Name: optocardiography and electrophysiology studies of ex vivo langendorff-perfused hearts
Uploaded: 2019-11-07T14:00:00
Duration: 9 min 52 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Optocardiography and Electrophysiology Studies of Ex Vivo Langendorff-perfused Hearts at JoVE.com

Yazarlar minnetle yararlı deneysel rehberlik için Dr Matthew Kay kabul ve Manelle Ramazan ve Muhaymin Chowdhury teknik yardım için. Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri (R01HL139472'den NGP'ye, R01 HL139712'den NI'ye), Çocuk Araştırma Enstitüsü, Çocuk Ulusal Kalp Enstitüsü ve Sheikh Zayed Pediatrik Cerrahi İnovasyon Enstitüsü tarafından desteklenmiştir.

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Kardiyovasküler araştırma modelleri hücresel in vivo preparatları arasında değişse de, klinik alaka ve deneysel yarar arasında doğal bir trade-off vardır. Bu spektrumda, izole Langendorff perfüzyon kalp kardiyakfizyolojisi 48eğitimi için yararlı bir uzlaşma kalır. Tüm kalp modeli tek hücre veya doku monolayers daha fonksiyonel ve yapısal entegrasyon daha yüksek bir düzeyde temsil eder, ama aynı zamanda in vivo modelleri ile ilişkili şaşırtıcı karmaşıklığı önler. Çift optik haritalama deneyleri sırasında önemli bir avantaj izole kalbin epikardiyal yüzeyi gözlemlenebilir ve transmembran potansiyeli ve kalsiyum işleme floresan görüntüleme kardiyakfizyolojisiizlemek için kullanılabilir 34 .
Kemirgen modelleri, kısmen ilgili tüm elementlerin (örn. çözelti hacmi, perfüzyon devresi, boya miktarı ve mekanik uncouplerler) ile ilişkili maliyetnedeniyle, daha büyük hayvanlara karşı izole kalp preparatları için en yaygın olarak kullanılır. büyük hayvanlarda aritmiler için daha fazla istikrarsızlık ve eğilimi ile birlikte10,36,49. Domuz kalpleri kullanmanın bir avantajı da, daralmanın yapısı, büyüklüğü ve hızı açısından insan kalbine yakından benzemeleri, bu nedenle koroner kan akımı ve kardiyak delik gibi hemodinamik parametrelerin daha doğru bir şekilde modelilmesidir. Aynı şekilde, insanlar ve domuzlar benzer kalsiyum işleme var, elektrokardiyogram aralıkları37, ve bu temsil altında yatan kanallar da dahil olmak üzere eylem potansiyel morfolojisi12,50,51, 52. yıl. Bu protokol, miyokardiyal işlevi kapsamlı bir şekilde karakterize etmek için tekrarlanabilir büyük bir hayvan modeli oluşturma adımlarını ayrıntılı olarak açıklar. Kurulu elektrofizyolojik protokollerle birlikte kullanılan transmembran voltaj (RH237) ve hücre içi kalsiyumun (Rhod2) eşzamanlı görüntülemesi, değişmiş kardiyak mekanizmalardan sorumlu mekanizmaları saptamak için Işlev. Açıklanan metodoloji preklinik güvenlik testi, toksikolojik tarama ve genetik veya diğer hastalık patolojilerinin araştırılması için kullanılabilir. Ayrıca, açıklanan metodoloji değiştirilebilir ve diğer kardiyak modeller ile kullanılmak üzere adapte edilebilir (örneğin, kan, insan) özel araştırma odak bağlı olarak53,54,55.
İzole, tüm kalp hazırlıkları için daha küçük bir kemirgen modeli daha büyük bir domuz modeline geçiş yaparken akılda tutulması gereken birkaç kritik değişiklikler vardır. Hazırlık ve kurulum sırasında, onkotik basıncı korumak ve ödemi azaltmak için perfusate albumin eklemenizi öneririz (artı antiköpük, gerekirse)56,57,58,59. Ayrıca, albumin içeren perfusat da medya yağ asidi takviyesi gerektiren metabolik çalışmalarda yardımcı olabilir60,61. Kemirgen kalpler aksine, büyük domuz kalp hacim oranı ve daha iyi sıcaklığı korur koroner damarlar akan ısıtılmış ortam artan hacmi nedeniyle sıcak ortamda batık olması gerekmez. Daha önce de belirtildiği gibi, sağ ventrikül içine ve sağ ve sol ventriküllerin epikardiyal yüzeyine sıcaklık sondaları yerleştirdik ve çalışma boyunca her üç noktada da 1−2 °C'lik sadece hafif sıcaklık dalgalanmalarını gözlemledik. Daha da önemlisi, bu tür hızlı akış hızları da kabarcıklar ve potansiyel bir emboli olasılığını artırabilir. Bu sorunu aşmak için, aort kanülüne doğru giden büyük delikli borulu bir kabarcık tuzağı kullanmanızı öneririz. Benzer şekilde, biz daha büyük (ve ağır) kalp aort kanültetmek için birlikte çalışan iki kişi için en yararlı bulundu; bir kişi sağlam hemostats ve başka bir göbek bandı kullanarak kanula aort güvenli aort ile aort açık tutmak için. Açıklanan metodolojide, kardiyopleji ve defibrilasyon ile perfüzyonun kardiyak iyileşme için hayati önem taşıdığını ve bunun kemirgen kalp preparatlarına aykırı olduğunu bulduk. Deneyimlerimize göre, sadece birkaç eksire kalpkardiyoversiyon olmadan normal sinüs odaklı aktiviteye devam etti.
Optik görüntüleme uç noktalarını geliştirmek için, asılı bir kalp hazırlığı, batmış bir kalple oluşabilecek parlamanın etkisini sınırlatır. Ayrıca, asılı kalp de dikey görüntüleme için yatay olarak kalp aşağı döşeme oluşabilir kalbin arka yönü üzerinde koroner damarların herhangi bir sıkıştırma veya uzlaşma önler. Biz de kabarcık tuzak (aort kanül yakın) büyük ölçüde doku boyama ve optik sinyaller geliştirilmiş sonra floresan boyalar yükleme bulundu. Son olarak, kardiyak elektrofizyoloji uç noktaları geliştirmek için, daha büyük bir koaksiyel stimülasyon elektrot kullanımı başarılı atriyal pacing kolaylaştırladı. Çeşitli EP parametreleri için yakalama ve yakalama kaybını tanımlamak için elektrokardiyogram kullanımını tanımlasak da, intrakardiyak kateterler veya bipolar kayıt elektrotları da kullanılabilir.
Çalışmamız izole, bozulmamış domuz kalp modelinde çift optik haritalama ve kardiyak elektrofizyolojik değerlendirme için bir metodoloji geliştirmeye odaklanmıştır. Genç insan kalbi ile benzerlikler nedeniyle, domuz kalp pediatrik kardiyoloji veya konjenital kalp defektleri odaklı çalışmalar için popüler bir model olmaya devam etmektedir. Daha da önemlisi, açıklanan yaklaşım daha büyük boyutlu yetişkin kalpleri ve / veya ilgi farklı türler ile kullanmak için adapte edilebilir. Nitekim, diğer laboratuvarlar bu can veya insan kalpleri (ya donör veya hastalıklı) kullanımı kendi özel araştırma odak53,54,55için daha uygulanabilir olduğunu bulabilirsiniz. Bu çalışmanın bir diğer potansiyel sınırlama görüntüleme sırasında hareket artifakı azaltmak için mekanik bir uncoupler kullanımıdır. Blebbistatin EKG parametreleri, aktivasyon ve refrakter dönemleri41,62,63üzerindeki minimal etkileri nedeniyle kardiyak görüntüleme uygulamalarında tercih edilen uncoupler haline gelmiştir. BDM daha az pahalı bir seçimdir, özellikle perfusate ve mekanik uncoupler daha büyük hacimlerde gerektiren büyük hayvan çalışmalarında önemli olabilir, ancak potasyum ve kalsiyum akımları üzerinde daha büyük bir etkiye sahip olduğu bilinmektedir eylem potansiyelini değiştirebilir morfoloji64,65,66,67. BDM kullanılırsa, APD kısaltma şoka bağlı arrythmias68kalplerin savunmasızlığını artırır unutmayın. Tersine, blebbistatin kullanarak ana sınırlama onun fotosensitivite ve fototoksisite, bu etkileri azalttı alternatif formülasyonlar rağmen69,70,71. Son olarak, açıklanan metodoloji çift optik haritalama deneyi için tek bir kamera sistemi kullanır, ancak epikardiyal yüzey de elektrik dalgalarının ventriküler fibrilasyon ve / veya izleme odaklanmış araştırma çalışmaları dikkat etmek önemlidir diğerleri tarafından açıklandığı gibi, üç boyutlu panoramik görüntüleme içerecek şekilde bu yaklaşımı değiştirmek gerekir15,19,72,73,74,75 .

