Name: real-time bioluminescence imaging of notch signaling dynamics during murine neurogenesis
Uploaded: 2019-12-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time Bioluminescence Imaging of Notch Signaling Dynamics during Murine Neurogenesis at JoVE.com

אנו מודים ליומיקו איוומוטו על התמיכה בייצור וידאו. אנו גם אסירי תודה לאקיהירו איזוטורה לדיון ולתמיכה בניתוח תמונה, היטושי מייניה לתמיכה טכנית עבור דור של בעלי חיים טרנסגניים, Yuji Shinjo (האולימפוס מדע הרפואה), Masatoshi אגאווה (האולימפוס מדע הרפואה), Takuya אישיזו ( האולימפוס מדע הרפואה) ו Ouin Kunitaki (Andor יפן) עבור תמיכה טכנית ודיונים של מערכת הדמיה biלומינסנציה. עבודה זו נתמכת על-ידי מחקר הליבה של המדע האבולוציונית והטכנולוגיה (JPMJCR12W2) (ק), גרנט-עזרה עבור מחקר מדעי על אזורים חדשניים (MEXT 24116705 עבור H.S. ו MEXT 16H06480 עבור ק), גרנט ב-עזרה עבור מחקר מדעי (C) (JSPS 18K06254) (H.S.), קרן טקדה (ק וH.S.), ופלטפורמה לגישות דינמיות למערכת החיים ממשרד החינוך, התרבות, הספורט, המדע והטכנולוגיה, יפן.

כל ההליכים, כולל נושאי בעלי חיים, אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול בבעלי חיים במכון למדעי החיים ומדעי הרפואה, אוניברסיטת קיוטו.
1. כתבים ביולומינסנציה
הערה: הכתב הלוציפראז מתאים למדידת הדינמיקה המהירה של פעילות היזם על ידי החדרת אות השפלה. יתר על כן, כתב היתוך...

