Name: real-time bioluminescence imaging of notch signaling dynamics during murine neurogenesis
Uploaded: 2019-12-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time Bioluminescence Imaging of Notch Signaling Dynamics during Murine Neurogenesis at JoVE.com

نشكر يوميكو ايواموتو لدعم إنتاج الفيديو. ونحن ممتنون أيضا ل Akihiro ايسومورا لمناقشه ودعم تحليل الصور ، هيتوشي Miyachi لدعم التقنية لتوليد الكائنات المحورة وراثيا ، يوجي Shinjo (اوليمبوس العلوم الطبية) ، ماساتوشي غوته (اوليمبوس العلوم الطبية) ، تاكانيا ايميزو ( اوليمبوس العلوم الطبية) و Ouin Kunitaki (Andor اليابان) للحصول علي الدعم الفني والمناقشات من نظام التصوير الإحيائي. وقد دعم هذا العمل من قبل البحوث الاساسيه للعلوم والتكنولوجيا التطورية (JPMJCR12W2) (R.K.) ، والمنح في المعونة للبحوث العلمية في مجالات مبتكره (تربيه 24116705 لH.S. و تربيه 16H06480 ل R.K.) ، ومنحه المعونة للبحوث العلمية (ج) (JSPS 18K06254) (H.S.) ، مؤسسه تاكيدا (R.K. و H.S.) ، ومنصة للنهج الديناميكية لنظام المعيشة من وزاره التعليم والثقافة والرياضة والعلوم والتكنولوجيا ، اليابان.

وقد تمت الموافقة علي جميع الإجراءات بما في ذلك المواد الحيوانية من قبل لجنه الرعاية الحيوانية المؤسسية والاستخدام في معهد الحياة الحدودية والعلوم الطبية ، جامعه كيوتو.
1-الصحفيون المتعصبون
ملاحظه: المراسل لوسيفيراز مناسب لقياس الديناميكيات السريعة للنشاط ا?...

