Name: clonal genetic tracing using the confetti mouse to study mineralized tissues
Uploaded: 2019-10-23T14:30:00
Duration: 7 min 41 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Clonal Genetic Tracing using the Confetti Mouse to Study Mineralized Tissues at JoVE.com

نشكر الدكتور ايفغيني ايفاشكين علي المشورة المنهجية. وقد حظي هذا العمل بالدعم المالي من مجلس البحوث السويدي (ا. س. ج) ، والمؤسسة العلمية الروسية (منحه #19-15-00241 إلى ASC) ، ومعهد كارنسكا (A.S.C.) ، وسترارغين كي ، ستيفتيلسين كوننغ غوستاف بي اس 80-årsfond (A.S.C.) ، ستيفتيلسين Frimurare بارنهوسيت و Sallskapet Barnavard (P.T.N.) ، المجلس الصيني للمنح الدراسية (B.Z.). تم تمويل المجهر البؤري من قبل كنوت ومؤسسه اليس فالينبرغ.

<ol>
	<li>Weissman, T. A., Pan, Y. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brainbow:+New+resources+and+emerging+biological+applications+for+multicolor+genetic+labeling+and+analysis.">Brainbow: New resources and emerging biological applications for multicolor genetic labeling and analysis.</a> Genetics. 199 (2), 293-306 (2015).</li><li>Snippert, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+crypt+homeostasis+results+from+neutral+competition+between+symmetrically+dividing+Lgr5+stem+cells.">Intestinal crypt homeostasis results from neutral competition between symmetrically dividing Lgr5 stem cells.</a> Cell. 143 (1), 134-144 (2010).</li><li>Proudfoot, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ending+the+message:+poly(A)+signals+then+and+now.">Ending the message: poly(A) signals then and now.</a> Genes &amp; Development. 25 (17), 1770-1782 (2011).</li><li>Livet, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+strategies+for+combinatorial+expression+of+fluorescent+proteins+in+the+nervous+system.">Transgenic strategies for combinatorial expression of fluorescent proteins in the nervous system.</a> Nature. 450 (7166), 56-62 (2007).</li><li>Nagy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cre+recombinase:+The+universal+reagent+for+genome+tailoring.">Cre recombinase: The universal reagent for genome tailoring.</a> Genesis. 26 (2), 99-109 (2000).</li><li>Kaukua, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+origin+of+mesenchymal+stem+cells+in+a+tooth+model+system.">Glial origin of mesenchymal stem cells in a tooth model system.</a> Nature. 513 (7519), 551-554 (2014).</li><li>F&#252;llgrabe, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+Lgr6++Progenitor+Cells+in+the+Hair+Follicle,+Sebaceous+Gland,+and+Interfollicular+Epidermis.">Dynamics of Lgr6+ Progenitor Cells in the Hair Follicle, Sebaceous Gland, and Interfollicular Epidermis.</a> Stem Cell Reports. 5 (5), 843-855 (2015).</li><li>Lazzeri, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocycle-related+tubular+cell+hypertrophy+and+progenitor+proliferation+recover+renal+function+after+acute+kidney+injury.">Endocycle-related tubular cell hypertrophy and progenitor proliferation recover renal function after acute kidney injury.</a> Nature Communications. 9 (1), 1344 (2018).</li><li>Reeves, M. Q., Kandyba, E., Harris, S., Del Rosario, R., Balmain, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicolour+lineage+tracing+reveals+clonal+dynamics+of+squamous+carcinoma+evolution+from+initiation+to+metastasis.">Multicolour lineage tracing reveals clonal dynamics of squamous carcinoma evolution from initiation to metastasis.</a> Nature Cell Biology. 20 (6), 699-709 (2018).</li><li>Yoo, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+Castration-Resistant+Bmi1+Sox2++Cells+in+Driving+Recurrence+in+Prostate+Cancer.">The Role of Castration-Resistant Bmi1+Sox2+ Cells in Driving Recurrence in Prostate Cancer.</a> Journal of the National Cancer Institute. 111 (3), 311-321 (2018).</li><li>McConnell, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p53+Regulates+Progenitor+Cell+Quiescence+and+Differentiation+in+the+Airway.">p53 Regulates Progenitor Cell Quiescence and Differentiation in the Airway.</a> Cell Reports. 17 (9), 2173-2182 (2016).</li><li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superficial+cells+are+self-renewing+chondrocyte+progenitors,+which+form+the+articular+cartilage+in+juvenile+mice.">Superficial cells are self-renewing chondrocyte progenitors, which form the articular cartilage in juvenile mice.</a> Faseb Journal. 31 (3), 1067-1084 (2017).</li><li>Newton, P. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+radical+switch+in+clonality+reveals+a+stem+cell+niche+in+the+epiphyseal+growth+plate.">A radical switch in clonality reveals a stem cell niche in the epiphyseal growth plate.</a> Nature. 567 (7747), 234-238 (2019).</li><li>Kaucka, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oriented+clonal+cell+dynamics+enables+accurate+growth+and+shaping+of+vertebrate+cartilage.">Oriented clonal cell dynamics enables accurate growth and shaping of vertebrate cartilage.</a> eLife. 6, 25902 (2017).</li><li>Kozhemyakina, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+Prg4-expressing+articular+cartilage+progenitor+cell+population+in+mice.">Identification of a Prg4-expressing articular cartilage progenitor cell population in mice.</a> Arthritis Rheumatology. 67 (5), 1261-1273 (2015).</li><li>Nakamura, E., Nguyen, M. T., Mackem, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+tamoxifen-regulated+Cre+activity+in+mice+using+a+cartilage-specific+CreERT+to+assay+temporal+activity+windows+along+the+proximodistal+limb+skeleton.">Kinetics of tamoxifen-regulated Cre activity in mice using a cartilage-specific CreERT to assay temporal activity windows along the proximodistal limb skeleton.</a> Developmental Dynamics. 235 (9), 2603-2612 (2006).</li><li>Mizuhashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resting+zone+of+the+growth+plate+houses+a+unique+class+of+skeletal+stem+cells.">Resting zone of the growth plate houses a unique class of skeletal stem cells.</a> Nature. 563 (7730), 254-258 (2018).</li><li>Reinert, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tamoxifen-Induced+Cre+loxP+Recombination+Is+Prolonged+in+Pancreatic+Islets+of+Adult+Mice.">Tamoxifen-Induced Cre loxP Recombination Is Prolonged in Pancreatic Islets of Adult Mice.</a> PloS One. 7 (3), 33529 (2012).</li><li>Kim, I. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+response+of+primary+human+bone+marrow+stromal+cells+to+recombinant+human+bone+morphogenic+protein-2+in+the+early+and+late+stages+of+osteoblast+differentiation.">In vitro response of primary human bone marrow stromal cells to recombinant human bone morphogenic protein-2 in the early and late stages of osteoblast differentiation.</a> Development, Growth &amp; Differentiation. 50 (7), 553-564 (2008).</li><li>Fang, X., Gyabaah, K., Nickkholgh, B., Cline, J. M., Balaji, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+In+Vivo+model+for+combinatorial+fluorescence+labeling+in+mouse+prostate.">Novel In Vivo model for combinatorial fluorescence labeling in mouse prostate.</a> The Prostate. 75 (9), 988-1000 (2015).</li><li>Newton, P. T., Xie, M., Medvedeva, E. V., S&#228;vendahl, L., Chagin, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+mTORC1+in+chondrocytes+does+not+affect+proliferation+or+differentiation,+but+causes+the+resting+zone+of+the+growth+plate+to+become+disordered.">Activation of mTORC1 in chondrocytes does not affect proliferation or differentiation, but causes the resting zone of the growth plate to become disordered.</a> Bone Reports. 8, 64-71 (2018).</li><li>Xie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cell+precursors+contribute+to+skeletal+formation+during+embryonic+development+in+mice+and+zebrafish.">Schwann cell precursors contribute to skeletal formation during embryonic development in mice and zebrafish.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 116 (30), 15068-15073 (2019).</li></ol>