<ol>
	<li>Ross, S. E., Greenberg, M. E., Stiles, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+helix-loop-helix+factors+in+cortical+development.">Basic helix-loop-helix factors in cortical development.</a> Neuron. 39, 13-25 (2003).</li><li>Pontious, A., Kowalczyk, T., Englund, C., Hevner, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+intermediate+progenitor+cells+in+cerebral+cortex+development.">Role of intermediate progenitor cells in cerebral cortex development.</a> Developmental Neuroscience. 30, 24-32 (2007).</li><li>Kriegstein, A., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+glial+nature+of+embryonic+and+adult+neural+stem+cells.">The glial nature of embryonic and adult neural stem cells.</a> Annual Review of Neuroscience. 32, 149-184 (2009).</li><li>Paridaen, J. T., Huttner, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenesis+during+development+of+the+vertebrate+central+nervous+system.">Neurogenesis during development of the vertebrate central nervous system.</a> EMBO Reports. 15, 351-364 (2014).</li><li>Taverna, E., G&#246;tz, M., Huttner, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cell+biology+of+neurogenesis:+toward+an+understanding+of+the+development+and+evolution+of+the+neocortex.">The cell biology of neurogenesis: toward an understanding of the development and evolution of the neocortex.</a> Annual Review of Cell and Developmental Biology. 30, 465-502 (2014).</li><li>Louvi, A., Artavanis-Tsakonas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch+signaling+in+vertebrate+neural+development.">Notch signaling in vertebrate neural development.</a> Nature Reviews Neuroscience. 7, 93-102 (2006).</li><li>Pierfelice, T., Alberi, L., Gaiano, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch+in+the+Vertebrate+Nervous+System:+An+Old+Dog+with+New+Tricks.">Notch in the Vertebrate Nervous System: An Old Dog with New Tricks.</a> Neuron. 69, 840-855 (2011).</li><li>Bray, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch+signalling:+a+simple+pathway+becomes+complex.">Notch signalling: a simple pathway becomes complex.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 7, 678-689 (2006).</li><li>Bray, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch+signalling+in+context.">Notch signalling in context.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 17, 722-735 (2016).</li><li>Kopan, R., Ilagan, M. X. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Canonical+Notch+Signaling+Pathway:+Unfolding+the+Activation+Mechanism.">The Canonical Notch Signaling Pathway: Unfolding the Activation Mechanism.</a> Cell. 137, 216-233 (2009).</li><li>Ishibashi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistent+expression+of+helix-loop-helix+factor+HES-1+prevents+mammalian+neural+differentiation+in+the+central+nervous+system.">Persistent expression of helix-loop-helix factor HES-1 prevents mammalian neural differentiation in the central nervous system.</a> The EMBO Journal. 13, 1799-1805 (1994).</li><li>Ohtsuka, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hes1+and+Hes5+as+notch+effectors+in+mammalian+neuronal+differentiation.">Hes1 and Hes5 as notch effectors in mammalian neuronal differentiation.</a> The EMBO Journal. 18, 2196-2207 (1999).</li><li>Ohtsuka, T., Sakamoto, M., Guillemot, F., Kageyama, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+the+Basic+Helix-Loop-Helix+Genes+Hes1+and+Hes5+in+Expansion+of+Neural+Stem+Cells+of+the+Developing+Brain.">Roles of the Basic Helix-Loop-Helix Genes Hes1 and Hes5 in Expansion of Neural Stem Cells of the Developing Brain.</a> Journal of Biological Chemistry. 276, 30467-30474 (2001).</li><li>Kageyama, R., Ohtsuka, T., Kobayashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Hes+gene+family:+repressors+and+oscillators+that+orchestrate+embryogenesis.">The Hes gene family: repressors and oscillators that orchestrate embryogenesis.</a> Development. 134, 1243-1251 (2007).</li><li>Shimojo, H., Ohtsuka, T., Kageyama, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillations+in+Notch+Signaling+Regulate+Maintenance+of+Neural+Progenitors.">Oscillations in Notch Signaling Regulate Maintenance of Neural Progenitors.</a> Neuron. 58, 52-64 (2008).</li><li>Imayoshi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+control+of+factors+determining+multipotency+and+fate+in+mouse+neural+progenitors.">Oscillatory control of factors determining multipotency and fate in mouse neural progenitors.</a> Science. 342, 1203-1208 (2013).</li><li>Shimojo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+control+of+Delta-like1+in+cell+interactions+regulates+dynamic+gene+expression+and+tissue+morphogenesis.">Oscillatory control of Delta-like1 in cell interactions regulates dynamic gene expression and tissue morphogenesis.</a> Genes and Development. 30, 102-116 (2016).</li><li>Hirata, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+expression+of+the+bHLH+factor+Hes1+regulated+by+a+negative+feedback+loop.">Oscillatory expression of the bHLH factor Hes1 regulated by a negative feedback loop.</a> Science. 298, 840-843 (2002).</li><li>Kageyama, R., Ohtsuka, T., Shimojo, H., Imayoshi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+Notch+signaling+in+neural+progenitor+cells+and+a+revised+view+of+lateral+inhibition.">Dynamic Notch signaling in neural progenitor cells and a revised view of lateral inhibition.</a> Nature Neuroscience. 11, 1247-1251 (2008).</li><li>Masamizu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+imaging+of+the+somite+segmentation+clock:+revelation+of+unstable+oscillators+in+the+individual+presomitic+mesoderm+cells.">Real-time imaging of the somite segmentation clock: revelation of unstable oscillators in the individual presomitic mesoderm cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103, 1313-1318 (2006).</li><li>Levine, J. H., Lin, Y., Elowitz, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+roles+of+pulsing+in+genetic+circuits.">Functional roles of pulsing in genetic circuits.</a> Science. 342, 1193-1200 (2013).</li><li>Purvis, J. E., Lahav, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Encoding+and+decoding+cellular+information+through+signaling+dynamics.">Encoding and decoding cellular information through signaling dynamics.</a> Cell. 152, 945-956 (2013).</li><li>Luker, G. D., Pica, C. M., Song, J., Luker, K. E., Piwnica-Worms, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+26S+proteasome+activity+and+inhibition+in+living+mice.">Imaging 26S proteasome activity and inhibition in living mice.</a> Nature Medicine. 9, 969-973 (2003).</li><li>Yamaguchi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synchronization+of+Cellular+Clocks+in+the+Suprachiasmatic+Nucleus.">Synchronization of Cellular Clocks in the Suprachiasmatic Nucleus.</a> Science. 302, 1408-1412 (2003).</li><li>Kiyohara, Y. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+BMAL1+C+terminus+regulates+the+circadian+transcription+feedback+loop.">The BMAL1 C terminus regulates the circadian transcription feedback loop.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103, 10074-10079 (2006).</li><li>Behar, M., Hoffmann, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+temporal+codes+of+intra-cellular+signals.">Understanding the temporal codes of intra-cellular signals.</a> Current Opinion in Genetics and Development. 20, 684-693 (2010).</li><li>Elowitz, M. B., Levine, A. J., Siggia, E. D., Swain, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stochastic+Gene+Expression+in+a+Single+Cell.">Stochastic Gene Expression in a Single Cell.</a> Science. 297, 1183-1186 (2002).</li><li>Nelson, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillations+in+NF-kappaB+signaling+control+the+dynamics+of+gene+expression.">Oscillations in NF-kappaB signaling control the dynamics of gene expression.</a> Science. 306, 704-708 (2004).</li><li>Purvis, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p53+dynamics+control+cell+fate.">p53 dynamics control cell fate.</a> Science. 336, 1440-1444 (2012).</li><li>Hansen, A. S., O'Shea, E. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promoter+decoding+of+transcription+factor+dynamics+involves+a+trade-off+between+noise+and+control+of+gene+expression.">Promoter decoding of transcription factor dynamics involves a trade-off between noise and control of gene expression.</a> Molecular Systems Biology. 9, 704 (2014).</li><li>Hansen, A. S., O'Shea, E. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cis+Determinants+of+Promoter+Threshold+and+Activation+Timescale.">cis Determinants of Promoter Threshold and Activation Timescale.</a> Cell Reports. 12, 1226-1233 (2015).</li><li>Johnson, H. E., Toettcher, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+Dynamics+Control+Cell+Fate+in+the+Early+Drosophila+Embryo.">Signaling Dynamics Control Cell Fate in the Early Drosophila Embryo.</a> Developmental Cell. 48, 361-370 (2019).</li><li>Badr, C. E., Tannous, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioluminescence+imaging:+Progress+and+applications.">Bioluminescence imaging: Progress and applications.</a> Trends in Biotechnology. 29, 624-633 (2011).</li><li>Nakajima, Y., Ohmiya, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioluminescence+assays:+multicolor+luciferase+assay,+secreted+luciferase+assay+and+imaging+luciferase+assay.">Bioluminescence assays: multicolor luciferase assay, secreted luciferase assay and imaging luciferase assay.</a> Expert Opinion on Drug Discovery. 5, 835-849 (2010).</li><li>Nakajima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+beetle+luciferase+for+high-resolution+bioluminescence+imaging.">Enhanced beetle luciferase for high-resolution bioluminescence imaging.</a> PLoS One. 5, (2010).</li><li>Stacer, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NanoLuc+reporter+for+dual+luciferase+imaging+in+living+animals.">NanoLuc reporter for dual luciferase imaging in living animals.</a> Molecular Imaging. 12, (2013).</li></ol>