<ol>
	<li>Ross, S. E., Greenberg, M. E., Stiles, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+helix-loop-helix+factors+in+cortical+development.">Basic helix-loop-helix factors in cortical development.</a> Neuron. 39, 13-25 (2003).</li><li>Pontious, A., Kowalczyk, T., Englund, C., Hevner, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+intermediate+progenitor+cells+in+cerebral+cortex+development.">Role of intermediate progenitor cells in cerebral cortex development.</a> Developmental Neuroscience. 30, 24-32 (2007).</li><li>Kriegstein, A., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+glial+nature+of+embryonic+and+adult+neural+stem+cells.">The glial nature of embryonic and adult neural stem cells.</a> Annual Review of Neuroscience. 32, 149-184 (2009).</li><li>Paridaen, J. T., Huttner, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenesis+during+development+of+the+vertebrate+central+nervous+system.">Neurogenesis during development of the vertebrate central nervous system.</a> EMBO Reports. 15, 351-364 (2014).</li><li>Taverna, E., G&#246;tz, M., Huttner, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cell+biology+of+neurogenesis:+toward+an+understanding+of+the+development+and+evolution+of+the+neocortex.">The cell biology of neurogenesis: toward an understanding of the development and evolution of the neocortex.</a> Annual Review of Cell and Developmental Biology. 30, 465-502 (2014).</li><li>Louvi, A., Artavanis-Tsakonas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch+signaling+in+vertebrate+neural+development.">Notch signaling in vertebrate neural development.</a> Nature Reviews Neuroscience. 7, 93-102 (2006).</li><li>Pierfelice, T., Alberi, L., Gaiano, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch+in+the+Vertebrate+Nervous+System:+An+Old+Dog+with+New+Tricks.">Notch in the Vertebrate Nervous System: An Old Dog with New Tricks.</a> Neuron. 69, 840-855 (2011).</li><li>Bray, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch+signalling:+a+simple+pathway+becomes+complex.">Notch signalling: a simple pathway becomes complex.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 7, 678-689 (2006).</li><li>Bray, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch+signalling+in+context.">Notch signalling in context.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 17, 722-735 (2016).</li><li>Kopan, R., Ilagan, M. X. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Canonical+Notch+Signaling+Pathway:+Unfolding+the+Activation+Mechanism.">The Canonical Notch Signaling Pathway: Unfolding the Activation Mechanism.</a> Cell. 137, 216-233 (2009).</li><li>Ishibashi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistent+expression+of+helix-loop-helix+factor+HES-1+prevents+mammalian+neural+differentiation+in+the+central+nervous+system.">Persistent expression of helix-loop-helix factor HES-1 prevents mammalian neural differentiation in the central nervous system.</a> The EMBO Journal. 13, 1799-1805 (1994).</li><li>Ohtsuka, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hes1+and+Hes5+as+notch+effectors+in+mammalian+neuronal+differentiation.">Hes1 and Hes5 as notch effectors in mammalian neuronal differentiation.</a> The EMBO Journal. 18, 2196-2207 (1999).</li><li>Ohtsuka, T., Sakamoto, M., Guillemot, F., Kageyama, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+the+Basic+Helix-Loop-Helix+Genes+Hes1+and+Hes5+in+Expansion+of+Neural+Stem+Cells+of+the+Developing+Brain.">Roles of the Basic Helix-Loop-Helix Genes Hes1 and Hes5 in Expansion of Neural Stem Cells of the Developing Brain.</a> Journal of Biological Chemistry. 276, 30467-30474 (2001).</li><li>Kageyama, R., Ohtsuka, T., Kobayashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Hes+gene+family:+repressors+and+oscillators+that+orchestrate+embryogenesis.">The Hes gene family: repressors and oscillators that orchestrate embryogenesis.</a> Development. 134, 1243-1251 (2007).</li><li>Shimojo, H., Ohtsuka, T., Kageyama, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillations+in+Notch+Signaling+Regulate+Maintenance+of+Neural+Progenitors.">Oscillations in Notch Signaling Regulate Maintenance of Neural Progenitors.</a> Neuron. 58, 52-64 (2008).</li><li>Imayoshi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+control+of+factors+determining+multipotency+and+fate+in+mouse+neural+progenitors.">Oscillatory control of factors determining multipotency and fate in mouse neural progenitors.</a> Science. 342, 1203-1208 (2013).</li><li>Shimojo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+control+of+Delta-like1+in+cell+interactions+regulates+dynamic+gene+expression+and+tissue+morphogenesis.">Oscillatory control of Delta-like1 in cell interactions regulates dynamic gene expression and tissue morphogenesis.</a> Genes and Development. 30, 102-116 (2016).</li><li>Hirata, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+expression+of+the+bHLH+factor+Hes1+regulated+by+a+negative+feedback+loop.">Oscillatory expression of the bHLH factor Hes1 regulated by a negative feedback loop.</a> Science. 298, 840-843 (2002).</li><li>Kageyama, R., Ohtsuka, T., Shimojo, H., Imayoshi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+Notch+signaling+in+neural+progenitor+cells+and+a+revised+view+of+lateral+inhibition.">Dynamic Notch signaling in neural progenitor cells and a revised view of lateral inhibition.</a> Nature Neuroscience. 11, 1247-1251 (2008).</li><li>Masamizu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+imaging+of+the+somite+segmentation+clock:+revelation+of+unstable+oscillators+in+the+individual+presomitic+mesoderm+cells.">Real-time imaging of the somite segmentation clock: revelation of unstable oscillators in the individual presomitic mesoderm cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103, 1313-1318 (2006).</li><li>Levine, J. H., Lin, Y., Elowitz, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+roles+of+pulsing+in+genetic+circuits.">Functional roles of pulsing in genetic circuits.</a> Science. 342, 1193-1200 (2013).</li><li>Purvis, J. E., Lahav, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Encoding+and+decoding+cellular+information+through+signaling+dynamics.">Encoding and decoding cellular information through signaling dynamics.</a> Cell. 152, 945-956 (2013).</li><li>Luker, G. D., Pica, C. M., Song, J., Luker, K. E., Piwnica-Worms, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+26S+proteasome+activity+and+inhibition+in+living+mice.">Imaging 26S proteasome activity and inhibition in living mice.</a> Nature Medicine. 9, 969-973 (2003).</li><li>Yamaguchi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synchronization+of+Cellular+Clocks+in+the+Suprachiasmatic+Nucleus.">Synchronization of Cellular Clocks in the Suprachiasmatic Nucleus.</a> Science. 302, 1408-1412 (2003).</li><li>Kiyohara, Y. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+BMAL1+C+terminus+regulates+the+circadian+transcription+feedback+loop.">The BMAL1 C terminus regulates the circadian transcription feedback loop.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103, 10074-10079 (2006).</li><li>Behar, M., Hoffmann, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+temporal+codes+of+intra-cellular+signals.">Understanding the temporal codes of intra-cellular signals.</a> Current Opinion in Genetics and Development. 20, 684-693 (2010).</li><li>Elowitz, M. B., Levine, A. J., Siggia, E. D., Swain, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stochastic+Gene+Expression+in+a+Single+Cell.">Stochastic Gene Expression in a Single Cell.</a> Science. 297, 1183-1186 (2002).</li><li>Nelson, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillations+in+NF-kappaB+signaling+control+the+dynamics+of+gene+expression.">Oscillations in NF-kappaB signaling control the dynamics of gene expression.</a> Science. 306, 704-708 (2004).</li><li>Purvis, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p53+dynamics+control+cell+fate.">p53 dynamics control cell fate.</a> Science. 336, 1440-1444 (2012).</li><li>Hansen, A. S., O'Shea, E. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promoter+decoding+of+transcription+factor+dynamics+involves+a+trade-off+between+noise+and+control+of+gene+expression.">Promoter decoding of transcription factor dynamics involves a trade-off between noise and control of gene expression.</a> Molecular Systems Biology. 9, 704 (2014).</li><li>Hansen, A. S., O'Shea, E. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cis+Determinants+of+Promoter+Threshold+and+Activation+Timescale.">cis Determinants of Promoter Threshold and Activation Timescale.</a> Cell Reports. 12, 1226-1233 (2015).</li><li>Johnson, H. E., Toettcher, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+Dynamics+Control+Cell+Fate+in+the+Early+Drosophila+Embryo.">Signaling Dynamics Control Cell Fate in the Early Drosophila Embryo.</a> Developmental Cell. 48, 361-370 (2019).</li><li>Badr, C. E., Tannous, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioluminescence+imaging:+Progress+and+applications.">Bioluminescence imaging: Progress and applications.</a> Trends in Biotechnology. 29, 624-633 (2011).</li><li>Nakajima, Y., Ohmiya, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioluminescence+assays:+multicolor+luciferase+assay,+secreted+luciferase+assay+and+imaging+luciferase+assay.">Bioluminescence assays: multicolor luciferase assay, secreted luciferase assay and imaging luciferase assay.</a> Expert Opinion on Drug Discovery. 5, 835-849 (2010).</li><li>Nakajima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+beetle+luciferase+for+high-resolution+bioluminescence+imaging.">Enhanced beetle luciferase for high-resolution bioluminescence imaging.</a> PLoS One. 5, (2010).</li><li>Stacer, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NanoLuc+reporter+for+dual+luciferase+imaging+in+living+animals.">NanoLuc reporter for dual luciferase imaging in living animals.</a> Molecular Imaging. 12, (2013).</li></ol>