Kardiyovasküler hastalık dünya çapında hastalık ve ölüm önde gelen nedenidir. Bu nedenle, birincil bir araştırma odak normal kardiyak fizyolojisi ve insanlarda morbidite ve mortalite katkıda bulunabilir altta yatan mekanizmaları incelemek için kullanılabilecek metodolojileri optimize etmektir. Temel kardiyovasküler araştırma geleneksel kemirgenler ve tavşan1,2,3, genetik olarak değiştirilmiş türlerin durumu nedeniyle4,5dahil olmak üzere küçük hayvan modelleri, dayanıyordu , daha düşük maliyetli, daha küçük deneysel ayak izi ve daha yüksek iş artışı. Ancak, bir domuz modelinin kullanımı daha klinik olarak ilgiliveri6 sağlama potansiyeline sahiptir. Nitekim, önceki çalışmalarda kardiyak elektrofizyoloji benzerlikler belgelenmiştir (EP) insanlar ve domuzlar arasında, benzer iyon akımları da dahil olmak üzere7, eylem potansiyel şekli8 ,ve farmakolojik test yanıtları9. Ayrıca, domuz kalp ya kemirgenler veya tavşan10daha insanlara karşılaştırılabilir kontraktil ve gevşeme kinetik vardır. Bir can modeli ile karşılaştırıldığında, domuz koroner anatomisi daha yakından bir insan kalbi11benzer,12 ve kalp gelişimi, pediatrik kardiyoloji ve / veya konjenital kalp defektleri odaklı çalışmalar için tercih edilen bir modeldir 13. Domuz ve insan kalbi arasında farklılıklar olmasına rağmen8, Bu benzerlikler domuz kalp kardiyovasküler araştırma için değerli bir model yapmak14.
Kalbin retrograd perfüzyon ilk Oskar Langendorff tarafından kurulan bu yana kardiyak dinamikleri ex vivo15 eğitimi için standart bir protokol haline gelmiştir16. Buna göre, Langendorff-perfüzyon otonom etkilerin yokluğunda izole, bozulmamış kalp desteklemek için kullanılabilir. Bu model doğrudan kardiyak elektrofizyoloji ve sağlıklı ve sağlıklı olmayan kalpler arasında kontraktür karşılaştırmak için yararlı bir araçtır. Kardiyak dinamikleri hem zamansal hem de mekansal olarak karmaşık olduğundan, bir bölgedeki hafif bir değişiklik tüm kalbin senkronizasyon17olarak çalışma yeteneğini önemli ölçüde etkileyebilir. Bu nedenle, parametre duyarlı boyaların yüksek spatiotemporal görüntüleme kalp yüzeyinde kardiyak fonksiyon izlemek için yararlı bir araçtır18,19. Nitekim, voltaj ve kalsiyuma duyarlı floresan probların eşzamanlı çift görüntüleme elektriksel aktivite, kalsiyum işleme ve doku düzeyinde uyarma-daralma kaplin değerlendirilmesi için izin verir20,21, 22,23,24,25,26,27,28. Langendorff-perfüzyon ve/veya optik haritalama teknikleri daha önce yaşlanma veya genetik mutasyonlara bağlı kardiyak performanstaki düşüşü belgelemek ve farmakolojik ajanların veya çevresel maruziyetlerin güvenliğini değerlendirmek için kullanılmıştır29 ,30,31,32,33.
Klinik ortamda, invaziv bir kardiyak elektrofizyoloji çalışması genellikle kardiyak ritim bozukluklarıaraştırmak, patolojileri belirlemek ve olası tedavi seçeneklerini saptamak için kullanılır. Benzer şekilde, sinüs düğümü fonksiyonunu değerlendirmek, atriyoventriküler iletimi ölçmek ve miyokardiyal dokunun kırılmadurumunu belirlemek için kullanılabilecek bir EP protokolü tanımladık. Açıklanan EP çalışması optik haritalama ile birlikte yapılabilir, veya optokardiografi34, tamamen izole kalplerde kardiyak fizyoloji karakterize etmek. Açıklanan protokolde, yüksek spatiotemporal çözünürlük floresan görüntüleme çift emisyonlu bir kurulumda voltaj (RH237) ve kalsiyum (Rhod-2AM) boyalarının birleşimi ile gerçekleştirildi. Ayrıca kardiyak elektrofizyoloji parametreleri hem sinüs ritmi altında hem de programlanmış elektriksel stimülasyona yanıt olarak izlendi.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>(-)-Blebbistatin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B0560-5MG</td>
			<td>Mechanical Uncoupler</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,3-Butanedione monoxime (BDM)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B0753-100G</td>
			<td>Mechanical Uncoupler</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td>A9418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analog signal interface</td>
			<td>emka Technologies</td>
			<td>itf16USB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antifoam</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A5758-250ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antifoam Y-30 Emulsion</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td>A5758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aortic cannula, 5/16&#8221;</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>45509-60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bubble trap</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS430641U-100EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ</td>
			<td>C77-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera, sCMOS</td>
			<td>Andor Technology</td>
			<td>Zyla 4.2 PLUS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coaxial stimulation electrode (atria)</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>73-0219</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Defibrillator</td>
			<td>Zoll</td>
			<td>M Series</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichroic mirror</td>
			<td>Chroma Technology</td>
			<td>T660lpxrxt-UF2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Differential amplifier</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>DP-304A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Emission filter, calcium</td>
			<td>Chroma Technology</td>
			<td>ET585/40m</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Emission filter, voltage</td>
			<td>Chroma Technology</td>
			<td>ET710lp</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EP stimulator (Bloom)</td>
			<td>Fisher Medical</td>
			<td>DTU-215B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excitation filter</td>
			<td>Chroma Technology</td>
			<td>CT510/60bp</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excitation lights</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>SOLIS-525C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>8147K52</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter cartridge, polypropylene</td>
			<td>Pentair</td>
			<td>PD-5-934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter housing</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>9979T21</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow transducer</td>
			<td>Transonic</td>
			<td>ME6PXN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td>158968</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating coil</td>
			<td>Radnoti</td>
			<td>158821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemofilter</td>
			<td>Hemocor</td>
			<td>HPH 400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostatic Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501326</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image Splitter</td>
			<td>Cairn Research</td>
			<td>OptoSplit II</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td>P3911</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ</td>
			<td>423-316</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large-bore tubing, I.D. 3/8&#8221;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-169-7H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lens 50 mm, 0.95 f-stop</td>
			<td>Navitar</td>
			<td>DO-5095</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metamorph</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td></td>
			<td>Image Alignment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td>M-7506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mucasol detergent</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z637181-2L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na Pyruvate</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td>P2256</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td>S-3014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ</td>
			<td>S-233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Electrodes 29 gauge, 2 mm</td>
			<td>AD Instruments Inc.</td>
			<td>MLA1204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Noise eliminator</td>
			<td>Quest Scientific</td>
			<td>Humbug</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion pump</td>
			<td>PolyStan</td>
			<td>A/S 1481</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pressure transducer</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>BLPR2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reservoir, 2 liter</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>UX-34541-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RH237</td>
			<td>AAT Bioquest Inc.</td>
			<td>21480</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rhod2-AM</td>
			<td>AAT Bioquest Inc.</td>
			<td>21062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stimulation electrode (ventricle)</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>73-0160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Suture</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>890186</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transducer amplifier</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>TBM4M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing flow console</td>
			<td>Transonic</td>
			<td>TS410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Umbilical tape</td>
			<td>Jorvet</td>
			<td>J0025UA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath/circulator</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89400-970</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Tools</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandage shears</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-8448</td>
			<td>Lister Bandage Scissors, Angled, Blunt/Blunt, 42.0mm blade length, 17.0 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrocautery</td>
			<td>Dalwha Corp. Ltd.</td>
			<td>BA2ALD001</td>
			<td>Model: 200 Basic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostat</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7476</td>
			<td>St Vincent Tube Occluding Forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostatic forceps</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-8960</td>
			<td>Hartmann Hemostatic Forceps, Curved, Serrated 2.2 mm tip width, 9.5 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostats</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-8985</td>
			<td>Halstead-Mosquito Hemostatic Forceps Curved, Serrated, 2mm tip 14cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayo scissors</td>
			<td>WPI</td>
			<td>501749</td>
			<td>14.5 cm, Straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum scissors</td>
			<td>WPI</td>
			<td>501747</td>
			<td>11.5 cm, Straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mosquito forceps</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-8980</td>
			<td>Halstead-Mosquito Hemostatic Forceps Straight, Smooth, 2mm tip width 12cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-8828</td>
			<td>Webster Needle Holders, Straight, Smooth,13.0 cm overall length</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pediatric cross clamp</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7660</td>
			<td>Cooley-Derra Clamp 6.25&#34; 5mm Calibrations</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Right angle forceps</td>
			<td>WPI</td>
			<td>501240</td>
			<td>Baby Mixter Hemostatic Forceps, 14cm, Right Angle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>549-4</td>
			<td>Scalpel Handle No. 4, 13.7cm Stainless Steel and 10 No. 22 Blades</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scissors</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-8380</td>
			<td>Operating Scissors, Straight, Blunt/Blunt, 42mm blade,12cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight Serrated forceps</td>
			<td>WPI</td>
			<td>500363</td>
			<td>Dressing Forceps 15.5cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Towel clamp</td>
			<td>WPI</td>
			<td>501700</td>
			<td>Backhaus Towel Clamp, 13cm, Curved, Locking handle, SS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weitlaner retractor</td>
			<td>WPI</td>
			<td>501314</td>
			<td>Weitlaner Retractor, Self-Retaining, 10.2cm, 2x3 Sharp Prongs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-0 prolene suture</td>
			<td>Various vendors</td>
			<td>Various vendors</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vessel loop</td>
			<td>Aspen surgical</td>
			<td>011001PBX</td>
			<td>Sterion&#174; Vessel Loop, 0.8 x 406mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cardioplegia (Plegisol)</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>00409-7969-05</td>
			<td>Plegisol; St Thomas crystalloid cardioplegia solution 20ml/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Various vendors</td>
			<td>Various vendors</td>
			<td>300 U/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe and Needle</td>
			<td>Various vendors</td>
			<td>Various vendors</td>
			<td>60mL &#38; 18G respectively</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Umbilical tape</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>U12T</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