מרכיבי האיתות החריץ מציגים ביטויים מרוטים ב-סנכרון במהלך התקופה האחרונה, אלא מתוך סנכרון במהלך נוירוגנזה, המובילה לקשיים בלכידת דינמיקת הביטוי באמצעות ניתוח סטטי במקרה האחרון. לפיכך, ניטור זמן אמת נדרש כדי לחשוף את דינמיקת הביטוי של רכיבי איתות מדרגה, כגון Hes1 ו- Dll1. מכיוון שתקופו...

המוח המיונקים מורכב ממספר רב של סוגים שונים של נוירונים ותאי גליה. כל התאים נוצרים מתאי גזע/מחולל קדמון (npcs), אשר מתרבים הראשון כדי להרחיב את המספרים שלהם, ואז להתחיל להבדיל לנוירונים, ובסופו של דבר להצמיח תאים גליה1,2,3,4,5. לאחר תאים הבדיל לנוירונים, הם לא יכולים להתרבות או להגדיל את המספרים שלהם, ולכן, התחזוקה של NPCs עד שלבים מאוחרים יותר חשוב. איתות מדרגה דרך אינטראקציות תא תא ממלא תפקיד חשוב בשמירה על npcs6,7. החריץ מתקשר עם חלבון הממברנה, חריץ, על פני השטח של תאים שכנים ומפעיל את החלבון חריץ. לאחר ההפעלה, פרוטפוליזיס של חלבון חריץ מתרחשת, ובכך משחררים את התחום התאיים של חריץ (nicd) מן קרום התא לתוך הגרעין8,9,10. בגרעין, NICD נקשר לאזורי היזם של Hes1 ו Hes5 (Hes1/5) ומפעיל את הביטוי של גנים אלה. Hes1/5 לדכא את הביטוי של הגנים הפרניים Ascl1 ו Neurogenin1/2 (Neurog1/2)11,12,13,14. מכיוון גנים proneural לגרום לבידול עצבי, Hes1/5 לשחק תפקידים חיוניים בתחזוקת npcs. יתרה מזאת, כאשר גנים מפרניים יכולים להפעיל את הביטוי של החריץ ו-Delta-like1 (Dll1), Hes1/5 גם מדחיקים את ביטויו של Dll1. לכן, הביטוי של Dll1 מוביל לתאים שכנים שליליים עבור Dll1 באמצעות איתות מדרגה. בדרך זו, תאים מעכבים תאים סמוכים לאחר אותו גורל, תופעה המכונה עיכוב לרוחב8. במוח המתפתח, הדיכוי הרוחבי ממלא תפקיד ביצירת סוגי תאים שונים.
הדמיה בזמן אמת ברמת תא בודדת מגלה ביטויים דינאמיים של רכיבי איתות מדרגה ב-npcs15,16,17. איתות מחריץ מפעיל את הביטוי של Hes1, אך Hes1 חלבון נקשר ליזם משלו ומחדש את הביטוי שלו. יתר על כן, Hes1 הוא חלבון בלתי יציב מאוד, כי הוא מושפל על ידי אוביקוויב-פרוטאסאט מסלול; לכן, הדיכוי של היזם משלה הוא רק קצר החיים ולאחר מכן התמלול מתחיל שוב. בדרך זו, הביטוי של Hes1 נדנוד בשתי רמות שעתוק וטרנסלtional במחזור 2 h18. הביטוי הנדנוד של Hes1, בתורו, מעורר את הביטוי המסובב של הגנים של המטרה במורד הזרם, כגון Ascl1, Neurog2, וDll1, דרך הדחקה מחזורית15,16,17,19. בעוד הגנים הפראוניים יכולים לגרום לבידול עצבי, הביטוי הנדנוד שלהם אינו מספיק לבידול עצבי; בעצם הביטוי המתמשכת שלהם חיוני לבידול העצבי. הביטוי נדנוד של גנים proneural חשוב לשמירה על npcs במקום לגרימת בידול עצבי14,15,16. הביטוי של Dll1 מרוטים ברמות התמלול והטרנסלאיזם במהלך שונות, כגון נוירוגנזה וסוטוגנזה. הביטוי הדינמי של Dll1 חשוב עבור מורגנזה נורמלי ביטוי קבוע של Dll1 גורם פגמים נוירוגנזה ו somitogenesis17. ממצאים אלה מדגימים את הפונקציה החשובה כי הדינמיקה של ביטוי גנים וקינטיקה חלבונים יש על הרגולציה של אירועים התפתחותיים שונים (כלומר, דינמיקה ביטוי שונה לייצר תפוקות שונות התנהגויות סלולר).
כדי לנתח את הדינמיקה של איתות מדרגה, הניתוח הסטטי של רקמות ותאים אינו מספיק מכיוון שהם משתנים ללא הרף. בזמן אמת הדמיה של תאים בודדים הוא כלי רב עוצמה כדי לחשוף את הדינמיקה ביטוי גנים. הביטוי הדינמי של מולקולות איתות מהירות עוברות תגובות מחזורית בתקופה של 2-3 h. ביטוי תקופתי מהיר זה מציג שתי בעיות קשות לניטור בזמן אמת: (1) הביטוי של המולקולות מדוכא רמות נמוכות, ו (2) מחזור מהיר דורש כתבים בתגובה מהירה. כדי להתגבר על בעיות אלה, פיתחנו בעבר ביולומינציה בזמן אמת שיטה הדמיה20. מכיוון שלעיתונאי הביולומינסנציה יש רגישות גבוהה יותר וזמן התבגרות קצר יותר מאשר כתבים פלורסצנט, אסטרטגיה זו מאפשרת לנו לעקוב אחר הדינמיקה המהירה בתאי החיים. שימוש בהדמיה בזמן אמת, גילינו כי גנים נוספים הציגו ביטוי דינמי משחשבנו בעבר. בנוסף, מספר הדיווחים המציגים ביטוי ודינמיקה חלבונים בתאי החיים והמשמעות של הדינמיקה הללו באירועים ביולוגיים שונים גדל, מציע תפקיד בסיסי של הדינמיקה ביטויים גנים21,22.
בדוח זה, אנו מתארים דרך להמחיש את הביטוי של החריץ והDll1 ב NPCs בתרבויות המונתק ובתרבויות הפרוסה הקורטיקלית. כדי לנטר את הדינמיקה של תמלול Dll1 ברמות תא בודד, יצרנו תרבויות מופקות של npcs שנגזר מהטלנצאלון העובריים של עכברים טרנסגניים הנושאים את הכתבת PDll1-רוב-fluc, הכתבת לוציפראאז מונחה-מיזם Dll1. כדי לפקח על הדינמיקה Dll1 חלבון ב vivo, הצגנו את הכתב היתוך Dll1-Fluc לתוך NPCs בקליפת המוח ודמיינו את הביטוי של הכתב NPCs בתרבויות פרוסת הקליפה. הדמיה בזמן אמת אפשרה לנו ללכוד את התכונות השונות של ביטוי גנים ודינמיקה חלבונים בתאי החיים ברזולוציה הטמפורלית הגבוהה.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bioluminescence Imaging System</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chilled water circulator (chiller)</td>
			<td>Julabo</td>
			<td>Model: F12-ED</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cooled CCD camera</td>
			<td>Andor Technology</td>
			<td>Model: iKon-M 934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator system</td>
			<td>TOKAI HIT</td>
			<td>Model: INU-ONICS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>Model: IX81</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>Model: IX83</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED illumination device</td>
			<td>CoolLED</td>
			<td>Model: pE1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MetaMorph</td>
			<td>MOLECULAR DEVICES</td>
			<td>Model: 40000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mix gas controller</td>
			<td>Tokken</td>
