Name: genetic modification of cyanobacteria by conjugation using the cyanogate modular cloning toolkit
Uploaded: 2019-10-31T15:00:00
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लेखक वित्तीय जैव प्रौद्योगिकी और जैव ऊर्जा (एनआईबीबी) और वित्तीय सहायता के लिए औद्योगिक जैव प्रौद्योगिकी नवाचार केंद्र (IBioIC) में PHYCONET जैव प्रौद्योगिकी और जैविक विज्ञान अनुसंधान परिषद (BBSRC) नेटवर्क के आभारी हैं. GARG, AASO और एपी BBSRC EASTBIO केस पीएचडी कार्यक्रम से धन सहायता स्वीकार करते हैं (अनुदान संख्या BB/M010996/1), Consezo Nacional de Ciencia y Tecnologa (CONACYT) पीएचडी कार्यक्रम, और IBioIC-BBSRC सहयोगी प्रशिक्षण भागीदारी (CTP) पीएचडी कार्यक्रम, क्रमशः. हम कॉनराड Mullineaux (लंदन की रानी मैरी विश्वविद्यालय), और पॉल एरिक जेन्सेन और जूली Annemerie ज़ीता ज़ेडलर (कोपेनहेगन के विश्वविद्यालय) प्लाज्मिड वेक्टर और प्रोटोकॉल योगदान और सलाह के लिए धन्यवाद.

1. संयंत्र MoClo और CyanoGate Toolkits का उपयोग कर वेक्टर विधानसभा
नोट: वेक्टर विधानसभा के साथ आगे बढ़ने से पहले, यह दृढ़ता से सिफारिश की है कि उपयोगकर्ताओं को खुद को संयंत्र और CyanoGate MoClo सिस्टम12,<sup class="...

गोल्डन गेट विधानसभा के कई फायदे हैं अन्य वेक्टर विधानसभा विधियों की तुलना में, विशेष रूप से scalability के संदर्भ में20,21. फिर भी, एक प्रयोगशाला में गोल्डन गेट प्रणाली की स्थापना के लिए समय ...

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>5-bromo-4-chloro-3-indolyl-&#946;-D-galactopyranoside (X-Gal)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>R0404</td>
			<td>Used in 2.1.3.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenosine 5&#8242;-triphosphate (ATP) disodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2383</td>
			<td>Used in Table 2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar (microbiology tested)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A1296-500g</td>
			<td>Used in 8.3.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Bioline</td>
			<td>BIO-41026</td>
			<td>Used in 6.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Attune NxT Flow Cytometer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>-</td>
			<td>Used in 4.3.1.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2153</td>
			<td>Used in Table 2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BpiI (BbsI)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>ER1011</td>
			<td>Used in Table 2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BsaI (Eco31I)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>ER0291</td>
			<td>Used in Table 2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbenicillin disodium</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>A1491.0005</td>
			<td>Used in 2.1.3.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Costar TC-Treated flat-bottom 24 well plates</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS3527</td>
			<td>Used in 4.1.3.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl Sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>BP231-100</td>
			<td>Used in 3.6.2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNeasy Plant Mini Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69104</td>
			<td>DNA extraction kit. Used in 5.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FLUOstar Omega Microplate reader</td>
			<td>BMG Labtech</td>
			<td>-</td>
			<td>Used in 4.2.2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GeneJET Plasmid Miniprep Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>K0503</td>
			<td>Plasmid purification kit. Used in step 2.3.2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass beads (0.5 mm diameter)</td>
			<td>BioSpec Products</td>
			<td>11079105</td>
			<td>Used in 5.2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10021083</td>
			<td>Used in 2.3.1, 3.6.2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10356553</td>
			<td>Used in 2.1.3.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kanamycin sulphate (Gibco)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11815-024</td>
			<td>Used in 2.1.3.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Membrane filters (0.45 &#956;m)</td>
			<td>MF-Millipore</td>
			<td>HAWP02500</td>
			<td>Used in 3.3.7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplates, 96-well, flat-bottom (Chimney Well) &#181;CLEAR</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>655096</td>
			<td>Used in 4.2.1.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monarch DNA Gel Extraction Kit</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>T1020S</td>
			<td>Used in 1.1.2.2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monarch PCR DNA Cleanup Kit</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>T1030</td>
			<td>DNA purification kit. Used in 1.1.2.3.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multitron Pro incubator with LEDs</td>
			<td>Infors HT</td>
			<td>-</td>
			<td>Shaking incubator with white LED lights. Used in 4.1.4.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MyTaq DNA Polymerase</td>
			<td>Bioline</td>
			<td>BIO-21108</td>
			<td>Used in 7.1.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop One</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>ND-ONE-W</td>
			<td>Used in 2.3.3.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>One Shot TOP10 chemically competent E. coli</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>C404010</td>
			<td>Used in 2.1.1.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffer saline (PBS) solution (10X concentrate)</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>K813</td>
			<td>Used in 4.3.2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Q5High-Fidelity DNA Polymerase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0491S</td>
			<td>Used in 1.1.2.1.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quick-Load 1 kb DNA Ladder</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>N0468S</td>
			<td>Used in Figure 4.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screw-cap tubes (1.5 ml)</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>72.692.210</td>
			<td>Used in 3.6.3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectinomycin dihydrochloride pentahydrate</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>J61820.06</td>
			<td>Used in 2.1.3.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterilin Clear Microtiter round-bottom 96-well plates</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>612U96</td>
			<td>Used in 4.3.1.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 DNA ligase</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>EL0011</td>
			<td>Used in Table 2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TissueLyser II</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>85300</td>
			<td>Bead mill. Used in 5.2.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