optocardiography and electrophysiology studies of ex vivo langendorff-perfused hearts

Küçük hayvan modelleri en yaygın kardiyovasküler araştırmalarda genetik olarak değiştirilmiş türlerin durumu ve daha büyük hayvanlara göre daha düşük maliyet nedeniyle kullanılır. Ancak, büyük memeliler daha iyi normal kardiyak fizyolojisi ile ilgili çeviri araştırma soruları için uygundur, patofizyoloji, ve terapötik ajanların preklinik test. Kardiyak araştırmalarda daha büyük bir hayvan modeli nin kullanılmasıyla ilgili teknik engelleri aşmak için, izole edilmiş, Langendorff'lu domuz yavrusu kalbinde fizyolojik parametreleri ölçmeyaklaşımını tanımlıyoruz. Bu yaklaşım kalbin durumunu değerlendirmek için iki güçlü deneysel aracı bir araya getirmektedir: elektrofizyoloji (EP) çalışması ve parametre duyarlı boyalar (RH237, Rhod2-AM) kullanarak transmembran voltaj ı ve hücre içi kalsiyumun eşzamanlı optik haritalaması. Açıklanan metodolojiler, kardiyak iletim sistemini, etki potansiyeli morfolojisindeki değişiklikler, kalsiyum kullanımı, uyarma-kontraksiyon kaplini ve kardiyak alternanların insidansını araştıran çeviri çalışmaları için uygundur veya Aritmi.

