Name: measurement of microtubule dynamics by spinning disk microscopy in monopolar mitotic spindles
Uploaded: 2019-11-15T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Microtubule Dynamics by Spinning Disk Microscopy in Monopolar Mitotic Spindles at JoVE.com

ونشكر أعضاء مرفق المجهر الضوئي ، معهد ماكس بلانك للطب التجريبي ، علي مشورتهم المتخصصة ودعمهم.

1. بذر الخلايا هيلا
<ol><li>اعداد 2 مل من 5 ميكروغرام/مل الفيبرونكتين جنيني الحل في الفوسفات مخزنه المالحة (التلفزيونية) وأضافه 450 μl منه في كل بئر من 4 بشكل جيد مكفرشفه (#1.5). احتضان الشريحة لمده 15 دقيقه في 37 درجه مئوية و 5 ٪ CO2.</li>
	<li>شطف خلايا هيلا المتنامية بشكل غير متزامن مع الفوسفات المخزن ?...

هنا ، ونحن وصف تعديلا للأسلوب الذي انشاته Ertych وآخرون44. مع العديد من التعديلات الأخرى ، ونحن الجمع بين هذه التقنية من تحليل ديناميات MT مع المزدوج الغزل القرص التصوير البؤري. استخدام القرص الدوار المزدوج يحسن دقه النامية MTs مع الحد من السمية الضوئية36. كما نقوم بتقلي...