			<td>Model: TK-MIGM OLO2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective lens</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>Model: UPLFLN 40X O</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Preparations for Dissection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Model: SMZ-2B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence stereoscopic microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Model: MZ16FA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps</td>
			<td>DUMONT</td>
			<td>INOX No.5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors, Micro scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ring-shaped forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10-cm plastic petri dish</td>
			<td>greiner</td>
			<td>664160-013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35-mm plastic petri dish</td>
			<td>greiner</td>
			<td>627160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>14249-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>11039-021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents for NPC dissociation culture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 supplement</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>12587-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bFGF</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>13256-029</td>
			<td>Stock solution: 1 &#956;g/ml in 0.1% BSA/PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-luciferin</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>01493-85</td>
			<td>Stock solution: 100mM in 0.9% saline</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase</td>
			<td>Worthington Biochemical Corporation</td>
			<td>LK003172</td>
			<td>Stock solution: 1000U/ml in EBSS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EBSS</td>
			<td>Worthington Biochemical Corporation</td>
			<td>LK003188</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottom dish</td>
			<td>IWAKI</td>
			<td>3910-035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 supplement (100x)</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>17502-048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-acetyl-cystein</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A-9165-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Papain</td>
			<td>Worthington Biochemical Corporation</td>
			<td>LK003178</td>
			<td>Stock solution: 7U/ml in EBSS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptmycine</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>09367-34</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-lysine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P-6281</td>
			<td>40 mg/ml in DW</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Preparations for in utero electroporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50-ml syringe</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>181228T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode</td>
			<td>Neppagene</td>
			<td>7-mm</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electroporator</td>
			<td>Neppagene</td>
			<td>CUY21 EDIT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauzes</td>
			<td>Kawamoto co.</td>
			<td>7161</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro capillary</td>
			<td>Made in-house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>14249-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentbarbital</td>
			<td>Kyoritsuseiyaku</td>
			<td>Somnopentyl</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ring-shaped forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors, Micro scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture needle</td>
			<td>Akiyama MEDICAL MFG. CO</td>
			<td>F17-40B2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>Seractal</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Preparations for Slice culture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10-cm plastic petri dish</td>
			<td>greiner</td>
			<td>664160-013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35-mm plastic petri dish</td>
			<td>greiner</td>
			<td>627160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture insert</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>PICM01250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>11039-021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>172012-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps</td>
			<td>DUMONT</td>
			<td>INOX No.5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>16050-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro surgical knife</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>19 Gauge V-Lance</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-gas incubator</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>MCO-5MUV-PJ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2/B27 media</td>
			<td>Made in-house</td>
			<td></td>
			<td>ref. NPC dissociatioin culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>14249-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ring-shaped forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors, Micro scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon rubber cutting board</td>
			<td>Made in-house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time bioluminescence imaging of notch signaling dynamics during murine neurogenesis