مكونات الإشارات الشق تظهر التعبيرات المتذبذبة في التزامن اثناء التوالد ولكن من التزامن اثناء التكوين العصبي ، مما يؤدي إلى صعوبات في التقاط ديناميات التعبير عن طريق تحليل ثابت في الحالة الاخيره. التالي ، مطلوب رصد في الوقت الحقيقي للكشف عن ديناميات التعبير من مكونات الإشارات الشق ، مثل <e...

ويتكون الدماغ الثدييات من عدد كبير من أنواع مختلفه من الخلايا العصبية والكريات الدليج. يتم إنشاء جميع الخلايا من الجذعية العصبية/الخلايا progenitor (npcs) ، والتي تتكاثر أولا لتوسيع اعدادهم ، ثم البدء في التفريق في الخلايا العصبية ، وأخيرا التي تؤدي إلى زنزانات الدبقيه1،2،3،4،5. مره واحده وقد تميزت الخلايا في الخلية العصبية ، فانها لا يمكن ان تتكاثر أو زيادة اعدادهم ، التالي ، وصيانة NPCs حتى مراحل لاحقه أمر مهم. الشق يشير عن طريق التفاعلات خليه خليه يلعب دورا هاما في الحفاظ علي npcs6،7. الشق يغاندس تتفاعل مع البروتين الغشاء ، الشق ، علي سطح الخلايا المجاورة وينشط البروتين الشق. بعد التنشيط ، يحدث التحلل البروتيني من البروتين الشق ، التالي الإفراج عن المجال داخل الخلايا من الشق (nicd) من غشاء الخلية في نواه8،9،10. في النواة ، يرتبط NICD بالمناطق المروجة لHes1 و Hes5 (Hes1/5) وينشط التعبير عن هذه الجينات. Hes1/5 قمع التعبير عن الجينات proneural Ascl1 و Neurogenin1/2 (Neurog1/2)11,12,13,14. لان الجينات proneural تحفز التمايز العصبية ، Hes1/5 تلعب أدوارا أساسيه في الحفاظ علي أجهزه الكمبيوتر الشخصية. وعلاوة علي ذلك ، كما الجينات proneural يمكن تفعيل التعبير من الشق ودلتا-like1 (Dll1) ، Hes1/5 أيضا قمع التعبير عن Dll1. ولذلك ، فان التعبير عن Dll1 يؤدي إلى الخلايا المجاورة السلبية ل Dll1 عن طريق اشاره الشق. وبهذه الطريقة ، تمنع الخلايا الخلايا المجاورة من اتباع مصيرها نفسه ، وهي ظاهره تعرف باسم التثبيط الجانبي8. في الدماغ النامية ، وتثبيط الجانبي يلعب دورا في توليد مختلف أنواع الخلايا المختلفة.
التصوير في الوقت الحقيقي علي مستوي خليه واحده يكشف عن تعبيرات ديناميكية من مكونات الإشارات الشق في npcs15،16،17. الشق يشير ينشط التعبير عن Hes1، ولكن Hes1 البروتين يربط إلى المروج الخاصة به ويقمع التعبير الخاصة به. وعلاوة علي ذلك ، Hes1 هو بروتين غير مستقر للغاية ، والتي يتم المتدهورة من قبل المسار اوبيكويتين-بروتياسومي ؛ ولذلك ، فان قمع المروج الخاصة به قصيرة فقط عاش ومن ثم يبدا النسخ مره أخرى. بهذه الطريقة ، والتعبير عن Hes1 يتذبذب في كل من النسخ والمستويات الانتقالية في دوره 2 ح18. ويؤدي التعبير المتذبذب لHes1 ، بدوره ، إلى التعبير المتذبذب عن الجينات المستهدفة المصب ، مثل الAscl1والNeurog2 والDll1 ، عن طريق القمع الدوري15و16و17و19. بينما الجينات proneural يمكن ان تحفز التمايز العصبية, التعبير الذبذبات غير كافيه لتمايز الخلايا العصبية; بدلا من ذلك التعبير المستدام ضروري لتمايز الخلايا العصبية. التعبير المتذبذب من الجينات proneural مهم للحفاظ علي npcs بدلا من حفز التمايز العصبية14,15,16. التعبير عن Dll1 يتذبذب في كل من النسخ والمستويات الانتقالية خلال التكوينات المختلفة ، مثل تكوين الأعصاب والسمية. التعبير الديناميكي لل Dll1 هو المهم لتكوين المستنقعات العادية والتعبير الثابت من Dll1 يدفع العيوب في التكوين العصبي والتمدد17. وتبين هذه النتائج الوظيفة الهامه التي تقوم بها ديناميات التعبير الجيني وحركيه البروتين علي تنظيم مختلف الاحداث التنموية (اي ان ديناميات التعبير المختلفة تنتج مخرجات مختلفه في السلوكيات الخلوية).
لتحليل ديناميات الإشارات الشق ، وتحليل ثابت من الانسجه والخلايا غير كافيه لأنها تتغير باستمرار. التصوير في الوقت الحقيقي من خلايا واحده هو أداه قويه للكشف عن ديناميات في التعبير الجيني. التعبير الديناميكي لجزيئات اشاره الشق الخضوع لاستجابات دوريه سريعة في الفترة من 2-3 h. ويمثل هذا التعبير الدوري السريع مشكلتين صعبتين للرصد في الوقت الحقيقي: (1) يتم قمع التعبير عن الجزيئات إلى مستويات منخفضه ، و (2) دوران السريع يتطلب مراسلين سريع الاستجابة. للتغلب علي هذه المشاكل ، قمنا مسبقا بتطوير طريقه التصوير في الوقت الحقيقي التلالؤ20. لان الصحفي الحيوي لديه حساسية اعلي ووقت النضج أقصر من الصحفيين الفلورسنت ، وهذه الاستراتيجية تمكننا من مراقبه الديناميكيات السريعة في الخلايا الحية. باستخدام التصور في الوقت الحقيقي ، وجدنا ان المزيد من الجينات أظهرت تعبيرا ديناميكيا مما كنا نظن سابقا. الاضافه إلى ذلك ، ازداد عدد التقارير التي تبين ديناميات التعبير والبروتين في الخلايا الحية واهميه هذه الديناميات في مختلف الاحداث البيولوجية ، مما يوحي بدور أساسي لديناميات تعابير الجينات21و22.
في هذا التقرير ، ونحن وصف طريقه لتصور التعبير عن الشق يجند Dll1 في npcs في كل من الثقافات المنفصلة وفي الثقافات شريحة القشرية. لمراقبه ديناميات Dll1 النسخ علي مستويات خليه واحده ، ونحن ولدت الثقافات المنفصلة من npcs المستمدة من الدماغ الجنيني من الفئران المعدلة وراثيا التي تحمل مراسل PDll1-Ub-fluc ، وهو Dll1 المروج الذي يحركها المؤيد الذي زعزعه استقراره. لمراقبه ديناميات البروتين Dll1 في الجسم الحيوي ، قدمنا Dll1 مراسل الانصهار في NPCs في القشرة وتصور التعبير عن مراسل في NPCs في الثقافات شريحة القشرية. التصوير في الوقت الحقيقي مكننا من التقاط الخصائص المختلفة للتعبير الجيني وديناميكيات البروتين في الخلايا الحية في الدقة الزمنيه العالية.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bioluminescence Imaging System</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chilled water circulator (chiller)</td>
			<td>Julabo</td>
			<td>Model: F12-ED</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cooled CCD camera</td>
			<td>Andor Technology</td>
			<td>Model: iKon-M 934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator system</td>
			<td>TOKAI HIT</td>
			<td>Model: INU-ONICS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>Model: IX81</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>Model: IX83</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED illumination device</td>
			<td>CoolLED</td>
			<td>Model: pE1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MetaMorph</td>
			<td>MOLECULAR DEVICES</td>