الأنابيب المجهرية (MTs) هي هياكل ديناميكية للغاية وجدت في جميع الخلايا الحقيقية النواة تقريبا وفي بعض البكتيريا1. مع [اكتين] وخيوط متوسطه, ينحت هم [ستوسيكلتون]2,3. تقسيم الخلية4، جزيء النقل5، الضرب الصواري6، والإحساس من البيئة المحيطة من خلال الابتدائية هدب7، السمع (kinocilium)8،9، الاجنه10،11،12، الغزو وورم خبيث13،14، وحتى تكوين الذاكرة15،16،17،18، والعديد من العمليات الأخرى تعتمد أساسا علي MTs. سيكون من المستحيل مشاركه الmts في جميع هذه الاحداث دون قدرتها الملحوظة علي التحول بسرعة بين النمو (البلمره) والانكماش (التحلل). وصفت هذه الخاصية بأنها عدم الاستقرار الديناميكي19. يتم تغيير MT ديناميستي في العديد من الحالات المرضية20،21،22. التالي ، فان تحديد طبيعة هذه الخاصية يمكن ان يساعد علي فهم أليات المرض وبعد ذلك معالجتها.
وقد وضعت قائمه طويلة من الأساليب لتحليل ديناميات MT, معظمها تستند إلى تقنيات التصوير23. في البداية ، تم استخدام المجاهر الضوئية واسعه المجال لمراقبه تشكيل أنابيب البوليمرات في المختبر24. الاكتشاف من [ند-كندينغ] ([ب])-بروتينات ان يجمع في [مت] [بلس-نهاي] والتطوير الطرق إلى فلوريسسينتلي تسميه بروتينات جعل هو يمكن ان يلاحظ التصرف ال [MTs] مباشره في [ليفينغ سل] مع مجال واسعه و [كونككلر] مجاهر مجهر25,26,27. واحده [آيب-بروتين] [ند-بيندينغ] بروتين 3 (EB3)28; من خلال التعبير المفرط وتتبع EB3 تنصهر إلى بروتين الفلورسنت ، يمكن تحديد معدلات التجميع MT plus-نهاية29،30.
وكثيرا ما يستخدم المجهر الضوئي الليزر البؤري المجهري (CLSM) لمتابعه ديناميات MT. ومع ذلك ، فان تقنيه التصوير هذه تشكل خطرا عاليا من السمية الضوئية والرشح الضوئي ، وهما عمليتان غير مرغوب فيهما للخلايا الحية وعينات التصوير الخافتة31. من أجل الحصول علي نسبه أفضل من الاشاره إلى الضوضاء ، يجب ان تكون قوه الليزر ومده التعرض عاليه بما يكفي في حين لا تضر العينات ، وهذا يتطلب التضحية بالقرار في مقابل السرعة. بديل مناسب ل CLSM هو الغزل القرص المجهر32. ويستند هذا الأسلوب التصوير علي استخدام القرص Nipkow33، والذي يتكون من قرص متحرك تحمل مجموعه من الثقوب ، ويعمل اي ما يعادل إلى العديد من المجاهر CLS التصوير نفس العينة في وقت واحد34. ولذلك ، فان الضوء من الليزر سوف تضيء عده مناطق في العينة في وقت واحد ولكن الحفاظ علي الطبيعة المحورية. التالي ، فان قرص Nipkow يسمح بالحصول علي صور مشابهه ل CLSM ولكن بشكل أسرع وباستخدام طاقة ليزر اقل. تم تحسين القرص Nipkow كذلك من قبل Yokogawa الكهربائية, التي أدخلت القرص الثاني مع مجموعه من العدسات الدقيقة علي ذلك ان الضوء المباشر بشكل فردي في ثقب الدبوس المعنية, مزيد من الحد من السمية الضوئية والتصوير الضوئي35. وهكذا, الغزل القرص الليزر المسح المجهري أصبحت طريقه الاختيار للتصوير الخلية الحية, ويجعل من الممكن الحصول علي الصور مع ارتفاع نسبه الاشاره إلى الضوضاء في سرعه عاليه31,36, وهو أمر حاسم لحل الإشارات مثل تلك من نهايات MT سريعة النمو.
ديناميات MT تختلف مؤقتا. علي سبيل المثال ، ميتيك MTs هي أكثر ديناميكية من تلك المرحلة البينية37،38. المثل ، لوحظت الاختلافات في معدل النمو والانكماش حتى داخل نفس مرحله دوره الخلية ، مثل انقسام39،40. لذلك ، لتجنب جمع البيانات الزائفة ، يجب ان يقتصر قياس ديناميات MT علي اطار زمني ضيق اثناء دوره الخلية. علي سبيل المثال ، يمكن تحقيق قياس ديناميات MT في طليعة عن طريق علاج الخلايا مع dimethylenastron (DME) ، وهو التناظرية monastrol الذي يمنع المحرك كينيسن Eg541 ويمنع تشكيل المغزل القطبين القطبية42. تثبيط الخلايا في طليعة مع مثبطات Eg5 DME وغيرها من المشتقات monastrol لا يؤثر علي mt ديناميات43،44،45، مما يجعل من DME أداه مفيده لدراسة ديناميات mt علي حد سواء في الخلايا الثابتة والحية44.
هنا نحن الجمع بين طريقه تحليل ديناميات MT في الخلايا بروتافاز الموصوفة من قبل Ertych وآخرون44 مع التصوير المزدوج القرص الغزل. يسمح هذا الأسلوب قياس ديناميات MT في الخلايا prometase التي تم جمعها من المستوي البؤري واحد مع معدل التصوير اعلي ، ولكن دون الرشح الضوئي والحد الأدنى من السمية الضوئية. وعلاوة علي ذلك ، وكمراسل الفلورسنت ، ونحن نستخدم البروتينات الفلورية ديمر الطماطم (tdtomato) التي تحسنت السطوع والاستقرار الضوئي بالمقارنة مع البروتين الفلوري الأخضر (egfp) ومتحمس مع انخفاض الطاقة الخفيفة46. لذلك ، يتطلب tdTomato طاقة ليزر اقل للاثاره واقل سميه ضوئيه. الإجمال ، فاننا نقوم بتحسين الطريقة من خلال الحد من السمية الضوئية وتحسين الدقة والمعالجة اللاحقة المطلوبة لتحليل ديناميات MT. بالاضافه إلى ذلك ، نقوم بإنشاء أساس للتعديلات المستقبلية للأسلوب عن طريق الجمع بينها وبين تقنيات التزامن الأخرى.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:849px;" width="849">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Dimethylenastron</td>
			<td style="width:123px;">Merck</td>
			<td style="width:344px;">324622</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DMEM w/o phenol red</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31053-28</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DPBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Fetal bovine serum</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>S0415</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Fibronectin Bovine Plasma</td>
			<td>Merck</td>
			<td>F4759</td>
			<td>Sterile powder</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">GlutaMAX</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050-038</td>
			<td>Stable glutamine substitutive</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">jetPRIME</td>
			<td>Polyplus</td>
			<td>114-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">EB3-TdTomato</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>plasmid #50708</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">RPMI 1640</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>61870-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Trypan Blue</td>
			<td>Merck</td>
			<td>T8154-20ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Trypsin/EDTA solution</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>L2143</td>
			<td>0.05% / o.02 % w/o calcium and magnesium</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">&#181;-slide</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>80426</td>
			<td>4-well slide with #1.5 coverslip</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Eclipse Ti Inverted microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Objective</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>MRD01991</td>
			<td>CFI Apo TIRF 100XC Oil</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">ACAL Laser Excahnger</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Laser box. 405, 458, 488, 514, 561 and 647nm</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Spinning disk module</td>
			<td>Andor</td>
			<td>CSU-W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Camera</td>
			<td>Andor</td>
			<td>iXon Ultra 888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Environmental Chamber</td>
			<td>Okolab</td>
			<td></td>
			<td>Dark chamber equipped with CO2 supply, tmeperature control and humidifier</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">HeLa Cells</td>
			<td>DSMZ</td>
			<td>ACC-57</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">NIS Elements v4</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Spinning disk microscope. Acquisition Software</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MATLAB</td>
			<td>Mathworks</td>
			<td></td>
			<td>Computing environment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Prism 8</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td>Statistical analysis and display software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measurement of microtubule dynamics by spinning disk microscopy in monopolar mitotic spindles

