Name: measurement of microtubule dynamics by spinning disk microscopy in monopolar mitotic spindles
Uploaded: 2019-11-15T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Microtubule Dynamics by Spinning Disk Microscopy in Monopolar Mitotic Spindles at JoVE.com

אנו מודים לחברי מתקן המיקרוסקופיה, מכון מקס פלנק לרפואה ניסויית, לייעוץ ולתמיכה המומחים שלהם.

1. זריעת תאי הלה
<ol><li>להכין 2 מ ל של 5 μg/mL fibronectin פתרון ב פוספט באגירה מלוחים (PBS) ולהוסיף 450 μL של אותו לתוך כל טוב של 4 שמיכות היטב הצ (#1 .5). מודיית את השקופית עבור 15 דקות ב 37 ° צ' ו 5% CO2.</li>
	<li>לשטוף באופן אסינכרוני בתאי הלה גדל עם מלוחים פוספט באגירה של Dulbecco (DPBS) ו דגירה עם טריפסין-EDTA (0.05%: 0.02%; w:v) ...

כאן, אנו מתארים שינוי של שיטה שהוקמה לראשונה על ידי ארפטיכון ואח '.44. יחד עם מספר שינויים אחרים, אנו משלבים את הטכניקה הזו של הניתוח MT דינמיקה עם הדמיה כפולה מסתובב הדיסק. השימוש בדיסק מסתובב כפול משפר את הרזולוציה של הגוברת MTs תוך הפחתת רעילות התמונה36. אנחנו עוד להק...

