Name: design of a biocompatible drug-eluting tracheal stent in mice with laryngotracheal stenosis
Uploaded: 2020-01-21T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Design of a Biocompatible Drug-Eluting Tracheal Stent in Mice with Laryngotracheal Stenosis at JoVE.com

المعهد الوطني لامراض الصمم وغيرها من اضطرابات الاتصال في المعاهد الوطنية للصحة تحت رقم الجائزة 1K23DC014082 و 1K23DC014082 (الكسندر هليل). وقد دعمت هذه الدراسة أيضا ماليا من قبل الجمعية الثلاثية والكلية الامريكيه للجراحين (الكسندر هليل) ، ومؤسسه الجمعية الطبية الامريكيه ، شيكاغو ، IL (Madhavi Duvvuri) ومنحه T32 NIDCD التدريب (كيفن Motz).

ملاحظه: تمت الموافقة علي جميع الطرق الموصوفة هنا من قبل لجنه الرعاية الحيوانية والاستخدام التابعة لجامعه جونز هوبكنز (MO12M354).
1. اعداد راباميسين في plla-PCL
<ol><li>اعداد قارورة زجاجيه اثنين (مع قبعات) من 70:30 البوليمر PLLA-PCL الحلول (اللزوجة المتاصله 1.3 − 1.8 DL/G ؛ جدول المواد) ال?...

<ol>
	<li>Minnigerode, B., Richter, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+subglottic+tracheal+stenosis+in+childhood.">Pathophysiology of subglottic tracheal stenosis in childhood.</a> Progress in Pediatric Surgery. 21, 1-7 (1987).</li><li>Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrotic+disease+and+the+T(H)1/T(H)2+paradigm.">Fibrotic disease and the T(H)1/T(H)2 paradigm.</a> Nature Reviews Immunology. 4 (8), 583-594 (2004).</li><li>Kaplan, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+Toxicity+Following+Administration+of+Sirolimus+(formerly+Rapamycin)+for+Psoriasis.">Systemic Toxicity Following Administration of Sirolimus (formerly Rapamycin) for Psoriasis.</a> Archives of Dermatology. 135 (5), 553-557 (1999).</li><li>Kalra, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New-Generation+Coronary+Stents:+Current+Data+and+Future+Directions.">New-Generation Coronary Stents: Current Data and Future Directions.</a> Currrent Atherosclerosis Reports. 19 (3), 14 (2017).</li><li>Chao, Y. K., Liu, K. S., Wang, Y. C., Huang, Y. L., Liu, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodegradable+cisplatin-eluting+tracheal+stent+for+malignant+airway+obstruction:+in+vivo+and+in+vitro+studies.">Biodegradable cisplatin-eluting tracheal stent for malignant airway obstruction: in vivo and in vitro studies.</a> Chest. 144 (1), 193-199 (2013).</li><li>Duvvuri, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+an+immunomodulatory+drug-eluting+stent+to+treat+laryngotracheal+stenosis.">Engineering an immunomodulatory drug-eluting stent to treat laryngotracheal stenosis.</a> Biomaterials Science. 7 (5), 1863-1874 (2019).</li><li>Mugru, S. D., Colt, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complications+of+silicone+stent+insertion+in+patients+with+expiratory+central+airway+collapse.">Complications of silicone stent insertion in patients with expiratory central airway collapse.</a> Annals of Thoracic Surgery. 84 (6), 1870-1877 (2007).</li><li>Hillel, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+situ,+in+vivo+murine+model+for+the+study+of+laryngotracheal+stenosis.">An in situ, in vivo murine model for the study of laryngotracheal stenosis.</a> JAMA Otolaryngolology Head Neck Surgery. 140 (10), 961-966 (2014).</li><li>Can, E., Udenir, G., Kanneci, A. I., Kose, G., Bucak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+PLLA/PCL+blends+and+paclitaxel+release+profiles.">Investigation of PLLA/PCL blends and paclitaxel release profiles.</a> AAPS PharmSciTech. 12 (4), 1442-1453 (2011).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paclitaxel+Drug-eluting+Tracheal+Stent+Could+Reduce+Granulation+Tissue+Formation+in+a+Canine+Model.">Paclitaxel Drug-eluting Tracheal Stent Could Reduce Granulation Tissue Formation in a Canine Model.</a> Chinese Medical Journal (Engl). 129 (22), 2708-2713 (2016).</li><li>Sigler, M., Klotzer, J., Quentin, T., Paul, T., Moller, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stent+implantation+into+the+tracheo-bronchial+system+in+rabbits:+histopathologic+sequelae+in+bare+metal+vs.+drug-eluting+stents.">Stent implantation into the tracheo-bronchial system in rabbits: histopathologic sequelae in bare metal vs. drug-eluting stents.</a> Molecularand Cellular Pediatrics. 2 (1), 10 (2015).</li><li>Robey, T. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+internal+bioabsorbable+PLGA+"finger-type"+stents+in+a+rabbit+tracheal+reconstruction+model.">Use of internal bioabsorbable PLGA "finger-type" stents in a rabbit tracheal reconstruction model.</a> Archives of Otolaryngology Head Neck Surgery. 126 (8), 985-991 (2000).</li></ol>