ونحن نقدم وصفا لتعديل طريقه محدده لتحديد ديناميات البولية الصغيرة في الخلايا الحية. ويستند البروتوكول علي التعبير عن علامة المشفرة وراثيا لغايات ايجابيه من الأنابيب الدقيقة (EB3 الموسومة مع بروتين الفلورسنت tdTomato) وعاليه السرعة, عاليه الدقة, التصوير الخلوي الحي باستخدام القرص الدوار المجهر المجهري. يتم تحقيق تزامن دوره الخلية وزيادة كثافة الأنابيب الدقيقة من خلال تثبيط الانفصال الوسطي في الخلايا المتصوقيه ، ويتم اجراء تحليل النمو باستخدام برنامج المسار المفتوح المصدر. ان استخدام بروتين فلوري مشرق واحمر اللون ، بالاشتراك مع طاقة الليزر المنخفضة ووقت التعرض المنخفض المطلوب لدوران القرص المجهري يقلل من السمية الضوئية واحتمال القطع الاثريه المستحثة ضوئيا. وهذا يسمح بتصوير عدد أكبر من الخلايا في نفس الاعداد مع الحفاظ علي الخلايا في وسط النمو في ظل ظروف الثقافة القياسية. ونظرا لان التحليل يتم بطريقه تلقائية خاضعه للاشراف ، فان النتائج قويه إحصائيا وقابله للتكرار.

وبعد البروتوكول المحدد المبين في الشكل 1A، تم التعبير عن pEB3 في خلايا هيلا المتنامية بصوره غير متزامنة. تمت مزامنة الخلايا 48 h بعد التحويل في طليعة من خلال العلاج DME (الشكل 1b). وكفلت هذه الخطوة ان يكون قياس ديناميات MT دائما في نفس المرحلة من دوره الخلية. وتمت معا...

Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Microtubule Dynamics by Spinning Disk Microscopy in Monopolar Mitotic Spindles at JoVE.com

Measurement of Microtubule Dynamics by Spinning Disk Microscopy in Monopolar Mitotic Spindles

نقدم هنا طريقه قويه ومفصله لتحليل ديناميات البولية المجهرية في الخلايا المتزامنة في طليعة باستخدام الخلية الحية الغزل القرص المجهري المجهر ومعالجه الصور المستندة إلى matlab.

قياس ديناميات الأنابيب المجهرية بواسطة المجهر القرص الغزل في المغزل ميتوتيك القطب

We describe a modification of an established method to determine microtubule dynamics in living cells. The protocol is based on the expression of a ...

