Name: optocardiography and electrophysiology studies of ex vivo langendorff-perfused hearts
Uploaded: 2019-11-07T14:00:00
Duration: 9 min 52 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Optocardiography and Electrophysiology Studies of Ex Vivo Langendorff-perfused Hearts at JoVE.com

Forfatterne anerkender taknemmeligt Dr. Matthew Kay for hjælpsom eksperimentel vejledning, og Manelle Ramadan og Muhaymin Chowdhury for teknisk assistance. Dette arbejde blev støttet af National Institutes of Health (R01HL139472 to NGP, R01 HL139712 to NI), children's Research Institute, children's national Heart Institute og Sheikh Zayed Institute for Pediatric Surgical innovation.

Forfatterne har intet at afsløre.

Selv om kardiovaskulære forskningsmodeller spænder fra cellulære til in vivo præparater, der er en iboende trade-off mellem klinisk relevans og eksperimentel nytte. På dette spektrum er det isolerede Langendorff-perfvant hjerte fortsat et nyttigt kompromis for studiet af hjertets fysiologi48. Hele hjerte modellen repræsenterer en højere grad af funktionel og strukturel integration end enkelt celle-eller vævs monolayers, men undgår også de forstyrrende kompleksiteter, der er forbundet med in vivo-modeller. En stor fordel ved Dual optisk kortlægning eksperimenter er, at den epicardial overflade af det isolerede hjerte kan observeres, og fluorescens billeddannelse af transmembran potentiale og calcium håndtering kan bruges til at overvåge hjertets fysiologi34.
Gnaver modeller er mest almindeligt anvendt til isolerede hjerte præparater i modsætning til større dyr, skyldes til dels de tilknyttede omkostninger ved at op-dimensionere alle de involverede elementer (f. eks opløsning volumen, perfusion kredsløb, mængde af farvestoffer og mekaniske uncouplers) sammen med større ustabilitet og tilbøjelighed til arytmias i større dyr10,36,49. En fordel ved at bruge gris hjerter er, at de ligner det menneskelige hjerte i struktur, størrelse og hastighed af sammentrækning, derfor mere præcist modellering hæodynamiske parametre som koronar blodgennemstrømning og hjertets udgang. På samme måde har mennesker og grise lignende calcium håndtering, elektrokardiogram intervaller37, og action potentielle morfologi, herunder de underliggende kanaler, som det repræsenterer12,50,51, 52. Denne protokol beskriver i detaljer de trin, for at skabe en reproducerbar store animalske model til omfattende karakterisere myokardial funktion. Samtidig billeddannelse af transmembran-spænding (RH237) og intracellulær calcium (Rhod2), der anvendes sammen med etablerede elektrofysiologiske protokoller, giver mulighed for at udpege mekanismer, der er ansvarlige for ændrede kardiale Funktion. Den beskrevne metodologi kan anvendes til prækliniske sikkerhedsundersøgelser, toksikologisk screening og undersøgelse af genetiske eller andre sygdoms patologier. Desuden kan den beskrevne metodologi ændres og tilpasses til brug sammen med andre hjerte modeller (f. eks. hunde, mennesker) afhængigt af det specifikke forsknings fokus53,54,55.
Der er et par kritiske ændringer at huske på, når overgangen fra en mindre gnaver model til en større svine model for isolerede, hele hjerte præparater. Under klargøring og opsætning anbefaler vi at tilføje albumin til perfusatet for at opretholde onkotisk tryk og reducere ødem (plus antifoam, hvis det er nødvendigt)56,57,58,59. Desuden, perfusat indeholder albumin kan også støtte i metaboliske undersøgelser, der også kræver fedtsyre tilskud til medierne60,61. I modsætning til gnaver hjerter behøver det større svine hjerte ikke at blive nedsænket i varme medier på grund af dets mindre overflade til volumen forhold og den øgede mængde varmede medier, der strømmer gennem krans karrene, som bedre bevarer temperaturen. Som tidligere nævnt placerede vi temperatur sonder inde i højre ventrikel og på den epicardial overflade af både højre og venstre ventrikler, der kun observerede små temperaturudsving på 1 − 2 °C på alle tre steder i hele studiet. Vigtigere, kan sådanne hurtigere strømningshastigheder også øge sandsynligheden for bobler og en potentiel emboli. For at omgå dette problem anbefaler vi at bruge en boble fælde med store bore slanger, der fører direkte ned til aorta kanylen. Tilsvarende fandt vi det mest nyttigt at have to personer, der arbejder i tandem til at kanyle aorta på et større (og tungere) hjerte; en person til at holde aorta åben med robuste produkter og en anden til at sikre aorta til atraumatiske ved hjælp af navle bånd. I den beskrevne metode konstaterede vi, at perfusion med kardioplegi og defibrillering var afgørende for hjerte genfinding, hvilket er i modstrid med gnaver hjerte præparater. I vores erfaring, genoptog kun et par fjernede hjerter normal sinus-drevet aktivitet uden kardioversion.
For at forbedre optiske billedbehandlings slutpunkter begrænsede en hængende hjerte forberedelse effekten af blænding, der kan opstå med et nedsænket hjerte. Desuden, den hængende hjerte undgår også enhver kompression eller kompromis af krans karrene på det bageste aspekt af hjertet, der kan opstå, når æglæggende hjertet ned horisontalt for vertikal billeddannelse. Vi fandt også, at lastning fluorescerende farvestoffer efter boble fælde (tæt på aorta-kanyle) stærkt forbedret vævs farvning og optiske signaler. Endelig, at forbedre hjertets Elektrofysiologi endepunkter, brugen af en større koaksial stimulation elektrode lettet vellykket atrieflimning. Selv om vi beskriver brugen af elektrokardiogrammer til at identificere opsamling og tab af Capture til forskellige EP parametre, kan intrakardiel katetre eller bipolar optagelse elektroder også anvendes.
Vores undersøgelse var fokuseret på at udvikle en metode til dual optisk kortlægning og kardiel elektrofysiologisk vurdering i en isoleret, intakt svine hjerte model. På grund af ligheder med den unge menneskelige hjerte, svine hjertet er stadig en populær model for undersøgelser fokuseret på pædiatrisk kardiologi eller medfødte hjertefejl. Vigtigere, kan den beskrevne tilgang tilpasses til brug med større størrelse voksne hjerter og/eller forskellige arter af interesse. Faktisk kan andre laboratorier finde, at brugen af hunde eller menneskelige hjerter (enten donor eller syge) er mere gældende for deres specifikke forskning fokus53,54,55. En anden potentiel begrænsning til denne undersøgelse er brugen af en mekanisk af at reducere bevægelse artefakt under billeddannelse. Blebbistatin er blevet afkobler af valg i hjertets billedbehandlings applikationer på grund af dets minimale effekt på EKG-parametre, aktivering og refraktære perioder41,62,63. BDM er et billigere valg, som kan være særlig vigtigt i store dyreforsøg, der kræver større mængder af perfusat og mekanisk afkobling, men det vides at have en større indvirkning på kalium-og calcium strømme, der kan ændre aktionspotentialet morfologi64,65,66,67. Hvis BDM anvendes, Bemærk, at APD forkortelse øger hjertets sårbarhed over for chok-induceret rytmeforstyrrelser68. Omvendt er den primære begrænsning for brug af blebbistatin dens lysfølsomhed og fototoksicitet, selv om alternative formuleringer, der har reduceret disse virkninger69,70,71. Endelig anvender den beskrevne metode et enkelt kamerasystem til dobbelt optisk kortlægning eksperimenter, men det er vigtigt at bemærke, at forskningsundersøgelser fokuseret på ventrikelflimren og/eller sporing af elektriske bølger på tværs af epicardial overflade ville være nødvendigt at ændre denne tilgang til at omfatte tredimensionel panoramabilleder, som beskrevet af andre15,19,72,73,74,75 .