وليس لدي المؤلفين ما يفصحون عنه.

تم استخدام نموذج الحلويات علي نطاق واسع لدراسة انسجه الغضروف المعدنية12،13،14 ولوصف البروتوكول الأمثل. يمكن استخدام الفئران قصاصات2 مع نسخه واحده أو نسختين من اليل R26R-الحلويات لتربيه والتجارب. أعاده الدمج في الفئران مع اليل واحد من بناء 2.1 الدماغ سيعطي أربعه التسميات المحتملة: البروتين الفلوري الأحمر (تقديم العروض ، سيتوبلازمي) ، البروتين الفلوري الأصفر (yfp ، سيتوبلاسولي) ، البروتين الفلوري السماوي (الباسيفيكي ، غشاء المترجمة) ، والأخضر البروتين الفلوري (GFP ، النواة المترجمة) ، في حين ان أعاده الدمج في الفئران المحتوية علي الورق (اي ، تحتوي علي نسختين من البناء 2.1 الدماغ) سوف تعطي 10 مخرجات اللون المحتملة (عروض التقديم + العروض ، العروض + YFP ، عروض التقديم + الباسيفيكي ، العطاء + GFP ، yfp GFP, س ف ب + اف بي اي, اف بي + GFP, GFP + GFP. ومع ذلك ، لان الختان الحمض النووي والاحداث الانقلاب تحدث بطريقه عشوائية ، أعاده تركيب لإنتاج GFP يحدث في جزء صغير فقط من الخلايا ، كما ذكرت سابقا2، ويختلف علي ما يبدو من نوع الخلية أو خط cre المستخدمة2، 12,13. التالي ، نظرا لانخفاض حدوث الاحداث المعاد تجميعها مما يؤدي إلى التعبير GFP ، وسته مخرجات اللون هي الأكثر شيوعا في الفئران الحلويات المنزلية.
اعتبار مهم عند التخطيط للتجارب مع الماوس قصاصات هو العثور علي سلاله Cre مناسبه. أولا ، نظرا لان اليل الحلويات لديها العديد من مواقع loxp ، واحده الحدث أعاده اتحاد لا يستبعد الثاني4. وهذا يعني انه إذا تم تسميه خليه ويقسم لإنتاج نسخه من لون واحد ، حدث أعاده تركيب الثانية في واحده من خلايا ابنتها من شانه ان يولد لون مختلف ، التالي إخفاء التوسع الحقيقي النسيلي. التالي ، سلالات Cre لا يمكن الحث ، حيث يكون الانزيم نشطا دائما إذا كان المروج المطابق نشطا ، ليس من المستحسن. ثانيا ، في بعض السلالات التعبير من cre للالطبيعيه غالبا ما ياتي علي حساب البروتين الذاتية ، التالي خلق النمط الظاهري من تلقاء نفسها (علي سبيل المثال ، ل Prg4-GFPCreERT2 ضرب في سلاله الماوس التي الفئران الميناء اثنين من الاليلات15) ، لذلك نسخه واحده من اليل cre هو مرغوب فيه. وفي جميع التجارب الموصوفة ، حملت نسخه واحده من الCol2CreERT16 اما الذكر أو الام الأنثى لتوليد Col2CreERT: الفئران الحلويات ، كما هو موضح في13. بعد ذلك ، فان خصوصية خط Cre إلى نوع الخلية من الفائدة هو اعتبار هام. علي سبيل المثال ، Col2CreERT هو غضروفي ، ولكن تسميات العديد من السكان متميزة من الغضروفي في الغضروف بعد الولادة في وقت مبكر17. وأخيرا ، فان نشاط سلالات Cre مختلفه يمكن ان تتغير إلى حد كبير مع العمر الحيواني ، كما النشاط الذاتي لمروج تستخدم لتغييرات التعبير Cre ، حتى في الخلايا من نفس النوع (علي سبيل المثال ، Prg4-GFPCreERT2، والتي يمكن ان تتطلب زيادة عدد جرعات تاموكسيفين لتسميه خلايا المنطقة السطحية كما الفئران سن15).
وسوف تنعكس علي عدد من الخلايا المسمية من كميه تاموكسيفين نظرا, لذلك ليس من المرغوب فيه دائما لإعطاء الجرعة القصوى لان التمييز بين الاستنساخ من بعضها البعض قد يكون من الصعب. لان التعبير Cre سوف تختلف تحت تنظيم المروجين مختلفه وكذلك مع العمر, الجرعة تاموكسيفين سوف تحتاج إلى تعديل لتحسين وضع العلامات. ومن المهم ان نلاحظ ان الخلايا ليست علي الفور الفلورسنت عند التسبب في أعاده التركيب لان الوقت مطلوب لأعاده تركيبه لتحدث والبروتينات الفلورية الناتجة تتراكم بما فيه الكفاية للتصوير. وهناك حاجه إلى مجموعه واسعه من الساعات (بين 24 − 72 ح) ، والتي يبدو ان تتاثر خط Cre ، من نوع الخلية ، والعمر الحيواني. منذ تاموكسيفين يمكن ان تكون نشطه بيولوجيا بعد فتره طويلة من الاداره18 فمن المستحسن دائما للتحقق من كفاءه أعاده الجمع بدقه في كل نموذج.
