Name: culture methods to determine the limit of detection and survival in transport media of campylobacter jejuni in human fecal specimens
Uploaded: 2020-03-10T12:30:00
Duration: 8 min 23 s
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	<li>. Annual Summaries of Foodborne Outbreaks Available from: <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/fdoss/annual-reports/index.html">https://www.cdc.gov/fdoss/annual-reports/index.html</a> (2018)</li><li>Kaakoush, N. O., Casta&#241;o-Rodr&#237;guez, N., Mitchell, H. M., Man, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+Epidemiology+of+Campylobacter+Infection.">Global Epidemiology of Campylobacter Infection.</a> Clinical Microbiology Reviews. 28 (3), 687-720 (2015).</li><li>Pitkanen, T. a., H, M. L., Rose, J. B., Jimenez-Cisneros, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Global Water Pathogen Project. , (2017).</li><li>Fitzgerald, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicenter+Evaluation+of+Clinical+Diagnostic+Methods+for+Detection+and+Isolation+of+Campylobacter+spp.+from+Stool.">Multicenter Evaluation of Clinical Diagnostic Methods for Detection and Isolation of Campylobacter spp. from Stool.</a> Journal of Clinical Microbiology. 54 (5), 1209-1215 (2016).</li><li>Kirkpatrick, B. D., Tribble, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+human+Campylobacter+jejuni+infections.">Update on human Campylobacter jejuni infections.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 27 (1), 1-7 (2011).</li><li>CDC. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+and+Trends+of+Infection+with+Pathogens+Transmitted+Commonly+Through+Food+-+Foodborne+Diseases+Active+Surveillance+Network,+10+U.S.+Sites,+2006-2013.">Incidence and Trends of Infection with Pathogens Transmitted Commonly Through Food - Foodborne Diseases Active Surveillance Network, 10 U.S. Sites, 2006-2013.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 63, 328-332 (2014).</li><li>Jaime, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Campylobacter+upsaliensis:+Another+Pathogen+for+Consideration+in+the+United+States.">Campylobacter upsaliensis: Another Pathogen for Consideration in the United States.</a> Clinical Infectious Diseases. 34 (11), 59-60 (2002).</li><li>Bullman, S., O'Leary, J., Corcoran, D., Sleator, R., Lucey, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular-based+detection+of+non-culturable+and+emerging+campylobacteria+in+patients+preseting+with+gastroenteritis.">Molecular-based detection of non-culturable and emerging campylobacteria in patients preseting with gastroenteritis.</a> Epidemiology and Infection. 140, 684-688 (2012).</li><li>Giltner, C. L., Saeki, S., Bobenchik, A. M., Humphries, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Detection+of+Campylobacter+Antigen+by+Enzyme+Immunoassay+Leads+to+Increased+Positivity+Rates.">Rapid Detection of Campylobacter Antigen by Enzyme Immunoassay Leads to Increased Positivity Rates.</a> Journal of Clinical Microbiology. 51 (2), 618-620 (2013).</li><li>M'ikanatha, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+stool+specimens+for+Campylobacter+spp.,+Pennsylvania,+USA.">Culturing stool specimens for Campylobacter spp., Pennsylvania, USA.</a> Emerging Infectious Disease. 18, 484-487 (2012).</li><li>Al Amri, A., Senok, A. C., Ismaeel, A. Y., Al-Mahmeed, A. E., Botta, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+PCR+for+direct+identification+of+Campylobacter+spp.+in+human+and+chicken+stools.">Multiplex PCR for direct identification of Campylobacter spp. in human and chicken stools.</a> Journal of Medical Microbiology. 56 (10), 1350-1355 (2007).</li><li>Buss, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Campylobacter+culture+fails+to+correctly+detect+Campylobacter+in+30%+of+positive+patient+stool+specimens+compared+to+non-cultural+methods.">Campylobacter culture fails to correctly detect Campylobacter in 30% of positive patient stool specimens compared to non-cultural methods.</a> European Journal of Clinical Microbiology &amp; Infectious Diseases. 38, 1087-1093 (2019).