Hjerte-kar-sygdom er en førende årsag til sygdom og død på verdensplan. Som sådan er en primær forskning fokus på at optimere metoder, der kan bruges til at studere normal hjertets fysiologi og underliggende mekanismer, der kan bidrage til sygelighed og dødelighed hos mennesker. Grundlæggende kardiovaskulær forskning har traditionelt været baseret på små dyremodeller, herunder gnavere og kaniner1,2,3, pågrund af tilgængeligheden af genetisk modificerede arter4,5, lavere omkostninger, mindre eksperimenterende fodspor og højere gennemløb. Brugen af en svine model har imidlertid potentiale til at give mere klinisk relevante data6. Faktisk, tidligere undersøgelser har dokumenteret ligheder i hjertets Elektrofysiologi (EP) mellem mennesker og grise, herunder lignende ion strømme7, action potentiel figur8, og respons på farmakologiske test9. Desuden, svine hjertet har kontraktile og afslapning kinetik, der er mere sammenlignelige med mennesker end enten gnavere eller kaniner10. Sammenlignet med en hunde model, den Porcin koronar anatomi mere ligner en menneskelig hjerte11,12 og er den model af valg for undersøgelser fokuseret på hjerte udvikling, pædiatrisk kardiologi og/eller medfødte hjertefejl 13. selv om der er forskelle mellem gris og menneskelige hjerte8, disse ligheder gør svin hjerte en værdifuld model for hjerte-kar-forskning14.
Retrograd perfusion af hjertet er blevet en standardprotokol for at studere hjertets dynamik ex vivo15 siden først etableret af Oskar Langendorff16. Derfor kan Langendorff-perfusion anvendes til at støtte et isoleret, intakt hjerte uden autonome påvirkninger. Denne model er et nyttigt værktøj til direkte at sammenligne hjertets Elektrofysiologi og kontraktilitet mellem sunde og ikke-sunde hjerter. Da hjertets dynamik både er timeligt og rumligt komplekst, kan en mindre ændring i én region dramatisk påvirke hele hjertets evne til at arbejde som syncytium17. Derfor er høj spatiotemporale billeddannelse af parameter følsomme farvestoffer et nyttigt værktøj til overvågning af hjertets funktion på tværs af hjertets overflade18,19. Faktisk giver simultan dobbelt billeddannelse af spænding og calcium-følsomme fluorescerende sonder mulighed for vurdering af elektrisk aktivitet, calcium håndtering og excitation-sammentrækning kobling på vævsniveau20,21, 22,23,24,25,26,27,28. Langendorff-perfusion og/eller optisk kortlægnings teknik har tidligere været anvendt til at dokumentere nedgangen i hjertets ydeevne på grund af aldring eller genetiske mutationer og til at vurdere sikkerheden af farmakologiske agenser eller miljø eksponeringer29 ,30,31,32,33.
I de kliniske omgivelser, en invasiv kardiel Elektrofysiologi undersøgelse bruges ofte til at undersøge hjerterytmeforstyrrelser, identificere patologier, og lokalisere mulige behandlingsmuligheder. På samme måde beskriver vi en EP-protokol, der kan bruges til at vurdere sinus node funktion, måle atrioventrikulær ledning, og identificere refraktoriness af myokardievæv. Den beskrevne EP-undersøgelse kan udføres i forbindelse med optisk kortlægning, eller optokardiografi34, til fuldt ud at karakterisere hjertets fysiologi i isolerede hjerter. I den beskrevne protokol blev der udført en høj spatiotemporale opløsning fluorescens Imaging med en kombination af spænding (RH237) og calcium (rhod-2AM) farvestoffer i en dual emission opsætning. Derudover blev kardielle Elektrofysiologi parametre overvåget under både sinusrytme og som respons på programmeret elektrisk stimulation.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>(-)-Blebbistatin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B0560-5MG</td>
			<td>Mechanical Uncoupler</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,3-Butanedione monoxime (BDM)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B0753-100G</td>
			<td>Mechanical Uncoupler</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td>A9418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analog signal interface</td>
			<td>emka Technologies</td>
			<td>itf16USB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antifoam</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A5758-250ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antifoam Y-30 Emulsion</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td>A5758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aortic cannula, 5/16&#8221;</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>45509-60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bubble trap</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS430641U-100EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ</td>
			<td>C77-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera, sCMOS</td>
			<td>Andor Technology</td>
			<td>Zyla 4.2 PLUS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coaxial stimulation electrode (atria)</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>73-0219</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Defibrillator</td>
			<td>Zoll</td>
			<td>M Series</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichroic mirror</td>
			<td>Chroma Technology</td>
			<td>T660lpxrxt-UF2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Differential amplifier</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>DP-304A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Emission filter, calcium</td>
			<td>Chroma Technology</td>
			<td>ET585/40m</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Emission filter, voltage</td>
			<td>Chroma Technology</td>
			<td>ET710lp</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EP stimulator (Bloom)</td>
			<td>Fisher Medical</td>
			<td>DTU-215B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excitation filter</td>
			<td>Chroma Technology</td>
			<td>CT510/60bp</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excitation lights</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>SOLIS-525C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>8147K52</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter cartridge, polypropylene</td>
			<td>Pentair</td>
			<td>PD-5-934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter housing</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>9979T21</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow transducer</td>
			<td>Transonic</td>
			<td>ME6PXN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td>158968</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating coil</td>
			<td>Radnoti</td>
			<td>158821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemofilter</td>
			<td>Hemocor</td>