			<td>Model: 40000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mix gas controller</td>
			<td>Tokken</td>
			<td>Model: TK-MIGM OLO2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective lens</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>Model: UPLFLN 40X O</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Preparations for Dissection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Model: SMZ-2B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence stereoscopic microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Model: MZ16FA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps</td>
			<td>DUMONT</td>
			<td>INOX No.5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors, Micro scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ring-shaped forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10-cm plastic petri dish</td>
			<td>greiner</td>
			<td>664160-013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35-mm plastic petri dish</td>
			<td>greiner</td>
			<td>627160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>14249-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>11039-021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents for NPC dissociation culture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 supplement</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>12587-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bFGF</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>13256-029</td>
			<td>Stock solution: 1 &#956;g/ml in 0.1% BSA/PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-luciferin</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>01493-85</td>
			<td>Stock solution: 100mM in 0.9% saline</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase</td>
			<td>Worthington Biochemical Corporation</td>
			<td>LK003172</td>
			<td>Stock solution: 1000U/ml in EBSS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EBSS</td>
			<td>Worthington Biochemical Corporation</td>
			<td>LK003188</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottom dish</td>
			<td>IWAKI</td>
			<td>3910-035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 supplement (100x)</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>17502-048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-acetyl-cystein</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A-9165-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Papain</td>
			<td>Worthington Biochemical Corporation</td>
			<td>LK003178</td>
			<td>Stock solution: 7U/ml in EBSS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptmycine</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>09367-34</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-lysine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P-6281</td>
			<td>40 mg/ml in DW</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Preparations for in utero electroporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50-ml syringe</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>181228T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode</td>
			<td>Neppagene</td>
			<td>7-mm</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electroporator</td>
			<td>Neppagene</td>
			<td>CUY21 EDIT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauzes</td>
			<td>Kawamoto co.</td>
			<td>7161</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro capillary</td>
			<td>Made in-house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>14249-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentbarbital</td>
			<td>Kyoritsuseiyaku</td>
			<td>Somnopentyl</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ring-shaped forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors, Micro scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture needle</td>
			<td>Akiyama MEDICAL MFG. CO</td>
			<td>F17-40B2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>Seractal</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Preparations for Slice culture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10-cm plastic petri dish</td>
			<td>greiner</td>
			<td>664160-013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35-mm plastic petri dish</td>
			<td>greiner</td>
			<td>627160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture insert</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>PICM01250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>11039-021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>172012-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps</td>
			<td>DUMONT</td>
			<td>INOX No.5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>16050-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro surgical knife</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>19 Gauge V-Lance</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-gas incubator</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>MCO-5MUV-PJ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2/B27 media</td>
			<td>Made in-house</td>
			<td></td>
			<td>ref. NPC dissociatioin culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>14249-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ring-shaped forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors, Micro scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon rubber cutting board</td>
			<td>Made in-house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time bioluminescence imaging of notch signaling dynamics during murine neurogenesis