خلال خطوه المجهر البؤري ، تتطلب أثاره البروتينات الفلورية من الورق اختراق الانسجه بواسطة ضوء الليزر. لان الانسجه المختلفة لها خصائص مختلفه ، ضوء الليزر قد لا تخترق أقسام سميكه 160 μm من جميع الانسجه. ومع ذلك ، يمكن استخدام هذه الأقسام سميكه لنمو الغضروف لوحه ، كما هو مستخدم في الشكل 2، الشكل 3. لاحظ ان كل المجهر مختلفه ، وانه من غير المرجح ان الإعدادات الموصوفة (الملف التكميلي 1) سوف تعمل تماما دون تعديلات طفيفه. واحد التحديات الرئيسية هو التمييز بين البروتينات الفلورية المختلفة لضمان عدم وجود تلوث من قناه إلى أخرى. علي سبيل المثال ، الاشاره في قناه YFP الناجمة عن الفلورية القادمة من GFP تتداخل بين قنوات YFP وعروض العروض. ويجب أيضا فحص قنوات YFP و القناات الباسيفيكية بعناية. ويمكن القيام بذلك بعده طرق. أولا ، يمكن تضييق نطاق انبعاثات الموجات الضوئية الفلورية التي يتم تسجيلها لكل بروتين فلوري. ثانيا ، يمكن ضبط قوه الليزر في تركيبه مع المكسب الرقمي تحسين الاشاره. في هذه الدراسة كانت هذه الخطوات كافيه ، ولكنها تعتمد علي اشاره فلورية قويه. وهذا يعني انه من الناحية النظرية ، يمكن ان تقلل معالجه الانسجه غير الفعالة من نشاط البروتينات الفلورية ، أو يمكن ان يضعف مصدر ضوء الليزر الضعيف فصل القناة.
واحده من مزايا الماوس قصاصات هو انه يمكن الجمع بينها وبين عدد كبير من سلالات متحولة وراثيا التي تتوفر بحيث يمكن دراسة تاثير الجينات محدده علي ديناميات النسيلي10،11،12 ،13،14،19،20، وان كان مع بعض القيود. علي سبيل المثال ، لا يمكن فصل أعاده تركيب الكللات الحلويات وجين الفائدة عند استخدام المسوخ المستندة إلى Cre loxP مع تتبع النسب الكلونال. ومع ذلك ، يمكن ان تكون هذه الاحداث المتزامنة أعاده تشكيل فعاله10،14،20. علي سبيل المثال ، تم استخدام هذه الامكانيه لاستكشاف زيادة عدد الخلايا في منطقه الراحة من الفئران بعد الاستئصال بعد الولادة غضروفي محدده من TSC1 في لوحه النمو21 وكشفت العلاقة النسيلي بين هذه الخلايا مع مرور الوقت 13. بالاضافه إلى ذلك ، يمكن استخدام تحليل النسيلي الانسجه الخاصة باستخدام الفئران قصاصات الورق مع الفئران متحولة غير cre loxp القائم علي11، وانه من الممكن أيضا الجمع بين هذه النهج مع الدوائية8،9 ،13 و/أو النماذج الجراحية8 لتصور الاستجابات النسيلي لاضطرابات وظيفية أخرى. المزيد من الفرص تنشا عند الجمع بين المقاطع المسمية قصاصات مع المناعة من البروتينات الذاتية عن طريق المناعي. ويسمح هذا التحليل بتحديد الخلايا المتتبعة والتنظير الحراري بعلامة معروفه. مع طريقه التثبيت الموصوفة هنا ، فمن الممكن لاجراء المناعي ولا تزال تصور الفلوري من البروتينات الفلورية قصاصات12،13. ومع ذلك ، في الورقات المذكورة ، لم يكن مطلوبا استرداد antigen. أساليب استرداد مستضد القاسية ، مثل الغليان في العازلة سيترات ، يؤدي إلى فقدان كامل من الفلورية القصاصات. علي الرغم من انه يمكن بعد ذلك الكشف عن البروتينات الفلورية كونفيتي باستخدام الأجسام المضادة22، يمكن ان يحدث فقدان الهوية النسيلي.
وباختصار ، فان استخدام نموذج الحلويات لتسميه الخلايا في الجسم الخارجي هو أداه معلوماتية لتحليل مصير تلك الخلايا مع مرور الوقت. توفر الطريقة الموصوفة طريقه سريعة وفعاله لتصور تعبير البروتين الفلوري بشكل مباشر في الانسجه المعدنية.