genetic modification of cyanobacteria by conjugation using the cyanogate modular cloning toolkit

सायनोबैक्टीरिया प्रोकैरियोटिक प्रकाश संश् लेषी जीवों का एक विविध समूह है जिसे उपयोगी औद्योगिक वस्तुओं के नवीकरणीय उत्पादन के लिए आनुवंशिक रूप से संशोधित किया जा सकता है। सिंथेटिक जीव विज्ञान में हाल ही में प्रगति ऐसे CyanoGate, बाद में परिवर्तन या सायनोबैक्टीरिया में भ्रमपूर्ण हस्तांतरण के लिए प्लाज्मिड वेक्टर के निर्माण के लिए एक मानकीकृत मॉड्यूलर क्लोनिंग प्रणाली के रूप में कई क्लोनिंग toolkits के विकास के लिए नेतृत्व किया है. यहाँ हम एक आत्म प्रतिकृति वेक्टर संयोजन के लिए एक विस्तृत विधि रूपरेखा (उदाहरण के लिए, एक फ्लोरोसेंट मार्कर अभिव्यक्ति कैसेट ले जाने) और साइनोबैक्टीरियल उपभेदों में वेक्टर के संयुग्मी हस्तांतरण Synechocystis सपा पीसीसी 6803 या Synechococcus लम्बी UTEX 2973. इसके अलावा, हम एक प्लेट रीडर या प्रवाह साइटोमेट्री का उपयोग कर के एक आनुवंशिक भाग (उदा., एक प्रमोटर) के प्रदर्शन की विशेषता के लिए कैसे रूपरेखा.

गोल्डन गेट विधानसभा कार्यप्रवाह प्रदर्शित करने के लिए, एक अभिव्यक्ति कैसेट स्तर 1 स्थिति 1 (आगे) स्वीकारकर्ता वेक्टर (pICH47732) निम्न स्तर 0 भागों युक्त में इकट्ठा किया गया था: सी-phycocyanin operon Pcpc560...