الشق الإشارات ينظم صيانة الخلايا الجذعية العصبية/السلف بواسطة التفاعلات خليه الخلية. مكونات اشاره الشق تظهر تعبير ديناميكي. يتم التعبير عن الشق اشاره Hes1 والشق يجند like1 (Dll1) بطريقه التذبذب في الخلايا الجذعية العصبية/progenitor. لان الفترة من التعبير يتذبذب من هذا مورثات جدا قصيرة (2 [ه]), هو يصعب ان يراقب هم دوريه تعبير. لفحص هذه التغيرات السريعة في التعبير الجيني أو ديناميات البروتين ، مطلوب مراسلي الاستجابة السريعة. وبسبب حركيه النضوج السريع والحساسية العالية ، فان المراسل لوسيفيرياز البيولوجي هو المناسب لرصد التغيرات السريعة في التعبير الجيني في الخلايا الحية. استخدمنا مراسلا لمراقبه النشاط المروج والمراسل المنصهر لإظهار ديناميكية البروتين عند دقه الخلية الواحدة. يظهر هذا مراسلات [بيوميننس] دوران سريعة ويلد إشارات ضعيفه جدا; لذلك ، قمنا بتطوير نظام التصوير الضوئي الحساس للغاية للكشف عن مثل هذه الإشارات الخافتة. هذه الطرق تمكننا من رصد مختلف ديناميات التعبير الجيني في الخلايا الحية والانسجه ، والتي هي معلومات هامه للمساعدة في فهم الدول الخلوية الفعلية.

تعبيرات من المورثات Hes1/7 معرض 2 h ذبذبه دوره في مختلفه خليه خطوط واثناء [سويتتيتولد]. وعلاوة علي ذلك ، فان فتره التذبذب قصيرة جدا وكلاهما mRNAs والبروتينات غير مستقره للغاية مع نصف حياه حوالي 20 دقيقه. إذا كنت تستخدم مراسل استجابه بطيئه ، لا يمكننا تتبع مثل هذه الديناميكيات السريعة ، وإذا كا...

