Name: measurement of microtubule dynamics by spinning disk microscopy in monopolar mitotic spindles
Uploaded: 2019-11-15T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Microtubule Dynamics by Spinning Disk Microscopy in Monopolar Mitotic Spindles at JoVE.com

Max-Planck Deneysel Tıp Enstitüsü Hafif Mikroskobu Tesisi üyelerine uzman tavsiye ve desteklerinden dolayı teşekkür ederiz.

1. HeLa Hücrelerinin Tohumlanması
<ol><li>Fosfat tamponlu salin (PBS) içinde 2 mL 5 μg/mL fibronectin çözeltisi hazırlayın ve 4 iyi odalı coverslip 'in her kuyuya 450 μL ekleyin (#1.5). 37 °C ve %5 CO2'de15 dakika boyunca kaydırağı kuluçkaya yatırın.</li>
	<li>Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Salini (DPBS) ile eş zamanlı olarak büyüyen HeLa hücrelerini durulayın ve tripsin-EDTA ile inkübün (%0.05: 0.02; w:v) 5 dakika boyunca 37 °C'de. Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 orta 3:1...

Burada, ilk ertych ve ark.44tarafından kurulan bir yöntemin bir değişiklik açıklar. Diğer bazı modifikasyonlarla birlikte, bu MT dinamiği analizi tekniğini çift dönen disk konfokal görüntüleme ile birleştiriyoruz. Çift eğirme diskinin kullanımı fototoksisiteyi azaltırken mt'ler büyüyen çözünürlüğü artırır36. Daha uzun bir dalga boyu floresan muhabirine geçerek hücrelerin fotobeyaztma ve lazer ışık kaynaklı hasarını daha da azaltıyoru...