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Genetic Modification of Cyanobacteria by Conjugation Using the CyanoGate Modular Cloning Toolkit

यहाँ, हम एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करने का वर्णन कैसे i) एक स्वयं प्रतिकृति वेक्टर को इकट्ठा CyanoGate मॉड्यूलर क्लोनिंग टूलकिट का उपयोग कर, ii) संयोजन द्वारा एक cyanobactrial मेजबान में वेक्टर परिचय, और iii) ट्रांसजेनिक cyanobacteria उपभेदों का उपयोग कर एक विशेषता प्लेट रीडर या प्रवाह साइटोमेट्री।

साइनोगेट मॉड्यूलर क्लोनिंग टूलकिट का उपयोग करके साइनोबैक्टीरिया का आनुवंशिक संशोधन

Cyanobacteria are a diverse group of prokaryotic photosynthetic organisms that can be genetically modified for the renewable production of useful ...

साइनोबैक्टीरिया फोटोसिंथेटिक रोगाणुओं का एक महत्वपूर्ण फायल है जो सिंथेटिक जीव विज्ञान और नवीकरणीय जैव प्रौद्योगिकी अनुप्रयोगों के लिए उपयोगी प्लेटफार्मों के रूप में तेजी से पहचाने जाते हैं। इसलिए विभिन्न साइनोबैक्टीरियल प्रजातियों में विषम डीएनए के डिजाइन, क्लोनिंग और परिचय को सरल बनाने के लिए मजबूत तकनीकों का विकास महत्वपूर्ण है। इसलिए यह तकनीक सायनोबैक्टीरियल प्रजातियों में डीएनए शुरू करने के लिए संभोग या ट्राइपरेंटल संभोग नामक एक अच्छी तरह से स्थापित विधि को दर्शाती है जो स्वाभाविक रूप से परिवर्तनीय नहीं हैं।एकल कोशिका से बहुकोशिकीय फिलामेंटस प्रजातियों तक साइनोबैक्टीरियल उपभेदों की एक विस्तृत श्रृंखला में संवहन सफलतापूर्वक किया गया है। यदि आप पहली बार इस तकनीक का प्रयास कर रहे हैं, तो कृपया देखभाल के साथ अपने साइनोबैक्टीरियल और अपने ई. कोलाई उपभेदों दोनों को संभालने का ध्यान रखें। उदाहरण के लिए, प्रोटोकॉल में दिए गए मूल्यों से ऊपर न करें और भंवर न करें।बैक्टीरिया और सायनोबैक्टीरिया को मिलाने से पहली बार यूजर्स को अजीब लग सकता है। हमें उम्मीद है कि संविलियन प्रक्रिया का प्रदर्शन करके हम इसे स्पष्ट करने में मदद करेंगे । स्तर एक विधानसभाओं के निर्माण के बाद, एक उपयुक्त स्तर टी स्वीकारकर्ता वेक्टर चुनें।स्तर टी रीढ़ की हड्डी के लिए अंतिम स्तर एक विधानसभा के तीन प्रमुख अंत ligate करने के लिए एक उपयुक्त अंत लिंक चुनें । स्तर टी में एक या एक से अधिक स्तर एक विधानसभाओं को इकट्ठा करने के लिए, PBI1 और आवश्यक अंत लिंक वेक्टर के साथ एक प्रतिक्रिया मिश्रण तैयार करते हैं । थर्मल साइकिल कार्यक्रम स्थापित करें और पांडुलिपि के अनुसार आगे बढ़ें।पहले दिन, साइनोबैकिस्टिस पीसीसी 6803 या सिनेकोकोकस विस्तारक यूटेक्स 2 9 73 की एक नई संस्कृति स्थापित करके साइनोबैक्टीरियल संस्कृति बढ़ाएं। एक गर्मी बाँझ पाश के साथ, एक्सनिक बीजी-11 आगर प्लेट से कोशिकाओं को परिमार्जन और एक १०० मिलीलीटर शंकु कुप्पी में जगह ताजा बीजी-11 माध्यम के ५० मिलीलीटर से भरा टीका लगाने के लिए । 