			<td>HPH 400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostatic Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501326</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image Splitter</td>
			<td>Cairn Research</td>
			<td>OptoSplit II</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td>P3911</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ</td>
			<td>423-316</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large-bore tubing, I.D. 3/8&#8221;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-169-7H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lens 50 mm, 0.95 f-stop</td>
			<td>Navitar</td>
			<td>DO-5095</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metamorph</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td></td>
			<td>Image Alignment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td>M-7506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mucasol detergent</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z637181-2L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na Pyruvate</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td>P2256</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td>S-3014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ</td>
			<td>S-233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Electrodes 29 gauge, 2 mm</td>
			<td>AD Instruments Inc.</td>
			<td>MLA1204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Noise eliminator</td>
			<td>Quest Scientific</td>
			<td>Humbug</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion pump</td>
			<td>PolyStan</td>
			<td>A/S 1481</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pressure transducer</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>BLPR2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reservoir, 2 liter</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>UX-34541-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RH237</td>
			<td>AAT Bioquest Inc.</td>
			<td>21480</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rhod2-AM</td>
			<td>AAT Bioquest Inc.</td>
			<td>21062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stimulation electrode (ventricle)</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>73-0160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Suture</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>890186</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transducer amplifier</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>TBM4M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing flow console</td>
			<td>Transonic</td>
			<td>TS410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Umbilical tape</td>
			<td>Jorvet</td>
			<td>J0025UA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath/circulator</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89400-970</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Tools</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandage shears</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-8448</td>
			<td>Lister Bandage Scissors, Angled, Blunt/Blunt, 42.0mm blade length, 17.0 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrocautery</td>
			<td>Dalwha Corp. Ltd.</td>
			<td>BA2ALD001</td>
			<td>Model: 200 Basic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostat</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7476</td>
			<td>St Vincent Tube Occluding Forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostatic forceps</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-8960</td>
			<td>Hartmann Hemostatic Forceps, Curved, Serrated 2.2 mm tip width, 9.5 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostats</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-8985</td>
			<td>Halstead-Mosquito Hemostatic Forceps Curved, Serrated, 2mm tip 14cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayo scissors</td>
			<td>WPI</td>
			<td>501749</td>
			<td>14.5 cm, Straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum scissors</td>
			<td>WPI</td>
			<td>501747</td>
			<td>11.5 cm, Straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mosquito forceps</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-8980</td>
			<td>Halstead-Mosquito Hemostatic Forceps Straight, Smooth, 2mm tip width 12cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-8828</td>
			<td>Webster Needle Holders, Straight, Smooth,13.0 cm overall length</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pediatric cross clamp</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7660</td>
			<td>Cooley-Derra Clamp 6.25&#34; 5mm Calibrations</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Right angle forceps</td>
			<td>WPI</td>
			<td>501240</td>
			<td>Baby Mixter Hemostatic Forceps, 14cm, Right Angle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>549-4</td>
			<td>Scalpel Handle No. 4, 13.7cm Stainless Steel and 10 No. 22 Blades</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scissors</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-8380</td>
			<td>Operating Scissors, Straight, Blunt/Blunt, 42mm blade,12cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight Serrated forceps</td>
			<td>WPI</td>
			<td>500363</td>
			<td>Dressing Forceps 15.5cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Towel clamp</td>
			<td>WPI</td>
			<td>501700</td>
			<td>Backhaus Towel Clamp, 13cm, Curved, Locking handle, SS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weitlaner retractor</td>
			<td>WPI</td>
			<td>501314</td>
			<td>Weitlaner Retractor, Self-Retaining, 10.2cm, 2x3 Sharp Prongs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-0 prolene suture</td>
			<td>Various vendors</td>
			<td>Various vendors</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vessel loop</td>
			<td>Aspen surgical</td>
			<td>011001PBX</td>
			<td>Sterion&#174; Vessel Loop, 0.8 x 406mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cardioplegia (Plegisol)</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>00409-7969-05</td>
			<td>Plegisol; St Thomas crystalloid cardioplegia solution 20ml/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Various vendors</td>
			<td>Various vendors</td>
			<td>300 U/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe and Needle</td>
			<td>Various vendors</td>
			<td>Various vendors</td>
			<td>60mL &#38; 18G respectively</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Umbilical tape</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>U12T</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