איתות מחריץ מווסת את התחזוקה של תאי גזע/מחולל שחור עצביים על-ידי אינטראקציות תא תא. הרכיבים של הביטוי הדינאמי של מוצג איתות. החריץ מדרגה Hes1 ו-Delta-like1 (Dll1) מבוטאים באופן מרוכך בתאי גזע/מחולל מעשה עצבי. מכיוון שתקופת הביטוי הנדנוד של הגנים הללו קצרה מאוד (2 שעות), קשה לעקוב אחר הביטוי המחזורי שלהם. כדי לבחון שינויים מהירים כאלה בביטוי הגנים או בדינמיקה החלבונים, נדרשים כתבים בתגובה מהירה. בגלל ההבשלה שלה מהירה קינטיקה ורגישות גבוהה, הכתב הביולומינסנציה לוציפראז מתאים לעקוב אחר שינויים ביטוי גנים מהיר בתאי החיים. השתמשנו בכתבת לוציפראז של יציבות לניטור פעילות היזם וכתבת התמזגו לוצין להדמיה של דינמיקת חלבון ברזולוציית תא בודדת. כתבים אלה הביולומינציה להראות מחזור מהיר וליצור אותות חלשים מאוד; לכן, פיתחנו מערכת הדמיה ביולומינציה רגישה מאוד כדי לזהות אותות קלושים כאלה. שיטות אלה מאפשרות לנו לנטר הדינמיקה של ביטוי גנים שונים בתאי החיים וברקמות, שהם מידע חשוב כדי לעזור להבין את המדינות הסלולריות בפועל.

ביטויים של הגנים Hes1/7 מחזור תנודות 2 המחזור בקווי התא השונים במהלך somitogenesis. יתרה מזאת, תקופת התנודה היא קצרה מאוד והן ה-mRNAs והחלבונים שלהם מאוד לא יציבים עם מחצית החיים של כ -20 דקות. אם נעשה שימוש בכתבת תגובה איטית, לא נוכל לעקוב אחר דינמיקה מהירה כזו, ואם נשתמש בכתב יציב, הדבר מצטבר בהדרגה ...

