Name: real-time bioluminescence imaging of notch signaling dynamics during murine neurogenesis
Uploaded: 2019-12-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time Bioluminescence Imaging of Notch Signaling Dynamics during Murine Neurogenesis at JoVE.com

Yumiko Iwamoto'ya videonun yapımını desteklediği için teşekkür ederiz. Biz de tartışma ve görüntü analizi destekler için Akihiro Isomura için müteşekkiriz, Hitoshi Miyachi transgenik hayvanların üretimi için teknik destekler için, Yuji Shinjo (Olympus Tıp Bilimi), Masatoshi Egawa (Tıp Bilimi), Takuya Ishizu ( Olympus Tıp Bilimi) ve Ouin Kunitaki (Andor Japonya) biyolüminesans görüntüleme sisteminin teknik destek ve tartışmaları için. Bu çalışma Evrimsel Bilim ve Teknoloji Için Çekirdek Araştırma (JPMJCR12W2) (R.K.), Yenilikçi Alanlar Bilimsel Araştırma Hibe(MEXT 24116705 H.S. ve MEXT 16H06480 R.K.), Grant-in-Aid Bilimsel Araştırma (C) (JSPS) tarafından desteklenmiştir 18K06254) (H.S.), Takeda Vakfı (R.K. ve H.S.) ve Eğitim, Kültür, Spor, Bilim ve Teknoloji Bakanlığı,Japonya'dan Yaşam Sistemine Dinamik Yaklaşımlar Platformu.

Hayvan denekleri de dahil olmak üzere tüm prosedür, Kyoto Üniversitesi Frontier Life and Medical Sciences Enstitüsü'ndeki Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır.
1. Biyolüminesans muhabirleri
NOT: Luciferase muhabiri, bozulma sinyalini kaynaştırarak organizatör aktivitesinin hızlı dinamiklerini ölçmek için uygundur. Ayrıca, luciferase füzyon muhabiri tek hücredeki protein dinamiklerinin izlenmesini sağlar. Muhabirl...