Watch this Scientific Journal Video about Real-time Bioluminescence Imaging of Notch Signaling Dynamics during Murine Neurogenesis at JoVE.com

Real-time Bioluminescence Imaging of Notch Signaling Dynamics during Murine Neurogenesis

الجذعية العصبية/الخلايا progenitor يحمل ديناميات التعبير المختلفة من الشق يشير المكونات التي تؤدي إلى نتائج مختلفه من الاحداث الخلوية. ويمكن الكشف عن مثل هذا التعبير الديناميكي عن طريق الرصد في الوقت الحقيقي ، وليس عن طريق التحليل الساكن ، وذلك باستخدام نظام تصويري حساس للغاية للتصوير الضوئي يمكن من تصور التغيرات السريعة في تعابير الجينات.

في الوقت الحقيقي التصوير الضوئي التلالؤ من الدرجة ديناميات الإشارات اثناء التكوين العصبي Murine

Notch signaling regulates the maintenance of neural stem/progenitor cells by cell-cell interactions. The components of Notch signaling exhibit dynamic ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية حول أهمية ديناميات التعبير الجيني في انتشار الخلايا والتمايز ، ولا سيما ديناميات جزيئات إشارات الناوتش في الخلايا الجذعية العصبية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه يمكننا مراقبة التعبير الجيني في المختبر وفي الجسم الحي بدقة عالية جدًا عن طريق التصوير المباشر. ومن خلال هذا الإجراء، سيكون هيرومي شيموجو، الأستاذ المساعد من مختبري الذي طور هذه التقنية الجديدة.لDd1 F لوسيفيراز تقديم مراسل في المجلس الوطني للصحافة، تأكيد عدم وجود استجابة لدواسة منعكس في يوم الجنين 12.5 إلى 14.5 فأرة حامل قبل إجراء شق من 2 إلى 3 سنتيمترات من خلال البطن، على طول خط الوسط. ضع شاشًا مبللًا PBS حول الشق ، واستخدم ملقطًا على شكل حلقة لاستخراج قرن الرحم الأيمن بعناية. بعد عد الأجنة، واستخدام شعري صغير لحقن واحد إلى اثنين microliters من الحمض النووي مراسل Dll1 F luciferase مختلطة في البطين من تيلنسيفلون من كل جنين.الحقنة الناجحة سوف تؤدي إلى مراعاة الصبغة الزرقاء على سطح الرحم. للكهربة، الرطب الرحم والأقطاب الكهربائية مع برنامج تلفزيوني، وبسبل بلطف رأس الجنين الأول. تعيين القطب مشحونة إيجابيا إلى جانب نصف الكرة الأرضية الذي تم حقن الحمض النووي، وتوفير خمس نبضات 30-50 فولت، 50 مللي ثانية، مع وقفة ثانية واحدة بين البقول، والتحقق من أن يتم توليد فقاعات من القطب المشحون سلبا.عندما تم حقن جميع الأجنة ، وإعادة القرن الرحم الأيسر إلى البطن ، واستخدام إبرة 17 ملليمتر لإغلاق الشق مع خياطة الحرير 4-0 ، ووضع PBS دافئ في تجويف البطن قبل الانتهاء من الإغلاق. لإقامة ثقافة المجلس الوطني لنواب الشعب الصيني المنفصلة، ضع أولا الرحم من يوم جنيني 12.5 إلى 14.5 حامل Dll1 في كل مكان لوسيفيراز الماوس المعدل وراثيا في طبق بيتري 10 سنتيمترات يحتوي على 25 ملليلتر من الجليد البارد برنامج تلفزيوني، واستخدام مقص صغير والملقط غرامة لإزالة الأجنة من الرحم. بعد قطع رؤوس الأجنة، ضع الرؤوس في طبق بيتري جديد طوله 10 سنتيمترات يحتوي على DMEM/F12 بارد الجليد، وأزل البشرة والغضاريف المحيطة بكل دماغ.نقل العقول إلى طبق 35 ملليمتر تحت مجهر تشريح يحتوي على ثلاثة ملليلترات من الجليد الباردة N2B27 المتوسطة. إزالة تيلينسيفال الأيمن والأيسر من diencephalon. استخدام ملقط غرامة لإزالة السحايا التي تغطي سطح التيلنسفالون وتشريح الجزء الظهري من القشرة من التيبنسفالون.عندما تم عزل جميع الأنسجة العصبية ذات الاهتمام ، استخدم ماصة P1000 لنقل العينات إلى أنابيب فردية 1.5 ملليلتر ، واستخدام ماصة P200 لpirate أي وسيط إضافي من كل أنبوب. إضافة 100 ميكرولترات من محلول باباين في زوج القشرة، ووضع العينات في 24 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. في نهاية الحضانة، ماص بلطف العينات 10 مرات مع ماصة P1000 جديدة، والعودة الأنابيب إلى 24 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة إضافية.في نهاية الحضانة ، الماصات بلطف العينات مرة أخرى قبل جمع الأنسجة المهضمة عن طريق الطرد المركزي. استلهموا من المُتطَعِدين، و اِعيدَ اِنْتِفِق كلّ بيليه برفق مع مليلتر واحد من متوسطة DMEM/F12. الطرد المركزي العينات ثلاث مرات أكثر كما أظهرت للتو، بلطف إعادة تعليق كل بيليه مع ملليلتر جديدة من المتوسط بعد كل طرد مركزي.