100 आरपीएम पर 30 डिग्री सेल्सियस पर सिनेसोसिस्टिस पीसीसी 6803 सेल संस्कृतियों को विकसित करने के लिए रोशनी के साथ एक मिलाते हुए इनक्यूबेटर में फ्लास्क रखें।Synechococcus लम्बी UTEX 2973 के लिए, 100 आरपीएम पर 40 डिग्री सेल्सियस पर सेल संस्कृतियों को विकसित करें। एक से दो दिनों के बाद, सेल संस्कृति का एक मिलीलीटर आकर्षित करें और स्पेक्ट्रोफोटोमीटर पर मापें। ओडी 750 पर अवशोषण 0.5 से 1.5 तक पहुंचता है।दूसरे दिन, एक MC1061 ई. कोलाई सहायक तनाव युक्त वैक्टर PRK24 और PRL528 में एम्पीसिलिन के पांच मिलीलीटर में १०० माइक्रोग्राम प्रति मिलीलीटर और क्लोराम्फेनिकोल की एकाग्रता पर 25 माइक्रोग्राम प्रति मिलीलीटर की एकाग्रता पर टीका लगाओ । एक मिलाते हुए इनक्यूबेटर में २२५ आरपीएम पर रात भर ३७ डिग्री सेल्सियस पर बढ़ें । फिर एलबी माध्यम के पांच मिलीलीटर ई. कोलाई संस्कृति स्तर टी कार्गो वेक्टर ले जाने के साथ उपयुक्त एंटीबायोटिक दवाओं युक्त टीका ।एक मिलाते हुए इनक्यूबेटर में २२५ आरपीएम पर रात भर ३७ डिग्री सेल्सियस पर संस्कृति बढ़ें । तीन दिन, सहायक और कार्गो ई. कोलाई रात भर संस्कृतियों 3, 000 ग्राम पर कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए अपकेंद्रित्र । सेल पैलेट को परेशान किए बिना सुपरनेट को त्याग दें।एंटीबायोटिक दवाओं के बिना ताजा पौंड माध्यम के पांच मिलीलीटर जोड़कर छर्रों को धोएं। सुपरनेट को हटाने के लिए धीरे-धीरे ऊपर और नीचे और अपकेंद्रित्र को पाइप करके गोली को फिर से खर्च करें। रातोंरात संस्कृति से अवशिष्ट एंटीबायोटिक दवाओं को हटाने के लिए इस वाशिंग चरण को तीन बार दोहराएं।अंतिम धोने के बाद, प्रारंभिक संस्कृति की मात्रा के एलबी माध्यम की आधी मात्रा में सेल पेलेट को फिर से खर्च करें। फिर एक दो मिलीलीटर ट्यूब में कार्गो तनाव के 450 माइक्रोलीटर के साथ सहायक तनाव के 450 माइक्रोलीटर गठबंधन और कमरे के तापमान पर छोड़ दें। इसके बाद, कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए 1, 500 ग्राम पर साइनोबैक्टीरियल संस्कृति के एक मिलीलीटर को अपकेंद्री करके साइनोबैक्टीरियल संस्कृति तैयार करें।फिर सेल पैलेट को परेशान किए बिना सुपरनेट को सावधानी से त्याग दें। इसी शुरुआती वॉल्यूम के फ्रेश बीजी-11 मीडियम को जोड़कर चार बार गोली धोएं। एक दो मिलीलीटर ट्यूब में संयुक्त ई. कोलाई उपभेदों के 900 माइक्रोलीटर के लिए धोया साइनोबैक्टीरियल संस्कृति के 900 माइक्रोलीटर जोड़ें।संस्कृतियों को धीरे-धीरे ऊपर और नीचे पाइपिंग करके मिलाएं। सिनेकोसाइटिस पीसीसी 6803 के लिए 30 मिनट या सिनेकोकस विस्तारक यूटेक्स 2973 के लिए दो घंटे के लिए कमरे के तापमान पर मिश्रण को इनक्यूबेट करें। कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए 1, 500 ग्राम पर मिश्रण अपकेंद्रित्र।