<ol>
	<li>Ross, S. E., Greenberg, M. E., Stiles, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+helix-loop-helix+factors+in+cortical+development.">Basic helix-loop-helix factors in cortical development.</a> Neuron. 39, 13-25 (2003).</li><li>Pontious, A., Kowalczyk, T., Englund, C., Hevner, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+intermediate+progenitor+cells+in+cerebral+cortex+development.">Role of intermediate progenitor cells in cerebral cortex development.</a> Developmental Neuroscience. 30, 24-32 (2007).</li><li>Kriegstein, A., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+glial+nature+of+embryonic+and+adult+neural+stem+cells.">The glial nature of embryonic and adult neural stem cells.</a> Annual Review of Neuroscience. 32, 149-184 (2009).</li><li>Paridaen, J. T., Huttner, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenesis+during+development+of+the+vertebrate+central+nervous+system.">Neurogenesis during development of the vertebrate central nervous system.</a> EMBO Reports. 15, 351-364 (2014).</li><li>Taverna, E., G&#246;tz, M., Huttner, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cell+biology+of+neurogenesis:+toward+an+understanding+of+the+development+and+evolution+of+the+neocortex.">The cell biology of neurogenesis: toward an understanding of the development and evolution of the neocortex.</a> Annual Review of Cell and Developmental Biology. 30, 465-502 (2014).</li><li>Louvi, A., Artavanis-Tsakonas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch+signaling+in+vertebrate+neural+development.">Notch signaling in vertebrate neural development.</a> Nature Reviews Neuroscience. 7, 93-102 (2006).</li><li>Pierfelice, T., Alberi, L., Gaiano, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch+in+the+Vertebrate+Nervous+System:+An+Old+Dog+with+New+Tricks.">Notch in the Vertebrate Nervous System: An Old Dog with New Tricks.</a> Neuron. 69, 840-855 (2011).</li><li>Bray, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch+signalling:+a+simple+pathway+becomes+complex.">Notch signalling: a simple pathway becomes complex.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 7, 678-689 (2006).</li><li>Bray, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch+signalling+in+context.">Notch signalling in context.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 17, 722-735 (2016).</li><li>Kopan, R., Ilagan, M. X. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Canonical+Notch+Signaling+Pathway:+Unfolding+the+Activation+Mechanism.">The Canonical Notch Signaling Pathway: Unfolding the Activation Mechanism.</a> Cell. 137, 216-233 (2009).</li><li>Ishibashi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistent+expression+of+helix-loop-helix+factor+HES-1+prevents+mammalian+neural+differentiation+in+the+central+nervous+system.">Persistent expression of helix-loop-helix factor HES-1 prevents mammalian neural differentiation in the central nervous system.</a> The EMBO Journal. 13, 1799-1805 (1994).</li><li>Ohtsuka, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hes1+and+Hes5+as+notch+effectors+in+mammalian+neuronal+differentiation.">Hes1 and Hes5 as notch effectors in mammalian neuronal differentiation.</a> The EMBO Journal. 18, 2196-2207 (1999).</li><li>Ohtsuka, T., Sakamoto, M., Guillemot, F., Kageyama, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+the+Basic+Helix-Loop-Helix+Genes+Hes1+and+Hes5+in+Expansion+of+Neural+Stem+Cells+of+the+Developing+Brain.">Roles of the Basic Helix-Loop-Helix Genes Hes1 and Hes5 in Expansion of Neural Stem Cells of the Developing Brain.</a> Journal of Biological Chemistry. 276, 30467-30474 (2001).</li><li>Kageyama, R., Ohtsuka, T., Kobayashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Hes+gene+family:+repressors+and+oscillators+that+orchestrate+embryogenesis.">The Hes gene family: repressors and oscillators that orchestrate embryogenesis.</a> Development. 134, 1243-1251 (2007).</li><li>Shimojo, H., Ohtsuka, T., Kageyama, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillations+in+Notch+Signaling+Regulate+Maintenance+of+Neural+Progenitors.">Oscillations in Notch Signaling Regulate Maintenance of Neural Progenitors.</a> Neuron. 58, 52-64 (2008).</li><li>Imayoshi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+control+of+factors+determining+multipotency+and+fate+in+mouse+neural+progenitors.">Oscillatory control of factors determining multipotency and fate in mouse neural progenitors.</a> Science. 342, 1203-1208 (2013).</li><li>Shimojo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+control+of+Delta-like1+in+cell+interactions+regulates+dynamic+gene+expression+and+tissue+morphogenesis.">Oscillatory control of Delta-like1 in cell interactions regulates dynamic gene expression and tissue morphogenesis.</a> Genes and Development. 30, 102-116 (2016).</li><li>Hirata, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+expression+of+the+bHLH+factor+Hes1+regulated+by+a+negative+feedback+loop.">Oscillatory expression of the bHLH factor Hes1 regulated by a negative feedback loop.</a> Science. 298, 840-843 (2002).</li><li>Kageyama, R., Ohtsuka, T., Shimojo, H., Imayoshi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+Notch+signaling+in+neural+progenitor+cells+and+a+revised+view+of+lateral+inhibition.">Dynamic Notch signaling in neural progenitor cells and a revised view of lateral inhibition.</a> Nature Neuroscience. 11, 1247-1251 (2008).</li><li>Masamizu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+imaging+of+the+somite+segmentation+clock:+revelation+of+unstable+oscillators+in+the+individual+presomitic+mesoderm+cells.">Real-time imaging of the somite segmentation clock: revelation of unstable oscillators in the individual presomitic mesoderm cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103, 1313-1318 (2006).</li><li>Levine, J. H., Lin, Y., Elowitz, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+roles+of+pulsing+in+genetic+circuits.">Functional roles of pulsing in genetic circuits.</a> Science. 342, 1193-1200 (2013).</li><li>Purvis, J. E., Lahav, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Encoding+and+decoding+cellular+information+through+signaling+dynamics.">Encoding and decoding cellular information through signaling dynamics.</a> Cell. 152, 945-956 (2013).</li><li>Luker, G. D., Pica, C. M., Song, J., Luker, K. E., Piwnica-Worms, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+26S+proteasome+activity+and+inhibition+in+living+mice.">Imaging 26S proteasome activity and inhibition in living mice.</a> Nature Medicine. 9, 969-973 (2003).</li><li>Yamaguchi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synchronization+of+Cellular+Clocks+in+the+Suprachiasmatic+Nucleus.">Synchronization of Cellular Clocks in the Suprachiasmatic Nucleus.</a> Science. 302, 1408-1412 (2003).</li><li>Kiyohara, Y. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+BMAL1+C+terminus+regulates+the+circadian+transcription+feedback+loop.">The BMAL1 C terminus regulates the circadian transcription feedback loop.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103, 10074-10079 (2006).</li><li>Behar, M., Hoffmann, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+temporal+codes+of+intra-cellular+signals.">Understanding the temporal codes of intra-cellular signals.</a> Current Opinion in Genetics and Development. 20, 684-693 (2010).</li><li>Elowitz, M. B., Levine, A. J., Siggia, E. D., Swain, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stochastic+Gene+Expression+in+a+Single+Cell.">Stochastic Gene Expression in a Single Cell.</a> Science. 297, 1183-1186 (2002).</li><li>Nelson, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillations+in+NF-kappaB+signaling+control+the+dynamics+of+gene+expression.">Oscillations in NF-kappaB signaling control the dynamics of gene expression.</a> Science. 306, 704-708 (2004).</li><li>Purvis, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p53+dynamics+control+cell+fate.">p53 dynamics control cell fate.</a> Science. 336, 1440-1444 (2012).</li><li>Hansen, A. S., O'Shea, E. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promoter+decoding+of+transcription+factor+dynamics+involves+a+trade-off+between+noise+and+control+of+gene+expression.">Promoter decoding of transcription factor dynamics involves a trade-off between noise and control of gene expression.</a> Molecular Systems Biology. 9, 704 (2014).</li><li>Hansen, A. S., O'Shea, E. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cis+Determinants+of+Promoter+Threshold+and+Activation+Timescale.">cis Determinants of Promoter Threshold and Activation Timescale.</a> Cell Reports. 12, 1226-1233 (2015).</li><li>Johnson, H. E., Toettcher, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+Dynamics+Control+Cell+Fate+in+the+Early+Drosophila+Embryo.">Signaling Dynamics Control Cell Fate in the Early Drosophila Embryo.</a> Developmental Cell. 48, 361-370 (2019).</li><li>Badr, C. E., Tannous, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioluminescence+imaging:+Progress+and+applications.">Bioluminescence imaging: Progress and applications.</a> Trends in Biotechnology. 29, 624-633 (2011).</li><li>Nakajima, Y., Ohmiya, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioluminescence+assays:+multicolor+luciferase+assay,+secreted+luciferase+assay+and+imaging+luciferase+assay.">Bioluminescence assays: multicolor luciferase assay, secreted luciferase assay and imaging luciferase assay.</a> Expert Opinion on Drug Discovery. 5, 835-849 (2010).</li><li>Nakajima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+beetle+luciferase+for+high-resolution+bioluminescence+imaging.">Enhanced beetle luciferase for high-resolution bioluminescence imaging.</a> PLoS One. 5, (2010).</li><li>Stacer, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NanoLuc+reporter+for+dual+luciferase+imaging+in+living+animals.">NanoLuc reporter for dual luciferase imaging in living animals.</a> Molecular Imaging. 12, (2013).</li></ol>

