Name: measurement of microtubule dynamics by spinning disk microscopy in monopolar mitotic spindles
Uploaded: 2019-11-15T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Microtubule Dynamics by Spinning Disk Microscopy in Monopolar Mitotic Spindles at JoVE.com

Wij danken de leden van de lichte microscopie faciliteit, Max-Planck Instituut voor experimentele geneeskunde, voor hun deskundig advies en ondersteuning.

1. zaaien van HeLa-cellen
<ol><li>Bereid 2 mL van 5 μg/mL fibronectine oplossing in fosfaatgebufferde Saline (PBS) en voeg hieraan 450 μL toe in elke put van een 4 well Chambered dekslip (#1.5). Incuberen de glijbaan gedurende 15 minuten bij 37 °C en 5% CO2.</li>
	<li>Spoel asynchroon groeiende HeLa-cellen af met Dulbecco's fosfaat gebufferde zoutoplossing (DPBS) en inincuberen met trypsine-EDTA (0,05%: 0,02%; w:v) gedurende 5 minuten bij 37 °C. Stop de enzymatische reactie door de toevoeging van Roswell...

Hier beschrijven we een wijziging van een methode die voor het eerst werd vastgesteld door Ertych et al.44. Samen met een aantal andere modificaties, combineren we deze techniek van MT Dynamics analyse met Dual Spinning Disk confocale Imaging. Het gebruik van de Dual Spinning Disk verbetert de resolutie van de groeiende MTs en vermindert fototoxiciteit36. We verminderen verder de fotobleaching en laserlicht veroorzaakte schade van de cellen door over te schakelen naar een l...