Şekil 1A, boru devresi, pompa, filtre, oksijenatörü, rezervuarları ve ısıtma elemanlarını içeren izole kalp perfüzyon sisteminin diyagramını gösterir. EKG (kurşun II konfigürasyonu) ve pacing elektrotlarının yerleştirilmesi Şekil 1B'degösterilmiştir ve görüntüleme kurulumu Şekil 1C'degösterilmiştir. Optik bileşenlerin ve ışık yollarının şeması Şekil 1D'degösterilmiştir.
2,5−10,5 kg vücut ağırlığı ve 18−137 g kalp ağırlığı(Şekil 2A)arasında değişen, genç Yorkshire domuzlarından izole edilmiş (14−42 gün, n = 18) bozulmamış, bütün kalpler üzerinde deneysel çalışmalar yapılmıştır. İzole kalbi Langendorff sistemine (37 °C) aktardıktan sonra, kalp hızı ~ 10 dk defibrilasyon içinde 70 ± 4.5 bpm 'ye (ortalama ± SEM) sabitlenmiş ve çalışma süresi boyunca sabit kalmıştır(Şekil 2B). Ortalama akış hızı 184 ± 17 mL/dk (ortalama ± SEM) ölçüldü ve mekanik bir ayırıcı içeren ısıtılmış ortamla perfüzyon yapıldıktan sonra 70 ± 7,5 mL/dk'ya kadar yavaşladı (Şekil 2C).
Kurşun II EG'leri çalışma süresi boyunca sinüs ritmi sırasında(Şekil 3A)veya elektrofizyolojik parametreleri ölçmek için dış pacing(Şekil 3B-E)yanıt olarakkaydedildi. EP değerlendirmesi için, wbcl ve SNRT'yi saptamak için sağ atriyuma dinamik pacing (S1−S1) uygulandı (S1−S1 başladıktan sonra iyileşme süresi, Şekil 3C),wbcl ventriküler iletim için atriyal olarak başlatılan en kısa PCL olarak belirtilmiştir. Ventriküler depolarizasyonu başlatan en kısa bağlantı aralığını belirlemek ve verp'yi saptamak için sol ventrikülüzerinde bipolar uyarıcı elektrot kullanılarak S1−S2 pacing protokolü uygulanmıştır (Şekil 3D). Alternatif olarak, Şekil 3E'degösterildiği gibi AVNERP'i (S1−S2) saptamak için Bir S1−S2 atriyal pacing protokolü uygulanır. Domuz kalp elektrofizyoloji parametrelerinin temsili örnekleri daha önce yayınlanmış olanlar ile yakından hizalamak37.
Optik haritalama deneyleri sinüs ritmi sırasında, spontan ventriküler fibrilasyon(Şekil 4),veya sol ventrikül (LV) dinamik pacing (S1−S1) sırasında elektriksel ve kalsiyum geri dönüşüm eğrileri oluşturmak için yapılmıştır Şekil 5. Boya yüklü bir piglet kalbinin temsili görüntüleri Şekil 4'te, epikardiyal yüzeyde ilgi çeken iki bölgeden toplanan ilgili optik aksiyon potansiyelleri (Vm) ve kalsiyum (Ca) geçici olarak gösterilmiştir (sağ ventrikül [RV] = mavi, LV = kırmızı) . İşlenmemiş sinyaller sinüs ritmi sırasında ve ventriküler fibrilasyon sırasında görüntülenir. Daha önce de belirtildiği gibi, dinamik epikardiyal pacing (S1−S1) optik haritalama deneyleri sırasında içsel kalp hızındaki hafif bir farkı normalleştirmek için de kullanılmıştır(Şekil 5A-E). Ham sinyaller (RV = mavi, LV = kırmızı) hareket potansiyelini göstermek için kullanılan - kalsiyum geçici bağlantı süresi(Şekil 5C),aktivasyon ve süre süresi(Şekil 5D),elektrik ve kalsiyum iadesi (Şekil 5E) görüntülenir. Kalın miyokardiyal preparatlar için, çekirdek boyutu ~3 mm x 3 mm ile mekansal filtreleme epikardiyal etki potansiyeli veya kalsiyum geçici analiz19,47için uygundur. Buna göre, yüksek uzamsal çözünürlükteki görüntüler (açıklanan kurulumda 1240 x 1024 toplam veya kanal başına 620 x 512, 6,5 μm piksel boyutu) genellikle edinme sırasında veya satın alma sonrası mekansal olarak bağlanır(Şekil 5C). Görüntü işleme özel algoritmalar23,33,43,45 (Şekil 3D) kullanarak aktivasyon ve repolarizasyon haritaları oluşturmak için yapılabilir kalpteki her piksel, eylem potansiyelinin veya kalsiyum geçici upstroke'un maksimum türevi olarak tanımlanmıştır.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60472/60472fig01.jpg"> Şekil 1: Deneysel kurulum. (A) İzole kalp perfüzyon sisteminin diyagramı; oklar akış yönünü gösterir. (B) A kanüle kalp elektrot yerleşimi ile gösterilir. RA = sağ atria, RV = sağ ventrikül, LV = sol ventrikül, EKG = kurşun II elektrokardiyogram. (C) Kalp dokusuna yakın görüntüleme platformu. (D) Her tamamlayıcı probun (voltaj, kalsiyum) salınımı, uygun emisyon filtrelerine ve dikroik aynaya sahip bir görüntü bölme cihazı kullanılarak dalga boyu ile ayrılır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60472/60472fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60472/60472fig02.jpg"> Şekil 2: Kalp ağırlığı, hız ve akış ölçümleri. (A) Çalışmada kullanılan her bir domuz yavrusu için vücut ağırlığı oranı (n = 18). (B) Kalp hızı ölçülen ~10 dk defibrilasyon dan sonra ve yine çalışma sonunda (yaklaşık 1 saat). (C) Azalmış oksijen talebi nedeniyle mekanik bir uncoupler (+BDM) ile perfüzyon sonrası koroner akış hızla düşer. Ölçek çubukları ortalama ± SEM'i temsil eder. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60472/60472fig02large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60472/60472fig03.jpg"> Şekil 3: Sinüs ritmi sırasında veya dış pacing yanıt olarak toplanan kurşun II elektrokardiyogram kayıtları temsili örnekler. (A) Normal sinüs ritmi. (B) Görüntüleme deneyleri için kullanılan 400 ms (S1−S1) döngü uzunluğunda epikardiyal pacing örneği. (C) Top: WBCL tanımlamak için atriyal pacing; S1 = 250 ms'de başarılı yakalama gözlenirken, atriyaldan ventrikül iletimine kadar gözlenir. Atriyal pacing SNRT belirlemek için kullanılabilir unutmayın (sinüs düğümü deşarj zamanı, dış pacing başladıktan sonra). Alt: S1 çevrim uzunluğu 205 ms'e düşürüldükçe ventriküliletimi başarısız olur. (D) Üst: Verp'i tanımlamak için epikardiyal pacing (S1−S2); S1 = 450 ms, S2 = 300 ms. Altta başarılı yakalama gözlenir: S2 çevrim uzunluğu 250 ms'e düşürüldükçe ventriküler doku yakalanmaz. (E) AVNERP'i tanımlamak için atriyal pacing (S1−S2). Üst: S1 = 450 ms, S2 = 200 ms. Altta başarılı yakalama gözlenir: S2 çevrim uzunluğu 199 ms'ye düşürüldükçe ventriküliletimi başarısız olur. Mavi oklar tempolu sivri uçları gösterir, kırmızı oklar yakalama ('C') veya hiçbir yakalama ('NC') gösterir. S1−S1 = dinamik pacing, S1−S2 = ekstrastimulus pacing. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60472/60472fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60472/60472fig04.jpg"> Şekil 4: Sinüs ritmi ve ventriküler fibrilasyon sırasında optik veriler. Sol: Boya yüklü domuz kalbinin temsili görüntüleri (Vm = voltaj, RH237; Ca = kalsiyum, Rhod2), ön görünüm. Uzaysal olarak filtrelenmiş transmembran gerilimi ve sinüs ritmi sırasında domuz kalbinden gelen hücre içi kalsiyum floresan sinyalleri (Merkez). Ventriküler fibrilasyon sırasında voltaj ve kalsiyum sinyalleri (Sağ). Sinyal bölge boyutları (15 x 15 piksel = 2,4 x 2,4 mm2, 30 x 30 = 4,8 x 4,8 mm2 çekirdek boyutu) kırmızı ve mavi kareler olarak temsil edilir. Birimler = ΔF/F. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60472/60472fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60472/60472fig05.jpg"> Şekil 5: Langendorff'un perfüzyonlu domuz kalplerinden alınan optik veriler. İşlenmemiş, uzamsal olarak filtrelenmiş (A) transmembran gerilimi ve (B) apeksteki elektriksel voltaj sırasında sağ ve sol ventriküllerden hücre içi kalsiyum floresan sinyalleri. Filtrelenmemiş, mekansal ortalama sinyaller optik eylem potansiyellerini ve ilgi bölgelerinden gelen kalsiyum geçicilerini göstermektedir (sinyal birimleri ΔF/F'dir). (C) Normalleştirilmiş geçici bir bindirme eylem potansiyelini-kalsiyum geçici bağlantı süresini (75 Hz'de filtrelenmiş düşük geçiş) göstermektedir. (D) Aktivasyon süresi (tact)ve % 80 repolarizasyon süresi de dahil olmak üzere zamansal parametrelerin izokronal haritaları oluşturmak için epikardiyal yüzey boyunca sinyalleri işleme. (E) Daha yavaş tempolu devir uzunluklarında daha uzun repolarizasyon süresini göstermek için istatistiksel analiz (sağda) ile birden fazla frekansta (solda) üretilen elektriksel ve kalsiyum geçici iade eğrileri. Ölçek çubukları = ortalama ± SEM. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60472/60472fig05large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Kimyasal</td>
			<td>Formül</td>
			<td>Molekül ağırlığı</td>
			<td>g/L</td>
		</tr>
<tr>
<td>Sodyum klorür</td>
			<td>Nacl</td>
			<td>58.44</td>
			<td>5.26</td>
		</tr>
<tr>
<td>Sodyum glukonat</td>
			<td>C6H11Nao7
</td>
			<td>218.14</td>
			<td>5.02</td>
		</tr>
<tr>
<td>Sodyum asetat trihidrat</td>
			<td>C2H3NaO2•3H2O</td>
			<td>136.08</td>
			<td>3.68</td>
		</tr>
<tr>
<td>Potasyum klorür</td>
			<td>Kartal</td>
			<td>74.55</td>
			<td>0.63</td>
		</tr>
<tr>
<td>Magnezyum klorür (susuz)</td>
			<td>MgCl2
</td>
			<td>95.21</td>
			<td>0.1405</td>
		</tr>
<tr>
<td>%8.4 Sodyum bikarbonat</td>
			<td>NaHCO3
</td>
			<td>84.01</td>
			<td>13</td>
		</tr>
<tr>
<td>Mannitol</td>
			<td>C6H14O6
</td>
			<td>182.17</td>
			<td>16.3</td>
		</tr>
<tr>
<td>Magnezyum sülfat</td>
			<td>MgSO4
</td>
			<td>120.37</td>
			<td>4</td>
		</tr>
<tr>
<td>Ph</td>
			<td>7.4</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>Ozmolarite (mOsmol/L)</td>
			<td>294</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 1: Modifiye del Nido's kardiyopleji tarifi.