सुपरनेटेंट के 1.6 मिलीलीटर निकालें और शेष सुपरनेट में गोली को फिर से रखें। एंटीबायोटिक दवाओं के बिना एक पौंड बीजी-11 आगर प्लेट पर एक 0.45 माइक्रोन झिल्ली फिल्टर रखें। ध्यान से एक बाँझ स्प्रेडर या एक बाँझ झुके टिप के साथ झिल्ली पर ई. कोलाई/साइनोबैक्टीरियल संस्कृति मिश्रण के २०० माइक्रोलीटर फैल गया ।पैराफिन फिल्म के साथ प्लेट को सील करें और प्लेट को 24 घंटे के लिए एक प्रबुद्ध इनक्यूबेटर में रखें। 24 घंटे के बाद, सावधानी से लौ निष्फल संदंश का उपयोग करके झिल्ली को कार्गो वेक्टर के लिए चयन करने के लिए उपयुक्त एंटीबायोटिक युक्त एक ताजा बीजी-11 एगर प्लेट में स्थानांतरित करें। पैराफिन फिल्म के साथ प्लेट को सील करें और पहले की तरह ही शर्तों के तहत इनक्यूबेट करें जब तक कॉलोनियां दिखाई न दें।उपनिवेश आमतौर पर सिनेसोसिटिस पीसीसी 6803 के लिए 7-14 दिनों के बाद और सिनेकोकोकस विस्तारक यूटेक्स 2 9 73 के लिए 3-7 दिनों के बाद दिखाई देते हैं। एक गर्मी बाँझ inoculating रॉड का उपयोग कर conjugants का चयन करने के लिए, एक नई बीजी-11 आगर उचित एंटीबायोटिक दवाओं युक्त प्लेट पर झिल्ली और लकीर से कम से दो व्यक्तिगत कालोनियों का चयन करें । फिर एक 15 मिलीलीटर अपकेंद्रित्र ट्यूब में साइनोबैक्टीरियल संस्कृति की एक लकीर टीका एलबी माध्यम के पांच मिलीलीटर और एक मिलाते हुए इनक्यूबेटर में २२५ आरपीएम पर रात भर ३७ डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट ।स्पष्ट संस्कृति ई कोलाई संदूषण के अभाव की पुष्टि करती है । सात दिनों की पर्याप्त वृद्धि अवधि के बाद, दीर्घकालिक क्रायो भंडारण या बाद के प्रयोग के लिए तरल संस्कृतियों की स्थापना के लिए व्यक्तिगत एक्सनिक उपनिवेशों को चुनें। इस अध्ययन में गोल्डन गेट असेंबली वर्कफ्लो का प्रदर्शन किया गया।विधानसभा प्रतिक्रिया के परिवर्तन के बाद, सफल विधानसभाओं ई. कोलाई कालोनियों के मानक नीले सफेद स्क्रीनिंग का उपयोग कर की पहचान की गई । लेवल वन वेक्टर और एंड लिंक वन वेक्टर में ईवाईएफपी एक्सप्रेशन कैसेट को फिर वेक्टर सीपीसीबीए-ईवाईएफपी देने के लिए लेवल टी रिकारॅ्बर वेक्टर में इकट्ठा किया गया । इकट्ठे सीपीसीबीए-ईवाईएफपी वेक्टर को प्रतिबंध पाचन द्वारा सत्यापित किया गया था।सीपीसीबीए-ईवाईएफपी या पीपीएमक्यूएके1-टी वेक्टर के सफल संयुगल हस्तांतरण के परिणामस्वरूप सिनेसोसिटिस पीसीसी 6803 और सिनेकोकोकस विस्तारक यूटेक्स 2 9 73 के लिए झिल्ली पर कई सौ उपनिवेशों तक की वृद्धि हुई। जैसा कि मजबूत Pcpc560 प्रमोटर के लिए उम्मीद थी, प्लेट रीडर से सामान्यीकृत ईवाईएफपी फ्लोरेसेंस और प्रवाह साइटोमीटर से प्रति सेल ईवाईएफपी फ्लोरेसेंस के लिए मूल्य नकारात्मक नियंत्रण की तुलना में अधिक थे। प्लेट रीडर और प्रवाह साइटोमीटर दोनों के साथ, फ्लोरेसेंस मूल्य सिनेकोकोकस विस्तारक 2 9 73 में सिनेकोस्टिस पीसीसी 6803 की तुलना में अधिक थे।सुनिश्चित करें कि आप न्यूनतम समय के लिए इनक्यूबेट करें जिसके अनुसार आप संयुग्मण कर रहे हैं।