Microtubuli (MTs) zijn zeer dynamische structuren gevonden in vrijwel alle eukaryote cellen en in sommige bacteriën1. Samen met actine en tussenliggende filamenten, ze beeldhouwen het cytoskelet2,3. Cell Division4, molecuul transport5, flagellar verslaan6, de sensatie van de omgeving door primaire tril haar cilium7, hoorzitting (kinocilium)8,9, embryo Genesis10,11,12, invasie en metastase13,14, en zelfs Geheugenvorming15,16,17,18, en veel andere processen vertrouwen voornamelijk op MTs. deelname van MTs in al deze gebeurtenissen zou onmogelijk zijn zonder hun opmerkelijke vermogen om snel te schakelen tussen groei (polymerisatie) en krimp (depolymerisatie). Deze eigenschap wordt beschreven als dynamische instabiliteit19. MT dynamiciteit is veranderd in vele pathologische condities20,21,22. Vandaar, het bepalen van de aard van deze eigenschap kan helpen om te begrijpen van de ziekte mechanismen en vervolgens hun behandeling.
Er is een lange lijst met methoden ontwikkeld voor de analyse van MT Dynamics, waarvan de meeste gebaseerd zijn op beeldvormingstechnieken23. Aanvankelijk werden brede veld licht microscopen gebruikt om de vorming van tubuline-polymeren in vitro24te observeren. De ontdekking van end-binding (EB)-eiwitten die verzamelen bij mt plus-ends en de ontwikkeling van methoden tot fluorescently label eiwitten maakten het mogelijk om het gedrag van MTs direct in levende cellen met breed veld en confocale fluorescentie microscopen25,26,27te observeren. Eén EB-eiwit is eind bindende proteïne 3 (EB3)28; door het overdrukken en volgen van EB3 gesmolten tot een fluorescerende proteïne, kunnen MT plus-end assemblage percentages worden bepaald op29,30.
Confocale laser scanning fluorescentiemicroscopie (CLSM) wordt vaak gebruikt om de MT-dynamiek te volgen. Deze beeldvormings techniek vormt echter een hoog risico op fototoxiciteit en fotobleaching, twee ongewenste processen voor de beeldvorming van levende cellen en Dim-voorbeelden31. Om een betere signaal-ruis verhouding te verkrijgen, moeten de laser kracht en de blootstellingsduur hoog genoeg zijn, terwijl ze de monsters niet beschadigen, en dit vereist een opoffering van de resolutie in ruil voor snelheid. Een geschikt alternatief voor CLSM is het spinnen schijf microscopie32. Deze Imaging modaliteit is gebaseerd op het gebruik van een Nipkowschijf33, die bestaat uit een bewegende schijf met een array van pinholes, en werkt op equivalente wijze aan veel CLS microscopen die hetzelfde monster gelijktijdig34. Daarom zal het licht van de laser verschillende gebieden in het monster tegelijkertijd verlichten, maar het confocale karakter behouden. De Nipkowschijf maakt het daarom mogelijk om beelden te verkrijgen die vergelijkbaar zijn met CLSM, maar sneller en minder Laser vermogen gebruiken. De Nipkow-schijf werd verder verbeterd door Yokogawa Electric, die een tweede schijf introduceerde met een reeks micro lenzen erop die individueel direct licht in een respectieve pinhole, verdere vermindering van fototoxiciteit en photobleaching35. Dus, Spinning Disk laser scanning microscopie werd een methode van keuze voor Live Cell Imaging, en het maakt het mogelijk om beelden met een hoge signaal-ruis verhouding te verkrijgen op een hoge snelheid31,36, wat cruciaal is voor het oplossen van signalen zoals die van de snelgroeiende MT-ends.
MT Dynamics verschillen tijdelijk. Bijvoorbeeld, de mitotische MTs zijn dynamischer dan de interfase Ones37,38. Evenzo, verschillen in de groeisnelheid en krimp zijn waargenomen zelfs binnen dezelfde cel cyclus fase, zoals mitose39,40. Daarom, om valse gegevensverzameling te voorkomen, moet de meting van MT Dynamics worden beperkt tot een smal tijdvenster tijdens de celcyclus. Meting van de MT-dynamiek in tijdens kan bijvoorbeeld worden bereikt door de cellen te behandelen met dimethylenastron (DME), een monastrol-analoog dat de motor kinesin Eg541 remt en de vorming van de bipolaire mitotische spindel42verhindert. Remming van cellen bij tijdens met Eg5 remmer DME en andere monastrol derivaten heeft geen invloed op de MT Dynamics43,44,45, waardoor DME een nuttig instrument voor het bestuderen van MT Dynamics zowel in vaste en levende cellen44.
Hier combineren we de methode van MT Dynamics analyse in tijdens cellen, beschreven door ertych et al.44 met Dual Spinning Disk Imaging. Deze methode maakt meting van de MT-dynamiek in prometafase cellen verzameld uit een enkel focal vlak met een hogere Imaging rate, maar zonder photobleaching en minimale fototoxiciteit. Bovendien gebruiken we als fluorescerende reporter tandem dimeer tomaten fluorescerende eiwitten (tdTomato) die de helderheid en foto stabiliteit in vergelijking met het groene fluorescerende eiwit (EGFP) heeft verbeterd en is opgewonden met lager energie licht46. Daarom vereist tdTomato minder Laser vermogen voor excitatie en is het minder fototoxisch. In totaal verbeteren we de methode verder door de fototoxiciteit te verminderen en de resolutie en nabewerking te verbeteren die nodig zijn voor de MT Dynamics-analyse. Bovendien maken we een basis voor toekomstige wijzigingen van de methode door deze te combineren met andere synchronisatie technieken.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:849px;" width="849">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Dimethylenastron</td>
			<td style="width:123px;">Merck</td>
			<td style="width:344px;">324622</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DMEM w/o phenol red</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31053-28</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DPBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Fetal bovine serum</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>S0415</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Fibronectin Bovine Plasma</td>
			<td>Merck</td>
			<td>F4759</td>
			<td>Sterile powder</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">GlutaMAX</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050-038</td>
			<td>Stable glutamine substitutive</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">jetPRIME</td>
			<td>Polyplus</td>
			<td>114-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">EB3-TdTomato</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>plasmid #50708</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">RPMI 1640</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>61870-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Trypan Blue</td>
			<td>Merck</td>
			<td>T8154-20ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Trypsin/EDTA solution</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>L2143</td>
			<td>0.05% / o.02 % w/o calcium and magnesium</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">&#181;-slide</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>80426</td>
			<td>4-well slide with #1.5 coverslip</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Eclipse Ti Inverted microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Objective</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>MRD01991</td>
			<td>CFI Apo TIRF 100XC Oil</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">ACAL Laser Excahnger</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Laser box. 405, 458, 488, 514, 561 and 647nm</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Spinning disk module</td>
			<td>Andor</td>
			<td>CSU-W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Camera</td>
			<td>Andor</td>
			<td>iXon Ultra 888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Environmental Chamber</td>
			<td>Okolab</td>
			<td></td>
			<td>Dark chamber equipped with CO2 supply, tmeperature control and humidifier</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">HeLa Cells</td>
			<td>DSMZ</td>
			<td>ACC-57</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">NIS Elements v4</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Spinning disk microscope. Acquisition Software</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MATLAB</td>
			<td>Mathworks</td>
			<td></td>
			<td>Computing environment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Prism 8</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td>Statistical analysis and display software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measurement of microtubule dynamics by spinning disk microscopy in monopolar mitotic spindles