Notch sinyalin bileşenleri somitogenez sırasında senkronize ama nörogenez sırasında senkronize salınımlı ifadeler göstermek, ikinci durumda statik analiz ile ifade dinamikleri yakalama zorluklara yol açan. Bu nedenle, Hes1 ve Dll1gibi Çentik sinyal bileşenlerinin ifade dinamiklerini ortaya çıkarmak için gerçek zamanlı izleme gereklidir. Hes1 ve Dll1 salınımlarının ifadeleri dönemleri son derece kısa olduğundan, ifade dinamiklerini izlemek için yaklaşık 2-3 s...

Memeli beyin nöronlar ve glial hücrelerin çeşitli çok sayıda oluşur. Tüm hücreler nöral kök / progenitor hücreleri (NPCs), ilk sayılarını genişletmek için çoğalır, sonra nöronlar içine ayırt etmeye başlar ve nihayet glialhücrelereneden oluşturulur 1,2,3,4,5. Hücreler nöronlara farklılaştıktan sonra çoğalamazlar veya sayılarını artıramazlar ve bu nedenle ndc'lerin daha sonraki aşamalara kadar sürdürülmesi önemlidir. Hücre-hücre etkileşimleri ile çentik sinyal6,7NPCs korunmasında önemli bir rol oynar. Çentik ligandları, komşu hücrelerin yüzeyinde ki membran proteini Çentik ile etkileşime girer ve Çentik proteinini aktive eder. Aktivasyon dan sonra, Notch proteinproteozis oluşur, bu nedenle çekirdekiçinehücre zarından Notch (NICD) hücre içi etki alanı serbest 8,9,10. Çekirdekte NICD, Hes1 ve Hes5 'in(Hes1/5)promotör bölgelerine bağlanır ve bu genlerin ekspresyonunu aktive eder. Hes1/5 pronöral genlerin ekspresyonunu bastırmak Ascl1 ve Neurogenin1 (Neurog1/2)11,12,13,14. Pronörgenler nöronal farklılaşmayı indüklediği için, Hes1/5 NP'lerin korunmasında önemli rol oynar. Ayrıca, pronörgenler Notch ligand Delta-like1 (Dll1) ekspresyonunu aktive edebildiği için, Hes1/5 de Dll1ekspresyonunu bastırabilir. Bu nedenle, Dll1 ifadesi Komşu hücrelerin Notch sinyalizasyon yoluyla Dll1 için negatif olmasına yol açar. Bu şekilde, hücreler aynı kaderi takip komşu hücreleri inhibe, lateral inhibisyon olarak bilinen bir fenomen8. Gelişmekte olan beyinde, lateral inhibisyon çeşitli farklı hücre tipleri üreten bir rol oynar.
Tek hücre düzeyinde gerçek zamanlı görüntüleme NPCs15,16,17Çentik sinyal bileşenlerinin dinamik ifadeler ortaya koymaktadır. Çentik sinyalhes1ifadesini aktive eder , ama Hes1 protein kendi organizatörü bağlanır ve kendi ifadesini bastırır. Ayrıca, Hes1 son derece kararsız bir proteindir, bu ubikitin-proteozom yolu tarafından bozulur; bu nedenle, kendi organizatörü baskı sadece kısa ömürlü ve daha sonra transkripsiyon tekrar başlar. Bu şekilde, Hes1 ifadesi 2 h döngüsü18hem transkripsiyon ve çeviri düzeylerinde salınımlar . Hes1 salınımlı ekspresyonu, sırayla, ascl1 gibi downstream hedef genlerin salınım ekspresyonu indükler, Ascl1gibi , Neurog2, ve Dll1, periyodik baskı yoluyla15,16,17,19. Pronör genler nöronal farklılaşmaya neden olabilirken, salınımlı ekspresyonları nöronal farklılaşma için yeterli değildir; yerine onların sürekli ifade nöronal farklılaşma için gereklidir. Pronör genlerin salınımlı ekspresyonu nöronal farklılaşma yı neden olmaktan ziyade NCD'lerin korunması için önemlidir14,15,16. Dll1 ekspresyonu nörogenez ve somitogenez gibi çeşitli morfogenez sırasında hem transkripsiyon hem de çeviri düzeyinde salınım lar. Dll1 dinamik ekspresyonu normal morfogenez ve Dll1 sürekli ekspresyonu için önemlidir nörogenez ve somitogenez17kusurları indükler. Bu bulgular, gen ekspresyonu ve protein kinetik dinamiklerinin çeşitli gelişimsel olayların düzenlenmesi nde sahip olduğu önemli işlevi göstermektedir (örneğin, farklı ifade dinamiği hücresel davranışlarda farklı çıkışlar üretir).
Çentik sinyalleme dinamiklerini analiz etmek için doku ve hücrelerin statik analizi sürekli değiştiği için yetersizdir. Tek hücrelerin gerçek zamanlı görüntüleme gen ekspresyonundaki dinamikleri ortaya çıkarmak için güçlü bir araçtır. Çentik sinyal moleküllerinin dinamik ekspresyonu 2-3 saat süre içinde hızlı döngüsel tepkilere uğrar. Bu hızlı periyodik ifade gerçek zamanlı izleme için iki zor sorun sunar: (1) moleküllerin ekspresyonu düşük seviyelere bastırılır ve (2) hızlı ciro hızlı yanıt muhabirleri gerektirir. Bu sorunların üstesinden gelmek için, daha önce bir biyolüminesans gerçek zamanlı görüntüleme yöntemi20geliştirdi. Biyolüminesans muhabiri floresan muhabirlere göre daha yüksek duyarlılığa ve daha kısa olgunlaşma süresine sahip olduğundan, bu strateji canlı hücrelerdeki hızlı dinamikleri izlememizi sağlar. Gerçek zamanlı görselleştirmeyi kullanarak, daha önce düşündüğümüzden daha fazla genin dinamik ifade sergilediğini bulduk. Buna ek olarak, canlı hücrelerde ekspresyon ve protein dinamiklerini gösteren raporların sayısı ve çeşitli biyolojik olaylarda bu dinamiklerin önemi artmıştır, gen ifadelerinde dinamiklerin temel bir rolü düşündüren21,22.
Bu raporda, notch ligand Dll1'in npt'lerde hem ayrıştırılmış kültürlerde hem de kortikal dilim kültürlerinde ifadesini görselleştirmenin bir yolunu açıklıyoruz. Dll1 transkripsiyonunun dinamiklerini tek hücre seviyelerinde izlemek için, dll1 organizatörü güdümlü dengesiz luciferase muhabiri pDll1-Ub-Fluc muhabiri nitransgenik farelerin embriyonik telensefalonundan elde edilen ndc'lerin ayrıştırılmış kültürlerini oluşturduk. Dll1 protein dinamiklerini vivo olarak izlemek için, Dll1-Fluc füzyon muhabirini korteksteki NPC'lere tanıttık ve kortikal dilim kültürlerinde NPC'lerde muhabirin ifadesini görselleştirdik. Gerçek zamanlı görüntüleme, yüksek zamansal çözünürlükte canlı hücrelerdeki gen ekspresyonu ve protein dinamiğinin çeşitli özelliklerini yakalamamızı sağladı.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bioluminescence Imaging System</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chilled water circulator (chiller)</td>
			<td>Julabo</td>
			<td>Model: F12-ED</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cooled CCD camera</td>
			<td>Andor Technology</td>
			<td>Model: iKon-M 934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator system</td>
			<td>TOKAI HIT</td>