الخطوات الأكثر اهميه لبناء بنجاح واستخدام الدعامات المخدرات التملص في الجسم الحيوي هي 1) تحديد نسبه PLLA-PCL الأمثل لمعدل الإدمان المخدرات مرغوب فيه ، 2) تحديد التركيز المناسب من المخدرات ليكون التملص ، 3) صب الدعامات حول الاوعيه الدموية لاستخدامها في الجسم الفيفو ، و 4) نقل الدعامات عبر الفم إل...

تضيق القصبة الهوائية هو تضييق باثولوجي للرغامي في معظم الأحيان بسبب الاصابه بعد التنبيب الضموري. الجمع بين الاستعمار البكتيري ، استجابه الجسم الاجنبيه لفغر الرغامي أو أنبوب الرغامي ، والعوامل الخاصة بالمريض تؤدي إلى استجابه التهابيه شاذة. يؤدي هذا الاستجابة المناعية غير المتكيفة إلى ترسب الكولاجين في القصبة الهوائية ، مما يؤدي إلى تضييق القصبة الهوائية والتضيق اللاحق1،2. ونظرا لان العلاج الحالي لهذا المرض هو في المقام الأول الجراحية ، وتطوير بديل العلاج الطبي القائم علي نموذج استهداف مسارات التهابيه والخبيثة المنحرفة التي تؤدي إلى ترسب الكولاجين المفرط قد درست. راتاميسين ، الذي يمنع مركب الإشارات mTOR ، وقد ثبت ان لها تاثيرات المناعة ، فضلا عن تاثير مضاد لليفي قوي. ومع ذلك, عندما يتم أداره راباميسين بالمنهجية, الآثار الجانبية الشائعة (علي سبيل المثال, فرط الدهون, فقر الدم, نقص الصفيحات) يمكن ان تكون واضحة3. والغرض من منهجيتنا هو تطوير وسيله لإيصال المخدرات المحلية عمليا لاستخدامها في مجري التنفس من شانها ان تقلل من هذه الآثار الجهازية. تركز تقييماتنا علي التحقيق في الاستجابة المناعية المحلية لبناء تسليم المخدرات ، فضلا عن قدرتها علي كبح وظيفة الخلايا الليفية وتغيير البيئة المناعية المحلية. وتشمل النتائج الخاصة بالمرض في اختبار الجسم الذي يقيم علامات التليف.
وقد استخدمت الدعامات القابلة للتحلل من المخدرات في النماذج الحيوانية من الامراض في أنظمه الأعضاء المتعددة ، بما في ذلك مجري التنفس4. لأداره تضيق المسالك الهوائية أو الانهيار ، وقد استخدمت التحقيقات السابقة المخدرات المغلفة السيليكون والدعامات القائمة علي النيكل5. تم اختيار بناء PLLA-PCL لهذا الأسلوب بالذات بسبب الشخصية الخاصة به الإدمان المخدرات والقوه الميكانيكية في الظروف الفسيولوجية علي مدي فتره من 3 أسابيع, وقد ثبت في الدراسات المنشورة السابقة6. PLLA-PCL هو أيضا ماده متوافقة بيولوجيا وقابله للتحلل بالفعل وافقت عليها FDA4. وقد درست الدعامات المتوافقة مع الحيوية سيسبلاتين و MMC في نماذج الحيوانية الكبيرة مثل الأرانب والقطط. ومع ذلك ، في هذه النماذج الحيوانية ، لم توضع الدعامات في نموذج حيواني من المرض وزرعت transcervically. توفر هذه الدراسة طريقه فريدة لتقييم الدعامات المتوافقة مع الادويه الحيوية التي توضع عبر الفم في نموذج الماوس لإصابات المسالك الهوائية وتضيق الحنجرة. والدعامة الحيوية التي تفلت من المخدرات المناعية محليا ويمكن تصغيرها للدراسة في نموذج murine هي قيمه للبحوث السريرية المسبقة الانتقالية. المحاولات السابقة في استخدام الدعامات مع المواد الأخرى بنيات ولدت استجابات قويه الجسم الغريبة تفاقم التهاب الكامن الذي يميز الجهاز7. هذه المنهجية ، علي حد علمنا ، هي الاولي من نوعها لدراسة الآثار المناعية والمضادة لليفي لنظام توصيل الادويه المرتكزة علي الدعامات في نموذج murine من لتر. نموذج murine نفسه يوفر العديد من المزايا لدراسة اثار المخدرات المناعية علي القصبة الهوائية. ويمكن دراسة الفئران المعدلة وراثيا والأفواج التجريبية من الفئران الصحية والمريضة ، والتي يمكن ان تؤدي إلى استنساخ التجريبية وتحسين فعاليه التكلفة. وعلاوة علي ذلك ، فان تسليم الدعامة transorally في القصبة الهوائية الماوس يحاكي التسليم السريري لهذه الدعامة في البشر ، والتي تسلط الضوء كذلك علي ميزه متعديه من هذه الطريقة. وأخيرا ، السهولة النسبية التي يمكن ان تنتج الدعامة PLLA-PCL مع المخدرات يسمح للتعديلات لتقديم العلاجات الدوائية البديلة التي تهدف إلى الحد من تشكيل ندبه في القصبة الهوائية.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1. For stent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22-gauge angiocatheter</td>