بعد الطرد المركزي الأخير، resuspend الكريات في 500 ميكرولتررس من N2B27 المتوسطة تكملها لوسيفرين واحد مليمولار، والبذور مرة واحدة 10 إلى الخلايا الست من كل عينة على الفردية بولي-L-lysine المغلفة الأطباق القاع الزجاجي. ثم ضع اللوحات في حاضنة ثقافة الخلية لمدة ساعة واحدة. مرة واحدة وقد التزمت الخلايا إلى الطبق، إضافة ملليلتر اثنين من N2B27 المتوسطة الطازجة بالإضافة إلى لوسيفرين واحد ملليمتر إلى كل لوحة.لتصور التعبير عن مراسل luciferase في الثقافات تفكك المجلس الوطني للصحافة، حدد هدف الغمر النفط، ووضع طبق عينة على مرحلة المجهر. عرض الحقل يدوياً لتحديد الموضع الأفضل لعرض الخلايا، والتركيز على الخلايا التي تهمك. انقر فوق Live للحصول على صورة الاختبار، واستخدم برنامج الاكتساب متعدد الأبعاد لتشغيل عملية الاستحواذ على الفاصل الزمني بواسطة الإنارة ثنائية الأبعاد والاستحواذات في المجال الساطع لمدة 24 ساعة.لإعداد الثقافات شريحة القشرة النامية، بعد يوم واحد من حقن المراسل، حصاد اليوم الجنيني 13.5 إلى 14.5 أدمغة الجنين كما هو موضح، ووضع الطبق الذي يحتوي على العقول على خشبة مسرح المجهر المتناظر الفلوري. تأكد من أن كل قشرة تعبر عن المراسل الفلورسنت المحقون تحت ضوء الإثارة المناسب ، ونقل الأدمغة إلى لوحة قطع مطاطية سيليكون مليئة بـ 30 ملليلتر من DMEM /F12 المتوسطة ، مع غاز الأكسجين بنسبة 100٪. استخدام سكين الجراحية الدقيقة والملقط غرامة لقطع الحدود بين الجزء الوسطي والجزء الجانبي من التيلسيفال الظهرية، وفصل الأنسجة إلى نصفين.ثم، استخدم السكين لقطع القشرة مثل المشارب للحصول على شرائح القشرية، ونقل الشرائح في المتوسط من لوحة القطع إلى طبق بيتري جديد من عيار 35 ملليمتراً عند الحصول عليها. عندما تم جمع جميع الشرائح، ضع سطح القطع لكل شريحة على إدراج الثقافة مجموعة في طبق القاع الزجاجي التي تحتوي على المتوسطة المخصبة، وضبط اتجاه كل شريحة مع ملقط غرامة حسب الضرورة. ثم، إزالة أي متوسطة زائدة مع ماصة، ووضع الطبق في حاضنة متعددة الغاز تعيين إلى 40٪ الأكسجين، 5٪ ثاني أكسيد الكربون، و 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.في نهاية الحضانة، إضافة 300 ميكرولترات من المتوسطة المخصب تستكمل مع لوسيفرين واحد مليمولار إلى طبق الثقافة. لتصور تعبير المراسل luciferase داخل الثقافات شريحة، حدد الهدف 40x، ووضع طبق العينة على مرحلة المجهر. الحصول على صورة اختبار من الفلوريسنس، وتعيين الموقف والتركيز على مستوى المنطقة ذات الاهتمام تحت إضاءة ضوء الإثارة المناسبة.ثم، تشغيل عملية الاستحواذ على الفاصل الزمني من خلال الإنارة ثلاثية الأبعاد، الفلوريسنس، والاستحواذات في المجال الساطع لمدة 24 ساعة. لرصد نشاط المروج من تذبذب الجينات Dll1، يمكن استخدام لوسيفيراز في كل مكان، وهو مراسل لوسيفيراز زعزعة الاستقرار مع نصف عمر حوالي 10 دقيقة. مثل مراسل الفلورسنت، يمكن استخدام مراسل luciferase لمراقبة ديناميات التعبير من البروتين من خلال دمجها في تسلسل الترميز الجيني من الفائدة.لتصور التعبير مراسل على مستوى خلية واحدة في الثقافات الأنسجة، يمكن أن يكون جين مراسل عابرة عابرة في الشخصيات عبر في الكهربائي الرحم كما هو موضح. وبالإضافة إلى ذلك، تمكن الصور المستندة إلى المجهر من الحصول على صور المجال المشرق، والفلور، و chemiluminescence. مراسل Dll1 المروج النشاط معارض تعبير متذبذب في NPCs المستمدة من telencephalon من Dll1 في كل مكان F لوسيفيراز مراسل الفئران، مع مراسل لوسيفيراز زعزعة الاستقرار مما يشير إلى تنظيم حاد صعودا وهبوطا للتعبير عن نشاط المروج.في الخلايا الخضراء المعززة المعززة للبروتين الإيجابي تحمل مراسل Hes1 وخلايا MCherry الإيجابية التي تعبر عن مراسل بروتين Dll1 الذي أجرى اتصالًا مع بعضها البعض أثناء الملاحظة ، يبدو أن تعبير مراسل Hes1 يبدأ بعد حوالي 60 دقيقة بعد الاتصال ، مما يشير إلى أن التأخير الزمني لإرسال إشارات Notch بين الخلايا المجاورة حوالي ساعة واحدة. وعلاوة على ذلك، أثناء انتقال الإشارة، يسلك تعبير بروتين Dll1 نقلًا ديناميكيًا. عند الحصول على التصوير بالإضاءة الحيوية، والحفاظ على غرفة المجهر مظلمة تماما، كما يمكن للضوء الدخيل منع الحصول على الأمثل.التطورات الأخيرة في علم الوراثة البصرية يسمح لنا للسيطرة على التعبير الجيني مع الضوء. مع هذه التقنية، يمكننا أن نقدم في وقت واحد نمط مختلف من التعبير الجيني ورصد ردود المراسل luciferase.