الأساليب المحسنة لمراقبه سلوك الخلايا مرغوب فيها لزيادة الكفاءة التجريبية عند استخدام النماذج الحيوانية. واحده من أكثر الطرق المفيدة لمراقبه سلوك الخلية في الجسم الفيفو هو تتبع النسب الاكليليه مع سلالات الماوس مراسل متعدد ألوان1، بما في ذلك المستخدمة علي نطاق واسع R26R (القصاصات) الماوس2. من خلال وضع العلامات وراثيا الخلايا الفردية مع البروتينات الفلورية وبعد تلك الخلايا مع مرور الوقت ، وقد استخدمت الباحثين في العديد من المجالات الماوس قصاصات للكشف عن رؤى في العديد من النظم البيولوجية المختلفة.
الفار القصاصات هو نظام مراسل المستندة إلى loxP في التي Cre تعتمد الحمض النووي أعاده تركيبه يسبب التعبير الدائم لأحد العديد من البروتينات الفلورية المحتملة في الطريقة العشوائية2. وتشمل اليل R26R التي أعرب عنها بشكل مطلق المروج cagg ، والتي تقع علي الفور من المنبع loxp-الجددالذي يحيط كاسيت2، الذي تسلسل الادننه ينهي النسخ3، تليها بريقوس 2.1 بناء4. التالي ، فان أعاده الدمج بوساطة Cre تؤدي في وقت واحد إلى الوصول إلى الكاسيتالجديدويؤدي إلى إنتاج بعض البروتينات الفلورية اعتمادا علي اي أجزاء من البناء ال2.1 الذي يتم استئصاله. هذه الميزة يجعل الماوس كونفيتي قابله للتكيف للغاية لأنه يمكن استخدامها لاستهداف اي السكان الخلوية في الماوس الذي سلاله Cre محدده متاحه. عبور سلاله Cre الانسجه الخاصة مع سلاله R26R-الحلويات يوفر خصوصية الوسم. ومع ذلك ، ينبغي أيضا ان تكون سلاله Cre محرض (علي سبيل المثال ، CreERT أو CreERT2 ، والتي تتطلب ملزمه تاموكسيفين للسماح لهم بدخول النواة والحث علي أعاده دمج الحمض النووي5) بحيث يمكن تحقيق الوسم في نقاط زمنيه محدده. التالي ، يمكن تسميه السكان الخلوية عن طريق حقن الناتجة CreERT ايجابيه/قصاصات اليد الايجابيه مع تاموكسيفين في الوقت المطلوب نقطه وتعقبها إلى سن معينه ، عندما يمكن جمع انسجه الفائدة للتحليل. بعد معالجه الانسجه ، يمكن تصور الخلايا فلوريسسينتلي المسمية مباشره بواسطة المجهر البؤري بحيث يمكن فصل ذريه كل خليه المسمية في البداية من ذريه ولدت من قبل اي خليه أخرى المسمي استنادا إلى الفلورسنت الخاصة بهم التسميات ، التالي السماح كلوليتي ليتم تقييمها (اي ، التتبع الوراثية النسيلي).
نظرا لمرونة نموذج حلويات ، وقد تم تطبيقه لدراسة تطوير وصيانة العديد من الانسجه المختلفة في مجال الصحة والمرض2،6،7،8،9، 10,11. أحدي الطرق الشائعة لاستخدام النموذج هي تسميه عدد معين من الخلايا وتحديد الانسجه التي ساهمت فيها (و/أو ذريتها). وكان أحد هذه النتائج باستخدام هذا النهج هو ان الأسنان البالغ يتكون من الخلايا مع الأصل الانحدر6. تطبيق آخر للنموذج هو دراسة التوازن الخلية الجذعية. فعلي سبيل المثال ، كشف نموذج الحلويات ان الخلايا الجذعية في الشفرات المعوية تتحول تدريجيا إلى مونوكلونال لان بعض الخلايا الجذعية المستنسخة تكون مهيمنه خلال المنافسة بين الزنزانات الجذعية2. ويمكن أيضا استخدام النموذج لتقييم تكاثر الخلايا ، وهو أمر مفيد بشكل خاص لدراسة الخلايا المنقسمة ببطء. علي سبيل المثال ، تم تقييم تشكيل النسيلي في الغضروف المفصلي12 ، ودرست الآثار قصيرة الأجل من خصم القنفذ علي لوحه النمو غضروفي في الفئران القديمة خمسه أسابيع13.
وعلي الرغم من البساطة النسبية لنموذج الحلويات ، فان اشاره الفلورسنت يمكن ان تكون صعبه من الناحية الفنية للمحافظة عليها حتى جمع الصور ، وخاصه عند تحليل الانسجه المعدنية. هنا ، يصف البروتوكول نموذجا محسنا لاستخدام الماوس قصاصات مع العظام بعد الولادة (حتى 6 أشهر من العمر) ، وتمكين البروتينات الفلورية لتكون تصور مباشره من قبل المجهر البؤري دون الحاجة إلى المناعة. يمكن تطبيق هذا البروتوكول المبسط علي الانسجه غير المعدنية. وعلاوة علي ذلك ، وشملت وصفا لكيفيه تخزين العينات من أجل الحفاظ علي اشاره الفلورسنت لفتره طويلة من 3 سنوات علي الأقل. ويرد في الشكل 1موجز للبروتوكول.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>2,2-thiodiethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>MKCF9328</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 mm-long cover slips</td>
			<td>Mendel-Gl&#228;zer</td>
			<td>220588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM 710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corn oil</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C8267</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryomold (standard)</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>Model: NX70</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable cryostat blades</td>
			<td>Histolab</td>
			<td>207500014</td>
			<td>Specifically for use with hard tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Scharlan</td>
			<td>AC0960005P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde concentrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>8.18708.1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottles</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>V7130</td>
			<td>Can be used for tamoxifen dilution and for tissue fixation and processing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris software</td>
			<td>Oxford Instruments</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Image analysis software for 3D reconstruction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>11-8162</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>102094-104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipette</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>86.1171</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14200075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.06498.1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S0389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost UltraPlus slides</td>
			<td>Mendel-Gl&#228;zer</td>
			<td>J3800AMNZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tamoxifen</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T5648</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zen2 software</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Freeware for Confocal laser scanning microscopy</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