Watch this Scientific Journal Video about Real-time Bioluminescence Imaging of Notch Signaling Dynamics during Murine Neurogenesis at JoVE.com

Real-time Bioluminescence Imaging of Notch Signaling Dynamics during Murine Neurogenesis

תאי גזע/מחולל קדמון מציגים דינמיקה של ביטויים שונים של רכיבי איתות מדרגה שמובילים לתוצאות שונות של אירועי הסלולר. ביטוי דינמי כזה יכול להתגלות על ידי ניטור בזמן אמת, לא על ידי ניתוח סטטי, באמצעות מערכת הדמיה ביולומינציה רגישה מאוד המאפשרת ויזואליזציה של שינויים מהירים בביטויי גנים.

בזמן אמת ביולומינסנציה הדמיה של מערכת איתות דינמיקה במהלך מורנין נוירוגנזה

Notch signaling regulates the maintenance of neural stem/progenitor cells by cell-cell interactions. The components of Notch signaling exhibit dynamic ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח על המשמעות של דינמיקת ביטוי גנים בהתפשטות התאים וההתבראות, במיוחד הדינמיקה של מולקולות איתות Notch בתאי גזע עצביים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שאנחנו יכולים לפקח על ביטוי גנים הן במבחנה והן ב vivo עם דיוק גבוה מאוד על ידי הדמיה חיה. הדגימה להליך תהיה הירומי שימוג'ו, עוזרת הפרופסור מהמעבדה שלי שפיתחה את הטכנולוגיה החדשה הזו.עבור Dll1 F לוציפראז כתב מבוא לתוך NPC, לאשר חוסר תגובה רפלקס הדוושה ביום עוברי 12.5 כדי 14.5 עכבר בהריון לפני ביצוע חתך של שניים עד שלושה סנטימטרים דרך הבטן, לאורך קו האמצע. מניחים גזה ספוגה PBS סביב החתך, ולהשתמש מדפים בצורת טבעת כדי לחלץ בזהירות את קרן הרחם הימנית. לאחר ספירת העוברים, השתמש במיקרו נימי כדי להזריק אחד עד שני מיקרוליטרים של דנ"א מעורב של כתב Dll1 F לוציפראז לחדר של הטלנצפלון של כל עובר.זריקה מוצלחת תגרום לשמירה על צבע כחול על פני השטח של הרחם. עבור אלקטרופורציה, להרטיב את הרחם ואת האלקטרודה עם PBS, בעדינות לתפוס את הראש של העובר הראשון. הגדר את האלקטרודה טעונה חיובית לצד של חצי הכדור שבו הוזרק ה-DNA, ולספק חמישה 30-50 וולט, 50 אלפיות שנייה פולסים, עם הפסקה של שנייה אחת בין פולסים, בודק כי בועות נוצרות מן האלקטרודה טעונה שלילית.כאשר כל העוברים הוזרקו, להחזיר את קרן הרחם השמאלית לבטן, ולהשתמש מחט 17 מילימטר כדי לסגור את החתך עם תפר משי 4-0, הצבת PBS חם לתוך חלל הבטן לפני השלמת הסגירה. כדי להקים תרבות NPC ניתוק, במקום הראשון הרחם מיום עוברי 12.5 כדי 14.5 בהריון Dll1 בכל מקום לוציפראז עכבר מהודק לתוך צלחת פטרי 10 ס"מ המכיל 25 מיליליטר של PBS קר כקרח, ולהשתמש מספריים מיקרו ומטסים עדינים כדי להסיר את העוברים מן הרחם. לאחר עריפת ראשם של העוברים, מניחים את הראשים לתוך צלחת פטרי חדשה של 10 ס"מ המכילה DMEM/F12 קר כקרח, ומסירים את האפידרמיס והסחוס המקיפים כל מוח.מעבירים את המוח לצלחת של 35 מ"מ תחת מיקרוסקופ ניתוח המכיל שלושה מיליליטר של מדיום N2B27 קר כקרח. הסר את הטלנצפלון הימני והשמאלי מ-דינצפלון. השתמש במטלות עדין כדי להסיר את קרום המוח המכסה את פני השטח של telencephalon ול לנתח את החלק הגבי של קליפת המוח מן telencephalon.כאשר כל הרקמות העצביות של עניין בודדו, להשתמש פיפטה P1000 להעביר את הדגימות לתוך צינורות בודדים 1.5 מיליליטר, ולהשתמש פיפטה P200 כדי לשאף כל מדיום נוסף מכל צינור. מוסיפים 100 מיקרוליטרים של תברוב פפאין לכל זוג קליפת המוח, ומ מניחים את הדגימות על 24 מעלות צלזיוס במשך 15 דקות. בסוף הדגירה, בעדינות pipette את הדגימות 10 פעמים עם פיפטה P1000 חדש, ולהחזיר את הצינורות ל 24 מעלות צלזיוס במשך 15 דקות נוספות.בסוף הדגירה, בעדינות pipette את הדגימות שוב לפני איסוף הרקמות מתעכל על ידי צנטריפוגה. שאף את העל-טבעיים, והתן בעדינות כל גלולה עם מיליליטר אחד של מדיום DMEM/F12. צנטריפוגה הדגימות שלוש פעמים נוספות כפי שהוכח רק, בעדינות resuspending כל גלולה עם מיליליטר טרי של מדיום לאחר כל צנטריפוגה.