			<td>Model: INU-ONICS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>Model: IX81</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>Model: IX83</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED illumination device</td>
			<td>CoolLED</td>
			<td>Model: pE1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MetaMorph</td>
			<td>MOLECULAR DEVICES</td>
			<td>Model: 40000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mix gas controller</td>
			<td>Tokken</td>
			<td>Model: TK-MIGM OLO2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective lens</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>Model: UPLFLN 40X O</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Preparations for Dissection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Model: SMZ-2B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence stereoscopic microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Model: MZ16FA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps</td>
			<td>DUMONT</td>
			<td>INOX No.5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors, Micro scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ring-shaped forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10-cm plastic petri dish</td>
			<td>greiner</td>
			<td>664160-013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35-mm plastic petri dish</td>
			<td>greiner</td>
			<td>627160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>14249-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>11039-021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents for NPC dissociation culture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 supplement</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>12587-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bFGF</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>13256-029</td>
			<td>Stock solution: 1 &#956;g/ml in 0.1% BSA/PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-luciferin</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>01493-85</td>
			<td>Stock solution: 100mM in 0.9% saline</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase</td>
			<td>Worthington Biochemical Corporation</td>
			<td>LK003172</td>
			<td>Stock solution: 1000U/ml in EBSS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EBSS</td>
			<td>Worthington Biochemical Corporation</td>
			<td>LK003188</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottom dish</td>
			<td>IWAKI</td>
			<td>3910-035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 supplement (100x)</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>17502-048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-acetyl-cystein</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A-9165-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Papain</td>
			<td>Worthington Biochemical Corporation</td>
			<td>LK003178</td>
			<td>Stock solution: 7U/ml in EBSS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptmycine</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>09367-34</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-lysine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P-6281</td>
			<td>40 mg/ml in DW</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Preparations for in utero electroporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50-ml syringe</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>181228T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode</td>
			<td>Neppagene</td>
			<td>7-mm</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electroporator</td>
			<td>Neppagene</td>
			<td>CUY21 EDIT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauzes</td>
			<td>Kawamoto co.</td>
			<td>7161</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro capillary</td>
			<td>Made in-house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>14249-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentbarbital</td>
			<td>Kyoritsuseiyaku</td>
			<td>Somnopentyl</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ring-shaped forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors, Micro scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture needle</td>
			<td>Akiyama MEDICAL MFG. CO</td>
			<td>F17-40B2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>Seractal</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Preparations for Slice culture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10-cm plastic petri dish</td>
			<td>greiner</td>
			<td>664160-013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35-mm plastic petri dish</td>
			<td>greiner</td>
			<td>627160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture insert</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>PICM01250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>11039-021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>172012-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps</td>
			<td>DUMONT</td>
			<td>INOX No.5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>16050-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro surgical knife</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>19 Gauge V-Lance</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-gas incubator</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>MCO-5MUV-PJ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2/B27 media</td>
			<td>Made in-house</td>
			<td></td>
			<td>ref. NPC dissociatioin culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>14249-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ring-shaped forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors, Micro scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon rubber cutting board</td>
			<td>Made in-house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time bioluminescence imaging of notch signaling dynamics during murine neurogenesis