			<td>Jelco</td>
			<td>4050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichloromethane</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>270997-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>56-81-5</td>
			<td>Available from other vendors as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDLGA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>739955-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLLA-PCL (70 : 30)</td>
			<td>Evonik Industries AG</td>
			<td>65053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rapamycin</td>
			<td>LC Laboratories</td>
			<td>R-5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2. Animal surgery</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wire brush</td>
			<td>Mill-Rose Company</td>
			<td>320101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3. For immunohistochemistry staining</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antigen retrival buffer</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab93678</td>
			<td>Available from other vendors as well; acidic pH needed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>8961S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11965-092</td>
			<td>Available from other vendors as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS (Fetal Bovine Serum)</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>F4135-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit-488 antibody</td>
			<td>Lif technology</td>
			<td>a11008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rat-633 antibody</td>
			<td>Lif technology</td>
			<td>a21094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrophilic plus slide</td>
			<td>BSB7028</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>100-10023</td>
			<td>Available from other vendors as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-CD3 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab5690</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat antiF4/80 antibody</td>
			<td>Biolengend</td>
			<td>123101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss LSM 510 Meta Confocal Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4. For quantative PCR</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5mm glass beads</td>
			<td>OMNI International</td>
			<td>19-645</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bead Mill Homoginizer</td>
			<td>OMNI International</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gene Specific Forward/Reverse Primers</td>
			<td>Genomic Resources Core Facility</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop 2000 spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power SYBR Green Mastermix</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>4367659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy mini kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>80404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StepOnePlus Real Time PCR system</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

design of a biocompatible drug-eluting tracheal stent in mice with laryngotracheal stenosis