We beschrijven een modificatie van een gevestigde methode om de dynamiek van microtubulus in levende cellen te bepalen. Het protocol is gebaseerd op de uitdrukking van een genetisch gecodeerde marker voor de positieve uiteinden van microtubuli (EB3 gelabeld met Tdtomaat fluorescerende eiwitten) en hoge-snelheid, hoge-resolutie, Live-celbeeldvorming met behulp van draaiende schijf confocale microscopie. Celcyclus synchronisatie en verhoogde dichtheid van microtubuli worden bereikt door remming van de centrosomale scheiding in mitotische cellen, en analyse van de groei wordt uitgevoerd met behulp van open-source U-track software. Het gebruik van een helder en rood verschoven fluorescerende eiwit, in combinatie met het lagere Laser vermogen en de gereduceerde blootstellingstijd die nodig is voor het spinnen van schijf microscopie verminderen fototoxiciteit en de waarschijnlijkheid van lichtgeïnduceerde artefacten. Dit maakt een groter aantal cellen in dezelfde bereiding mogelijk, terwijl de cellen in een groeimedium onder standaardcultuur omstandigheden worden gehandhaafd. Omdat de analyse wordt uitgevoerd in een automatische gecontroleerde mode, zijn de resultaten statistisch robuust en reproduceerbaar.

Na het gegeven protocol in Figuur 1awerd de PEB3-tdTomato plasmide transitief uitgedrukt in asynchroon groeiende HeLa-cellen. De cellen werden gesynchroniseerd 48 h na de transfectie bij tijdens door DME behandeling (Figuur 1b). Deze stap zorgde ervoor dat de meting van de MT-dynamiek altijd in dezelfde fase van de celcyclus werd uitgevoerd. De timelapse-films werden verder verwerkt en geanalyseerd met U-track v 2.2.0, zoals beschreven in de aanvullende document...

Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Microtubule Dynamics by Spinning Disk Microscopy in Monopolar Mitotic Spindles at JoVE.com

Measurement of Microtubule Dynamics by Spinning Disk Microscopy in Monopolar Mitotic Spindles

Hier presenteren we een robuuste en gedetailleerde methode van microtubulus dynamica analyse in cellen gesynchroniseerd in tijdens met behulp van Live-cel spinnen schijf confocale microscopie en MATLAB gebaseerde beeldverwerking.

