processing of Electrospun Fibres for Tissue Engineering

조직 공학을위한 Electrospun의 Fibres의 Postproduction 처리

Electrospinning is a commonly used and versatile method to produce  scaffolds (often biodegradable) for 3D tissue engineering.1, 2, 3 Many tissues in vivo ...

연구

생체공학

A Versatile Automated Platform for Micro-scale Cell Stimulation Experiments

마이크로 스케일 세포 자극 실험을위한 다목적 자동화 플랫폼

Study of cells in culture (in vitro analysis) has provided important insight into complex biological systems. Conventional methods and equipment for in ...

Gradient Strain Chip for Stimulating Cellular Behaviors in Cell-laden Hydrogel

그라데이션 변형 칩 셀 라덴 히드로에 자극 세포 행동에 대 한

Artificial guidance for cellular alignment is a hot topic in the field of tissue engineering. Most of the previous research has investigated single ...

Fully Automated Centrifugal Microfluidic Device for Ultrasensitive Protein Detection from Whole Blood

전혈에서 고감도 단백질 검출을위한 완전 자동화 된 원심 미세 유체 장치

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) is a promising method to detect small amount of proteins in biological samples. The devices providing a platform ...

Automated Robotic Liquid Handling Assembly of Modular DNA Devices

모듈형 DNA 장치 조립 로봇 액체 처리 자동화

Recent advances in modular DNA assembly techniques have enabled synthetic biologists to test significantly more of the available &#34;design space&#34; ...

Design and Implementation of an Automated Illuminating, Culturing, and Sampling System for Microbial Optogenetic Applications

미생물 Optogenetic 애플리케이션을위한 설계 및 자동화 일루미, 배양 및 샘플링 시스템의 구현

Optogenetic systems utilize genetically-encoded proteins that change conformation in response to specific wavelengths of light to alter cellular ...

Automated Slide Scanning and Segmentation in Fluorescently-labeled Tissues Using a Widefield High-content Analysis System

자동된 슬라이드 스캔 및 Widefield 하이 콘텐츠 분석 시스템을 사용 하 여 붙일 표시 된 조직에서 시장 세분화

Automated slide scanning and segmentation of fluorescently-labeled tissues is the most efficient way to analyze whole slides or large tissue sections. ...

Use of High-Throughput Automated Microbioreactor System for Production of Model IgG1 in CHO Cells

높은 처리량의 사용 모델 IgG1 조 세포에서의 생산을 위한 Microbioreactor 시스템 자동화

Automated microscale bioreactors (15 mL) can be a useful tool for cell culture engineers. They facilitate the simultaneous execution of a wide variety of ...

Live Cell Analysis of Shear Stress on Pseudomonas aeruginosa Using an Automated Higher-Throughput Microfluidic System

Live Cell Analysis of Shear Stress on Pseudomonas aeruginosa Using an Automated Higher-Throughput Microfluidic System

라이브 셀 분석의 전단 응력에 녹 농 균 등 처리량 미세 자동 시스템을 사용 하 여

A higher-throughput microfluidic in vitro bioreactor coupled with fluorescence microscopy has been used to study bacterial biofilm growth and morphology, ...

Purification and Analytics of a Monoclonal Antibody from Chinese Hamster Ovary Cells Using an Automated Microbioreactor System

자동화된 미생물체 시스템을 사용하여 중국 햄스터 난소 세포의 단일 클론 항체의 정화 및 분석

Monoclonal antibodies (mAbs) are one of the most popular and well-characterized biological products manufactured today. Most commonly produced using ...