Mikrotübüller (MTs) hemen hemen tüm ökaryotik hücrelerde ve bazı bakterilerde bulunan son derece dinamik yapılardır1. Aktin ve ara filamentlerle birlikte sitoiskelet2,3'ün yonttürün. Hücre bölünmesi4, molekül taşıma5, flagellar dayak6, birincil cilium7ile çevrenin hissi , işitme (kinocilium)8,9, embriyogenez10,11,12, invazyon ve metastaz13,14, ve hatta bellek oluşumu15,16,17,18, ve diğer pek çok süreç öncelikle MTs güveniyor. Tüm bu olaylara MTs katılımı hızla büyüme (polimerizasyon) ve büzülme (depolimerizasyon) arasında geçiş olağanüstü yeteneği olmadan imkansız olacaktır. Bu özellik dinamik kararsızlık19olarak tanımlanır. MT dinamikliği birçok patolojik koşullarda değiştirilir20,21,22. Bu nedenle, bu özelliğin doğasını belirleme hastalık mekanizmaları ve daha sonra tedavi anlamak için yardımcı olabilir.
MT dinamiği analizi için uzun bir yöntem listesi geliştirilmiştir ve bunların çoğu görüntüleme tekniklerine dayanmaktadır23. Başlangıçta, geniş alan ışık mikroskoplar in vitro24tubulin polimerlerin oluşumunu gözlemlemek için kullanılmıştır. MT artı uçlarında toplanan son bağlayıcı (EB)-proteinlerin keşfi ve floresan etiket proteinleri için yöntemlerin geliştirilmesi, geniş alan ve konfokal floresan mikroskoplar25,26,27ile canlı hücrelerde doğrudan MT'lerin davranışını gözlemlemek mümkün kılmaktadır. Bir EB-protein ilerler bağlayıcı protein 3 (EB3)28; bir floresan protein erimiş EB3 aşırı ekspresyon ve izleme ile, MT artı uç montaj oranlarıbelirlenebilir 29,30.
Konfokal lazer tarama floresan mikroskopisi (CLSM) sıklıkla MT dinamiklerini takip etmek için kullanılır. Ancak, bu görüntüleme tekniği fototoksisite ve fotobeyazrlama, canlı hücre ve loş örnek görüntüleme için iki istenmeyen süreçler yüksek bir risk teşkil31. Daha iyi bir sinyal-gürültü oranı elde etmek için, lazer gücü ve maruz kalma süresi numunelere zarar vermezken yeterince yüksek olmalıdır ve bu da hız karşılığında çözünürlükten ödün vermelidir. CLSM'ye uygun bir alternatif, dönen disk mikroskobu32'dir. Bu görüntüleme yöntemi bir Nipkow disk33kullanımına dayanmaktadır , hangi iğne delikleri bir dizi taşıyan hareketli bir disk oluşur, ve aynı anda aynı örneği görüntüleme birçok CLS mikroskoplar eşdeğer çalışır34. Bu nedenle, lazerden gelen ışık aynı anda örnekteki çeşitli bölgeleri aydınlatır ancak konfokal tabiatı korur. Nipkow disk, bu nedenle, CLSM benzer ama daha hızlı ve daha az lazer gücü kullanarak görüntüleri elde sağlar. Nipkow disk daha yokogawa Electric tarafından geliştirilmiştir, hangi mikrolensler bir dizi ile ikinci bir disk tanıttı bu ayrı ayrı bir iğne deliği içine ışık doğrudan, daha fazla fototoksisite ve fotobleaching azaltarak35. Böylece, dönen disk lazer tarama mikroskopisi canlı hücre görüntüleme için tercih edilen bir yöntem haline geldi, ve mümkün yüksek hızda yüksek sinyal-gürültü oranı ile görüntü elde etmek için yapar31,36, bu hızlı büyüyen MT biter gibi sinyalleri çözmek için çok önemlidir.
MT dinamiği geçici olarak farklılık gösterir. Örneğin, mitotik MTs interfaz olanlar37,38daha dinamiktir. Benzer şekilde, büyüme hızı ve büzülme farklılıkları aynı hücre döngüsü fazı içinde bile gözlenmiştir, mitoz gibi39,40. Bu nedenle, yanlış veri toplamayı önlemek için, MT dinamiğinin ölçümü hücre döngüsü sırasında dar bir zaman penceresi ile sınırlandırılmalıdır. Örneğin, prometafazda MT dinamiğinin ölçümü, motor kinsin Eg541'i inhibe eden ve bipolar mitotik mil oluşumunu engelleyen bir monastrol analogu olan dimethylenastron (DME) hücreleri tedavi ederek elde edilebilir42. Eg5 inhibitörü DME ve diğer monastrol türevleri ile prometafazda hücrelerin inhibisyonu MT dinamikleri etkilemez43,44,45, Hangi DME sabit ve canlı hücrelerde hem de MT dinamikleri incelemek için yararlı bir araç yapar44.
Burada Ertych ve ark.44 tarafından tanımlanan prometafaz hücrelerinde MT dinamiği analizi yöntemini çift dönen disk görüntüleme ile birleştiriyoruz. Bu yöntem, fotobeyaztma ve minimum fototoksisite olmaksızın, daha yüksek görüntüleme hızına sahip tek bir odak düzleminden toplanan prometafaz hücrelerinde MT dinamiğinin ölçülmesine olanak sağlar. Ayrıca, floresan muhabiri olarak, yeşil floresan protein (EGFP) ile karşılaştırıldığında parlaklık ve fotostabilite geliştirilmiş ve daha düşük enerjiLi ışık ile heyecanlı tandem dimer Domates floresan protein (tdTomato) kullanın46. Bu nedenle, tdTomato uyarma için daha az lazer gücü gerektirir ve daha az fototoksik. Toplamda, fototoksisiteyi azaltarak ve MT dinamikanalizi için gerekli olan çözünürlüğü ve postprocessingi iyileştirerek yöntemi daha da geliştiriyoruz. Ayrıca, diğer senkronizasyon teknikleri ile birleştirerek yöntemin gelecekteki değişiklikler için bir temel oluşturmak.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:849px;" width="849">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Dimethylenastron</td>
			<td style="width:123px;">Merck</td>
			<td style="width:344px;">324622</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DMEM w/o phenol red</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31053-28</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DPBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Fetal bovine serum</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>S0415</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Fibronectin Bovine Plasma</td>
			<td>Merck</td>
			<td>F4759</td>
			<td>Sterile powder</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">GlutaMAX</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050-038</td>
			<td>Stable glutamine substitutive</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">jetPRIME</td>
			<td>Polyplus</td>
			<td>114-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">EB3-TdTomato</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>plasmid #50708</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">RPMI 1640</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>61870-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Trypan Blue</td>
			<td>Merck</td>
			<td>T8154-20ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Trypsin/EDTA solution</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>L2143</td>
			<td>0.05% / o.02 % w/o calcium and magnesium</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">&#181;-slide</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>80426</td>
			<td>4-well slide with #1.5 coverslip</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Eclipse Ti Inverted microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Objective</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>MRD01991</td>
			<td>CFI Apo TIRF 100XC Oil</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">ACAL Laser Excahnger</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Laser box. 405, 458, 488, 514, 561 and 647nm</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Spinning disk module</td>
			<td>Andor</td>
			<td>CSU-W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Camera</td>
			<td>Andor</td>
			<td>iXon Ultra 888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Environmental Chamber</td>
			<td>Okolab</td>
			<td></td>
			<td>Dark chamber equipped with CO2 supply, tmeperature control and humidifier</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">HeLa Cells</td>
			<td>DSMZ</td>
			<td>ACC-57</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">NIS Elements v4</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Spinning disk microscope. Acquisition Software</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MATLAB</td>
			<td>Mathworks</td>
			<td></td>
			<td>Computing environment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Prism 8</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td>Statistical analysis and display software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measurement of microtubule dynamics by spinning disk microscopy in monopolar mitotic spindles