clonal genetic tracing using the confetti mouse to study mineralized tissues

وصف خليه فرديه في الجسم لرصد أنواع الخلايا التي يمكن ان تؤدي إلى وتتبع هجرتها من خلال الكائن الحي أو تحديد طول العمر يمكن ان يكون وسيله قويه للكشف عن أليات لتطوير الانسجه والصيانة. واحده من أهم الاداات المتاحة حاليا لمراقبه الخلايا في الجسم المجري هو نموذج الماوس كونفيتي. ويمكن استخدام نموذج حلويات لتسميه الخلايا الفردية وراثيا في الفئران الحية مع البروتينات الفلورية المختلفة في نوع الخلية بطريقه محدده ورصد مصيرهم ، فضلا عن مصير ذريتهم مع مرور الوقت ، في عمليه تسمي التتبع الوراثية النسيلي أو تتبع سلاله الكلونال. وقد ولد هذا النموذج قبل عقد من الزمن تقريبا ، واسهم في تحسين فهم العديد من العمليات البيولوجية ، ولا سيما المتعلقة ببيولوجيا الخلايا الجذعية ، والتنمية ، وتجديد انسجه الكبار. ومع ذلك ، فان الحفاظ علي اشاره الفلورسنت حتى جمع الصور والتقاط المتزامن للإشارات الفلورية المختلفة يشكل تحديا من الناحية التقنية ، خاصه بالنسبة للانسجه المعدنية. يصف هذا المنشور بروتوكول خطوه بخطوه لاستخدام نموذج الحلويات لتحليل غضروف صفيحه النمو التي يمكن تطبيقها علي اي نسيج معدني أو غير معدني.