Watch this Scientific Journal Video about Optocardiography and Electrophysiology Studies of Ex Vivo Langendorff-perfused Hearts at JoVE.com

Optocardiography and Electrophysiology Studies of Ex Vivo Langendorff-perfused Hearts

Bu çalışmanın amacı, kardiyak dinamiği n çevirisel bir hayvan modeli kullanarak araştırmak için bir yöntem oluşturmaktır. Açıklanan deneysel yaklaşım, izole, bozulmamış bir domuz kalp modelindeki elektriksel aktiviteyi değerlendirmek için elektrofizyolojik bir çalışma ile birlikte çift emisyonlu optokardiografi içerir.

Ex Vivo Langendorff perfüzyonlu Kalplerin Optokardiyografi ve Elektrofizyoloji Çalışmaları

Small animal models are most commonly used in cardiovascular research due to the availability of genetically modified species and lower cost compared to ...

Kardiyovasküler arıza dünya çapında önde gelen ölüm nedenidir. Burada sunduğumuz izole kalp modeli insan kardiyak dinamiklerine deneysel bir pencere görevi görebilir. Bu yaklaşım, klasik elektrofizyoloji çalışmasını transmembran voltajı ve hücreler arası kalsiyumun eşzamanlı optik haritalaması ile birleştirerek kalbin durumunu değerlendirir.Bu metodoloji hastalık modelleme, farmakoloji ve toksikoloji çalışmalarına uygulanabilir. Örneğin, odak alanlarından biri kardiyak elektrofizyoloji üzerinde cam büyükleri etkilerini karakterize etmektir. Bu metodoloji teknik olarak daha küçük bir hayvan modeli kullanan bir protokolden daha zorlu olsa da, genel olarak, tüm parçalar yerleştirildikten sonra protokol nispeten basittir.Bir görüntüleme ve perfüzyon sisteminin tüm bileşenlerini metinle tanımlamak zordur, bu nedenle bu sürecin görsel gösterimi başarılı bir hazırlık oluşturmada yardımcı olacaktır. Yükselen aort bozulmamış ile kalp izole sonra, buz gibi kardiyopleji içine excised organ dalma ve aort duvarKavrama hemostats bir çift kullanın. Kabı, kalbin yaklaşık 95 santimetre üzerinde asılı bir buz gibi kardiyopleji ortamına bağlı boruya bağlı nervürlü bir kanüle yerleştirin.Damar damar girmesini herhangi bir kabarcıklar önlemek için damar taşana kadar sıvı aort doldurmak için izin verin ve kanül aort güvenli göbek bandı kullanın. Kanülden sarkandan sarkan kalbin ağırlığını taşıyacak hemostatları bağlayın ve soğuk ortamın kalbe 70 milimetrelik sabit bir cıva basıncında yer çekimiyle geriye doğru pergrat sağlamasına izin verin. Duymayı kanüle hava sokmadan 37 santigrat derecelik Langendorff sistemine aktarın.Ve normal sinüs ritmi kalan kan ve kardiyopleji vaskülatür floş sağlar. Şok edilebilir aritmiler durumunda, organ defibrillate için kalbin apeks ve tabanına dış kürekler yerleştirin, beş joule tek bir şok teslim ve 50 joule kadar beş joule artışlarla artan, kardiyoversiyon, veya unshockable ritim elde edilir. Sonra, herhangi bir kan ve kardiyopleji kaldırmak için resirasyon olmadan modifiye Krebs-Henseleit orta en az bir litre ile kalp floş.Orta kalp yoluyla açık çalıştığında, perfusate recirculate dolaşan döngü kapatın. Çalışma boyunca EKG'ye standart bir kurşun kaydetmek için, apekse yakın ventriküler epikardyuma 29 kalibrelik bir iğne elektrotu takın ve sağ atriyuma başka bir elektrot takın. Diferansiyel biyoamplifikatörün pozitif ve negatif girdilerini sırasıyla apeks ve sağ atriyuma bağlayın ve sağ atriyuma bir bipolar uyarıcı elektrot ve pacing amacıyla lateral sol ventriküle ikinci bir bipolar uyarıcı elektrot takın.İlk akım diyastolik eşiğin iki katı ve bir milisaniyelik darbe genişliğine ayarlanmış bir elektrofizyoloji uyarıcı kullanarak kalbi hızlandırın. Pacing eşiğini belirlemek için, tutarlı bir uyarıcı yanıtı sağlamak için tanımlanmış pacing döngüsü uzunluklarında bir milisaniyelik darbe genişliği ile bir ila iki miliamper uyarıcı impulslar bir dizi uygulayın. S1, S1 veya S1, S2 pacing trenini kullanarak ekstra uyarıcı pacing yapın.Pacing yakalamayı başaramayana kadar S2 pacing döngüsü uzunluğunu adım adım 10 milisaniye azaltın. Ardından, sondan bir önceki pacing döngüsü uzunluğuna kadar adım atın ve yakalama kaybından önce en hassas pacing döngüsü uzunluğunu belirlemek için döngü uzunluklarını milisaniye aralıklarla azaltın. Ventriküler etkili refrakter periyodu belirlemek için, s2 erken beat ventriküler depolarizasyon başlatır kısa S1, S2 aralığı belirlemek