ما نقدمه هنا هو طريقة قوية وبسيطة لتحليل ديناميات microtubule باستخدام الخلايا الحية الغزل القرص التصوير confocal في الخلايا متزامنة في prometaphase، ويتم تحليل الصور بعد ذلك على منصة MATLAB القائم. استخدام البروتين الفلورسنت الحمراء التحول في تركيبة مع المجهر القرص الغزل يقلل من السمية الضوئية. لذلك، يمكن تصوير عدد أكبر من الخلايا ضمن نفس التحضير.يتم تغيير ديناميكية microtubule في عدد كبير من الحالات المرضية. ولذلك، فهم التنظيم وسلوك ديناميات microtubule في تلك العمليات يمكن أن تساعدنا على فهم آلية المرض، وفي نهاية المطاف، وتطوير العلاجات للتعويض عنها. والطريقة قابلة للارتقاء أيضا، لذلك يمكن تطبيقها في جهد اكتشاف المخدرات.يمكن تعديل الأسلوب عن طريق تغيير بروتوكول desynchronization الفلوريسنس والحصول على خلايا من مراحل مختلفة من دورة الخلية. وهذا يمكن أن يكون مفيدا عند فحص المخدرات ضد microtubules وتحديد عيب في تقسيم والخلايا غير المنقسمة. فمن الضروري لتحسين بروتوكول transfection وكثافة البذر لكل نوع الخلية.يجب أن يكون مستوى التعبير من EB3 منخفضة، من أجل الكشف عن ميكروتوبولس واحدة المتنامية. ابدأ بشطف خلايا HeLa المتنامية بشكل غير متزامن في DPBS ، ثم احتضانها مع التربسين -EDTA لمدة خمس دقائق ، عند 37 درجة مئوية. وقف التربسينات من خلال إضافة 1640 1640 1640 متوسطة مكمّلة مع 10٪ FCS المعطلة الحرارة في نسبة ثلاثة إلى واحد، وأضاف التربسين-EDTA.حساب تركيز الخلايا وفقا لاتجاهات المخطوطات، والبذور 50،000 الخلايا في كل بئر من معدة، وأغطية الغرف. إعادة الغطاء إلى الحاضنة، وتنمو الخلايا لمدة 24 ساعة في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون. في اليوم التالي، وإزالة الخلايا من الحاضنة، وإسقاط من الحكمة إضافة 100 ميكرولترات من خليط transfection في كل بئر.إعادة الخلايا إلى الحاضنة، وبعد أربع ساعات من الحضانة تكمل الخلايا مع المتوسطة الطازجة واحتضان بالإضافة إلى ذلك لمدة 20 ساعة. إعداد محلول 2.5 ميكرومولار من dimethylenastron, أو DME, في DMEM الأحمر الفينول, تكمل مع 10٪ FCS واثنين من المليمولار L-الجلوتامين. استبدال متوسط النمو في غطاء الغرف مع متوسط نمو DME، وإعادة الخلايا إلى الحاضنة.بعد 3.5 ساعة من الحضانة، قم بنقل الخلايا إلى المجهر عن طريق تركيب غطاء الأغطية المغطى في غرفة بيئية من المقرر أن تكون 37 درجة مئوية و5٪ من ثاني أكسيد الكربون، مع لوحات داكنة للتصوير. ثم مواصلة الحضانة لما مجموعه أربع ساعات. قم بتنفيذ التصوير الزمني على مجهر مقلوب مع فتحة رقمية 100X و1.49 وهدف غمر الزيت ونظام ثنائي القرص والتركيز التلقائي الموثوق به.حدد معلمات التصوير كما هو موضح في مخطوطة النص. العثور على خلية في الطور ، والتركيز في الطائرة Z المقابلة لمركز المغزل الماكر. ثم الحصول على الصور كل 5 ثوان، على مدى ما مجموعه دقيقة واحدة، مع عدم وجود binning ولا الإضاءة بين التعرض.ابدأ بتحميل برنامج التحليل الرقمي وإضافة المجلد U-track V2.2.0 إلى مسار البحث عن البرامج، المسمى "محدد الفيلم" GUI، من نافذة الأمر. ثم استيراد الملفات الخام التي تم إنشاؤها بواسطة برنامج الحصول على الصور. أدخل الفتحة الرقمية للهدف والفاصل الزمني المستخدم في التصوير يدويًا.