لتسميه غضروفي في الغضروف الغضروفي وتصور توسعها النسيلي مع العمر باستخدام الاداره تاموكسيفين علي P1, Col2CreERT: تم وصفها الفئران قصاصات, وجمعت أطرافهم الخلفية علي P27. تم تحديد القسم المركزي من خلال تصور الرباط الصليبي (الشكل 2 ا) وتم تصور المستنسخات في لوحه النمو الظنبوبي القريبة (الشكل 2 ب). وتظهر هذه البيانات ان الخلايا الفردية التي كانت Col2 الايجابيه علي P1 وأصبحت المسمية مع البروتينات الفلورية كونفيتي عندما تدار تاموكسيفين, خضع التوسع النسيلي, وبقي بعد ذلك في لوحه النمو حتى P27. ويمكن النظر إلى التغيرات الاوليه في التوسع التاجي من نقطه زمنيه انمائيه مماثله في الشكل 1 من منشور صدر مؤخرا في13.
لإعطاء مثال علي اشاره الفلورسنت بعد التخزين طويل الأجل (الخطوة 5.5) ، تم تخزين القسم الذي تم جمعه مباشره بعد (انظر الشكل 2ا ، ب) لأكثر من 3 سنوات قبل ان يتم اعداده والتصوير (الشكل 2c، الفيديو 1) .
لإظهار بعض المشاكل الشائعة مع البروتوكول ، يتم عرض مقطع مكسور اثناء الخطوة الخاصة بالتجميد في الشكل 3A. منطقه القسم (بين لوحه النمو والغضروف المفصلي) الموسعة في الشكل 3b يظهر ان هذه الجرعة من تاموكسيفين يؤدي إلى مثل هذا المستوي العالي من أعاده الدمج في هذا المجال انه سيمنع تحليل النسيلي.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60424/60424fig01.jpg"> الشكل 1: نظره عامه تجريبية. مخطط انسيابي يلخص المراحل الرئيسية للأسلوب. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60424/60424fig01large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60424/60424fig02.jpg"> الشكل 2: صور القصاصات من الماوس Col2CreERT: القصاصات. (ا) عينات من Col2CreERT: تمت معالجه الفئران الحلويات دون التكلس أو خطوه التخزين علي المدى الطويل. ويقع القسم المركزي باستخدام الرباط الصليبي كعلامة. تم تصور هذه الصورة باستخدام فحص البلاط بعد الكشف عن عروض العروض مع T-PMT (شريط مقياس = 300 μm). (ب) تظهر الاعمده الكلناله داخل القصبة القريبة من لوحه النمو المرئية في (ا) ، بعد أعاده البناء ثلاثية الابعاد. (ج) تم تجهيز شريحة مجاوره لتلك المبينة في الشكلين (ا) و (ب) المحتفظ بها في التخزين طويل الأجل لأكثر من 3 سنوات لأغراض التصوير وأعاده البناء الثلاثي الابعاد. يتم عرض عروض العروض ، YFP ، والباسيفيكي في (B) و (C) (القضبان مقياس = 50 μm). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60424/60424fig02large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60424/60424fig03.jpg"> الشكل 3: التحديات عند استخدام الأسلوب. (ا) خطوط متقطعه بيضاء مخطط تقسيم في القسم من خلال لوحه النمو من Col2CreERT: الفئران قصاصات (مقياس شريط = 50 μm). تظهر المنطقة الموجودة داخل المربع الأبيض في (B) (شريط المقياس = 25 ميكرومتر). يتم عرض عروض العروض ، YFP ، والاشعه فوق المتوسطة في كلا اللوحتين ، كما تظهر قناه ضوء الليزر غير المنعكسة (T-PMT) في (ا) لتصور الانسجه. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60424/60424fig03large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.</a>
فيديو 1: أعاده بناء ثلاثية الابعاد للوحه النمو من Col2CreERT: الفار القصاصات. شريحة أعدت من Col2CreERT: تم عقد الماوس القصاصات في التخزين علي المدى الطويل بعد الفصل لأكثر من 3 سنوات ، ومن ثم معالجتها للتصوير. وأجريت أعاده البناء ثلاثية الابعاد تلقائيا مع برامج تحليل الصور وتصديرها كفيديو. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/60424/video_1.mov" target="_blank">يرجى النقر هنا لتحميل هذا الفيديو.</a>
الملف التكميلي 1: التشكيل النموذجي للمجهر البؤري. (ا) الضوابط الرئيسية الموجودة في علامة التبويب الاستحواذ . (ب−د) وتظهر معلمات الليزر ، والطول الموجي الاثاره ، ومجموعه من موجات الانبعاثات المسجلة لثلاثه البروتينات الفلورية قصاصات. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/60424/60424supfig01.jpg" target="_blank">الرجاء الضغط هنا لتحميل هذا الملف.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Clonal Genetic Tracing using the Confetti Mouse to Study Mineralized Tissues at JoVE.com

Clonal Genetic Tracing using the Confetti Mouse to Study Mineralized Tissues

تصف هذه الطريقة استخدام نموذج الماوس R26R (الحلويات) لدراسة الانسجه المعدنية ، والتي تغطي جميع الخطوات من استراتيجية التكاثر إلى acquirements الصورة. وشملت هو بروتوكول العامة التي يمكن تطبيقها علي جميع الانسجه الرخوة وبروتوكول تعديل التي يمكن تطبيقها علي الانسجه المعدنية.

التتبع الوراثي الكلونال باستخدام الماوس الحلويات لدراسة الانسجه المعدنية

Labeling an individual cell in the body to monitor which cell types it can give rise to and track its migration through the organism or determine its ...