</li><li>Wohlwend, N., Tiermann, S., Risch, L., Risch, M., Bodmer, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+Multiplex+Real-Time+PCR+Assay+for+Detecting+Major+Bacterial+Enteric+Pathogens+in+Fecal+Specimens:+Intestinal+Inflammation+and+Bacterial+Load+Are+Correlated+in+Campylobacter+Infections.">Evaluation of a Multiplex Real-Time PCR Assay for Detecting Major Bacterial Enteric Pathogens in Fecal Specimens: Intestinal Inflammation and Bacterial Load Are Correlated in Campylobacter Infections.</a> Journal of Clinical Microbiology. 54 (9), 2262-2266 (2016).</li><li>Couturier, B. A., Hale, D. C., Couturier, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+Campylobacter+upsaliensis+with+Persistent+Bloody+Diarrhea.">Association of Campylobacter upsaliensis with Persistent Bloody Diarrhea.</a> Journal of Clinical Microbiology. 50 (11), 3792-3794 (2012).</li><li>Chaban, B., Musil, K. M., Himsworth, C. G., Hill, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+cpn60-Based+Real-Time+Quantitative+PCR+Assays+for+the+Detection+of+14+Campylobacter+Species+and+Application+to+Screening+of+Canine+Fecal+Samples.">Development of cpn60-Based Real-Time Quantitative PCR Assays for the Detection of 14 Campylobacter Species and Application to Screening of Canine Fecal Samples.</a> Applied and Environmental Microbiology. 75, 3055-3061 (2009).</li><li>Allos, B., Blaser, M. J., Mandell, G. L., Bennett, J. E., Dolin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mandell, Douglas, and Bennett's Principles and Practice of Infectious Diseases, 7th ed. , 2793-2802 (2009).</li><li>Anderson, N. W., Buchan, B. W., Ledeboer, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+BD+MAX+Enteric+Bacterial+Panel+to+Routine+Culture+Methods+for+Detection+of+Campylobacter,+Enterohemorrhagic+Escherichia+coli+(O157),+Salmonella,+and+Shigella+Isolates+in+Preserved+Stool+Specimens.">Comparison of the BD MAX Enteric Bacterial Panel to Routine Culture Methods for Detection of Campylobacter, Enterohemorrhagic Escherichia coli (O157), Salmonella, and Shigella Isolates in Preserved Stool Specimens.</a> Journal of Clinical Microbiology. 52 (4), 1222-1224 (2014).</li><li>Wasfy, M., Oyofo, B., Elgindy, A., Churilla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+preservation+media+for+storage+of+stool+samples.">Comparison of preservation media for storage of stool samples.</a> Journal of Clinical Microbiology. 33 (8), 2176-2178 (1995).</li><li>Bess&#232;de, E., Delcamp, A., Sifre, E., Buissonniere, A., M&#233;graud, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+Methods+for+Detection+of+Campylobacters+in+Stool+Samples+in+Comparison+to+Culture.">New Methods for Detection of Campylobacters in Stool Samples in Comparison to Culture.</a> Journal of Clinical Microbiology. 49 (3), 941-944 (2011).</li><li>Bess&#232;de, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+Diagnostic+Accuracy+of+Two+Immunochromatographic+Tests+Detecting+Campylobacter+in+Stools+and+Their+Role+in+Campylobacter+Infection+Diagnosis.">Evaluation of the Diagnostic Accuracy of Two Immunochromatographic Tests Detecting Campylobacter in Stools and Their Role in Campylobacter Infection Diagnosis.</a> Journal of Clinical Microbiology. 56 (4), (2018).</li><li>Shane, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infectious+Diseases+Society+of+America+Clinical+Practice+Guidelines+for+the+Diagnosis+and+Management+of+Infectious+Diarrhea.">Infectious Diseases Society of America Clinical Practice Guidelines for the Diagnosis and Management of Infectious Diarrhea.</a> Clinical Infectious Diseases. 65 (12), 1963-1973 (2017).</li><li>Toledo, Z., Simaluiza, R. J., Astudillo, X., Fern&#225;ndez, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occurrence+and+antimicrobial+susceptibility+of+thermophilic+Campylobacter+species+isolated+from+healthy+children+attending+municipal+care+centers+in+Southern+Ecuador.">Occurrence and antimicrobial susceptibility of thermophilic Campylobacter species isolated from healthy children attending municipal care centers in Southern Ecuador.</a> Revista do Instituto de Medicina Tropical de Sao Paulo. 59, 77-77 (2017).</li><li>Lee, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Symptomatic+and+asymptomatic+Campylobacter+infections+associated+with+reduced+growth+in+Peruvian+children.">Symptomatic and asymptomatic Campylobacter infections associated with reduced growth in Peruvian children.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 7 (1), 2036 (2013).</li></ol>