optocardiography and electrophysiology studies of ex vivo langendorff-perfused hearts

Små dyremodeller anvendes oftest i hjerte-kar-forskning på grund af tilgængeligheden af genetisk modificerede arter og lavere omkostninger i forhold til større dyr. Endnu, større pattedyr er bedre egnet til translationelle forskningsspørgsmål i forbindelse med normal hjertets fysiologi, Patofysiologi, og præklinisk testning af terapeutiske midler. For at overvinde de tekniske barrierer, der er forbundet med at ansætte en større dyremodel inden for Kardiologisk forskning, beskriver vi en tilgang til måling af fysiologiske parametre i et isoleret, Langendorff-perfektbrugt Grisling hjerte. Denne fremgangsmåde kombinerer to kraftfulde eksperimentelle værktøjer til at evaluere tilstanden af hjertet: Elektrofysiologi (EP) undersøgelse og samtidig optisk kortlægning af transmembran spænding og intracellulære calcium ved hjælp af parameter følsomme farvestoffer (RH237, Rhod2-am). De beskrevne metoder egner sig godt til translationelle undersøgelser, der undersøger det kardiale ledningssystem, ændringer i aktionspotentialet morfologi, calcium håndtering, excitation-sammentrækning kobling og forekomsten af hjerte vekslere eller Arytmier.