Çentik sinyalizasyonu, nöral kök/progenitor hücrelerinin hücre-hücre etkileşimleri tarafından bakımını düzenler. Notch sinyalbileşenleri dinamik bir ifade sergiler. Çentik sinyal efektörü Hes1 ve Notch ligand Delta-like1 (Dll1) nöral kök/progenitor hücrelerinde salınımlı bir şekilde ifade edilir. Bu genlerin salınım lı ekspresyon süresi çok kısa olduğundan (2 saat), döngüsel ekspresyonlarını izlemek zordur. Gen ekspresyonundaki veya protein dinamiğindeki bu kadar hızlı değişimleri incelemek için hızlı yanıt muhabirleri gereklidir. Hızlı olgunlaşma kinetiği ve yüksek duyarlılığı nedeniyle, biyolüminesans muhabiri luciferase canlı hücrelerdeki hızlı gen ekspresyonu değişikliklerini izlemek için uygundur. Organizatör aktivitesini izlemek için dengesi bozulmuş bir luciferase muhabiri ve protein dinamiklerini tek hücre çözünürlükte görselleştirmesi için luciferase-erimiş bir muhabir kullandık. Bu biyolüminesans muhabirleri hızlı ciro göstermek ve çok zayıf sinyaller üretmek; bu nedenle, bu tür silik sinyalleri tespit etmek için son derece hassas bir biyolüminesans görüntüleme sistemi geliştirdik. Bu yöntemler, canlı hücre ve dokularda çeşitli gen ekspresyonu dinamiklerini izlememizi sağlar, bunlar gerçek hücresel durumları anlamamıza yardımcı olacak önemli bilgilerdir.