Microtubules (MTs) הם מבנים דינמיים מאוד למצוא כמעט כל התאים איקריוטית ובכמה חיידקים1. . הם מפסל את שלדהציטו2,3 תא החטיבה4, מולקולה הובלה5, מכות הדגל6, התחושה של הסביבה המקיפה דרך הסייום7, שמיעה (kinocilium)8,9, embryogenesis10,11,12, פלישה גרורות13,14, ואפילו היווצרות זיכרון15,16,17,18, ותהליכים רבים אחרים מסתמכים בעיקר על MTs. השתתפות MTs בכל האירועים הללו יהיה בלתי אפשרי ללא היכולת המדהימה שלהם לעבור במהירות בין הצמיחה (פלמור) והצטמקות (דפלוניזציה). מאפיין זה מתואר כאי-יציבות דינאמית19. הר הדינמיות משתנה בתנאים פתולוגיים רבים20,21,22. לפיכך, קביעת אופי הנכס יכול לעזור להבין את מנגנוני המחלות ולאחר מכן את הטיפול שלהם.
רשימה ארוכה של שיטות פותחו עבור ניתוח MT דינמיקה, שרובם מבוססים על טכניקות דימות23. בתחילה, מיקרוסקופים אור שדה רחב שימשו להתבוננות היווצרות פולימרים טובולין בתוך מבחנה24. הגילוי של מחייב הקצה (EB)-חלבונים שאוספים ב-MT פלוס-מסתיים ופיתוח של שיטות כדי לתייג חלבונים באנרגיה fluorescently אופן מאפשר לבחון את התנהגותו של MTs ישירות בתאים חיים עם שדה רחב ו-מיקרוסקופ מיקרוסקופים פלואורסצנטית25,26,27. EB-פרוטאין אחד הוא חלבון מחייב הקצה 3 (EB3)28; על ידי הבעת יתר ומעקב EB3 התמזגו חלבון פלורסנט, MT פלוס-end תעריפי ההרכבה ניתן לקבוע29,30.
לייזר confocal וקד סריקת מיקרוסקופ קרינה פלואורסצנטית (CLSM) משמש לעתים קרובות כדי לעקוב MT הדינמיקה. עם זאת, טכניקת הדמיה זו מהווה סיכון גבוה לפוטורעילות ופוטוהלבנה, שני תהליכים לא רצויים עבור תא חי והדמיה לדוגמה עמומה31. כדי לקבל יחס טוב יותר של אות לרעש, את כוח הלייזר ואת משך החשיפה צריך להיות גבוה מספיק בעוד לא לפגוע בדגימות, וזה דורש הקרבת החלטה בתמורה למהירות. חלופה מתאימה ל-CLSM היא ספינינג32מיקרוסקופ דיסק. מודאליות זו מבוססת על השימוש של דיסק Nipkow33, אשר מורכב דיסק נע הנושאת מערך של חורים, ועובד אופן מיקרוסקופים CLS רבים הדמיה זהה בו34. לכן, האור מהלייזר יאיר מספר אזורים במדגם בו זמנית, אך ישמור על הטבע הטוב. הדיסק Nipkow, לכן, מאפשר קבלת תמונות דומות CLSM אבל מהיר יותר באמצעות כוח לייזר פחות. The Nipkow הדיסק היה שיפור נוסף על ידי Yokogawa אלקטריק, אשר הציג דיסק שני עם מערך של microlenses על זה כי בנפרד אור ישיר לתוך pinhole בהתאמה, הפחתת הרעילות הרבה יותר phototoxicity לבנת35. כך, מסתובב מיקרוסקופית דיסק סריקה לייזר הפכה לשיטה של בחירה עבור הדמיה תא חי, וזה מאפשר להשיג תמונות עם יחס אות לרעש גבוה במהירות גבוהה31,36, אשר חיוני לפתרון אותות כגון אלה מתוך הצמיחה המהירה MT.
הדינמיקה של MT שונה באופן זמני. לדוגמה, mitotic MTs הם דינמיים יותר מאשר האינטרפאזה37,38. באופן דומה, הבדלים בקצב הצמיחה הצטמקות נצפו גם בתוך שלב אותו מחזור התא, כגון מיטוזה39,40. לכן, כדי להימנע מאיסוף נתונים שווא, יש להגביל את המדידה של הדינמיקה של MT לחלון זמן צר במהלך מחזור התא. לדוגמה, מדידה של MT דינמיקה ב prometaphase ניתן להשיג על ידי טיפול בתאים עם dimethylenאסטרה (dme), אנלוגי monastrol המונע את המנוע קינזין Eg541 ומונע את היווצרות של הmitotic ציר דו-קוטבית42. עיכוב של תאים ב prometaphase עם Eg5 מעכבי dme ונגזרים monastrol אחרים לא משפיעים על MT דינמיקה43,44,45, מה שהופך dme כלי שימושי ללמוד mt דינמיקה הן בתאים קבועים וחיים44.
כאן אנו משלבים את השיטה של ניתוח הדינמיקה MT בתאים prometaphase שתוארו על ידי Ertych ואח '44 עם הדמיה דיסק מסתובב כפול. שיטה זו מאפשרת מדידה של הדינמיקה MT ב prometaphase תאים שנאספו ממישור מוקד אחד עם קצב הדמיה גבוה יותר, אך ללא הלבנת ומינימלית פוטורעילות. יתר על כן, כעיתונאי פלורסנט, אנו משתמשים בחלבון פלורסנט (tdTomato) הכולל בהירות ופוטויציבות לעומת חלבון פלורסנט ירוק (EGFP) והוא נרגש עם אור אנרגיה נמוכה46. לכן, tdTomato דורש פחות כוח לייזר עבור עירור והוא פחות פוטורעיל. בסך הכל, אנו משפרים עוד את השיטה על-ידי הפחתת הרעילות ושיפור הרזולוציה והטיפול בדואר הנדרש לניתוח הדינמיקה של MT. בנוסף, אנו יוצרים בסיס לשינויים עתידיים בשיטה על-ידי שילובם בשיטות סינכרון אחרות.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:849px;" width="849">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Dimethylenastron</td>
			<td style="width:123px;">Merck</td>
			<td style="width:344px;">324622</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DMEM w/o phenol red</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31053-28</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DPBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Fetal bovine serum</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>S0415</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Fibronectin Bovine Plasma</td>
			<td>Merck</td>
			<td>F4759</td>
			<td>Sterile powder</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">GlutaMAX</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050-038</td>
			<td>Stable glutamine substitutive</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">jetPRIME</td>
			<td>Polyplus</td>
			<td>114-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">EB3-TdTomato</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>plasmid #50708</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">RPMI 1640</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>61870-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Trypan Blue</td>
			<td>Merck</td>
			<td>T8154-20ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Trypsin/EDTA solution</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>L2143</td>
			<td>0.05% / o.02 % w/o calcium and magnesium</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">&#181;-slide</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>80426</td>
			<td>4-well slide with #1.5 coverslip</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Eclipse Ti Inverted microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Objective</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>MRD01991</td>
			<td>CFI Apo TIRF 100XC Oil</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">ACAL Laser Excahnger</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Laser box. 405, 458, 488, 514, 561 and 647nm</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Spinning disk module</td>
			<td>Andor</td>
			<td>CSU-W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Camera</td>
			<td>Andor</td>
			<td>iXon Ultra 888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Environmental Chamber</td>
			<td>Okolab</td>
			<td></td>
			<td>Dark chamber equipped with CO2 supply, tmeperature control and humidifier</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">HeLa Cells</td>
			<td>DSMZ</td>
			<td>ACC-57</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">NIS Elements v4</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Spinning disk microscope. Acquisition Software</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MATLAB</td>
			<td>Mathworks</td>
			<td></td>
			<td>Computing environment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Prism 8</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td>Statistical analysis and display software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measurement of microtubule dynamics by spinning disk microscopy in monopolar mitotic spindles