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Cells, Genomes, and Evolution

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Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

प्रारंभिक चिकी भ्रूण के स्वस्थानी संकरण में डबल पूरा पर्वत

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Assay for Neural Induction in the Chick Embryo

चिकी भ्रूण में तंत्रिका प्रेरण के लिए परख

A High-content Imaging Workflow to Study Grb2 Signaling Complexes by Expression Cloning

एक उच्च सामग्री इमेजिंग कार्यप्रवाह अभिव्यक्ति क्लोनिंग द्वारा अध्ययन Grb2 परिसर संकेत

Signal  transduction by growth factor receptors is essential for cells to maintain  proliferation and differentiation and requires tight control. Signal  ...

Genetic Modification and Recombination of Salivary Gland Organ Cultures

जेनेटिक और लार ग्रंथि अंग संस्कृति का संशोधन पुनर्संयोजन

Branching  morphogenesis occurs during the development of many organs, and the embryonic  mouse submandibular gland (SMG) is a classical model for the ...

Fecal Glucocorticoid Analysis: Non-invasive Adrenal Monitoring in Equids

मलीय Glucocorticoid विश्लेषण: Equids में गैर-आक्रामक अधिवृक्क निगरानी

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. During a potentially aversive situation, ...

DNA Electroporation, Isolation and Imaging of Myofibers

डीएनए इलेक्ट्रोपोरेशन, Myofibers के अलगाव और इमेजिंग

Mature muscle has a unique structure that is amenable to live cell imaging. Herein, we describe the experimental protocol for expressing fluorescently ...

Simultaneous Measurement of Mitochondrial Calcium and Mitochondrial Membrane Potential in Live Cells by Fluorescent Microscopy

Mitochondrial कैल्शियम और mitochondrial झिल्ली के साथ माप फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी द्वारा जीवित कोशिकाओं में संभावित

Apart from their essential role in generating ATP, mitochondria also act as local calcium (Ca2+) buffers to tightly regulate intracellular Ca2+ ...

Visualization of DNA Compaction in Cyanobacteria by High-voltage Cryo-electron Tomography

उच्च वोल्टेज क्रायो-इलेक्ट्रॉन टोमोग्राफी द्वारा Cyanobacteria में डीएनए संपीड़न के दृश्य

This protocol describes how to visualize the transient DNA compaction in cyanobacteria. DNA compaction is a dramatic cytoplasmic event recently found to ...

A Pipeline using Bilateral In Utero Electroporation to Interrogate Genetic Influences on Rodent Behavior

कृंतक व्यवहार पर आनुवंशिक प्रभावों से पूछताछ करने के लिए यूटेरो इलेक्ट्रोपेशन में द्विपक्षीय का उपयोग करने वाली पाइपलाइन

As genome-wide association studies shed light on the heterogeneous genetic underpinnings of many neurological diseases, the need to study the contribution ...

Establishment and Genetic Manipulation of Murine Hepatocyte Organoids

Murine हेपेटोसाइट Organoids की स्थापना और आनुवंशिक हेरफेर

The liver is the largest organ in mammals. It plays an important role in glucose storage, protein secretion, metabolism and detoxification. As the ...