लेखक TECHLAB, इंक के कर्मचारी हैं जो इस लेख में एक तुलनात्मक के रूप में उपयोग की जाने वाली क्विक चेक ™ किट का उत्पादन करते हैं।

यहां वर्णित संस्कृति विधियों सरल, व्यापक रूप से इस्तेमाल की जाने वाली तकनीकों और अधिकांश प्रयोगशालाओं में उपलब्ध सामग्रियोंपर 10बनाई गई हैं। यह विश्लेषणात्मक और काल्पनिक नमूनों का संयोजन है जो मल संस्कृतियों के लिए चिकित्सकीय रूप से प्रासंगिक पता लगाने की सीमा की नई जानकारी प्रदान करता है। इसके अतिरिक्त, 5 अलग-अलग परखों के साथ संस्कृति परिणामों का न्यायनिर्णयन इस निष्कर्ष को मजबूत करता है कि कैम्पिलोबैक्टर मल संस्कृति रोगी नमूनों के एक महत्वपूर्ण हिस्से को गलत पहचानती है। ईआईए और आणविक परख नियंत्रण के रूप में उपयोगी होते हैं क्योंकि वे प्रत्येक एक अलग सिद्धांत (एंटीबॉडी बनाम डीएनए प्रवर्धन के साथ एंटीजन इंटरैक्शन) पर आधारित होते हैं और महत्वपूर्ण बात यह है कि बैक्टीरिया की व्यवहार्यता पर भरोसा नहीं करते हैं। ध्यान दें कि इन अध्ययनों के लिए उपयोग की जाने वाली ईआईए परख अच्छी तरह से मान्य है और इसे 4 आणविकपरीक्षणों 12के साथ पूरी तरह से सहमत दिखाया गया है।
Campylobacter spp की संस्कृति विशेष रूप से परेशानी है, संवेदनशीलता के साथ 60−76%19,20से सीमा की सूचना दी, और के रूप में यहां सच सकारात्मक नमूनों का पता लगाने में विफलता की अपनी ~30% की दर से स्पष्ट है । कार्मिक उम्मीद कर सकते हैं कि नियंत्रण ईआईए और आणविक परीक्षण अक्सर सकारात्मक परिणाम देंगे जब संस्कृति डेटा नकारात्मक होते हैं।
प्रोटोकॉल में सबसे महत्वपूर्ण कदम प्रतिस्पर्धी मल वनस्पतियों के बीच पिन-पॉइंट कॉलोनियों की पहचान है। यह असामान्य नहीं है, क्योंकि पता लगाने की सीमा के पास कमजोर होना, शून्य और गैर-शून्य कॉलोनी गिनती अनुमान (जैसे, 2, 0, 1, 0, 0, 0) का बारी-बारी से होना। यह पहचानना महत्वपूर्ण है कि संस्कृति थ्रेसहोल्ड सांद्रता की एक श्रृंखला होगी, न कि एक विशिष्ट सीएफयू/एमएल । फिर भी, संस्कृति का पता लगाने के लिए एक कम सीमा के रूप में ~ 1 x 106 CFU/mL मल का अनुमान अच्छी तरह से रिपोर्ट के साथ तुलना करता है कि संक्रमित मनुष्यों ने प्रति ग्राम मल21106 से 109कैम्पिलोबैक्टर बहाया। एंटीबायोटिक दवाओं या आगर प्लेटों में परिवर्तन और व्यक्तिगत मल नमूनों में अपरिहार्य विविधताओं निस्संदेह दहलीज मूल्यों को बदल देगा । इस प्रोटोकॉल से ग्रोथ मीडिया में सुधार संभव होना चाहिए ।
संस्कृति का पता लगाने के लिए एक सीमा पर यह पहली जानकारी नैदानिक परीक्षणों के लिए चिकित्सकीय रूप से प्रासंगिक थ्रेसहोल्ड सेट करना संभव बनाती है, और माइक्रोबायोलॉजिकल फाउंडेशन देती है जिसे कैम्पिलोबैक्टरद्वारा गैर-रोगसूचक गाड़ी22,23 के अअध्ययन मुद्दों का समाधान करने की आवश्यकता होती है, या यदि बैक्टीरियल लोड लक्षणों या गंभीर अगली कड़ी से संबंधित है।