אנו מתארים שינוי של שיטה מבוססת לקביעת הדינמיקה המיקרוכדורית בתאי החיים. הפרוטוקול מבוסס על הביטוי של סמן מקודד גנטית עבור הקצוות החיוביים של microtubules (EB3 מתויג עם חלבון פלורסנט tdTomato) ו במהירות גבוהה, ברזולוציה גבוהה, הדמיה של תא חי באמצעות מיקרוסקופ הדיסק מסתובב מיקרוסקופית. סנכרון התאים והצפיפות המוגברת של microtubules מתבצעים על ידי הפרדה מרבית בתאי הmitotic, וניתוח הצמיחה מבוצע באמצעות תוכנת U-Track של מקור פתוח. השימוש בחלבון פלורסנט בהיר ואדום הוזז, בשילוב עם כוח לייזר נמוך יותר וזמן חשיפה מופחת הנדרש עבור מיקרוסקופ דיסק מסתובב להפחית את הרעילות וההסתברות של חפצים המושרה באור. הדבר מאפשר הדמיה של מספר גדול יותר של תאים בהכנה זהה תוך שמירה על התאים במדיום גדילה תחת תנאי תרבות סטנדרטיים. מכיוון שהניתוח מבוצע באופן אוטומטי מפוקח, התוצאות הן עמידות סטטיסטית ומפוקחת.

בעקבות הפרוטוקול הנתון המתואר באיור 1A, ה-PEB3-tdTomato באופן מידי התבטא באופן מבוקר בתאי חלה הגדלים באופן אסינכרוני. התאים סונכרנו 48 h לאחר הprometaphase באמצעות טיפול DME (איור 1B). שלב זה הבטיח כי המדידה של MT דינמיקה נעשתה תמיד באותו שלב של מחזור התא. הסרטים בזמן הקפיצה הי...

Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Microtubule Dynamics by Spinning Disk Microscopy in Monopolar Mitotic Spindles at JoVE.com

Measurement of Microtubule Dynamics by Spinning Disk Microscopy in Monopolar Mitotic Spindles

כאן אנו מציגים שיטה איתנה ומפורטת של ניתוח מיקרוטוכדורית בתאים מסונכרנים בprometaphase באמצעות מיקרוסקופ הדיסק המסתובב של תא חי מיקרוסקופיה ועיבוד תמונה מבוסס MATLAB.

מדידה של מיקרוטוכדורית על ידי ספינינג מיקרוסקופ דיסק ב-מונוסולאר Mitotic צירים

We describe a modification of an established method to determine microtubule dynamics in living cells. The protocol is based on the expression of a ...