Canlı hücrelerdeki mikrotübül dinamiklerini belirlemek için kurulmuş bir yöntemin modifikasyonunu tanımlıyoruz. Protokol, mikrotübüllerin pozitif uçları (tdTomato floresan proteini ile etiketlenmiş EB3) ve dönen disk konfokal mikroskopisi kullanılarak yüksek hızlı, yüksek çözünürlüklü, canlı hücre görüntülemesi için genetik olarak kodlanmış bir belirteç ifadesine dayanmaktadır. Hücre döngüsü senkronizasyonu ve mikrotübüllerin artan yoğunluğu mitotik hücrelerde sentozomal ayırma inhibe ederek elde edilir ve büyüme analizi açık kaynak U-Track yazılımı kullanılarak gerçekleştirilir. Parlak ve kırmızı yayılılmış floresan proteinin kullanımı, düşük lazer gücü ve iplik disk mikroskobu için gerekli azaltılmış maruz kalma süresi ile birlikte fototoksisiteyi ve ışığa bağlı objelerin olasılığını azaltır. Bu standart kültür koşulları altında bir büyüme ortamda hücreleri korurken aynı hazırlık hücrelerin daha fazla sayıda görüntüleme sağlar. Analiz denetlenen otomatik bir şekilde yapıldığından, sonuçlar istatistiksel olarak sağlam ve tekrarlanabilir.

Şekil 1A'daözetlenen protokolütaki pEB3-tdTomato plazmid, eş zamanlı olarak büyüyen HeLa hücrelerinde geçici olarak ifade edildi. DME tedavisi ile prometafazda transfeksiyon dan sonra hücreler 48 saat senkronize edildi(Şekil 1B). Bu adım, MT dinamiğinin ölçümünün her zaman hücre döngüsünün aynı aşamasında yapılmasını sağlamıştır. Zaman atlamalı filmler daha fazla işlenmiş ve U-Track v2.2.0 ile analiz olarak ek belgelerde açı...

Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Microtubule Dynamics by Spinning Disk Microscopy in Monopolar Mitotic Spindles at JoVE.com

Measurement of Microtubule Dynamics by Spinning Disk Microscopy in Monopolar Mitotic Spindles

Burada canlı hücre dönen disk konfokal mikroskopisi ve MATLAB tabanlı görüntü işleme kullanarak prometafazda senkronize hücrelerde mikrotübül dinamiği analizinin sağlam ve ayrıntılı bir yöntemini sıyoruz.

Monopolar Mitotik İğlerde Dönen Disk Mikroskobu ile Mikrotübül Dinamiğinin Ölçülmesi

We describe a modification of an established method to determine microtubule dynamics in living cells. The protocol is based on the expression of a ...