Meting van de microtubulus dynamiek door draaiende schijf microscopie in monopolaire mitotische spindels

We describe a modification of an established method to determine microtubule dynamics in living cells. The protocol is based on the expression of a ...

Wat we hier presenteren is een robuuste en eenvoudige methode om microtubuliy dynamics te analyseren met behulp van live-cel spinnen schijf confocale beeldvorming in cellen gesynchroniseerd in prometafase, en beelden worden daarna geanalyseerd op een MATLAB-gebaseerd platform. Het gebruik van rood verschoven fluorescerend eiwit in combinatie met draaiende schijfmicroscopie vermindert de fototoxiciteit. Daarom kan een groter aantal cellen worden afgebeeld binnen hetzelfde preparaat.Microtubulidydynamiek wordt in een groot aantal pathologische omstandigheden veranderd. Daarom kan het begrijpen van de regulatie en het gedrag van microtubbuledynamiek in die processen ons helpen het mechanisme van de ziekte te begrijpen en uiteindelijk therapieën te ontwikkelen om ze te compenseren. En de methode is ook schaalbaar, dus het kan mogelijk worden toegepast in een drug discovery inspanning.De methode kan worden gewijzigd door fluorescentiedesynchronisatieprotocol te wijzigen en cellen uit verschillende fasen van de celcyclus te verkrijgen. Dit kan nuttig zijn bij het screenen van geneesmiddelen tegen microtubuli en het identificeren van defecten op delende en niet-delende cellen. Het is noodzakelijk om het transfectieprotocol en de zaaidichtheid voor elk celtype te optimaliseren.Het expressieniveau van EB3 moet laag zijn om enkele groeiende microtubuli te detecteren. Begin met het spoelen van asynchrone hela-cellen in DPBS en vervolgens vijf minuten lang incubeermen met trypsine-EDTA, bij 37 graden Celsius. Stop de trypsinisatie door rpmi-1640 medium toe te voegen aangevuld met 10% warmte geïnactiveerde FCS bij een drie-tegen-een verhouding, de toegevoegde trypsin-EDTA.Bereken de concentratie van de cellen volgens manuscriptaanwijzingen, en zaad 50.000 cellen in elk goed van een voorbereide, chambered coverslip. Breng de coverslip terug naar de couveuse en kweek cellen gedurende 24 uur bij 37 graden Celsius en 5% kooldioxide. Op de volgende dag, verwijder de cellen uit de incubator, en drop-wise voeg 100 microliter van transfectie mengsel in elke put.Breng de cellen terug naar de couveuse en vul na vier uur incubatie de cellen met vers medium en bovendien 20 uur uitbroeden. Bereid een 2,5 micromolar oplossing van dimethylenastron, of DME, in fenol roodvrije DMEM, aangevuld met 10% FCS en twee millimolar L-glutamine. Vervang het groeimedium in de chambered coverslip door het DME groeimedium en breng de cellen terug naar de couveuse.Breng de cellen na 3,5 uur incubatie naar de microscoop door de chambered coverslip in een milieukamer te monteren die is ingesteld op 37 graden Celsius en 5%koolstofdioxide, met donkere panelen voor beeldvorming. Ga dan verder met de incubatie voor een totaal van vier uur. Voer de time lapse imaging uit op een omgekeerde microscoop met een 100X, 1.49 numeriek diafragma, olieonderdompeling doelstelling, een dual disk confocal systeem, en een betrouwbare autofocus systeem.Definieer de beeldvormingsparameters zoals beschreven in het tekstmanuscript. Zoek een cel in profase, en focus in het Z-vlak dat overeenkomt met het centrum van de monopolaire mitotische as. Dan verwerven beelden om de 5 seconden, meer dan een minuut, zonder binning en geen verlichting tussen de belichtingen.Begin met het laden van de numerieke analysesoftware en het toevoegen van de u-track V2.2.0-map in het softwarezoekpad, de zogenaamde filmkiezer GUI, vanuit het opdrachtvenster. Importeer vervolgens de raw-bestanden die worden gegenereerd door de software voor het