تضيق الحنجرة (لتر) هو تضييق باثولوجي للتهاب الرغامي والقصبة الهوائية مما يؤدي إلى انسداد خارج المضيق وضيق كبير في التنفس. ينتج هذا المرض عن أصابه الغشاء المخاطي من جسم غريب في القصبة الهوائية ، مما يؤدي إلى تلف الانسجه والاستجابة التهابيه المحلية التي تذهب بشكل منحرف ، مما يؤدي إلى ترسب الانسجه المصابة بندبات مرضيه. العلاج لل ه هو الجراحية بسبب عدم وجود العلاجات الطبية الفعالة. والغرض من هذا الأسلوب هو بناء الدعامات المتوافقة مع الحيوية التي يمكن تصغيرها لوضعها في الفئران مع لتر. أظهرنا ان PLLA-PCL (70 ٪ بولي-L-lactide و 30 ٪ polycaprolactone) بناء كان الأمثل نشاط القوه ، كانت متوافقة بيولوجيا ، عمليا في وضع الدعامات في الجسم الحيوي ، وقادره علي التملص من المخدرات. يوفر هذا الأسلوب نظام تسليم المخدرات لاختبار العوامل المناعية المختلفة لمنع التهاب محليا والحد من تليف مجري التنفس. تصنيع الدعامات ياخذ 28 − 30 ح ويمكن استنساخها بسهوله ، مما يسمح للتجارب مع الأفواج الكبيرة. هنا أدرجنا راباميسين المخدرات داخل الدعامة لاختبار فعاليتها في الحد من التليف وترسب الكولاجين. وكشفت النتائج ان الخيام plla-PCL أظهرت الإفراج عن راباميسين موثوق بها ، وكانت مستقره ميكانيكيا في الظروف الفسيولوجية ، وكانت متوافقة بيولوجيا ، مما يحفز استجابه التهابيه قليلا في القصبة الهوائية. وعلاوة علي ذلك ، فان الدعامات PLLA-PCL التي تقلل من الندبات في القصبة الهوائية في الجسم المجري.

وكان بناء الدعامات plla-PCL القابلة للتحلل التي تم تحميلها مع راباميسين المستخدمة في هذه الدراسة قادره علي التملص راباميسين بطريقه متسقة ويمكن التنبؤ بها في الظروف الفسيولوجية (الشكل 1). يبين الشكل 2 الدعامة PLLA-PCL التي تم وضعها حول مقياس الشعيرات 22 جرام لاستخدا?...

Watch this Scientific Journal Video about Design of a Biocompatible Drug-Eluting Tracheal Stent in Mice with Laryngotracheal Stenosis at JoVE.com

Design of a Biocompatible Drug-Eluting Tracheal Stent in Mice with Laryngotracheal Stenosis

ينتج تضيق الحنجرة من ترسب الندبة الباثولوجي الذي يضيق بشكل خطير مجري القصبات الهوائية ويفتقر إلى العلاجات الطبية الفعالة. باستخدام PLLA-PCL (70 ٪ بولي-L-lactide و 30 ٪ polycaprolactone) الدعامات كنظام تسليم المخدرات المحلية ، يمكن دراسة العلاجات المحتملة التي تهدف إلى خفض انتشار ندبه في القصبة الهوائية.

تصميم دعامة الرغامي المضادة للادويه المتوافقة بيولوجيا في الفئران مع تضيق الحنجرة

Laryngotracheal stenosis (LTS) is a pathologic narrowing of the subglottis and trachea leading to extrathoracic obstruction and significant shortness of ...