Figur 1a viser et diagram over det isolerede hjerte perfusions system, som omfatter slange kredsløbet, pumpen, filteret, oxygenatoren, reservoirer og varmeelementer. Placeringen af EKG (lead II-konfiguration) og pacing-elektroder vises i figur 1b, og billedbehandlings opsætningen er afbildet i figur 1c. En skematisk af de optiske komponenter og lysstier er vist i figur 1d.
Eksperimentelle undersøgelser blev udført på intakt, hele hjerter isoleret fra unge Yorkshire grise (14 − 42 dage, n = 18), der varierede i størrelse fra 2.5 − 10,5 kg legemsvægt og 18 − 137 g hjertevægt (figur 2a). Efter overførsel af det isolerede hjerte til et Langendorff-system (37 °C) stabiliseres hjertefrekvensen til 70 ± 4,5 BPM (gennemsnit ± SEM) inden for ~ 10 min af defibrillationen og forblev konstant under hele studiets varighed (figur 2b). En gennemsnitlig strømningshastighed på 184 ± 17 mL/min (gennemsnit ± SEM) blev målt, hvilket faldt til 70 ± 7,5 mL/min efter perfusing med varmede medier indeholdende en mekanisk afkobling (figur 2c).
Bly II-Ecg'erne blev registreret i hele studiets varighed under sinus rytmen (figur 3a) eller som reaktion på ekstern pacing (figur 3B-E) for at kvantificere elektrofysiologiske parametre. For ep's vurdering blev dynamisk pacing (S1 − S1) anvendt på det højre atrium til at lokalisere wbcl og snrt (restitutionstiden efter S1 − S1 påbegyndes, figur 3c), hvor wbcl blev betegnet som den korteste PCL, der indledte atrieflimren til ventrikulær ledning. En S1 − S2 pacing-protokol blev implementeret ved hjælp af en bipolar stimulus-elektrode på venstre ventrikel for at identificere det korteste koblings interval, der initierede ventrikulær depolarisering, hvorved man pegede VERP (figur 3D). Alternativt anvendes en S1-S2 atrieflimren pacing-protokol til at lokalisere avnerp (S1 − S2), som vist i figur 3e. Repræsentative eksempler på svine hjertets Elektrofysiologi parametre er i tæt overensstemmelse med dem, der tidligere blev offentliggjort37.
Der blev udført optiske kortlægnings eksperimenter under sinusrytme, spontan ventrikelflimren (figur 4) eller under dynamisk pacing (S1 − S1) af venstre VENTRIKEL (LV) for at generere elektriske og calcium restitutions kurver afbildet i Figur 5. Repræsentative billeder af et farvestof-lastet Grisling hjerte er vist i figur 4 med tilsvarende optisk action potentialer (VM) og calcium (ca) transienter indsamlet fra to regioner af interesse på den epicardial overflade (højre ventrikel [RV] = blå, LV = rød) . Ubehandlede signaler vises under sinus rytmen og under ventrikelflimren. Som tidligere nævnt blev der også anvendt dynamisk epicardial pacing (S1 − S1) under eksperimenter med optisk kortlægning for at normalisere enhver lille forskel i den iboende puls (figur 5A-E). RAW-signaler vises (RV = blå, LV = rød), som blev brugt til at skildre aktionspotentialet — calcium transitorisk koblings tidspunkt (figur 5c), aktiverings-og varigheds tidspunkt (figur 5D), elektrisk og calcium restitution (figur 5e). For tykke Myokardie præparater, rumlig filtrering med kerne størrelse ~ 3 mm x 3 mm er passende for epicardial aktionspotentiale eller calcium forbigående analyse19,47. Derfor er billeder med høj rumlig opløsning (i den beskrevne opsætning 1240 x 1024 i alt eller 620 x 512 pr. kanal, 6,5 μm pixelstørrelse) ofte rumligt bineret under eller efter erhvervelse (figur 5c). Billedbehandling kan udføres for at generere aktiverings-og repolariserings kort ved hjælp af brugerdefinerede algoritmer23,33,43,45 (figur 3D), med aktiveringstiden for hver pixel på hjertet blev defineret som det maksimale derivat af aktionspotentialet eller calcium-forbigående upstroke.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60472/60472fig01.jpg"> Figur 1: eksperimentel opsætning. A) diagram over det isolerede hjerte perfusions system pilene angiver retningen af flowet. B) et kanyle hjerte vises med elektrodeplacering. RA = højre Atria, RV = højre ventrikel, LV = venstre ventrikel, EKG = bly II elektrokardiogram. C) billedbehandlings platformen i umiddelbar nærhed af hjertevævet. D) emission af hver supplerende sonde (spænding, calcium) adskilles ved bølgelængde ved hjælp af en billed delings anordning med passende emissions filtre og koldtlysreflektorlamper-spejl. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60472/60472fig01large.jpg" target="_blank">Venligst klik her for at se en større version af dette tal.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60472/60472fig02.jpg"> Figur 2: måling af hjertevægt, hastighed og flow. (A) hjertevægt til legemsvægt forhold for hver pattegris, der anvendes i studiet (n = 18). B) hjertefrekvensen målt ~ 10 min efter defibrillering og igen ved studiets afslutning (ca. 1 time). C) koronar strømmen falder bundfaldet efter perfusion med en mekanisk af (+ BDM) på grund af nedsat iltforbrug. Skala søjler repræsenterer Mean ± SEM. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60472/60472fig02large.jpg" target="_blank">Klik her for at se en større version af dette tal.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60472/60472fig03.jpg"> Figur 3: repræsentative eksempler på optagelser af bly II-elektrokardiogram, som er indsamlet under sinusrytme eller som reaktion på ekstern pacing. (A) normal sinusrytme. B) eksempel på epicardial-pacing med en cyklus længde på 400 MS (S1 − S1), som blev anvendt til billeddiagnostiske forsøg. C) Top: atrieflimning for at identificere WBCL vellykket opsamling observeres ved S1 = 250 MS, hvor atrieflimren til ventrikulær ledning observeres. Bemærk, at atrieflimren pacing kan bruges til at bestemme snrt (tid til sinus node udledning, efter påbegyndelse af ekstern pacing). Bund: da S1-cyklussens længde er faldet til 205 MS, mislykkes lednings ledningen til ventriklen. (D) Top: epicardial pacing (S1 − S2) for at identificere verp; vellykket opsamling observeres ved S1 = 450 MS, S2 = 300 MS. bottom: som S2 cyklus længde er faldet til 250 MS, ventrikel vævet undlader at fange. E) atrieflimning (S1 − S2) for at identificere AVNERP. Top: vellykket opsamling observeres ved S1 = 450 MS, S2 = 200 MS. bottom: som S2 cyklus længde er faldet til 199 MS, ledning til ventriklen mislykkes. Blå pile betegner pacing pigge, røde pile betegner Capture (' C ') eller ingen Capture (' NC '). S1 − S1 = dynamisk pacing, S1 − S2 = extrastimulus pacing. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60472/60472fig03large.jpg" target="_blank">Venligst klik her for at se en større version af dette tal.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60472/60472fig04.jpg"> Figur 4: optiske data under sinusrytme og ventrikelflimren. Venstre: repræsentative billeder af et farvestof-lastet gris hjerte (VM = spænding, RH237; Ca = calcium, Rhod2), forreste visning. Rumligt filtreret transmembran spænding og intracellulære calcium fluorescerende signaler fra en gris hjerte under sinusrytme (Center). Spændings-og calcium signaler under ventrikelflimren (højre). Signal område størrelser (15 x 15 pixels = 2,4 x 2,4 mm2, 30 x 30 = 4,8 x 4,8 mm2 kerne størrelse) repræsenteret som røde og blå firkanter. Enheder = ΔF/F. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60472/60472fig04large.jpg" target="_blank">Klik her for at se en større version af dette tal.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60472/60472fig05.jpg"> Figur 5: optiske data fra Langendorff-perfbrugte svine hjerter. Uforarbejdet,rumligtfiltreret (A) transmembran spænding og (B) intracellulære calcium fluorescens signaler fra højre og venstre ventrikler under elektrisk pacing ved spidsen. Ufiltrerede, rumligt gennemsnitlige signaler skildrer optiske aktionspotentialer og calcium transienter fra regioner af interesse (signalenheder er ΔF/F). (C) en overlejring af normaliserede transienter illustrerer aktions potentiel-calcium transitorisk koblings tidspunkt (lavpasfilter filtreret ved 75 Hz). (D) behandling af signaler på tværs af epicardial overflade for at generere isokronale kort over tidsmæssige parametre, herunder aktiveringstidspunkt (tact) og 80% repolariserings tidspunkt. E) elektriske og calcium forbigående restitutions kurver genereret ved flere frekvenser (venstre) med statistisk analyse (højre) for at illustrere længere repolariserings tidspunkt ved langsommere pacing-cyklus længder. Skala stænger = gennemsnit ± SEM. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60472/60472fig05large.jpg" target="_blank">Klik her for at se en større version af dette tal.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Kemiske</td>
			<td>Formel</td>
			<td>Molekylvægt</td>
			<td>g/L</td>
		</tr>
<tr>
<td>Natriumchlorid</td>
			<td>Nacl</td>
			<td>58,44</td>
			<td>5,26</td>
		</tr>
<tr>
<td>Natriumgluconat</td>
			<td>C6H11Nao7
</td>
			<td>218,14</td>
			<td>5,02</td>
		</tr>
<tr>
<td>Natriumacetat-trihydrat</td>
			<td>C2H3Nao2• 3h2O</td>
			<td>136,08</td>
			<td>3,68</td>
		</tr>
<tr>
<td>Kaliumchlorid</td>
			<td>KCl</td>
			<td>74,55</td>
			<td>0,63</td>
		</tr>
<tr>
<td>Magnesium klorid (vandfri)</td>
			<td>MgCl2
</td>
			<td>95,21</td>
			<td>0,1405</td>
		</tr>
<tr>
<td>8,4% natriumbicarbonat</td>
			<td>NaHCO3
</td>
			<td>84,01</td>
			<td>13</td>
		</tr>
<tr>
<td>Mannitol</td>
			<td>C6H14O6
</td>
			<td>182,17</td>
			<td>16,3</td>
		</tr>
<tr>
<td>Magnesium sulfat</td>
			<td>MgSO4
</td>
			<td>120,37</td>
			<td>4</td>
		</tr>
<tr>
<td>Ph</td>
			<td>7,4</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>Osmolaritet (mOsmol/L)</td>
			<td>294</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
</tbody></table>Tabel 1: modificeret del Nido s cardioplegi opskrift.