verkrijgen van afbeeldingen. Voer handmatig het numerieke diafragma van de doelstelling en het tijdsinterval in dat wordt gebruikt voor beeldvorming.Zodra alle afbeeldingen zijn geladen, slaat u de ingevoerde timelapse-serie op als een film door opslaan als filmlijst en de u-trackoptie aan de rechterkant van het dialoogvenster te selecteren. Selecteer microtubuli plus-ends in het pop-upmenu en klik op oke, waarmee een nieuw dialoogvenster wordt geopend om de parameters van de drie stappen van de analyse te bepalen. Klik voor stap één op instellingen en selecteer komeetdetectie in het vervolgkeuzemenu.Definieer de parameters voor het verschil van gaussian filter en de waterscheiding segmentatie, zoals beschreven in het manuscript. Selecteer vervolgens instellingen toepassen op alle films en klik op toepassen. Selecteer voor stap twee de microtubuli plus-end-dynamiek en gebruik de instellingsopties om de waarden te definiëren voor het koppelen, dichten van hiaten, samenvoegen en splitsen en de filterfuncties van Kalman, afhankelijk van het tekstmanuscript.Voor problemen met dimensionaliteit kiest u twee in het vervolgkeuzemenu en gebruikt u vijf frames voor maximale tussenruimte om te sluiten en drie frames voor de minimale lengte van tracksegmenten vanaf de eerste stap. Selecteer net als voorheen de instellingen toepassen op alle films en klik op toepassen. Kies voor stap drie de classificatie van microtubbuledynamica als een methode voor trackanalyse en definieer de parameters via de instellingsknop.Selecteer de vakken voor het verwijderen van tracks aan het begin en einde van de film en maak histogrammen voor statistieken. Selecteer in de vervolgkeuzelijst twee tot drie frames voor voorwaartse gap en 95e percentiel van forward gap-snelheidsverdeling, voor respectievelijk voorwaartse en achterwaartse herindeling. Zodra alle parameters zijn gedefinieerd, selecteert u het selectievakje controleren/uitvinken toepassen op alle films en voert u alle selectievakjes films uit in het u-trackvenster voor het besturingselementvenster en drukt u op Uitvoeren.Er wordt een bericht weergegeven zodra de verwerking van de film is voltooid. De pEB3-tdTomato plasmid werd van voorbijgaande aard uitgedrukt in HeLa cellen. De cellen werden gesynchroniseerd met DME behandeling.Time lapse films van microtubuli groei werden geanalyseerd, en de resulterende groei snelheid en dynamiek werden uitgezet. De parameters die worden beschreven om de analyse te beïnvloeden, zoals de maximale tussenruimtelengte en de maximale krimpfactor, zijn gewijzigd voor dezelfde set timelapse-films. De overeenkomstige waarden van groeisnelheid en dynamiek werden berekend.Hoewel de resulterende groeisnelheid niet significant werd beïnvloed, was de dynamiek anders toen de maximale afstandslengte werd gewijzigd. In alle drie de gevallen was de detectie van microtubbule subsporen vergelijkbaar, maar de reconstructie van de volledige MT-trajecten werd meestal beïnvloed toen de maximale afstandslengte op 15 werd ingesteld. Om te beoordelen of beeldvormingsvoorwaarden het gedrag van microtubuli verstoorden, werden de eerste en tweede helften van de time lapse-serie afzonderlijk geanalyseerd en werden de bijbehorende groeisnelheid en dynamiek vergeleken.Zoals verwacht werden er geen significante verschillen vastgesteld. Het is belangrijk om in gedachten te houden, dat omdat de cellen worden gesynchroniseerd in prometafase, de dichtheid van microtubuli zeer hoog is. Daarom moet men de parameters van de analyse zeer zorgvuldig instellen, om verschillende microtubuli niet verkeerd te identificeren.De meting van de microtubulidynamiek met deze methode kan worden vergeleken met studies van andere biologische doelen direct, indirect, het reguleren van microtubuli.