संयुक्त राज्य अमेरिका रोग नियंत्रण केंद्र (सीडीसी) ने हाल ही में प्रकाशित किया है कि खाद्य जनित रोग सक्रिय निगरानी नेटवर्क (FoodNet) निगरानी कार्यक्रम २०१८१में प्रयोगशाला का निदान Campylobacter संक्रमण के ९,७२३ मामलों की सूचना दी । यह 2015−20171में कैम्पिलोबैक्टर मामले की रिपोर्ट में 12% की वृद्धि का प्रतिनिधित्व करता है। दुनिया भर में, Campylobacter spp. सबसे आम जीवाणु आंतों संक्रमण2में से एक हैं । फिर भी, हर साल होने वाली कैम्पिलोबैक्टरआधारित आंतों की बीमारियों की संख्या3को कम रिपोर्ट किए जाने की आशंका है । यह कम अनुमान अनुमान के रूप में उम्मीद के मुताबिक है क्योंकि ज्यादातर रोगियों को केवल मध्यम असुविधा और कोई चिकित्सा उपचार के साथ ठीक कर सकते हैं । हालांकि, अधिक गंभीर लक्षणों वाले रोगियों के लिए या जो गंभीर बीमारी के लिए उच्च जोखिम में हैं, और जो तब चिकित्सा देखभाल की तलाश करते हैं, मल संस्कृति यह आकलन करने के लिए सबसे आम तरीका है कि क्या कैम्पिलोबैक्टर रोगजनक है जो उनके संकट का कारण बन रहा है4।
Campylobacter spp.के लिए, मल संस्कृति विशेष रूप से परेशानी है । सबसे आम रोगजनक जीव, सी जेजुनी, सी कोलाई, सी अप्सलेन्सिस, और सी लारी, माइक्रोएयरोफिलिक5हैं। इसका मतलब यह है कि बैक्टीरिया यादृच्छिक, अज्ञात दरों पर एक बार हवा के संपर्क में मर जाएगा । नमूना संग्रह और संस्कृति सेटअप के बीच का समय इस प्रकार संस्कृति द्वारा व्यवहार्य कैम्पिलोबैक्टर spp का पता लगाने की क्षमता में एक अनियंत्रित चर बन जाता है ।
मल के नमूनों की प्रत्यक्ष संस्कृति के लिए, कैम्पिलोबैक्टर की धीमी वृद्धि भी एक समस्या है। कैम्पिलोबैक्टर उपनिवेश 48 एच के ऊष्मायन के बाद भी बहुत छोटे हैं और मल मैट्रिक्स में प्रतिस्पर्धी जीवों द्वारा आसानी से कवर किया जा सकता है। प्लेटें जिनमें एंटीबायोटिक्स होते हैं, जिनमें सी जेजुनी और सी कोलाई के अधिकांश उपभेदों का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है, क्योंकि एंटीबायोटिक्स कई (लेकिन सभी नहीं) के विकास को रोकते हैं, जो मल बैक्टीरिया प्रतिस्पर्धा करते हैं, जिससे कैम्पिलोबैक्टर कॉलोनियों के बेहतर दृश्य की अनुमति होती है6। हालांकि, सी लारी और सी अपसेलियांसिस जैसी अन्य कैम्पिलोबैक्टर प्रजातियां इनमें से कुछ एंटीबायोटिक दवाओं के प्रति संवेदनशील हैं, और या तो खराब हो जाती हैं या बिल्कुल नहीं। यह इन एंटीबायोटिक-संवेदनशील प्रजातियों7से कैम्पिलोबैक्टर संक्रमणों की कम रिपोर्टिंग में योगदान देता है ।
एक तीसरा कारण है कि कैम्पिलोबैक्टर के लिए एक संस्कृति गलत हो सकती है। बैक्टीरिया, जब जोर दिया, व्यवहार्य रह सकते हैं, लेकिन बन सकता है "गैर culturable"8। परिभाषा के अनुसार इसका मतलब है कि संस्कृति नमूने में मौजूद बैक्टीरिया का पता नहीं लगाएगी। कितनी बार होता है8ज्ञात नहीं है ।
संस्कृति के साथ इन संभावित मुद्दों को देखते हुए, हम कई तुलना संदर्भ तरीकों का इस्तेमाल किया ताकि दोषपूर्ण संस्कृति परिणाम एक भी तुलना परख गलत9दिखाई नहीं दिया । उपयोग की जाने वाली संस्कृति विधियों (उदाहरण के लिए, कैम्पिलोबैक्टर-चयनात्मकप्लेटें, परिवहन माध्यम, गैस पैदा करने वाले पाउच) को चुना गया क्योंकि उनका उपयोग स्टूल नमूना संस्कृति10के लिए नैदानिक प्रयोगशालाओं में व्यापक रूप से किया जाता है।
यहां वर्णित संस्कृति प्रोटोकॉल विकसित किए गए थे क्योंकि कैम्पिलोबैक्टर जेजुनी की सबसे कम संख्या है कि मानव मल में संस्कृति द्वारा पता लगाया जा सकता है पता नहीं था । हालांकि पोल्ट्री मल11में मौजूद कॉलोनी बनाने वाली इकाइयों (सीएफयू) की संख्या के लिए अनुमान प्रकाशित किए गए हैं, लेकिन इन परिणामों को मानव मल के बराबर नहीं किया जा सकता है, क्योंकि कैम्पिलोबैक्टर spp मुर्गियों में कॉममेंसल्स हैं, और दस्त का कारण नहीं बनते हैं। इस मौलिक जानकारी के लिए Campylobacter बैक्टीरिया की संख्या है कि मनुष्यों में आंत्रशोथ के लक्षण पैदा करेगा और उपभेदों या प्रजातियों के बीच उग्रता की तुलना स्थापित करने की जरूरत है ।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anaerobic 3.5L Jar</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>HP0031A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AnaeroGRO Campylobacter Selective Agar</td>
			<td>Hardy Diagnostics</td>
			<td>AG701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto Brain Heart Infusion</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>237500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto Protease Peptone</td>
			<td>Life Technologies Corp</td>
			<td>211684</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basic Fuchsin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>B12544</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BBL Trypticase Peptone</td>
			<td>Life Technologies Corp</td>
			<td>211921</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C. coli Type strain</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>33559</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C. jejuni Type strain</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>33560</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CampyGen gas generating system sachet</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>CN0025A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Campylobacter QUIK CHEK</td>
			<td>TechLab, Inc.</td>
			<td>T5047 / T31025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cary-Blair transport medium</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>23-005-47</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coli Roller Sterile plating beads</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>71013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dilution Buffer</td>
			<td>Anaerobe Systems</td>
			<td>AS-908</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Equitech-Bio, Inc</td>
			<td>SFBM30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bisulfite</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>243973</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P2256</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrophotometer cuvettes</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>9090-0460</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

culture methods to determine the limit of detection and survival in transport media of campylobacter jejuni in human fecal specimens