מה שאנו מציגים כאן הוא שיטה חזקה ופשוטה לנתח דינמיקה microtubule באמצעות דימות קונפוסל דיסק מסתובב תא חי בתאים מסונכרנים prometaphase, ותמונות מנותחות לאחר מכן על פלטפורמה מבוססת MATLAB. השימוש בחלבון פלואורסצנטי אדום בשילוב עם מיקרוסקופ דיסק מסתובב מפחית פוטוטוקסיות. לכן, מספר גדול יותר של תאים ניתן לדמיין בתוך אותה הכנה.דינמיקת המיקרוטובול משתנה במספר רב של מצבים פתולוגיים. לכן, הבנת הרגולציה וההתנהגות של דינמיקת המיקרוטובול בתהליכים אלה יכולה לעזור לנו להבין את מנגנון המחלה, ובסופו של דבר לפתח טיפולים כדי לפצות עליהם. השיטה היא גם יוקרתית, כך שזה יכול להיות מיושם במאמץ גילוי סמים.ניתן לשנות את השיטה על ידי שינוי פרוטוקול desynchronization פלואורסצנטיות וקבלת תאים מהשלבים השונים של מחזור התא. זה יכול להיות שימושי בעת סינון תרופות נגד microtubules וזיהוי פגם על תאים מתחלקים ולא מתחלקים. יש צורך למטב את פרוטוקול ההמרה ואת צפיפות הזריעה עבור כל סוג תא.רמת הביטוי של EB3 צריכה להיות נמוכה, על מנת לזהות microtubules גדל יחיד. התחל על ידי שטיפה אסינכרונית גדל תאי HeLa ב DPBS, ולאחר מכן דגירה אותם עם טריפסין-EDTA במשך חמש דקות, ב 37 מעלות צלזיוס. הפסק את ההפסקה על-ידי הוספת RPMI-1640 בינוני בתוספת FCS 10%heat מושבת ביחס של שלושה לאחד, טריפסין-EDTA הוסיף.לחשב את הריכוז של התאים על פי הוראות כתב יד, וזרע 50, 000 תאים לתוך כל באר של מוכן, כריכה קאמרית. מחזירים את הכיסויים לאנקובטור, ומגדלים תאים במשך 24 שעות ב-37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו-חמצני. למחרת, להסיר את התאים מהאינקובטור, ושחרר חכם להוסיף 100 microliters של תערובת transfection לתוך כל באר.מחזירים את התאים לחממה, ולאחר ארבע שעות של דגירה משלימים את התאים עם מדיום טרי ובנוסף אינקובט במשך 20 שעות. הכן פתרון 2.5 micromolar של dimethylenastron, או DME, ב DMEM חינם אדום פנול, בתוספת 10% FCS ושני מילימולר L-גלוטמין. החלף את מדיום הצמיחה בכיסוי התאי במדיום הצמיחה של DME והחזר את התאים לאנקובטור.לאחר 3.5 שעות של דגירה, להעביר את התאים למיקרוסקופ על ידי הרכבה כיסוי תא לתוך תא סביבתי להגדיר 37 מעלות צלזיוס ו 5% פחמן דו חמצני, עם לוחות כהים להדמיה. לאחר מכן המשיכו את הדגירה במשך ארבע שעות בסך הכל. בצע את הדמיית לשגות הזמן במיקרוסקופ הפוך עם צמצם מספרי 100X, 1.49, מטרת טבילת שמן, מערכת קונפוקל דיסק כפולה, ומערכת מיקוד אוטומטית אמינה.הגדר את פרמטרי ההדמיה כמתואר בכתב היד של הטקסט. מצא תא בפרופזה, והתמקד במישור Z המתאים למרכז הציר המיטוטי המונופולרי. לאחר מכן לרכוש תמונות כל 5 שניות, על פני סך של דקה אחת, ללא binning וללא תאורה בין חשיפות.התחל על-ידי טעינת תוכנת הניתוח המספרי והוספת התיקיה V2.2.0 של u-track לנתיב החיפוש של התוכנה, הנקראת GUI של בורר סרטים, מחלון הפקודה. לאחר מכן יבא את הקבצים הגולמיים שנוצרו על-ידי תוכנת רכישת התמונות. הזן באופן ידני את הצמצם המספרי של המטרה ואת מרווח הזמן המשמש להדמיה.