Burada sunduğumuz şey, prometafazda senkronize edilmiş hücrelerde canlı hücre dönen disk konfokal görüntülemekullanarak mikrotübül dinamiklerini analiz etmek için sağlam ve basit bir yöntemdir ve görüntüler daha sonra MATLAB tabanlı bir platformda analiz edilir. Dönen disk mikroskobu ile birlikte kırmızı-shifted floresan protein kullanımı fototoksisiteyi azaltır. Bu nedenle, daha fazla sayıda hücre aynı hazırlık içinde görüntülenebilir.Mikrotübül dinamiği çok sayıda patolojik koşullarda değiştirilir. Bu nedenle, bu süreçlerde mikrotübül dinamiğinin düzenlenmesini ve davranışını anlamak, hastalığın mekanizmasını anlamamıza ve sonunda bunları telafi edecek tedaviler geliştirmemize yardımcı olabilir. Ve yöntem de ölçeklenebilir, bu yüzden potansiyel bir ilaç keşif çabası uygulanabilir.Yöntem floresan desynchronization protokolü değiştirerek ve hücre döngüsünün farklı aşamalarından hücreleri elde değiştirerek değiştirilebilir. Bu mikrotübüller karşı ilaç tarama ve bölen ve bölünmeyen hücreler üzerinde kusur tespit yararlı olabilir. Her hücre tipi için transfeksiyon protokolünü ve tohumlama yoğunluğunu optimize etmek gerekir.EB3 ifade düzeyi, tek büyüyen mikrotübülleri tespit etmek için düşük olmalıdır. DPBS'de eşzamanlı olarak büyüyen HeLa hücrelerini durulayarak başlayın, sonra onları 37 derecede beş dakika boyunca tripsin-EDTA ile kuluçkaya yatırın. RPMI-1640 orta ekleyerek tripsinizasyon durdurun 10% ısı inaktive FCS ile üç-bir oranda, eklenen trypsin-EDTA.El yazması yönlere göre hücrelerin konsantrasyonu hesaplayın ve hazırlanmış, odacıklı coverslip her kuyuiçine 50.000 hücre tohum. Kapak sıvısını kuvöze geri getirin ve hücreleri 24 saat boyunca 37 santigrat derece ve %5 karbondioksitle büyütün. Ertesi gün, kuvözhücreleri çıkarın ve damla akıllıca her kuyuya transfeksiyon karışımı 100 mikrolitre ekleyin.Hücreleri kuvöze geri döndürün ve dört saatlik kuluçkadan sonra hücreleri taze ortamla tamamlar ve ayrıca 20 saat kuluçkaya yatırın. Fenol kırmızısı serbest DMEM dimetilenastron veya DME 2.5 mikromol çözeltisi hazırlayın, ile birlikte 10%FCS ve iki milimolar L-glutamin. Odacıklı kapaktaki büyüme ortamını DME büyüme ortamıyla değiştirin ve hücreleri kuvöze geri verin.3,5 saatlik kuluçkadan sonra, hücreleri mikroskopa aktarın ve odacıklı örtüyü 37 santigrat derece ve %5 karbondioksit olarak belirlenen bir çevre odasına monte edin ve görüntüleme için koyu paneller ile. Sonra toplam dört saat kuluçkaya devam edin. 100X, 1.49 sayısal diyafram açıklığı, yağ daldırma hedefi, çift disk konfokal sistemi ve güvenilir bir otomatik odaklama sistemi ile ters bir mikroskop üzerinde zaman atlamalı görüntüleme gerçekleştirin.Metin makalesinde açıklandığı gibi görüntüleme parametrelerini tanımlayın. Profazda bir hücre bulun ve monopolar mitotik milin merkezine karşılık gelen Z düzlemine odaklanın. Ardından her 5 saniyede bir, toplam bir dakikadan fazla, hiçbir binning ve pozlama arasında aydınlatma olmadan görüntü elde edin.Sayısal analiz yazılımını yükleyerek ve komut penceresinden film seçici GUI adı verilen yazılım arama yoluna u-track V2.2.0 klasörünü ekleyerek başlayın. Ardından görüntü edinme yazılımı tarafından oluşturulan ham dosyaları içe aktarın. Hedefin sayısal diyafram açıklığını ve