için lateral sol ventrikül üzerinde uyarıcı elektrot kullanın.Wenckebach döngüsü uzunluğunu tanımlamak için, sağ atriyumdaki uyarıcı elektrodu kullanarak en kısa S1,S1 aralığını kullanın ve bire bir atriyoventriküler iletim normal iletim yolu üzerinden yayılır. Sinüs düğümü iyileşme süresini tanımlamak için sağ atriyumdaki uyarıcı elektrodu kullanarak S1, S1 tempolu treni uygulayın ve tempolu trendeki son itiş gücü ile spontan sinoatriyal düğüm aracılı aktivitenin geri kazanımı arasındaki zaman gecikmesini ölçün. Atriyoventriküler düğüm etkili refrakter dönemi kurmak için, sağ atriyum üzerinde uyarıcı elektrot kullanın.Erken atriyal stimülasyonun ardından qrs kompleksini ortaya çıkaran ventriküler depolarizasyonu simgeleyen Hisbundle potansiyelinin takip edildiği en kısa S1, S2 bağlantı aralığını bulun. Transmembran gerilimi ve hücre içi kalsiyumun optik haritalaması için, önce yavaşça aort kanülüne beş mililitreye kadar taze hazırlanmış voltaj boyası proksimal ekleyin ve ardından taze hazırlanmış kalsiyum boyasının yavaş ilavesi. Ardından, görüntüleme donanımını uygun bir görüş alanına odaklanmak için yerleştirin ve kamerayı bir iş istasyonuna bağlayın.5 ila iki milisaniye pozlama süresi ile seçili yazılımı kullanarak görüntüleri elde edin. İstenilen bölgeleri bölüp bindirmeye ve herhangi bir vurgu yanlış hizalamaya gri tonlama veya sözde renk eklemesi görüntüleyebilen yazılım yardımı ile görüntü hizalaması gerçekleştirin. Ortam aydınlatması en aza indirgenerek, sensörün derinliğinde belirtildiği gibi, tek tip ve maksimum epikardiyal aydınlatma sağlamak için LED ışıkları test edin.Daha sonra, sinüs ritmi, ventriküler fibrilasyon veya dinamik pacing sol ventrikül üzerinde konumlandırılmış stimülasyon elektrodu kullanarak miyokardim görüntü, bir pacing döngüsü uzunluğu ile başlayan 350 milisaniye ve 10 ila 50 milisaniye azalan iade eğrileri oluşturmak için. Deneme boyunca optik bir kalite sinyalinin edinimini onaylamak için bir video dosyası açın, ilgi çekici bir bölge seçin ve zaman içinde ortalama floresan'ı çizin. Deneyin sonunda, kalp sistemden çıkarın ve perfusate drenaj.Daha sonra, sistem boru ve odaları arıtılmış su ile durulayın. Rutin bakım için, gerektiğinde sistemi düzenli olarak deterjan solüsyonu ile durulayın. Bu temsili çalışmalarda, prosedür, gösterildiği gibi, vücut ağırlığı 2,5 ila 10,5 kilogram ve kalp ağırlığı 18-137 gram arasında değişen bozulmamış modeller üzerinde yapılmıştır.Bir Langendorff sistemine izole kalp transfer sonra, kalp hızı defibrilasyon yaklaşık 10 dakika içinde dakikada yaklaşık 70 atım stabilize ve çalışma süresi boyunca sabit kalır. Dakikada yaklaşık 184 mililitre lik ortalama akış hızı genellikle ölçülür. Mekanik bir ayırıcı içeren ısıtılmış ortamla perfüzyon yaptıktan sonra dakikada 70 mililitreye kadar yavaşlar.Kurşun iki EGs sinüs ritmi sırasında çalışma süresi boyunca veya elektrofizyolojik parametreleri ölçmek için dış pacing yanıt olarak kaydedilebilir. Optik haritalama deneyleri sinüs ritmi ve spontan ventriküler fibrilasyon sırasında da yapılabilir. Boya yüklü bir kalbin temsili görüntüleri, ilgili optik eylem potansiyelleri ile elde edilebilir.Ve kalsiyum geçici epikardiyal yüzeyde ilgi iki bölgeden toplanabilir. Buna ek olarak, dinamik epikardiyal pacing içsel kalp hızlarında herhangi bir hafif farklılıkları normalleştirmek için optik haritalama deneyleri sırasında kullanılabilir. Ham sinyaller eylem potansiyel kalsiyum geçici bağlantı süresi, aktivasyon ve süre süresi ve elektrik ve kalsiyum iadesi tasvir etmek için kullanılabilir.Kabarcıkların aorta girmesine izin vermemek, hayvandan sisteme geçiş süresini en aza indirmek ve daha büyük kalbi desteklemek önemlidir. Elektrofizyoloji ve optik sinyal verileri satın alma sonrası analiz edilebilir. Ayrıca, kalp histoloji, immünboyama veya gen ekspresyonu analizi için çalışmadan sonra korunabilir.Bu tekniği, çocukça kardiyak gelişimi karakterize etmek ve çevresel maruziyetlerin kardiyak fizyoloji üzerindeki etkisini incelemek için kullanıyoruz. Hareketi en aza indirmek için kullanılan mekanik ayırıcılar ve albumin frothing adresiiçin kullanılan anti-köpük kimyasallar her ikisi de toksik, bu nedenle uygun kişisel koruyucu ekipman kullanarak kesinlikle gereklidir.