Hes1/7 genlerinin ifadeleri çeşitli hücre hatlarında ve somitogenez sırasında 2 h salınım döngüsü sergiler. Ayrıca, salınım dönemi çok kısadır ve hem mRNA'ları hem de proteinleri yaklaşık 20 dk'lık yarı lanma süreleri ile son derece kararsızdır. Eğer yavaş tepkili bir muhabir kullanıyorsak, bu kadar hızlı dinamikleri takip edemeyiz ve istikrarlı bir muhabir kullanıyorsanız, gen ekspresyonu salınım yaparken yavaş yavaş birikir. Bu nedenle, muhabir hızla bu tür döngüsel if...

Watch this Scientific Journal Video about Real-time Bioluminescence Imaging of Notch Signaling Dynamics during Murine Neurogenesis at JoVE.com

Real-time Bioluminescence Imaging of Notch Signaling Dynamics during Murine Neurogenesis

Nöral kök/progenitor hücreleri, hücresel olayların farklı sonuçlarına yol açan Çentik sinyal bileşenlerinin çeşitli ifade dinamiklerini sergilerler. Bu tür dinamik ifade, gen ekspresyonlarında hızlı değişimlerin görselleştirilmesini sağlayan son derece hassas biyolüminesans görüntüleme sistemi kullanılarak statik analizle değil, gerçek zamanlı izleme ile ortaya çıkabilir.

Murin Nörogenezi Sırasında Çentik Sinyal Dinamiğinin Gerçek Zamanlı Biyolüminesans Görüntülemesi

Notch signaling regulates the maintenance of neural stem/progenitor cells by cell-cell interactions. The components of Notch signaling exhibit dynamic ...