לאחר שכל התמונות נטענות, שמור את סידרת לשגות הזמן שהוזנה כסרט על-ידי בחירה באפשרות שמור כרשימת סרטים ואת אפשרות ה- U-track בצד ימין של חלון הדו-שיח. בחר microtubule plus-ends מהתפריט הנפתח ולחץ על אישור, הפותח חלון דו-שיח חדש כדי לקבוע את הפרמטרים של שלושת שלבי הניתוח. עבור השלב הראשון, לחץ על הגדרות ובחר זיהוי שביט מהתפריט הנפתח.הגדר את הפרמטרים להבדל של מסנן גאוסיאני ופילוח קו פרשת המים, כמתואר בכתב היד. לאחר מכן בחר החל הגדרות על כל הסרטים ולחץ על החל. עבור השלב השני, בחר את הדינמיקה של microtubule plus-end, ולהשתמש באפשרויות ההגדרה כדי להגדיר את הערכים לקישור, לסגירת רווחים, למיזוג ולפיצול ולפונקציות המסנן של קלמן, בהתאם לכתב היד של הטקסט.לבעיות בממדיות, בחרו שתיים מהתפריט הנפתח, ולהשתמש בחמש מסגרות לסגירה של רווח מרבי ושלוש מסגרות לאורך מינימלי של מקטעי רצועה מהשדה הראשון. כמו קודם, בחר להחיל הגדרות על כל הסרטים ולחץ על החל. עבור שלב שלישי, בחר סיווג דינמיקת microtubule כשיטה לניתוח מסלול והגדר את הפרמטרים באמצעות לחצן ההגדרה.בחר את התיבות להסרת רצועות בתחילת הסרט ובסוף הסרט והפוך אותן להיסטוגרמות סטטיסטיקה. מהרשימה הנפתחת, בחר באמצעות שתיים עד שלוש מסגרות לפני רווח קדימה, והאחוזון ה-95 של התפלגות מהירות הפער קדימה, עבור סיווג מחדש קדימה ואחורה, בהתאמה. לאחר הגדרת כל הפרמטרים, בחר החל בדיקה/ביטול סימון על כל הסרטים והפעל את כל תיבות הסרטים מחלון ה- U-track של חלוניות הפקדים ולאחר מכן לחץ על הפעל.הודעה מוצגת לאחר השלמת עיבוד הסרט. הפלסמיד pEB3-tdTomato בא לידי ביטוי באופן ארעי בתאי הלה. התאים סונכרנו עם טיפול DME.סרטים לשגות זמן של צמיחת microtubule נותחו, ואת מהירות הצמיחה וכתוצאה מכך ואת הדינמיקה היו התווה. הפרמטרים המתוארים כמשפיעים על הניתוח, כגון אורך רווח מרבי ומגורם הצטמקות מרבי, שונו עבור אותה קבוצה של סרטים לשגות בזמן. הערכים המתאימים של מהירות הצמיחה והדינמיקה חושבו.בעוד מהירות הצמיחה וכתוצאה מכך לא הושפעה באופן משמעותי, הדינמיקה הייתה שונה כאשר אורך הפער המרבי השתנה. בכל שלושת המקרים, הגילוי של מסלולי משנה microtubule היה דומה, עדיין שחזור של מסלולי MT מלא הושפע בעיקר כאשר אורך הפער המרבי נקבע ל 15. כדי להעריך אם תנאי ההדמיה הפריעו להתנהגות המיקרוטובול, נותחו החצאים הראשון והשני של סדרת הזמן בנפרד, והשוו את מהירות הצמיחה והדינמיקה המתאימות.כצפוי, לא התגלו הבדלים משמעותיים. חשוב לזכור, כי בגלל התאים מסונכרנים prometaphase, הצפיפות של microtubule הוא גבוה מאוד. לכן, יש להגדיר את הפרמטרים של הניתוח בזהירות רבה, לא כדי מזהה בטעות microtubule שונים.ניתן להשוות את המדידה של דינמיקת microtubule בשיטה זו עם מחקרים של מטרות ביולוגיות אחרות ישירות, בעקיפין, ויסות microtubules.