يتيح لنا هذا البروتوكول التحقيق في الدعامات التي تُلَلِّط المخدرات في نموذج حيواني صغير من تضيق الحنجرة مما يتيح لنا الاستفادة من الحيوانات المعدلة وراثياً بطريقة فعالة من حيث التكلفة. وضع عبر الطرق من دعامة مجرى الهواء الممسيل المخدرات تجنيب الحيوانات من شق مفتوح في القصبة الهوائية التي تمثل نموذجا أكثر أهمية سريريا من التضيق الحنجرة. هذه التقنية تسهل التحقيق قبل الإكلينيكي لاستراتيجيات توصيل الأدوية المحلية لعلاج تضيق الحنجرة.توفر هذه التقنية منصة مجدية وفعالة للتحقيق في الدعامات الهوائية المائلة للمخدرات في نموذج حيواني صغير يمكن تطبيقه للتحقيق في النماذج الحيوانية الأكبر حجمًا بالإضافة إلى التطبيق السريري. تقنية خاصة في النوبات transtental، تحريض إصابة القصبة الهوائية، وخطوة وضع دعامة مجرى الهواء. عرض مرئي لهذه الجراحة الصعبة تقنيا أمر بالغ الأهمية لأن العديد من التفاصيل الدقيقة لا يمكن وصفها بشكل كامل في الكلمات.لجعل 1٪ rapamycin التي تحتوي على حل البوليمر، إضافة ستة ملليغرام من راباميسين إلى 600 ملليغرام من 70-30 PLLA-PCL في قارورة زجاجية. تحت غطاء محرك الدخان، إضافة ستة ملليلتر من ديكلوروميثان إلى يباميسين تكمل والسيطرة على القارورة وإضافة 120 ميكرولترات من الجلسرين إلى كل قارورة. ثم قم بغطاء القنينات والسماح لحل PLLA-PCL لتجانس لمدة ست إلى 12 ساعة في درجة حرارة الغرفة.لإنشاء دعامة مجرى الهواء مورين، وذلك باستخدام المواد العقيمة والتقنية، وتطبيق ملليلتر واحد من راباميسين مكملة حل PLLA-PCL على كانية الوريد من 22 مقياس بروبيلين الاثيلين المفلورة القائمة على أنجيوكاثيرتر مع إبطاء تدوير القسطرة. عندما تم تطبيق كل من الحل، دعم angiocatheter مصبوب مع غيض من أنجيوكاثيتر التي تواجهها إلى أسفل وهُل القسطرة على حافة طبق بيتري الزجاج في غطاء محرك فراغ. بعد 24 ساعة تحت فراغ في درجة حرارة الغرفة، تطور بلطف وانزلاق القسطرة من بناء الدعامة المجففة والتحقق محيطا من الدعامة لأي عيوب قد تكون نتجت أثناء عملية الصب.للمساعدة في التصور، فمن المفيد لرسم خط أسود رقيقة أسفل طول الدعامة. تقليم كل نهاية من الدعامات المصبوب مع مقص مستقيم غرامة بحيث حواف محورية واستخدام مقص لقطع كل دعامة إلى ثلاثة شرائح محورية ملليمتر. ثم تحميل كل دعامة ثلاثة ملليمترات على قسطرة وريدية قياس 22 جديدة.لالتدسيس تضيق الحنجرة، بعد التأكد من عدم وجود استجابة لقرصة إصبع القار، ضع الفأر الأول على منصة جراحية في موقف supine وحلقة قطعة صغيرة من الخيط الملصقة على الجزء العلوي من منصة حول القاطعات المركزية. تأمين أطرافه إلى الجدول مع الشريط وجعل 1.5 سنتيمتر في منتصف شق عمودي في عنق الماوس. تقسيم الغدة الصعترية المغالى فيها وفيما بعد فصين الناتجين لتصور القصبة الهوائية.تقسيم عضلات sternohyoid وterrotheroid متفوق في المرفقات الثنائية العليا وتمرير 22 قياس أنجيوثيتر transorally من خلال الحنجرة في القصبة الهوائية. باستخدام ملقط صغيرة، وتطبيق الضغط على الحنجرة الأمامية للماوس للمساعدة في وضع الصحيح من القسطرة. يمكن تصور أنجيوكاثيتر وضعت بشكل صحيح من خلال لونها الأبيض من خلال القصبة الهوائية.