görüntüleme için kullanılan zaman aralığını manuel olarak girin.Tüm görüntüler yüklendikten sonra, film listesi olarak kaydet'i ve diyalog penceresinin sağ tarafındaki u-track seçeneğini seçerek girilen zaman atlamalı diziyi film olarak kaydedin. Açılır menüden mikrotübül artı uçları seçin ve çözümlemenin üç adımının parametrelerini belirlemek için yeni bir diyalog penceresi açan tamam'ı tıklatın. Birinci adım için ayarlara tıklayın ve açılan menüden kuyruklu yıldız algılamasını seçin.Makalede açıklandığı gibi Gaussian filtresi ve havza segmentasyonu arasındaki parametreleri tanımlayın. Ardından tüm filmlere uygula ayarlarını seçin ve uygula'yı tıklatın. İkinci adım için, mikrotübül artı uç dinamiklerini seçin ve metin el yazmasına göre bağlama, boşluk kapatma, birleştirme ve bölme ve Kalman filtre işlevleri değerlerini tanımlamak için ayar seçeneklerini kullanın.Boyutsallıkla ilgili sorunlar için açılır menüden iki tane seçin ve kapatmak için maksimum boşluğun kapanması için beş kare ve ilk adımdan itibaren en az parça kesimi uzunluğu için üç kare kullanın. Daha önce olduğu gibi, tüm filmlere uygula ayarlarını seçin ve uygula'yı tıklatın. Üçüncü adım için, parça analizi yöntemi olarak mikrotübül dinamiği sınıflandırmasını seçin ve parametreleri ayar düğmesi aracılığıyla tanımlayın.Filmin başındave sonundaki parçaları kaldırmak için kutuları seçin ve istatistik histogramları yapın. Açılan listeden, ileri boşluktan önce iki veya üç kare ve sırasıyla ileri ve geri yeniden sınıflandırma için ileri ve geri hız dağılımının yüzde 95'ini kullanarak seçin. Tüm parametreler tanımlandıktan sonra, tüm filmlere onay/çek uygula'yı seçin ve kontrol bölmeleri u-track penceresinden tüm film kutularını çalıştırın ve ardından çalıştır'a basın.Film işleme tamamlandıktan sonra bir ileti görüntülenir. pEB3-tdTomato plazmid geçici HeLa hücrelerinde ifade edildi. Hücreler DME tedavisi ile senkronize edildi.Mikrotübül büyümesinin zaman atlamalı filmleri analiz edildi ve ortaya çıkan büyüme hızı ve dinamiklik çizildi. Maksimum boşluk uzunluğu ve maksimum büzülme faktörü gibi çözümlemesi etkilemek için açıklanan parametreler, aynı zaman atlamalı film kümesi için değiştirildi. Büyüme hızı ve dinamiklik karşılık gelen değerleri hesaplandı.Ortaya çıkan büyüme hızı önemli ölçüde etkilenmezken, maksimum boşluk uzunluğu değiştirildiğinde dinamiklik farklıydı. Her üç durumda da mikrotübül alt parçalarının saptanması benzerdi, ancak maksimum boşluk uzunluğu 15'e ayarlandığında tam MT yörüngelerinin yeniden yapılandırılması çoğunlukla etkilenmiştir. Görüntüleme koşullarının mikrotübül davranışına müdahale edip etmediğini değerlendirmek için zaman atlamalı serinin birinci ve ikinci yarısı ayrı ayrı analiz edilmiş ve buna karşılık gelen büyüme hızı ve dinamiklik karşılaştırılmıştı.Beklendiği gibi, önemli bir fark saptadı. Bu akılda tutulması önemlidir, hücreler prometafaz senkronize olduğundan, mikrotübül yoğunluğu çok yüksektir. Bu nedenle, farklı mikrotübül yanlış tanımlamak için değil, çok dikkatli bir şekilde analiz parametrelerini ayarlamak zorunda.Bu yöntemle mikrotübül dinamiğinin ölçülmesi, diğer biyolojik hedeflerin doğrudan, dolaylı olarak mikrotübüllerin düzenlenmesi çalışmaları ile karşılaştırılabilir.