Campylobacterके निदान के लिए मानव मल से एक संस्कृति आधारित आंतों की बीमारी कई दिन लगते हैं, एक प्रतीक्षा है कि चिकित्सक और रोगी के धैर्य करों । एक संस्कृति नमूना हैंडलिंग के दौरान व्यवहार्यता के यादृच्छिक नुकसान, अन्य मल वनस्पतियों के अतिविकास और पारंपरिक मीडिया पर कई रोगजनक कैम्पिलोबैक्टर प्रजातियों के खराब विकास से झूठे नकारात्मक परिणामों से भी ग्रस्त है। इन समस्याओं रोगी उपचार पर नैदानिक निर्णयचकित कर सकते है और Campylobacter विकास और संक्रमण पर बुनियादी सवालों का जवाब देने से क्षेत्र सीमित है । हम एक ऐसी प्रक्रिया का वर्णन करते हैं जो जीवाणु संख्याओं की निचली सीमा का अनुमान लगाती है जिसे संस्कृति द्वारा पता लगाया जा सकता है और इस नाजुक जीव के परिवहन के लिए उपयोग किए जाने वाले मीडिया में सी जेजुनी के अस्तित्व की मात्रा निर्धारित करने के लिए एक विधि है। इस जानकारी को जानते हुए, नैदानिक परीक्षणों के लिए चिकित्सकीय रूप से प्रासंगिक पता लगाने की सीमा निर्धारित करना और गैर-रोगसूचक उपनिवेशीकरण प्रचलित है, यदि अन्य आंत्र रोगजनकों के साथ सह-संक्रमण आम है, या यदि बैक्टीरियल लोड लक्षणों या गंभीर अगली कड़ी से संबंधित है, तो इसका अध्ययन नहीं करना संभव हो जाता है। अध्ययन में १,५५२ संभावित रूप से एकत्र किए गए रोगी दस्त मल नमूनों का परीक्षण भी शामिल है जिन्हें शुरू में पारंपरिक संस्कृति द्वारा वर्गीकृत किया गया था और आगे एक नए एंजाइम इम्यूनोसे द्वारा परीक्षण किया गया था । सकारात्मक और विवेकी नमूनों को फिर सच्चे-सकारात्मक या सच्चे-नकारात्मक स्थिति को आवंटित करने के लिए चार आणविक तरीकों से जांच की गई । 5 गैर संस्कृति तरीकों सभी ४८ सकारात्मक और विचारशील नमूनों पर पूरा समझौता दिखाया, जबकि संस्कृति गलत पहचान 14 (28%) संस्कृति द्वारा गलत तरीके से पहचाने गए नमूनों में 13 झूठे नकारात्मक और 1 झूठे सकारात्मक नमूना शामिल थे । इस बुनियादी प्रोटोकॉल का उपयोग कई कैम्पिलोबैक्टर spp के साथ किया जा सकता है और कैम्पिलोबैक्टर बैक्टीरिया की संख्या की अनुमति देगा जो मनुष्यों में आंत्रशोथ के लक्षणों का उत्पादन करते हैं और व्यापकता दरों को अपडेट करने के लिए।

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Culture Methods to Determine the Limit of Detection and Survival in Transport Media of Campylobacter Jejuni in Human Fecal Specimens

हालांकि Campylobacter के लिए मल संस्कृति गलत है, यह अभी भी पहचान के लिए सोने के मानक माना जाता है । मानव मल में सी जेजुनी के परिवहन मीडिया में पता लगाने और अस्तित्व की सीमा निर्धारित करने के तरीकों का वर्णन किया जाता है और बेहतर सटीकता के साथ एक नए इम्यूनोसे के साथ तुलना की जाती है।

मानव मल नमूनों में कैम्पिलोबैक्टर जेजुनी के परिवहन मीडिया में पता लगाने और अस्तित्व की सीमा निर्धारित करने के लिए संस्कृति के तरीके

A culture from human stool for diagnosis of Campylobacter-based intestinal illness takes several days, a wait that taxes the fortitude of the physician ...