للحث على الإصابة ، تمرير فرشاة سلك Bleomycin المغلفة من خلال أنجيوكاثيتر المدرج وسحب ببطء القسطرة بحيث تبقى فرشاة الأسلاك فقط داخل القصبة الهوائية. باستخدام ملقط غرامة، وتطبيق مضاد للضغط على القصبة الهوائية لتعطيل ميكانيكيا لومن القصبة الهوائية مع فرشاة قبل إعادة إدخال القسطرة في القصبة الهوائية على الفرشاة. إزالة فرشاة الأسلاك وإعادة تطبيق Bleomycin قبل إدراج وإزالة الفرشاة أربع مرات أخرى كما أظهرت للتو.بعد تطبيق بلوميسين الأخير، قم بإزالة القسطرة من القصبة الهوائية. بالنسبة لوضع عبراتنة من PLLA-PCL، تأكد من أن خط عمودي أسود رفيع قد تم دمجه في كل دعامة و إنبات الماوس مع أنجيوكاثيتر محملة مسبقاً. وينبغي تصور الدعامة داخل القصبة الهوائية من خلال شق عبر الإرسالية.عندما تكون الدعامة في مكانها، استخدم ملقطًا ناعمًا لإدراك القصبة الهوائية بقوة ولكن بلطف من خلال الشق لعقد الدعامة في مكانها وإزالة القسطرة. من المهم وضع الدعامة بعناية قدر الإمكان. الكثير من الضغط على القصبة الهوائية سيؤدي إلى انهيار الدعامة مما تسبب في انسداد مجرى الهواء والموت للحيوان.إغلاق شق مع الغراء الأنسجة أو امتصاص 4-0 الغرز الكرومية المستخدمة هنا والسماح للماوس لاسترداد مع الرصد قبل العودة إلى قفص الحيوان المنزل. عند نقطة النهاية التجريبية المناسبة، ضع فأر الاهتمام في موضع الوبين على المنصة الجراحية واستخدم مقص قزحية منحنية منحني ناعم لإعادة فتح الشق. كشف القصبة الهوائية كما أظهرت واستخدام مقص لتقسيم القصبة الهوائية القعرية تحت مستوى الدعامة.بعد ذلك، قم بتقسيم القصبة الهوائية القريبة أسفل الحنجرة وفوق الدعامة وفصل القصبة الهوائية المقسمة عن المريء بشكلٍ مُتَمَرَّح. ثم إزالة الدعامة من القصبة الهوائية وإصلاح القصبة الهوائية في 10٪ formalin لمدة 24 ساعة. إن الرامايسايسين القابل للتحلل الحيوي الذي تم تحميله ببناء الدعامات PLLA-PCL المستخدم في هذه الدراسة قادر على تضخيم راباميسين بطريقة متسقة ويمكن التنبؤ بها في ظل الظروف الفسيولوجية.في هذه الصورة، يمكن ملاحظة الدعامة المصغرة القابلة للالتقاء بيولوجياً في موضعها داخل القصبة الهوائية كما هو مبين من خلال العلامة السوداء على الدعامة التي تصور من خلال القصبة الهوائية الماوس الشفافة. بعد 21 يوما، يمكن استخدام علامة الصبغة السوداء لتأكيد الحفاظ على موقف الدعامة داخل القصبة الهوائية. اختبار التوافق الحيوي باستخدام تلطيخ مناعي لعلامات الالتهاب الحاد والمزمن تثبت أن بناء الدعامات PLLA-PCL ليست نشطة مناعية كما يحددها العدد الأدنى من الخلايا المناعية الموجودة بعد وضع في غياب الإصابة.التلاعب بالمجرى الهوائي بطريقة حساسة وعصرية أمر بالغ الأهمية لنجاح الإجراء. القوة المفرطة، النوبات المتعددة، وانهيار الدعامات يمكن أن تؤدي إلى موت الحيوانات. بعد العلاج مع الدعامة راباميسين eluting, تقييم البقاء على قيد الحياة, التعبير الجيني عن طريق الكم في الوقت الحقيقي PCR, المناعة بما في ذلك تدفق استئصال الدم, ELISA, ويمكن إجراء الكيمياء المناعية.كما أنه يوفر منصة ناجحة للتغذية الدوائية في نموذج الماوس، وهذه التقنية يمهد الطريق للتحقيقات المستقبلية للعلاجات المطبقة محليا في التضيق الحنجرة. ثنائي كلورو الميثان هو سائل متآكل. تأكد من استخدام غطاء الدخان دائمًا، ومعدات الحماية الشخصية، والمواد غير المسببة للتآكل