Watch this Scientific Journal Video about Optocardiography and Electrophysiology Studies of Ex Vivo Langendorff-perfused Hearts at JoVE.com

Optocardiography and Electrophysiology Studies of Ex Vivo Langendorff-perfused Hearts

Formålet med denne undersøgelse var at etablere en metode til undersøgelse af hjertets dynamik ved hjælp af en translationel dyremodel. Den beskrevne eksperimentelle tilgang inkorporerer Dual-emission optocardiography i forbindelse med en elektrofysiologisk undersøgelse for at vurdere elektrisk aktivitet i en isoleret, intakt svine hjerte model.

Optokardiografi og Elektrofysiologi studier af ex vivo Langendorff-perfbrugte hjerter

Small animal models are most commonly used in cardiovascular research due to the availability of genetically modified species and lower cost compared to ...

Hjerte-kar-funktionsfejl er den hyppigste dødsårsag på verdensplan. Den isolerede hjertemodel, som vi præsenterer her, kan tjene som et eksperimentelt vindue ind i menneskets hjertedynamik. Denne tilgang kombinerer en klassisk elektrofysiologi undersøgelse med den samtidige optiske kortlægning af transmembran spænding og intercellulær calcium til at vurdere tilstanden af hjertet.Denne metode kan anvendes til sygdomsmodellering, farmakologi og toksikologiundersøgelser. For eksempel er et af vores fokusområder at karakterisere glasstørrelsesglassenes indvirkning på hjerteelektrofysiologien. Selv om denne metode er mere teknisk udfordrende end en protokol, der udnytter en mindre dyremodel, samlet, protokollen er relativt ligetil, når alle brikkerne er på plads.Det er svært at beskrive alle komponenterne i et billedbehandlings- og perfusionssystem efter tekst, så visuel demonstration af denne proces vil hjælpe med at gengive en vellykket forberedelse. Efter isolering af hjertet med den opstigende aorta intakt, kaste det punkterede organ i iskold kardioplegi og bruge et par hæmostater til greb væggen af aorta. Slip fartøjet på en ribbet kanyle fastgjort til slanger forbundet til en liter iskold kardioplegi medium suspenderet ca 95 centimeter over hjertet.Lad væsken fylde aortaen, indtil fartøjet flyder over for at forhindre, at bobler kommer ind i vaskulaturen, og brug navlestrengstape til at fastgøre aortaen til kanylen. Bind hemostaterne til at bære vægten af hjertet, da det hænger fra kanylen for yderligere at sikre vævet og tillade det kolde medium til retrograd gennemgafle hjertet ved et konstant tryk på 70 millimeter kviksølv ved tyngdekraften. Overfør høre til 37 grader Celsius Langendorff system uden at indføre luft i kanylen.Og lad den normale sinus rytme til at skylle vaskulaturen af eventuelle resterende blod og kardioplegi. I tilfælde af shockable arytmier, placere eksterne padler på toppen og bunden af hjertet til at defibrillere orglet, levere et enkelt chok på fem joule og stigende i fem joule intervaller indtil 50 joule, kardioversion, eller unshockable rytme opnås. Derefter skylle hjertet med mindst én liter modificeret Krebs-Henseleit medium uden recirkulation for at fjerne eventuelle resterende blod og kardioplegi.Når mediet løber klart gennem hjertet, skal du lukke den cirkulerende løkke for at reklassere perfusaten. For at optage en standard føre til EKG i løbet af undersøgelsen, vedhæfte en 29-gauge nål elektrode til ventrikel epicardium nær spidsen og vedhæfte en anden elektrode i højre atrium. Tilslut de positive og negative input fra en differential bioamplater til toppen og højre atrium, henholdsvis, og vedhæfte en bipolar stimulus elektrode på højre atrium og en anden bipolar stimulus elektrode til den laterale venstre ventrikel til pacing formål.Tempo hjertet ved hjælp af en elektrofysiologi stimulator, med den oprindelige strøm sat til det dobbelte af diastolisk tærskel og en et-millisekund puls bredde. For at identificere pacing tærskel, anvende en serie på en til to-milliamp stimulus impulser med en et-millisekund puls bredde på definerede pacing cyklus længder for at sikre en konsekvent stimulus reaktion. Udfør ekstra stimulus pacing ved hjælp af enten en S1, S1 eller S1, S2 pacing tog.Reducer S2-tempoet i længdevis med 10 millisekunder, indtil tempoet ikke fanger. Derefter trin op til den næstsidste pacing cyklus længde og mindske cyklus længder i et millisekund intervaller for at bestemme den mest præcise pacing cyklus længde før tab af fangst. For at etablere ventrikel effektiv ildfast periode, bruge stimulus elektrode på sidebladet venstre ventrikel til at identificere den korteste S1, S2 interval, hvor S2 for tidligt slå indleder ventrikeldepolarisering.For at definere Wenckebach cyklus længde, bruge stimulus elektrode til højre atrium at finde den korteste S1, S1 interval, hvor en en-til-en atrioventricular ledning formerer via den normale ledningsvej. For at definere sinus node restitutionstid, skal du bruge stimulus elektrode til højre atrium til at anvende en S1, S1 pacing tog og måle tidsforsinkelse mellem den sidste impuls i pacing toget og inddrivelse af spontane sinoatrial node medieret aktivitet. For at etablere atrioventrikulær node effektiv ildfast periode, skal du bruge stimulus elektroden til højre atrium.Find det korteste S1, S2 koblingsinterval, hvor den for tidlige atriestimulering efterfølges af et Hisbundle-potentiale, der fremkalder et QRS-kompleks, der betyder ventrikulær depolarisering. Til optisk kortlægning af transmembranspændingen og intracellulært calcium tilsættes først langsomt op til fem milliliter frisklavet spændingsfarvestof proksimalt til aortadylen efterfulgt af langsom tilsætning af frisklavet calciumfarvestof. Placer derefter billedhardwaren for at fokusere på et passende synsfelt og slutte kameraet til en arbejdsstation.Ansk af dem ved hjælp af den valgte software med en eksponeringstid på 5 til to millisekunder. Og udføre et billede justering ved hjælp af software, der kan opdele og overlejre de ønskede områder og vise en gråtone subtraktion eller pseudo-farve tilføjelse til enhver fremhæve forskydninger. Mens den omgivende belysning er minimeret, skal du teste LED-lamperne for at sikre en ensartet og maksimal episardiel belysning, som bestemmes af sensorens brønddybde.Derefter billede myokardiet under sinus rytme, ventrikelflimmer, eller dynamisk pacing ved hjælp af stimulation elektrode placeret på venstre ventrikel, begyndende med en pacing cyklus længde på 350 millisekunder og faldende med 10 til 50 millisekunder til at generere restitution kurver. For at bekræfte erhvervelsen af et optisk kvalitetssignal under hele eksperimentet skal du åbne en videofil, vælge et område af interesse og afbilde den gennemsnitlige fluorescens over tid. I slutningen af forsøget, fjerne hjertet fra systemet og dræne perfusat.Skyl derefter systemslangen og kamrene med renset vand. For rutinemæssig vedligeholdelse skylles systemet med jævne mellemrum med rengøringsmiddelopløsning efter behov. I disse repræsentative undersøgelser blev proceduren udført på intakte modeller, som påvist, der varierede i størrelse fra 2,5 til 10,5 kg kropsvægt og 18 til 137 gram hjertevægt.Efter overførsel af det isolerede hjerte til et Langendorff-system stabiliseres pulsen til ca. 70 slag i minuttet inden for ca. 10 minutters defibrillering og forbliver konstant under hele studiets varighed. En gennemsnitlig strømningshastighed på ca. 184 milliliter pr. minut måles typisk. Det bremser til 70 milliliter i minuttet efter perfusing med opvarmet medium, der indeholder en mekanisk uncoupler.Bly to EKG'er kan registreres i hele undersøgelsens varighed under sinusrytme eller som reaktion på ekstern pacing for at kvantificere de elektrofysiologiske parametre. Optiske kortlægning eksperimenter kan også udføres under sinus rytme og spontan ventrikelflimmer. Repræsentative billeder af et farvestof-loaded hjerte kan fås med de tilsvarende optiske handling potentialer.Og calciumtransienter kan indsamles fra to regioner af interesse på den episkeardieoverflade. Desuden kan dynamiske epiardiale pacing bruges under den optiske kortlægning eksperimenter til at normalisere eventuelle små forskelle i den iboende hjertefrekvens. De rå signaler kan bruges til at skildre den virkning potentielle calcium forbigående kobling tid, aktivering og varighed tid, og den elektriske og calcium restitution.Det er vigtigt at undgå at tillade bobler at komme ind i aorta, for at minimere tidspunktet for overførslen fra dyret til systemet, og at støtte de større hjerte. Elektrofysiologi og optiske signaldata kan analyseres efter erhvervelsen. Derudover kan hjertet bevares efter studiet for histologi, immunstaining eller genekspressionsanalyse.Vi bruger denne teknik til at karakterisere unge hjerteudvikling og til at undersøge virkningen af miljøeksponeringer på hjertefysiologi. De mekaniske frakoblede bruges til at minimere bevægelse og anti-skum kemikalier, der anvendes til at løse albumin skumning er begge giftige, så ved hjælp af passende personlige værnemidler er absolut afgørende.