कैम्पिलोबैक्टर संस्कृति की कठिनाई ने मौलिक अध्ययनों को बाधित किया है जैसे कि बीमारी पैदा करने के लिए कुछ बैक्टीरिया की आवश्यकता कैसे है। यहां उपयोग किए जाने वाले ये संयुक्त विश्लेषणात्मक और काल्पनिक नमूने इस समस्या का समाधान कर सकते हैं। यह तकनीक नैदानिक प्रासंगिक रोगी लक्षणों को सकारात्मक मल संस्कृति परिणाम के साथ सहसंबद्ध होने की अनुमति देती है और पहली बार, बैक्टीरिया की वास्तविक संख्या।सीखना कितने बैक्टीरिया बीमारी के साथ सहसंबंधित निदान, पता लगाने के लिए एक महत्वपूर्ण लक्ष्य और उपभेदों या Campylobacter की प्रजातियों के बीच उग्रता की तुलना के लिए एक ठोस विधि प्रदान करेगा । Campylobacter संस्कृति सीधी है, लेकिन यह मात्रात्मक व्यवहार्यता बनाए रखने के लिए त्वरित और संगठित तैयारी की आवश्यकता है । एक प्लेट पर प्रतिस्पर्धी मल वनस्पतियों के बीच कैम्पिलोबैक्टर उपनिवेशों की पहचान करने के लिए काफी निर्णय की भी आवश्यकता है।एक C.jejuni या सी. कोलाई संस्कृति शुरू करने से पहले, दस्ताने, एक प्रयोगशाला कोट, और सुरक्षा चश्मा पर डाल दिया, और एक कीटाणुरहित laminar प्रवाह सुरक्षा हुड के भीतर एक डिस्पोजेबल सुरक्षात्मक चादर जगह है । बाँझ तकनीक लकीर का उपयोग करना हर हाइड्रेटेड या गल बैक्टीरियल स्टॉक एक Campylobacter विशिष्ट आगर प्लेट पर और एक एनारोबिक जार में ४८ घंटे के लिए ३७ डिग्री सेल्सियस पर थाली जगह एक माइक्रोएरोबिक वातावरण गैस पैदा sachet युक्त । 24 घंटे बाद, शिथिल भी शोरबा के एक कुप्पी को कवर करें और फ्लास्क को एक नए एनारोबिक जार में एक सैशे के साथ रखें जो रात भर इनक्यूबेशन 37 डिग्री सेल्सियस पर एक माइक्रोएरोबिक वातावरण का उत्पादन करेगा।अगली सुबह कैम्पिलोबैक्टर संस्कृति की स्टार्टर प्लेट को कुरेदने के लिए पूर्व-कम शोरबा और एक इनोक्यूलिंग लूप के तीन मिलीलीटर का उपयोग करें। घोल को एक बाँझ ट्यूब में स्थानांतरित करें, और स्क्रैप किए गए घोल के तीन मिलीलीटर के साथ पूर्व-कम शोरबा के शेष 97 मिलीलीटर को टीका करें। गैस सैशे के साथ जार में शोरबा रखें और 48 से 72 घंटे के लिए एक मिलाते हुए इनक्यूबेटर पर प्रति मिनट 37 डिग्री सेल्सियस और 115 क्रांतियों पर संस्कृति को इनक्यूबेट करें, जब तक कि संस्कृति 4 से अधिक के 600 नैनोमीटर पर ऑप्टिकल घनत्व तक न पहुंच जाए।इस शुद्ध स्टॉक संस्कृति में बैक्टीरिया की संख्या स्थापित करने के लिए कमजोर पड़ने के 900 माइक्रोलीटर में शोरबा के 100 माइक्रोलीटर की आठ 10 गुना कमजोर पड़ने श्रृंखला प्रदर्शन करते हैं। बाँझ चढ़ाना मोती का उपयोग करना, एक बार 10 के १०० माइक्रोलीटर फैला नकारात्मक पांचवें से 10 को डुप्लिकेट पूर्व कम Campylobacter विशिष्ट प्लेटों और एक दूसरे अवायवीय जार में प्लेटें रखने से पहले कमजोर पड़ने एकाग्रता के साथ लेबल प्लेटों को ३७ डिग्री सेल्सियस पर ४८ से ७२ घंटे के लिए पाउच पैदा करने से पहले । विकास अवधि के अंत में गिनती के लिए 30 से 300 कॉलोनियों के बीच के साथ प्लेटों का चयन करें।गणना के बाद गिनती का उपयोग करने के लिए सूत्र के अनुसार स्टॉक शोरबा संस्कृति के मिलीलीटर प्रति कॉलोनी बनाने इकाइयों का निर्धारण । यह महत्वपूर्ण है कि विश्लेषणात्मक कॉलोनी मायने रखता है सटीक के रूप में यह नुकीला मल पूल का उपयोग कर कदम के सभी underpins । प्रदर्शन के रूप में गिनती के लिए चढ़ाना के तुरंत बाद, शोरबा और Campylobacter नकारात्मक मल पूल के बराबर मात्रा मिश्रण और नकारात्मक मल पूल में नौ बाद में दो गुना कमजोर पड़ने, फीकल पूल के लिए कोई Campylobacter युक्त शोरबा के साथ एक नियंत्रण प्लेट जोड़ने में मदद करने के लिए गैर Campylobacter कालोनियों की पहचान ।