بمجرد تحميل جميع الصور، حفظ سلسلة الفاصل الزمني دخلت كفيلم عن طريق تحديد حفظ كقائمة الفيلم، والخيار u المسار على الجانب الأيمن من نافذة الحوار. حدد ميكروتوبول زائد الأطراف من القائمة المنبثقة، وانقر فوق "حسناً"، الذي يفتح نافذة حوار جديدة لتحديد معلمات الخطوات الثلاث للتحليل. للخطوة الأولى، انقر فوق الإعدادات وحدد الكشف عن المذنب من القائمة المنسدلة.حدد معلمات الفرق بين مرشح الغاوسيين وتجزئة مستجمعات المياه، كما هو موضح في المخطوطة. ثم حدد تطبيق الإعدادات على جميع الأفلام وانقر فوق تطبيق. للخطوة الثانية، حدد ديناميات الميكوتوبول زائد النهاية، واستخدم خيارات الإعداد لتحديد قيم الربط، وإغلاق الفجوة، والدمج، والتقسيم، ووظائف تصفية كالمان، وفقًا لمخطوطة النص.بالنسبة للمشاكل المتعلقة بالبعد، اختر اثنين من القائمة المنسدلة، واستخدم خمسة إطارات لإغلاق الحد الأقصى للفجوة، وثلاثة إطارات لطول الحد الأدنى لشرائح المسار من الخطوة الأولى. كما كان من قبل، حدد تطبيق الإعدادات على جميع الأفلام وانقر فوق تطبيق. بالنسبة للخطوة الثالثة، اختر تصنيف ديناميكيات microtubule كأسلوب تحليل المسار، وحدد المعلمات من خلال زر الإعداد.حدد المربعات لإزالة المسارات في بداية الفيلم ونهايته، وقم بإجراء مخططات الإحصاءات. من القائمة المنسدلة، حدد استخدام إطارين إلى ثلاثة قبل الفجوة الأمامية، والمئين 95 من توزيع سرعة الفجوة الأمامية، لإعادة التصنيف إلى الأمام والخلف، على التوالي. بمجرد تحديد كافة المعلمات، حدد تطبيق الاختيار / إلغاء تحديد لجميع الأفلام، وتشغيل جميع الأفلام مربعات من أجزاء التحكم u-المسار النافذة، ثم اضغط على تشغيل.يتم عرض رسالة بمجرد اكتمال معالجة الفيلم. تم التعبير عن peb3-tdTomato plasmid بشكل عابر في خلايا هيلا. مزامنة الخلايا مع العلاج DME.تم تحليل أفلام الوقت الفاصل من النمو microtubule، وسرعة النمو الناتجة ودينامية ورسمت. تم تعديل المعلمات الموصوفة للتأثير على التحليل ، مثل الحد الأقصى لطول الفجوة وعامل التقلص الأقصى ، لنفس المجموعة من أفلام الفاصل الزمني. وحُسبت القيم المقابلة لسرعة النمو ودينامية النمو.وفي حين أن سرعة النمو الناتجة لم تتأثر بشكل كبير، فإن الدينامية كانت مختلفة عندما تم تعديل الحد الأقصى لطول الفجوة. وفي الحالات الثلاث جميعها، كان الكشف عن المسارات الفرعية الصغيرة مماثلة، ومع ذلك فإن إعادة بناء مسارات النقل المتعدد الوسائط الكاملة تأثرت في الغالب عندما تم تعيين الحد الأقصى لطول الفجوة إلى 15. من أجل تقييم ما إذا كانت ظروف التصوير تتداخل مع سلوك microtubule ، تم تحليل النصفين الأول والثاني من سلسلة الفاصل الزمني بشكل منفصل ، وتمت مقارنة سرعة النمو المقابلة وديناميكية.وكما كان متوقعا، لم تكتشف أي اختلافات ذات شأن. من المهم أن نأخذ في الاعتبار، أن نظرا لأن الخلايا متزامنة في prometaphase، وكثافة microtubule عالية جدا. لذلك، على المرء أن يحدد بارامترات التحليل بعناية فائقة، وليس أن يخطئ في تحديد مختلف microtubule.ويمكن مقارنة قياس ديناميات ميكروتومول مع هذه الطريقة مع دراسات الأهداف البيولوجية الأخرى بشكل مباشر، بشكل غير مباشر، وتنظيم microtubules.