Research

JoVE Journal

Biology

In vivo Micro-circulation Measurement in Skeletal Muscle by Intra-vital Microscopy

In vivo micro-circulatie meting in de skeletspier door Intra-vitale Microscopie

BACKGROUND: Regulatory factors and detailed physiology of in vivo microcirculation have remained not fully clarified after many different modalities of ...

Studying Mitotic Checkpoint by Illustrating Dynamic Kinetochore Protein Behavior and Chromosome Motion in Living Drosophila Syncytial Embryos

Studying Mitotic Checkpoint by Illustrating Dynamic Kinetochore Protein Behavior and Chromosome Motion in Living Drosophila Syncytial Embryos

Studeren Mitotische Checkpoint door te laten zien Dynamic kinetochoor Protein Gedrag en Chromosoom Motion in Living<em&gt; Drosophila</em&gt; Syncytieel Embryo&#39;s

The spindle assembly checkpoint (SAC) mechanism is an active signal, which monitors the interaction between chromosome kinetochores and spindle ...

Live Cell Imaging of Primary Rat Neonatal Cardiomyocytes Following Adenoviral and Lentiviral Transduction Using Confocal Spinning Disk Microscopy

Live cell imaging van primaire Rat Neonatale Cardiomyocytes Na Adenovirale en Lentiviral Transduction via confocale draaiende schijf Microscopie

Primary rat neonatal cardiomyocytes are useful in basic in vitro cardiovascular research because they can be easily isolated in large numbers in a single ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-dimensionale Tracking van hematopoietische stamcellen en progenitorcellen in volwassen muis calvarial Bone Marrow

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Using plusTipTracker Software to Measure Microtubule Dynamics in Xenopus laevis Growth Cones

Using plusTipTracker Software to Measure Microtubule Dynamics in Xenopus laevis Growth Cones

Met behulp plusTipTracker Software om dynamiek van microtubuli Meet in<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Groei Kegels

Microtubule (MT) plus-end-tracking proteins (+TIPs) localize to the growing plus-ends of MTs and regulate MT dynamics1,2. One of the most well-known and ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

Hoge-resolutie time-lapse beeldvorming en geautomatiseerde analyse van de dynamiek van microtubuli in Living humane navelstreng endotheelcellen

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...

Reconstitution of Basic Mitotic Spindles in Spherical Emulsion Droplets

Reconstructie van Basic Mitotische Assen in Sferische emulsiedruppeltjes

Mitotic spindle assembly, positioning and orientation depend on the combined forces generated by microtubule dynamics, microtubule motor proteins and ...

Simultaneous Measurement of Mitochondrial Calcium and Mitochondrial Membrane Potential in Live Cells by Fluorescent Microscopy

Gelijktijdige meting van mitochondriale calcium en mitochondriale membraan potentieel in levende cellen door fluorescentie microscopie

Apart from their essential role in generating ATP, mitochondria also act as local calcium (Ca2+) buffers to tightly regulate intracellular Ca2+ ...

High-resolution Imaging and Analysis of Individual Astral Microtubule Dynamics in Budding Yeast

Hoge-resolutie beeldvorming en analyse van individuele Astral dynamiek van microtubuli in gist

Dynamic microtubules are fundamental to many cellular processes, and accurate measurements of microtubule dynamics can provide insight into how cells ...

Examination of Mitotic and Meiotic Fission Yeast Nuclear Dynamics by Fluorescence Live-cell Microscopy

Onderzoek van de kern dynamiek van de mitotische en Meiotische splijtstof gist door fluorescentie-Live-cel microscopie

Live-cell imaging is a microscopy technique used to examine cell and protein dynamics in living cells. This imaging method is not toxic, generally does ...