Research

JoVE Journal

Biology

In vivo Micro-circulation Measurement in Skeletal Muscle by Intra-vital Microscopy

İskelet kas-içi hayati Mikroskopi in vivo Mikro sirkülasyon Ölçümü

BACKGROUND: Regulatory factors and detailed physiology of in vivo microcirculation have remained not fully clarified after many different modalities of ...

Studying Mitotic Checkpoint by Illustrating Dynamic Kinetochore Protein Behavior and Chromosome Motion in Living Drosophila Syncytial Embryos

Studying Mitotic Checkpoint by Illustrating Dynamic Kinetochore Protein Behavior and Chromosome Motion in Living Drosophila Syncytial Embryos

Living Görselleştirilmesi Dinamik Kinetochore Protein Davranış ve Kromozom Hareket tarafından Mitotik Checkpoint incelenmesi<em&gt; Drosophila</em&gt; Sinsityal Embriyolar

The spindle assembly checkpoint (SAC) mechanism is an active signal, which monitors the interaction between chromosome kinetochores and spindle ...

Live Cell Imaging of Primary Rat Neonatal Cardiomyocytes Following Adenoviral and Lentiviral Transduction Using Confocal Spinning Disk Microscopy

İlköğretim Rat Yenidoğan kardiyomiyositlerin Canlı Hücre Görüntüleme Adenoviral izlenerek ve Lentiviral İletimi Confocal Disk Mikroskopi Spinning kullanma

Primary rat neonatal cardiomyocytes are useful in basic in vitro cardiovascular research because they can be easily isolated in large numbers in a single ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

Yetişkin Fare Kalvaryal Kemik İliği içinde Hematopoietik kök hücrelerin Vivo 4-Boyutlu Takip

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Using plusTipTracker Software to Measure Microtubule Dynamics in Xenopus laevis Growth Cones

Using plusTipTracker Software to Measure Microtubule Dynamics in Xenopus laevis Growth Cones

Içinde Mikrotubul Dynamics Tedbir plusTipTracker Yazılım Kullanma<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Büyüme Konileri

Microtubule (MT) plus-end-tracking proteins (+TIPs) localize to the growing plus-ends of MTs and regulate MT dynamics1,2. One of the most well-known and ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

Yüksek çözünürlüklü Time-lapse Görüntüleme ve Yaşayan İnsan Umbilikal Ven Endotelyal Hücrelerinde Mikrotubul Dinamiği Otomatik Analizi

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...

Reconstitution of Basic Mitotic Spindles in Spherical Emulsion Droplets

Küresel emülsiyon damlacıkların Temel Mitotik Mil Sulandırma

Mitotic spindle assembly, positioning and orientation depend on the combined forces generated by microtubule dynamics, microtubule motor proteins and ...

Simultaneous Measurement of Mitochondrial Calcium and Mitochondrial Membrane Potential in Live Cells by Fluorescent Microscopy

Floresan Mikroskopi Canlı hücreler Potansiyel Mitokondriyal Kalsiyum ve Mitokondriyal Membran Eşzamanlı Ölçümü

Apart from their essential role in generating ATP, mitochondria also act as local calcium (Ca2+) buffers to tightly regulate intracellular Ca2+ ...

High-resolution Imaging and Analysis of Individual Astral Microtubule Dynamics in Budding Yeast

Yüksek çözünürlüklü görüntüleme ve Bireysel Astral Mikrotubul Dynamics Analizi Budding Maya

Dynamic microtubules are fundamental to many cellular processes, and accurate measurements of microtubule dynamics can provide insight into how cells ...

Examination of Mitotic and Meiotic Fission Yeast Nuclear Dynamics by Fluorescence Live-cell Microscopy

Floresans canlı hücre mikroskobu ile mitotik ve meiotic Fission Maya nükleer dinamiklerinin incelenmesi

Live-cell imaging is a microscopy technique used to examine cell and protein dynamics in living cells. This imaging method is not toxic, generally does ...