לאחר הצנטריפוגה האחרונה, יש להשתמש מחדש ב-500 מיקרוליטרים של אמצעי N2B27 בתוספת לוציפרין מילימולרי אחד, ולזרע פעם אחת 10 עד ששת התאים מכל דגימה על כלים תחתונים בודדים מצופים זכוכית מצופה פולי-L-ליסין. לאחר מכן, מניחים את הצלחות באינקובטור תרבות התא במשך שעה אחת. לאחר התאים דבקו בצלחת, מוסיפים שני מיליליטר של טרי N2B27 בינוני בתוספת לוציפרין מילימולרי אחד לכל צלחת.כדי לדמיין את ביטוי הכתב של לוציפראז בתרבויות דיסוציאציה של NPC, בחר את מטרת טבילת השמן והנח את צלחת הדגימה על שלב המיקרוסקופ. הצג את השדה באופן ידני כדי לקבוע את המיקום הטוב ביותר להצגת התאים והתמקד בתאי העניין. לחץ על Live כדי להשיג את תמונת הבדיקה, ולהשתמש בתוכנית רכישה רב-ממדית כדי להפעיל את רכישת זמן לשגות על ידי זוהר דו מימדי ורכישות שדה בהיר במשך 24 שעות.כדי להכין תרבויות פרוסת קליפת המוח המתפתחת, יום אחד לאחר הזרקת הכתב, לקצור את היום העוברי 13.5 עד 14.5 מוחות עוברים כפי שהוכח, ולה מניחים את המנה המכילה את המוח על הבמה של מיקרוסקופ סטריאוסקופי פלואורסצנטי. אשר כי כל קליפת המוח מבטאת את הכתב פלואורסצנטי מוזרק תחת אור העירור המתאים, ולהעביר את המוח ללוח חיתוך גומי סיליקון מלא 30 מיליליטר של אמצעי DMEM / F12, מבעבע עם 100% גז חמצן. השתמש בסכין מיקרו כירורגית ומקלות עדינים כדי לחתוך את הגבול בין החלק המדיאלי והצידי של telencephalon הגבי, ולהפריד את הרקמה לשתי ההמיספרות.לאחר מכן, השתמש בסכין כדי לחתוך את קליפת המוח כמו פסים כדי להשיג פרוסות קליפת המוח, העברת הפרוסות במדיום מן קרש החיתוך לתוך צלחת פטרי 35 מ"מ חדש כפי שהם נרכשים. לאחר איסוף כל הפרוסות, מניחים את המשטח החתך של כל פרוסה על גבי מוסיף תרבות המוצב בצלחת תחתית זכוכית המכילה מדיום מועשר, ומתאימים את הכיוון של כל פרוסה במטחנים עדין לפי הצורך. לאחר מכן, הסר כל מדיום עודף עם פיפטה, והכנס את המנה לאנקובטור מרובה גזים שנקבע ל-40%חמצן, 5% פחמן דו-חמצני ו-37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות.בסוף הדגירה, מוסיפים 300 מיקרוליטרים של מדיום מועשר בתוספת לוציפרין מילימולרי אחד לצלחת התרבות. כדי לדמיין את ביטוי הכתב של לוציפראז בתוך תרבויות הפרוסה, בחר את המטרה 40x והצב את צלחת הדגימה על שלב המיקרוסקופ. לרכוש תמונת מבחן של הפלואורסצנטיות, ולהגדיר את המיקום ואת מישור המיקוד לאזור העניין תחת הארת אור העירור המתאים.לאחר מכן, הפעל את רכישת זמן לשגות על ידי זוהר תלת מימדי, פלואורסצנטיות, ורכישות שדה בהיר במשך 24 שעות. כדי לפקח על פעילות האמרגן של הגן המתנד Dll1, luciferase בכל מקום, כתב luciferase לא יציבות עם זמן מחצית חיים של כ 10 דקות, ניתן להשתמש. כמו כתב פלואורסצנטי, כתב luciferase יכול לשמש כדי לפקח על הדינמיקה ביטוי של חלבון על ידי התמזגו רצף קידוד גנים של עניין.כדי לדמיין ביטוי כתב ברמה של תא יחיד בתרבות רקמות, הגן הכתב יכול להיות מתחלף באופן חולף לתוך NPCs באמצעות אלקטרופורציה ברחם כפי שהוכח. בנוסף, הדמיה מבוססת מיקרוסקופ מאפשרת רכישה של תמונות שדה בהיר, פלואורסצנטיות וכימותרפיה. הכתב של פעילות האמרגן Dll1 מציג ביטוי נדנוד ב- NPCs הנגזרים מהטלנצפלון של עכברי כתב F luciferase בכל מקום, עם כתב לוציפראז חסר יציבות המציין תקנה חדה למעלה ולמטה של הביטוי של פעילות האמרגן.בתאים סחוביים משופרים של חלבון פלואורסצנטי ירוק הסמוך הנושאים כתב Hes1 ותאים חיוביים mCherry המביעים כתב חלבון Dll1 אשר יצר קשר אחד עם השני במהלך התצפית, הבעת כתב Hes1 נראה להתחיל כ 60 דקות לאחר מגע, מה שמרמז כי עיכוב הזמן להעברת Notch איתות בין התאים הסמוכים הוא כשעה. יתר על כן, במהלך העברת אותות, ביטוי חלבון Dll1 מפגין טרנסלוקציה דינמית. בעת רכישת הדמיה bioluminescence, לשמור על חדר מיקרוסקופ כהה לחלוטין, כמו אור מיותר יכול למנוע רכישה אופטימלית.ההתפתחויות האחרונות באופטוגנטיקה מאפשרות לנו לשלוט בביטוי גנים עם אור. בעזרת טכניקה זו, אנו יכולים להציג בו זמנית דפוסים שונים של ביטוי גנים ולנטר תגובות כתב לוציפראז.