Research

JoVE Journal

Medicine

Ex Vivo Culture of Patient Tissue &amp; Examination of Gene Delivery

Ex Vivo Culture of Patient Tissue & Examination of Gene Delivery

Hasta Doku ve Gen Teslimat Sınav Ex Vivo Kültür

This video describes the use of patient tissue as an ex vivo model for the study of gene delivery.  Fresh patient tissue obtained at the time of surgery ...

Ex Vivo Infection of Live Tissue with Oncolytic Viruses

Ex Vivo Infection of Live Tissue with Oncolytic Viruses

Ex Vivo Enfeksiyon Oncolytic Virüsler Canlı Doku

Oncolytic Viruses (OVs) are novel therapeutics that selectively replicate in and kill tumor cells1. Several clinical trials evaluating the effectiveness ...

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

İnsan Safen Ven Prosedürü<em&gt; Ex vivo</em&gt; Perfüzyon ve Dış Takviye

The mainstay of contemporary therapies for extensive occlusive arterial disease is venous bypass graft. However, its durability is threatened by intimal ...

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

Nanobody ve Antikor Temelli Doğrulama<em&gt; İn Vivo</emFarelerde&gt; Tümör Xenograftlarında NIRF-görüntüleme Deneyler kullanma<em&gt; Ex vivo</em&gt; Sitometrisi ve Mikroskopi

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice ...

Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts

Langendorff-perfüze sıçan Hearts indüksiyon ve İskemi-reperfüzyon Hasarı Değerlendirilmesi

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for ...

Ex vivo Live Imaging of Lung Metastasis and Their Microenvironment

Ex vivo Live Imaging of Lung Metastasis and Their Microenvironment

Ex Akciğer Metastaz ve Bunların mikroçevresinin Canlı Görüntüleme vivo

Metastasis is a major cause for cancer-related morbidity and mortality. Metastasis is a multistep process and due to its complexity, the exact cellular ...

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

Ex Vivo Normothermic karaciğer perfüzyon küçük bir hayvan Model

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...

Impact of Intracardiac Neurons on Cardiac Electrophysiology and Arrhythmogenesis in an Ex Vivo Langendorff System

Impact of Intracardiac Neurons on Cardiac Electrophysiology and Arrhythmogenesis in an Ex Vivo Langendorff System

Kardiyak Elektrofizyoloji ve Arrhythmogenesis bir Ex Vivo Langendorff sisteminde intrakardiyak nöronların etkisi

Since its invention in the late 19th century, the Langendorff ex vivo heart perfusion system continues to be a relevant tool for studying a broad spectrum ...

Ex Vivo Corneal Organ Culture Model for Wound Healing Studies

Ex vivo kornea Organ kültür modeli için yaranın çalışmaları

The cornea has been used extensively as a model system to study wound healing. The ability to generate and utilize primary mammalian cells in two ...

Slicing and Culturing Pig Hearts under Physiological Conditions

Fizyolojik Koşullar altında Domuz Kalpleri Dilimleme ve Culturing

Many novel drugs fail in clinical studies due to cardiotoxic side effects as the currently available in vitro assays and in vivo animal models poorly ...