Education

Research

JoVE Core

JoVE Journal

Cell Biology

Molecular Biology

Developmental Biology

Unit 2

Unit 1

Cell Signaling Pathways

Alternative Signaling Routes in Gene Expression

SCIENTISTS IN ACTION

Studying Wnt Signaling During Patterning of Conducting Airways

دراسة إشارات Wnt خلال الزخرفة من إجراء الخطوط الجوية

Wnt signaling pathways play critical roles during development of the respiratory tract. Defining precise mechanisms of differentiation and morphogenesis ...

Kinetic Measurement and Real Time Visualization of Somatic Reprogramming

الحركية قياس وفي الوقت الحقيقي التصور من إعادة برمجة الجسدية

Somatic reprogramming has enabled the conversion of adult cells to induced pluripotent stem cells (iPSC) from diverse genetic backgrounds and disease ...

Stimulation of Notch Signaling in Mouse Osteoclast Precursors

تحفيز اشارة الشق في ماوس تآكل العظام Osteoclast السلائف

Notch signaling is a key component of multiple physiological and pathological processes. The nature of Notch signaling, however, makes in vitro ...

Multi-Photon Time Lapse Imaging to Visualize Development in Real-time: Visualization of Migrating Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

تصوير مرور الوقت فوتون متعددة لتصور التنمية في الوقت الحقيقي: التصور لترحيل الخلايا العصبية كريست في الأجنة الزرد

Congenital eye and craniofacial anomalies reflect disruptions in the neural crest, a transient population of migratory stem cells that give rise to ...

Real-time Measurement of Epithelial Barrier Permeability in Human Intestinal Organoids

قياس النفاذية الحاجز الظهارية في أورجانويدس المعوية البشرية في الوقت الحقيقي

Advances in 3D culture of intestinal tissues obtained through biopsy or generated from pluripotent stem cells via directed differentiation, have resulted ...

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

في فيفو تصوير Morphogenesis وتر العضلات في المورفولوجية الخوادر

Muscles together with tendons and the skeleton enable animals including humans to move their body parts. Muscle morphogenesis is highly conserved from ...

Live Cell Imaging of Chromosome Segregation During Mitosis

تصوير الخلايا الحية لفصل الكروموسومات أثناء الانقسام

Chromosomes must be reliably and uniformly segregated into daughter cells during mitotic cell division. Fidelity of chromosomal segregation is controlled ...

Neurogenesis Using P19 Embryonal Carcinoma Cells

تكوين الأعصاب باستخدام خلايا سرطان الجنين P19

The P19 cell line derived from a mouse embryo-derived teratocarcinoma has the ability to differentiate into the three germ layers. In the presence of ...

Imaging and Analysis of Tissue Orientation and Growth Dynamics in the Developing Drosophila Epithelia During Pupal Stages

Imaging and Analysis of Tissue Orientation and Growth Dynamics in the Developing Drosophila Epithelia During Pupal Stages

التصوير والتحليل لاتجاهات الأنسجة وديناميات النمو في الظهارة الهوائية النامية Drosophila خلال مراحل البوبال

Within multicellular organisms, mature tissues and organs display high degrees of order in the spatial arrangements of their constituent cells. A ...

Real-Time Imaging of CCL5-Induced Migration of Periosteal Skeletal Stem Cells in Mice

التصوير في الوقت الحقيقي من الهجرة الناجمة عن CCL5 من الخلايا الجذعية الهيكل العظمي البيريوستال في الفئران

Periosteal skeletal stem cells (P-SSCs) are essential for lifelong bone maintenance and repair, making them an ideal focus for the development of ...