डुप्लिकेट पूर्व-कम कैम्पिलोबैक्टर विशिष्ट आगर प्लेटों पर प्रत्येक कैम्पिलोबैक्टर मल कमजोर पड़ने के स्ट्रीक 10 माइक्रोलीटर और लगभग 48 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर गैस पैदा करने वाले सैशे के साथ एनारोबिक जार में प्लेटों को इनक्यूबेट करें। इनक्यूबेशन के अंत में नेत्रहीन शुद्ध Campylobacter संस्कृतियों से उन जैसी कालोनियों के लिए लकीर प्लेटों की जांच । इस बात की पुष्टि करने के लिए कि उपनिवेश वास्तव में कैम्पिलोबैक्टर ग्राम धुंधला के लिए कालोनियों की तरह कई कैम्पिलोबैक्टर का चयन करते हैं और ग्राम-नकारात्मक घुमावदार, सर्पिल, या सिगार के आकार के छोटे बैक्टीरिया की पहचान करने के लिए तेल विसर्जन लेंस का उपयोग करके हल्के माइक्रोस्कोपी द्वारा एक बारीकी से लकीर वाले क्षेत्र की कल्पना करते हैं।अन्य फीकल वनस्पतियों की पहचान करने में मदद करने के लिए जोड़ा Campylobacter के बिना एक नकारात्मक नियंत्रण प्लेट महत्वपूर्ण है। पिछले कमजोर पड़ने पर विचार करें जिसमें एक दृश्य कैम्पिलोबैक्टर जैसी ग्राम-नकारात्मक कॉलोनी संस्कृति का पता लगाने की सीमा है। और काल्पनिक नैदानिक मल नमूने में सकारात्मक कमजोर पड़ने के प्रति मिलीलीटर कॉलोनी बनाने इकाइयों की गणना करने के लिए सूत्र का उपयोग करें।परिवहन माध्यम में संग्रहीत कैम्पिलोबैक्टर की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए कैम्पिलोबैक्टर शोरबा संस्कृति के एक मिलीलीटर के साथ नकारात्मक मल पूल के एक मिलीलीटर के साथ मिश्रण करें और नकारात्मक मल पूल में 10 डुप्लिकेट दो गुना धारावाहिक कमजोर करने को तैयार करें। इसके अलावा कैरी-ब्लेयर माध्यम में एक अतिरिक्त एक से चार अनुपात में प्रत्येक कमजोर पड़ने को कमजोर करें और 20 कमजोर पड़ने वाली ट्यूबों और कैप ट्यूबों में कैरी-ब्लेयर माध्यम में एक नकारात्मक नियंत्रण को ९६ घंटे के लिए दो से आठ डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें । समय शून्य पर शुरू और हर 24 घंटे उसके बाद लकीर 10 माइक्रोलीटर एलिकोट्स प्रत्येक कमजोर पड़ने के Campylobacter चयनात्मक आगर प्लेटों पर और ४८ घंटे के लिए ३७ डिग्री सेल्सियस पर प्लेटों इनक्यूबेट ।के रूप में वहां रोगी के नमूनों से सटीक जीवाणु संख्या स्थापित करने के लिए कोई स्वतंत्र विधि है दो एक साथ माप एक शुद्ध जीवाणु स्टॉक के साथ किया जा सकता है । एक परीक्षण का उपयोग एक मल मैट्रिक्स में स्टॉक बैक्टीरिया के धारावाहिक कमजोर पड़ने से कैम्पिलोबैक्टर कॉलोनियों के दृश्य का पता लगाने के लिए किया जाता है, जो नैदानिक नमूनों का अनुकरण करता है। अन्य परीक्षण का विश्लेषणात्मक रूप से उपयोग किया जाता है, एक ही बैक्टीरिया स्टॉक संस्कृति में मौजूद मिलीलीटर प्रति कॉलोनी बनाने वाली इकाइयों को मात्रा निर्धारित करता है जो स्पाइकिंग के लिए उपयोग किया जाता है।सफलता के लिए एक प्रमुख पैरामीटर प्रतिस्पर्धी मल वनस्पतियों के बीच तुच्छ आकार की कालोनियों की पहचान कर रहा है, जैसा कि नुकीला मल संस्कृति के इस प्रतिनिधि प्लेट द्वारा सचित्र है। यहां, सात स्वतंत्र प्रयोगों से विशिष्ट डेटा देखा जा सकता है। बस मल संस्कृतियों के भीतर Campylobacter जैसा दिखता है कि कालोनियों की पहचान पर्याप्त नहीं है ।सभी उपनिवेशों को चने के दाग या अधिक उन्नत तरीकों के साथ पुष्टि की जानी चाहिए। हम एक एंजाइम इम्यूनोसे का उपयोग करते हैं जो सी.अप्सालिएसिस या सी.लारी जैसी असामान्य प्रजातियों का पता लगाने के लिए संस्कृति की तुलना में अधिक सटीक है, जो आगर युक्त मानक एंटीबायोटिक पर खराब हो जाता है। यह तकनीक कैम्पिलोबैक्टर की गैर-रोगसूचक गाड़ी जैसी चीजों का अध्ययन करने के लिए एक आवश्यक नींव देती है और क्या उच्च जीवाणु भार कैम्पिलोबैक्टर संक्रमण के गंभीर परिणामों के लिए एक रोगी को उच्च जोखिम में डाल देता है।हमेशा पीपे पहनें जब बैक्टीरिया के साथ काम कर रहे हैं, जो अक्सर संक्रामक होते हैं और खतरनाक हो सकते हैं, और नकारात्मक मल पूल के साथ जिसमें स्वस्थ दानदाताओं से एकत्र होने पर भी अज्ञात रोगजनक हो सकते हैं।