Bu yöntem, hücre çoğalması ve farklılaşmasında gen ekspresyonu dinamiğinin önemi, özellikle nöral kök hücrelerdeki Çentik sinyal moleküllerinin dinamikleri hakkında anahtar soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, canlı görüntüleme ile hem in vitro hem de in vivo gen ekspresyonunu çok yüksek hassasiyetle izleyebiliyor olmamızdır. Prosedürü gösteren Hiromi Shimojo, bu yeni teknolojiyi geliştiren laboratuvarımdaki yardımcı doçent.Dll1 F luciferase muhabirinin NPC'ye girişi için, 12,5 ila 14,5 gebe farede pedal refleksine yanıt eksikliğini doğrulayın ve karın dan iki ila üç santimetrelik bir kesi yaparak orta hat boyunca ilerleyin. Kesinin etrafına PBS'li gazlı bez yerleştirin ve doğru rahim boynuzunu dikkatlice çıkarmak için halka şeklinde ki forceps'leri kullanın. Embriyoları sayarak sonra, her embriyonun vensefalisine bir ila iki mikrolitre karışık Dll1 F luciferase muhabiri DNA enjekte etmek için bir mikro kılcal damar kullanın.Başarılı bir enjeksiyon rahim yüzeyi üzerinde mavi boya gözlemneden olacaktır. Elektroporasyon için, PBS ile rahim ve elektrot ıslak ve yavaşça ilk embriyo başkanı kavramak. Pozitif yüklü elektrodu DNA'nın enjekte edildiği yarımkürenin yan tarafına ayarlayın ve darbeler arasında bir saniyelik bir duraklama ile beş adet 30 ila 50 volt, 50 milisaniyelik darbeler sağlayın, negatif yüklü elektrottan kabarcıklar üretildiğini kontrol edin.Tüm embriyolar enjekte edildiğinde, sol rahim boynuzu karın dönmek, ve 4-0 ipek sütür ile kesi kapatmak için 17 milimetrelik bir iğne kullanın, kapatma tamamlamadan önce karın boşluğuna sıcak PBS yerleştirerek. Ayrışmış bir NPC kültürü kurmak için, ilk embriyonik gün 12,5 ila 14,5 hamile Dll1 her yerde luciferase transgenik fare bir 10 santimetre Petri çanak buz-soğuk PBS 25 mililitre içeren içine rahim yer ve rahim embriyoları kaldırmak için mikro makas ve ince çerkedikler kullanın. Embriyoların kafasını kestikten sonra, kafaları buz gibi DMEM/F12 içeren 10 santimetrelik yeni bir Petri kabına yerleştirin ve her beyni çevreleyen epidermisin ve kıkırdağı çıkarın.Beyinleri, üç mililitre buz gibi N2B27 ortamı içeren bir kesme mikroskobu altında 35 milimetrelik bir tabağa aktarın. Diensefalon sağ ve sol telencephalon çıkarın. Telensefalon yüzeyini kaplayan menenjleri çıkarmak ve telensefalondan korteksin dorsolateral kısmını incelemek için ince çerkeciler kullanın.İlgi çeken tüm sinir dokuları izole edildiğinde, numuneleri tek tek 1,5 mililitrelik tüplere aktarmak için p1000 pipeti kullanın ve her tüpten herhangi bir ekstra ortam aspire etmek için bir P200 pipeti kullanın. Korteks çifti başına 100 mikrolitre papain çözeltisi ekleyin ve numuneleri 15 dakika boyunca 24 derecede yerleştirin. Kuluçka sonunda, numuneleri yeni bir P1000 pipetle 10 kez pipetleyin ve tüpleri 15 dakika daha 24 santigrat dereceye geri verin.Kuluçka sonunda, sindirilmiş dokuları santrifüj le toplamadan önce numuneleri hafifçe pipetleyin. Süpernatantları aspire edin ve her peleti bir mililitre DMEM/F12 ortamıyla hafifçe askıya alın. Numuneleri sadece gösterildiği gibi üç kez daha santrifüj edin, her bir santrifüjden sonra her peleti taze bir mililitre orta ile hafifçe yeniden sulandırın.Son santrifüjden sonra, tek milimolar luciferin ile desteklenen 500 mikrolitre N2B27 orta peletleri yeniden askıya alın ve her örnekten altı hücreye bir kez 10 kez poli-L-lizin kaplı cam alt tabaklara tohum. Daha sonra, bir saat hücre kültürü kuluçka plakaları yerleştirin. Hücreler yemeğe yapışıp kaldıktan sonra, her tabağa iki mililitre taze N2B27 orta artı bir milimolar luciferin ekleyin.NPC dissosyasyon kültürlerinde luciferase muhabiri ifadesini görselleştirmek için, yağ daldırma hedefini seçin ve örnek kabı mikroskop aşamasına yerleştirin. Hücreleri görüntülemek için en iyi konumu belirlemek ve ilgi çeken hücrelere odaklanmak için alanı el ile görüntüleyin. Test görüntüsünü elde etmek için Canlı'yı tıklatın ve iki boyutlu parlaklık ve parlak alan edinimi ile 24 saat boyunca hızlandırılmış edinimini çalıştırmak için Çok Boyutlu Edinme programını kullanın.Gelişen korteks dilimi kültürlerini hazırlamak için, muhabir enjeksiyonundan bir gün sonra, embriyonik gün 13.5-14.5 embriyo beyinlerini toplayın ve beyiniçeren kabı floresan stereoskopik mikroskobun sahnesine yerleştirin. Her korteksin enjekte edilen floresan muhabiri uygun uyarma ışığı altında ifade ettiğini doğrulayın ve beyni %100 oksijen gazıyla şişirilmiş 30 mililitre DMEM/F12 ortamıyla dolu silikon kauçuk kesme tahtasına aktarın. Dorsal telencephalon medial ve lateral kısmı arasındaki sınırı kesmek için bir mikro cerrahi bıçak ve ince çalgılar kullanın, ve iki yarımküreye doku ayırmak.Daha sonra, kortikal dilimler elde etmek için korteks gibi korteks kesmek için bıçak kullanın, onlar elde edilir gibi yeni bir 35 milimetrelik Petri çanak içine kesme tahtası orta dilimleri aktarAn. Tüm dilimler toplandığında, her dilimin kesme yüzeyini zenginleştirilmiş ortam içeren cam bir alt tabağa yerleştirerek her dilimin yönünü gerektiği gibi ince çaksiliklerle ayarlayın. Daha sonra, bir pipet ile herhangi bir aşırı orta çıkarın ve 30 dakika boyunca% 40 oksijen, % 5 karbondioksit ve 37 derece santigrat ayarlanmış bir çok gaz lı kuluçka içine çanak yerleştirin.Kuluçka sonunda, kültür çanak bir milimolar luciferin ile desteklenen zenginleştirilmiş orta 300 mikrolitre ekleyin. Dilim kültürleri içindeki luciferase muhabiri ifadesini görselleştirmek için 40x hedefini seçin ve örnek kabı mikroskop aşamasına yerleştirin. Floresan bir test görüntüsü elde edin ve uygun uyarma ışığının aydınlatılması altında konumu ve odak düzlemini ilgi bölgesine ayarlayın.Ardından, üç boyutlu parlaklık, floresan ve parlak alan edinimi ile 24 saat boyunca hızlandırılmış edinimçalıştırın. Salınımlı gen Dll1'in promotör aktivitesini izlemek için, yaklaşık 10 dakikalık yarı ömrü olan dengesiz bir luciferase muhabiri olan her yerde bulunan luciferase kullanılabilir. Floresan bir muhabir gibi, luciferase muhabiri ilgi gen kodlama dizisine erimiş olarak bir proteinin ifade dinamiklerini izlemek için kullanılabilir.Doku kültürlerinde tek hücreli düzeyde muhabir ifadesini görselleştirmek için, muhabir geni gösterildiği gibi rahim elektroporasyonu yoluyla np'lere geçici olarak geçirilebilir. Buna ek olarak, mikroskop tabanlı görüntüleme parlak alan, floresan ve kemilüminesans görüntülerinin elde edilmesini sağlar. Dll1 organizatör faaliyet muhabiri NPCs dll1 her yerde F luciferase muhabir farelerin telencephalon türetilen bir salınımifade sergiler, kararsız luciferase muhabiri organizatör faaliyetinin ifade keskin bir yukarı ve aşağı düzenleme gösteren ile.Hes1 muhabiri ve gözlem sırasında birbirleriyle temas eden Dll1 protein muhabirini ifade eden mCherry pozitif hücreleri taşıyan bitişik geliştirilmiş yeşil floresan protein pozitif hücrelerde, Hes1 muhabirinin ifadesi temastan yaklaşık 60 dakika sonra başlar ve bitişik hücreler arasında Çentik sinyalinin iletimi için gecikmenin yaklaşık bir saat olduğunu düşündürmektedir. Ayrıca, sinyal iletimi sırasında, Dll1 protein ekspresyonu dinamik bir translokasyon sergiler. Biyolüminesans görüntülemesini elde ederken, mikroskop odasını tamamen karanlık tutun, çünkü yabancı ışık optimum bir edinimi önleyebilir.Optogenetikteki son gelişmeler gen ekspresyonunu ışıkla kontrol etmemizi sağlar. Bu teknikle, aynı anda gen ekspresyonunun çeşitli modelini tanıtabilir ve luciferase muhabirinin tepkilerini izleyebiliriz.