من خلال وضع العلامات الجينية على الخلايا الفردية ببروتينات الفلورسنت واتباع تلك الخلايا بمرور الوقت ، سمح ماوس Confetti للباحثين بالكشف عن رؤى جديدة في العديد من العمليات البيولوجية. بروتوكول لدينا يقلل من الوقت الفاصل بين جمع الأنسجة والتصوير، ويمكن تطبيقها على أي الأنسجة المعدنية أو غير المهدنة ويحافظ على الفلورسين لعدة سنوات. هذه الطريقة مفيدة جدا لجميع مجالات الطب التجديدي والبيولوجيا التنموية لأنه يمكن تطبيقها على مختلف السكان الخلوية لدراسة مصيرهم وحركيتهم طالما أن خط Cre مناسب متاح.سوف تظهر تعليماتنا خطوة بخطوة الخطوة الأكثر تحدياً للتمييز بين الاختلاف بين الإشارات الفلورية المنبعثة من البروتينات الفلورية المختلفة. ابدأ بإعداد أنسجة الماوس للتصوير. بالنسبة للأنسجة الرخوة والثنية المعدنية والفيمورا من الفئران التي يصل عمرها إلى 45 يومًا ، قم بإصلاح الأنسجة في 3.7٪ الفورمالديهايد PBS واحتضنها عند 4 درجات مئوية لمدة ست ساعات بينما تتدحرج بلطف على دوار.بالنسبة للأنسجة المعدنية مثل الساق والفيتامرا من الفئران فوق عمر 45 يومًا ، أعد لترًا واحدًا من محلول 10٪EDTA مع تعديل pH إلى 8.05 مع هيدروكسيد الصوديوم وتمييع الفورمالديهايد إلى 3.7٪ باستخدام هذا الحل. إصلاح الأنسجة عن طريق الاحتفاظ بها في 3.7٪ الفورمالديهايد برنامج تلفزيوني بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية. في اليوم التالي، ضعه في محلول الفورمالديهايد EDTA المُبَرَّك ويحتضنه عند 4 درجات مئوية أثناء الدوران لمدة 48 ساعة، مع التأكد من استبدال المحلول ثلاث مرات أثناء الحضانة.ثم ضع الأنسجة في سكروز 30٪، مع التأكد من ملء الحاوية إلى الحافة، وتدوير بلطف بين عشية وضحاها في أربع درجات مئوية. في الصباح، استخدم ملقط لإزالة الأنسجة من محلول السكروز وشطفه بخمس ملليلترات من مركب درجة حرارة القطع الأمثل، أو أكتوبر، لبضع ثوان. ملء cryomold المسمى مسبقا مع أكتوبر ووضع الأنسجة في الجزء السفلي، والعمل بسرعة لتجنب الجلوس العينة في درجة حرارة الغرفة لفترة طويلة جدا.تضمين العينة عن طريق وضع القالب على الجليد الجاف وانتظار أكتوبر لترسيخ. إذا لم يتم استخدام العينات على الفور، يمكن تخزينها في ناقص 20 درجة مئوية. إزالة كتلة من القالب.تطبيق أكتوبر بين الجزء العلوي من الكتلة وتشاك وتبريده في التبريد لمدة خمس دقائق على الأقل أو حتى OCT يقوي تماما. Precool حامل العينة وحامل شفرة إلى ناقص 20 درجة مئوية، ثم ضع العينة في حامل تشاك ونصلة في حامل شفرة، والسماح لهم لتكواسير لعدة دقائق. بالنسبة لتحليل لوحة النمو بعد الولادة، أعد أقسامًا من 30 إلى 160 ميكرومتر.استخدام التبريد لتقليم كتلة وقطع أقسام الأنسجة إلى سمك مناسب وجمعها على الشرائح. ثم الهواء الجافة الشرائح في درجة حرارة الغرفة حتى أنها جافة تماما وتخزينها في ناقص 20 درجة مئوية لمدة تصل إلى 36 شهرا. عندما تكون جاهزة لاستخدام الشريحة، إزالتها من الثلاجة وتقديمها إلى درجة حرارة الغرفة في حامل شريحة.لإزالة OCT، تطبيق برنامج تلفزيوني بلطف على الشريحة مع ماصة باستور. لمدة 160 ميكرومتر سميكة المقاطع، احتضان الشريحة لمدة 15 دقيقة، وإزالة السائل وتطبيق برنامج تلفزيوني جديد لمدة خمس دقائق أخرى. جبل الشرائح في حل من 75٪ thiodiethanol في درجة حرارة الغرفة مع 60 ملليمتر زلات غطاء طويل.أولاً، حدد قناة RFP بالنقر عليها في علامة التبويب القنوات، مما يؤدي إلى عرض تفاصيل القناة في علامة التبويب مسار الضوء. ثم انقر فوق مربع الاختيار بجانب T-PMT. ضع الشريحة في حامل الشريحة ووضع الأنسجة ذات الاهتمام مباشرة بين مسار الضوء والعدسة الهدف.لتوطين الأنسجة، قم بإلغاء تحديد صناديق YFP و CFP تحت عنوان المسارات لعلامة التبويب القنوات. حدد قناة T-PMT في عنوان المسارات، ثم انقر مباشرة في علامة التبويب الاستحواذ وزيادة مكاسب لقناة T-PMT من أجل تصور اختيار الأنسجة على الشاشة. ضبط موقف الشريحة لتحديد المنطقة ذات الاهتمام والتركيز باستخدام مقبض المجهر المناسب.ثم انقر فوق إيقاف في علامة التبويب اكتساب لإيقاف التعرض بالليزر. حدد معلمات التصوير وفقًا لتعليمات المخطوطات، ثم قم بتعديل حجم الثقب إذا لزم الأمر. تحقق من الإعداد للتأكد من أن الإشارات المسجلة لا تتداخل، ثم حدد جميع القنوات الثلاث في علامة التبويب القنوات واضغط على زر الانطباق.قم بالتمرير بين قنوات العرض في الصورة الناتجة عن طريق النقر على المربعات الزرقاء المظللة أعلى كل قناة في علامة تبويب الأبعاد والتحقق يدويًا من التداخل بين القنوات على الشاشة. إذا تداخلت الإشارات، قم بإعادة ضبط المعلمات حتى يمكن تمييزها عن بعضها البعض. تم استخدام هذا البروتوكول لتسمية chondrocytes في الغضروف epiphyseal وتصور توسعها التخفي مع التقدم في السن.تم تحديد القسم المركزي من خلال تصور الرباط الصليبي وتم تصوير المستنسخات في لوحة النمو التيبية القريبة. الخلايا الفردية التي كانت كول2 إيجابية وأصبحت وصفت مع البروتينات الفلورية Confetti على إدارة تاموكسيفين، خضع التوسع التخفي وبقي في وقت لاحق في لوحة النمو. ويمكن تصور إشارة الفلورسنت بعد التخزين على المدى الطويل.تم تخزين بعض الأقسام لأكثر من ثلاث سنوات قبل التحضير والتصوير. وقد أجريت إعادة البناء ثلاثية الأبعاد تلقائيا مع برنامج تحليل الصور وتصديرها كفيديو. قسم واحد كسر أثناء خطوة التبريد يحتوي على منطقة مع هذا المستوى العالي من إعادة التركيب أنه من شأنه أن يمنع تحليل التخفي، مما يدل على واحدة من المشاكل الشائعة التي واجهتها مع هذا البروتوكول.اعتمادا على سؤال البحث الخاص بك، وذلك باستخدام خط Cre التي تسميات على وجه التحديد الخلايا الخاصة بك من الفائدة يمكن أن تكون مهمة جدا. لذلك، نوصي بفحص الفلورس في تلك الخلايا بعد وقت قصير من إعادة التركيب. استخدام خطوط Cre غير قابل للتكرير أمر ضروري لأن إعادة التشكيل المستمر للحمض النووي في خطوط Cre غير قابلة للاختراق يمكن أن يغير الملف الفلوري للخلايا المتحللة مما يحول دون التحليل الزني.ويمكن الجمع بين هذا البروتوكول مع اضطرابات وظيفية مثل سلالات التلاعب وراثيا، والعلاجات الدوائية، والتدخلات الجراحية، فضلا عن تلطيخ الفلوروس المناعي من أقسام المعدة.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Using Confocal Analysis of Xenopus laevis to Investigate Modulators of Wnt and Shh Morphogen Gradients