Research

JoVE Journal

Biology

In vivo Micro-circulation Measurement in Skeletal Muscle by Intra-vital Microscopy

במדידה Micro-vivo מחזור בשרירי השלד על ידי מיקרוסקופית תוך חיוני

BACKGROUND: Regulatory factors and detailed physiology of in vivo microcirculation have remained not fully clarified after many different modalities of ...

Studying Mitotic Checkpoint by Illustrating Dynamic Kinetochore Protein Behavior and Chromosome Motion in Living Drosophila Syncytial Embryos

Studying Mitotic Checkpoint by Illustrating Dynamic Kinetochore Protein Behavior and Chromosome Motion in Living Drosophila Syncytial Embryos

לימוד מחסום mitotic ידי הממחישות התנהגות חלבון דינמי Kinetochore ו Motion כרומוזום חיים<em&gt; תסיסנית</em&gt; עוברים סינסיציאלי

The spindle assembly checkpoint (SAC) mechanism is an active signal, which monitors the interaction between chromosome kinetochores and spindle ...

Live Cell Imaging of Primary Rat Neonatal Cardiomyocytes Following Adenoviral and Lentiviral Transduction Using Confocal Spinning Disk Microscopy

ההדמיה של תא חי של ראשוני cardiomyocytes ילודים החולדה בעקבות adenoviral וlentiviral התמרה באמצעות דיסק מסתובב confocal מיקרוסקופית

Primary rat neonatal cardiomyocytes are useful in basic in vitro cardiovascular research because they can be easily isolated in large numbers in a single ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

במעקב 4 ממדי Vivo של תאי גזע ואבות היווצרות דם במבוגרי עכבר calvarial מח עצם

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Using plusTipTracker Software to Measure Microtubule Dynamics in Xenopus laevis Growth Cones

Using plusTipTracker Software to Measure Microtubule Dynamics in Xenopus laevis Growth Cones

באמצעות plusTipTracker תוכנה כדי למדוד microtubule Dynamics ב<em&gt; Laevis Xenopus</em&gt; קונוסים צמיחה

Microtubule (MT) plus-end-tracking proteins (+TIPs) localize to the growing plus-ends of MTs and regulate MT dynamics1,2. One of the most well-known and ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

זמן לשגות הדמיה ברזולוציה גבוהה וניתוח אוטומטי של Dynamics microtubule In Living האדם טבורי וריד לתאי אנדותל

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...

Reconstitution of Basic Mitotic Spindles in Spherical Emulsion Droplets

כינון צירי mitotic הבסיסי בטיפות אמולסיה שסתומים

Mitotic spindle assembly, positioning and orientation depend on the combined forces generated by microtubule dynamics, microtubule motor proteins and ...

Simultaneous Measurement of Mitochondrial Calcium and Mitochondrial Membrane Potential in Live Cells by Fluorescent Microscopy

מדידה בו זמנית של סידן מיטוכונדריאלי מיטוכונדריאלי ממברנה פוטנציאלית בתאים חיים באמצעות פלורסנט מיקרוסקופית

Apart from their essential role in generating ATP, mitochondria also act as local calcium (Ca2+) buffers to tightly regulate intracellular Ca2+ ...

High-resolution Imaging and Analysis of Individual Astral Microtubule Dynamics in Budding Yeast

הדמיה ברזולוציה גבוהה וניתוח של Dynamics microtubule אסטרל הבודד שמרים ניצנים

Dynamic microtubules are fundamental to many cellular processes, and accurate measurements of microtubule dynamics can provide insight into how cells ...

Examination of Mitotic and Meiotic Fission Yeast Nuclear Dynamics by Fluorescence Live-cell Microscopy

בחינת Mitotic ומיוטיק ביקוע הדינמיקה הגרעינית על ידי הזריחה לחיות-מיקרוסקופ התא

Live-cell imaging is a microscopy technique used to examine cell and protein dynamics in living cells. This imaging method is not toxic, generally does ...