Education

Research

JoVE Core

JoVE Journal

Cell Biology

Molecular Biology

Developmental Biology

Unit 2

Unit 1

Cell Signaling Pathways

Alternative Signaling Routes in Gene Expression

SCIENTISTS IN ACTION

Studying Wnt Signaling During Patterning of Conducting Airways

İletken Airways Desenlendirme sırasında Wnt Sinyalizasyonu incelenmesi

Wnt signaling pathways play critical roles during development of the respiratory tract. Defining precise mechanisms of differentiation and morphogenesis ...

Kinetic Measurement and Real Time Visualization of Somatic Reprogramming

Somatik yeniden programlanması Kinetik Ölçümü ve Gerçek Zamanlı Görselleştirme

Somatic reprogramming has enabled the conversion of adult cells to induced pluripotent stem cells (iPSC) from diverse genetic backgrounds and disease ...

Stimulation of Notch Signaling in Mouse Osteoclast Precursors

Fare Osteoklast Öncüleri Notch Sinyal uyarılması

Notch signaling is a key component of multiple physiological and pathological processes. The nature of Notch signaling, however, makes in vitro ...

Multi-Photon Time Lapse Imaging to Visualize Development in Real-time: Visualization of Migrating Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

Geliştirme gerçek zamanlı olarak görselleştirmek için çoklu foton zaman atlamalı görüntüleme: nöral Crest hücrelerde geçirme Zebra balığı embriyo görselleştirme

Congenital eye and craniofacial anomalies reflect disruptions in the neural crest, a transient population of migratory stem cells that give rise to ...

Real-time Measurement of Epithelial Barrier Permeability in Human Intestinal Organoids

Gerçek zamanlı insan bağırsak Organoids epitel bariyer geçirgenliği ölçümü

Advances in 3D culture of intestinal tissues obtained through biopsy or generated from pluripotent stem cells via directed differentiation, have resulted ...

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

Vivo Kas-tendon morfogenez Drosophila pupa içinde görüntüleme

Muscles together with tendons and the skeleton enable animals including humans to move their body parts. Muscle morphogenesis is highly conserved from ...

Live Cell Imaging of Chromosome Segregation During Mitosis

Kromozom segregasyon mitoz sırasında canlı hücre görüntüleme

Chromosomes must be reliably and uniformly segregated into daughter cells during mitotic cell division. Fidelity of chromosomal segregation is controlled ...

Neurogenesis Using P19 Embryonal Carcinoma Cells

Nörojenez P19 embriyonal karsinom hücrelerini kullanarak

The P19 cell line derived from a mouse embryo-derived teratocarcinoma has the ability to differentiate into the three germ layers. In the presence of ...

Imaging and Analysis of Tissue Orientation and Growth Dynamics in the Developing Drosophila Epithelia During Pupal Stages

Imaging and Analysis of Tissue Orientation and Growth Dynamics in the Developing Drosophila Epithelia During Pupal Stages

Pupal Evrelerinde Gelişen Drosophila Epitelinde Doku Oryantasyonu ve Büyüme Dinamiğinin Görüntülenmesi ve Analizi

Within multicellular organisms, mature tissues and organs display high degrees of order in the spatial arrangements of their constituent cells. A ...

Real-Time Imaging of CCL5-Induced Migration of Periosteal Skeletal Stem Cells in Mice

Farelerde Periosteal İskelet Kök Hücrelerinin CCL5 Kaynaklı Göçünün Gerçek Zamanlı Görüntülenmesi

Periosteal skeletal stem cells (P-SSCs) are essential for lifelong bone maintenance and repair, making them an ideal focus for the development of ...