Using Confocal Analysis of Xenopus laevis to Investigate Modulators of Wnt and Shh Morphogen Gradients

باستخدام تحليل متحد البؤر من<em&gt; القيطم المورق</em&gt; بالتحقيق المغيرون من WNT وShh على محدثة التخلق التدرجات

This protocol describes a method to visualise ligands distributed across a field of cells. The ease of expressing exogenous proteins, together with the ...

A Method for Lineage Tracing of Corneal Cells Using Multi-color Fluorescent Reporter Mice

منهج في النسب الانسحاب من الخلايا القرنية عن طريق متعدد الألوان مراسل الفلورسنت الفئران

Lineage tracing experiments define the origin, fate and behavior of cells in a specific tissue or organism. This technique has been successfully applied ...

Simultaneous Assessment of Cardiomyocyte DNA Synthesis and Ploidy: A Method to Assist Quantification of Cardiomyocyte Regeneration and Turnover

تقييم في وقت واحد Cardiomyocyte الحمض النووي تحضير والصيغة الصبغية: طريقة لمساعدة الكمي لCardiomyocyte التجديد ودوران

Although it is accepted that the heart has a limited potential to regenerate cardiomyocytes following injury and that low levels of cardiomyocyte turnover ...

Combining Intravital Fluorescent Microscopy (IVFM) with Genetic Models to Study Engraftment Dynamics of Hematopoietic Cells to Bone Marrow Niches

Combining Intravital Fluorescent Microscopy IVFM with Genetic Models to Study Engraftment Dynamics of Hematopoietic Cells to Bone Marrow Niches

الجمع بين الفحص المجهري نيون إينترافيتال (إيففم) مع النماذج الوراثية لدراسة ديناميات Engraftment الخلايا المكونة للدم لمنافذ نخاع العظام

Increasing evidence indicates that normal hematopoiesis is regulated by distinct microenvironmental cues in the BM, which include specialized cellular ...

In Vitro Growth of Mouse Preantral Follicles Under Simulated Microgravity

In Vitro Growth of Mouse Preantral Follicles Under Simulated Microgravity

في المختبر نمو بصيلات بريانترال الماوس تحت ظروف محاكاة الجاذبية الصغرية

14 day-old mouse ovarian tissue and preantral follicles isolated from same-aged mice were incubated in a simulated microgravity culture system. We ...

Genetic Engineering of Primary Mouse Intestinal Organoids Using Magnetic Nanoparticle Transduction Viral Vectors for Frozen Sectioning

الهندسة الوراثية للأجهزة المعوية الماوس الأولية باستخدام الجسيمات النانوية المغناطيسية تحويل ناقلات الفيروسية للتقسيم المجمدة

Intestinal organoid cultures provide a unique opportunity to investigate intestinal stem cell and crypt biology in vitro, although efficient approaches to ...

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

أسلوب الثقافة أورجانوتيبيك لدراسة تطوير الأنسجة الجنينية الدجاج

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

Tracing Gene Expression Through Detection of &#946;-galactosidase Activity in Whole Mouse Embryos

Tracing Gene Expression Through Detection of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-galactosidase Activity in Whole Mouse Embryos

تتبع التعبير الجيني من خلال الكشف عن نشاط β-جالاكتوسيداسي في الأجنة كله الماوس

The Escherichia coli LacZ gene, encoding &#946;-galactosidase, is largely used as a reporter for gene expression and as a tracer in cell lineage studies. ...

An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

نموذج في المختبر نظام التروية التوازي-لوحة لدراسة البكتيريا التمسك Graft الأنسجة

Various valved conduits and stent-mounted valves are used for right ventricular outflow tract (RVOT) valve replacement in patients with congenital heart ...

An In Vivo Method to Study Mouse Blood-Testis Barrier Integrity

An In Vivo Method to Study Mouse Blood-Testis Barrier Integrity

أسلوب في فيفو لدراسة سلامة حاجز الدم-الخصية الماوس

Spermatogenesis is the development of spermatogonia into mature spermatozoa in the seminiferous tubules of the testis. This process is supported by ...