Research

JoVE Journal

Biology

In vivo Micro-circulation Measurement in Skeletal Muscle by Intra-vital Microscopy

في القياس الصغير تداول المجراة في الهيكل العظمي والعضلات التي البينية الحيوية الميكروسكوب

BACKGROUND: Regulatory factors and detailed physiology of in vivo microcirculation have remained not fully clarified after many different modalities of ...

Studying Mitotic Checkpoint by Illustrating Dynamic Kinetochore Protein Behavior and Chromosome Motion in Living Drosophila Syncytial Embryos

Studying Mitotic Checkpoint by Illustrating Dynamic Kinetochore Protein Behavior and Chromosome Motion in Living Drosophila Syncytial Embryos

دراسة حاجز الميتوزى بواسطة يوضح الحيوي Kinetochore السلوك البروتين والحركة كروموسوم في المعيشة<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الجنين المخلوي

The spindle assembly checkpoint (SAC) mechanism is an active signal, which monitors the interaction between chromosome kinetochores and spindle ...

Live Cell Imaging of Primary Rat Neonatal Cardiomyocytes Following Adenoviral and Lentiviral Transduction Using Confocal Spinning Disk Microscopy

يعيش التصوير خلية من فأر الابتدائية حديثي الولادة العضلية بعد الغدانية وLentiviral تنبيغ طريق متحد البؤر المجهري القرص الغزل

Primary rat neonatal cardiomyocytes are useful in basic in vitro cardiovascular research because they can be easily isolated in large numbers in a single ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

في فيفو تتبع 4 الأبعاد للالجذعية المكونة للدم والسلف الكبار في خلايا الفأر قبي نخاع العظم

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Using plusTipTracker Software to Measure Microtubule Dynamics in Xenopus laevis Growth Cones

Using plusTipTracker Software to Measure Microtubule Dynamics in Xenopus laevis Growth Cones

plusTipTracker باستخدام برنامج لقياس ديناميكية في أنيبيب<em&gt; القيطم المورق</em&gt; المخاريط النمو

Microtubule (MT) plus-end-tracking proteins (+TIPs) localize to the growing plus-ends of MTs and regulate MT dynamics1,2. One of the most well-known and ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

عالية الدقة التصوير الوقت الفاصل بين وتحليل الآلي للأنيبيب حيوية في المعيشة السري الإنسان خلايا الوريد غشائي

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...

Reconstitution of Basic Mitotic Spindles in Spherical Emulsion Droplets

إعادة تشكيل الأساسي الميتوزى المغازل في كروية مستحلب قطرات

Mitotic spindle assembly, positioning and orientation depend on the combined forces generated by microtubule dynamics, microtubule motor proteins and ...

Simultaneous Measurement of Mitochondrial Calcium and Mitochondrial Membrane Potential in Live Cells by Fluorescent Microscopy

قياس وقت واحد من الميتوكوندريا الكالسيوم والميتوكوندريا غشاء المحتملة في الخلايا الحية التي كتبها نيون الميكروسكوب

Apart from their essential role in generating ATP, mitochondria also act as local calcium (Ca2+) buffers to tightly regulate intracellular Ca2+ ...

High-resolution Imaging and Analysis of Individual Astral Microtubule Dynamics in Budding Yeast

عالية الدقة التصوير والتحليل من الأفراد بالنجوم أنيبيب حيوية في مهدها الخميرة

Dynamic microtubules are fundamental to many cellular processes, and accurate measurements of microtubule dynamics can provide insight into how cells ...

Examination of Mitotic and Meiotic Fission Yeast Nuclear Dynamics by Fluorescence Live-cell Microscopy

فحص الديناميات النووية الخميرة الانشطارية الميتومية وMeiotic عن طريق الفلورة الخلية الحية المجهرية

Live-cell imaging is a microscopy technique used to examine cell and protein dynamics in living cells. This imaging method is not toxic, generally does ...