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Culture Methods to Determine the Limit of Detection and Survival in Transport Media of Campylobacter Jejuni in Human Fecal Specimens

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

चिपकने वाला टेप आधारित नमूनाकरण और प्रतिदीप्ति का संयोजन बगल में</emरैपिड पता लगाने के लिए> संकरण साल्मोनेला ताजा उपज पर

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Amplifying and Quantifying HIV-1 RNA in HIV Infected Individuals with Viral Loads Below the Limit of Detection by Standard Clinical Assays

Amplifying और मानक नैदानिक ​​Assays द्वारा जांच की सीमा से नीचे वायरल लोड के साथ एचआईवी संक्रमित व्यक्तियों में एचआईवी -1 शाही सेना बढ़ाता

Amplifying viral genes and quantifying HIV-1 RNA in HIV-1 infected individuals with viral loads below the limit of detection by standard assays (below ...

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

मात्रात्मक<em&gt; इन विट्रो में</emस्टेटिक शर्तों के तहत सक्रिय प्राथमिक मानव microvascular endothelial कोशिकाओं को न्युट्रोफिल आसंजन उपाय&gt; परख

The vascular  endothelium plays an integral part in the inflammatory response. During the  acute phase of inflammation, endothelial cells (ECs) are ...

Total Protein Extraction and 2-D Gel Electrophoresis Methods for Burkholderia Species

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कुल प्रोटीन निष्कर्षण और 2 डी जेल वैद्युतकणसंचलन तरीके के लिए<em&gt; Burkholderia</em&gt; प्रजाति

The investigation of  the intracellular protein levels of bacterial species is of importance to  understanding the pathogenic mechanisms of diseases ...

Methods to Inhibit Bacterial Pyomelanin Production and Determine the Corresponding Increase in Sensitivity to Oxidative Stress

तरीके बैक्टीरियल Pyomelanin उत्पादन रोकना और ऑक्सीडेटिव तनाव के प्रति संवेदनशीलता में इसी वृद्धि निर्धारित करने के लिए

Pyomelanin is an extracellular red-brown pigment produced by several bacterial and fungal species. This pigment is derived from the tyrosine catabolism ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

न्युट्रोफिल अलगाव और विश्लेषण करने के लिए चिकित्सीय एजेंट लिंफोमा सेल संवेदनशीलता में उनकी भूमिका का निर्धारण करने के लिए

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

Human Placental and Decidual Organ Cultures to Study Infections at the Maternal-fetal Interface

मानव अपरा और decidual अंग संस्कृतियों मातृ-भ्रूण इंटरफेस पर संक्रमण का अध्ययन करने के लिए

The placenta shows a large degree of interspecies anatomic variability. To best understand biology and pathophysiology of the human placenta, it is ...

High-throughput Detection of Respiratory Pathogens in Animal Specimens by Nanoscale PCR

नेनो पीसीआर द्वारा पशु नमूनों में श्वसन रोगज़नक़ों के उच्च throughput जांच

Nanoliter scale real-time PCR uses spatial multiplexing to allow multiple assays to be run in parallel on a single plate without the typical drawbacks of ...

Real-time Quaking-induced Conversion Assay for Detection of CWD Prions in Fecal Material

मल सामग्री में CWD Prions का पता लगाने के लिए वास्तविक समय तड़पनेवाला-प्रेरित रूपांतरण परख

The RT-QuIC technique is a sensitive in vitro cell-free prion amplification assay based mainly on the seeded misfolding and aggregation of recombinant ...

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

ओवेरेक्स्पेशन एंड हेरिंग ऑफ ह्यूमन<em&gt; सीआईएस</em&gt; -प्रेनिलट्रांसफ़्रेज़ इन<em&gt; एस्चेरिचिया कोली</em

Prenyltransferases (PT) are a group of enzymes that catalyze chain elongation of allylic diphosphate using isopentenyl diphosphate (IPP) via multiple ...