Education

Research

JoVE Core

JoVE Journal

Cell Biology

Molecular Biology

Developmental Biology

Unit 2

Unit 1

Cell Signaling Pathways

Alternative Signaling Routes in Gene Expression

SCIENTISTS IN ACTION

Studying Wnt Signaling During Patterning of Conducting Airways

לימוד Wnt איתות במהלך דפוסים של איירווייס ניצוח

Wnt signaling pathways play critical roles during development of the respiratory tract. Defining precise mechanisms of differentiation and morphogenesis ...

Kinetic Measurement and Real Time Visualization of Somatic Reprogramming

מדידת קינטי Real Time ויזואליזציה של תכנות מחדש סומטיים

Somatic reprogramming has enabled the conversion of adult cells to induced pluripotent stem cells (iPSC) from diverse genetic backgrounds and disease ...

Stimulation of Notch Signaling in Mouse Osteoclast Precursors

גירוי של מערכת איתות Notch עכבר osteoclast המבשר

Notch signaling is a key component of multiple physiological and pathological processes. The nature of Notch signaling, however, makes in vitro ...

Multi-Photon Time Lapse Imaging to Visualize Development in Real-time: Visualization of Migrating Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

פוטון רב זמן לשגות הדמיה כדי להמחיש את התפתחות בזמן אמת: ויזואליזציה של העברת תאי הרכס העצבי עוברי דג זברה

Congenital eye and craniofacial anomalies reflect disruptions in the neural crest, a transient population of migratory stem cells that give rise to ...

Real-time Measurement of Epithelial Barrier Permeability in Human Intestinal Organoids

בזמן אמת מדידה של מחסום האפיתל חדירות ב Organoids מעיים אנושיים

Advances in 3D culture of intestinal tissues obtained through biopsy or generated from pluripotent stem cells via directed differentiation, have resulted ...

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

אין ויוו הדמיה של גיד השריר מורפוגנזה ב דרוזופילה הגלמים

Muscles together with tendons and the skeleton enable animals including humans to move their body parts. Muscle morphogenesis is highly conserved from ...

Live Cell Imaging of Chromosome Segregation During Mitosis

תא חי הדמיה של הפרדה בין כרומוזום במהלך מיטוזה

Chromosomes must be reliably and uniformly segregated into daughter cells during mitotic cell division. Fidelity of chromosomal segregation is controlled ...

Neurogenesis Using P19 Embryonal Carcinoma Cells

נוירוגנזה באמצעות P19 Embryonal קרצינומה של תאים

The P19 cell line derived from a mouse embryo-derived teratocarcinoma has the ability to differentiate into the three germ layers. In the presence of ...

Imaging and Analysis of Tissue Orientation and Growth Dynamics in the Developing Drosophila Epithelia During Pupal Stages

Imaging and Analysis of Tissue Orientation and Growth Dynamics in the Developing Drosophila Epithelia During Pupal Stages

הדמיה וניתוח של כיוון רקמות ודינמיקה בפיתוח הדרוזולה אפיתליה במהלך שלבי pupal

Within multicellular organisms, mature tissues and organs display high degrees of order in the spatial arrangements of their constituent cells. A ...

Real-Time Imaging of CCL5-Induced Migration of Periosteal Skeletal Stem Cells in Mice

הדמיה בזמן אמת של הגירה הנגרמת על ידי CCL5 של תאי גזע שלד Periosteal בעכברים

Periosteal skeletal stem cells (P-SSCs) are essential for lifelong bone maintenance and repair, making them an ideal focus for the development of ...