Research

JoVE Journal

Medicine

Ex Vivo Culture of Patient Tissue &amp; Examination of Gene Delivery

Ex Vivo Culture of Patient Tissue & Examination of Gene Delivery

This video describes the use of patient tissue as an ex vivo model for the study of gene delivery.  Fresh patient tissue obtained at the time of surgery ...

Ex Vivo Infection of Live Tissue with Oncolytic Viruses

Ex Vivo Infection of Live Tissue with Oncolytic Viruses

Oncolytic Viruses (OVs) are novel therapeutics that selectively replicate in and kill tumor cells1. Several clinical trials evaluating the effectiveness ...

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

Procedure for Menneskerettigheder saphenous Veins<em&gt; Ex vivo</em&gt; Perfusion og udvendig forstærkning

The mainstay of contemporary therapies for extensive occlusive arterial disease is venous bypass graft. However, its durability is threatened by intimal ...

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

Validering af Nanobody og antistofbaserede<em&gt; In Vivo</em&gt; Tumor xenograft NIRF-imaging Forsøg på mus ved brug<em&gt; Ex vivo</em&gt; Flowcytometri og mikroskopi

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice ...

Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts

Induktion og vurdering af iskæmi-reperfusion skade i Langendorff-perfusionerede rottehjerter

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for ...

Ex vivo Live Imaging of Lung Metastasis and Their Microenvironment

Ex vivo Live Imaging of Lung Metastasis and Their Microenvironment

Ex vivo Levende Imaging af lungemetastase og deres mikromiljø

Metastasis is a major cause for cancer-related morbidity and mortality. Metastasis is a multistep process and due to its complexity, the exact cellular ...

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

En lille dyremodel af Ex Vivo Normothermic lever Perfusion

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...

Impact of Intracardiac Neurons on Cardiac Electrophysiology and Arrhythmogenesis in an Ex Vivo Langendorff System

Impact of Intracardiac Neurons on Cardiac Electrophysiology and Arrhythmogenesis in an Ex Vivo Langendorff System

Virkningen af Intracardiac neuroner på hjerte Elektrofysiologi og Arrhythmogenesis i en Ex Vivo Langendorff System

Since its invention in the late 19th century, the Langendorff ex vivo heart perfusion system continues to be a relevant tool for studying a broad spectrum ...

Ex Vivo Corneal Organ Culture Model for Wound Healing Studies

Ex Vivo sårheling hornhinde orgel kultur Model for undersøgelser

The cornea has been used extensively as a model system to study wound healing. The ability to generate and utilize primary mammalian cells in two ...

Slicing and Culturing Pig Hearts under Physiological Conditions

Udskæring og dyrkning af grisehjerter under fysiologiske forhold

Many novel drugs fail in clinical studies due to cardiotoxic side effects as the currently available in vitro assays and in vivo animal models poorly ...