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Monitoring the Wall Mechanics During Stent Deployment in a Vessel

رصد ميكانيكا الحائط أثناء النشر ستينت في وعاء

Clinical trials have reported different restenosis rates for various stent designs1. It is speculated that stent-induced strain concentrations on the ...

Design of a Biaxial Mechanical Loading Bioreactor for Tissue Engineering

تصميم مفاعل حيوي ذو محورين الميكانيكية جار للهندسة الأنسجة

We  designed a loading device that is capable of applying uniaxial or biaxial  mechanical strain to a tissue engineered biocomposites fabricated for  ...

Experimental Investigation of Secondary Flow Structures Downstream of a Model Type IV Stent Failure in a 180&#176; Curved Artery Test Section

Experimental Investigation of Secondary Flow Structures Downstream of a Model Type IV Stent Failure in a 180Ãƒâ€šÃ‚Â° Curved Artery Test Section

التحقيق التجريبي للهياكل تدفق الثانوية المصب من الفشل نموذج النوع الرابع الدعامة في قسم اختبار 180 درجة الشريان منحني

The arterial network in the human vasculature comprises of ubiquitously present blood vessels with complex geometries (branches, curvatures and ...

Ferromagnetic Bare Metal Stent for Endothelial Cell Capture and Retention

المغناطيسية باري المعادن الدعامة لالبطانية القبض على خلية والاستبقاء

Rapid endothelialization of cardiovascular stents is needed to reduce stent thrombosis and to avoid anti-platelet therapy which can reduce bleeding risk. ...

Automated Robotic Liquid Handling Assembly of Modular DNA Devices

الآلي الجمعية معالجة السائل الروبوتية أجهزة وحدات الحمض النووي

Recent advances in modular DNA assembly techniques have enabled synthetic biologists to test significantly more of the available &#34;design space&#34; ...

Synthesis of Biocompatible Liquid Crystal Elastomer Foams as Cell Scaffolds for 3D Spatial Cell Cultures

توليف حيويا الكريستال السائل المرنة كسوات كما السقالات الخليوي لزراعات الخلايا 3D المكانية

Here, we present a step-by-step preparation of a 3D, biodegradable, foam-like cell scaffold. These scaffolds were prepared by cross-linking star block ...

Anatomically Realistic Neonatal Heart Model for Use in Neonatal Patient Simulators

نموذج القلب الولدان تشريحيا واقعية لاستخدامها في أجهزة محاكاة المرضى حديثي الولادة

Neonatal patient simulators (NPS) are artificial patient surrogates used in the context of medical simulation training. Neonatologists and nursing staff ...

Repressing Gene Transcription by Redirecting Cellular Machinery with Chemical Epigenetic Modifiers

قمع النسخ الجيني قبل إعادة توجيه الأجهزة الخلوية مع المعدلات جينية الكيميائية

Regulation of chromatin compaction is an important process that governs gene expression in higher eukaryotes. Although chromatin compaction and gene ...

Design and Synthesis of a Reconfigurable DNA Accordion Rack

تصميم وتجميع رف الاكورديون الحمض النووي إعادة التشكيل

DNA nanostructure-based mechanical systems or DNA nanomachines, which produce complex nanoscale motion in 2D and 3D in the nanometer to &#229;ngstr&#246;m ...

Seeding and Implantation of a Biosynthetic Tissue-engineered Tracheal Graft in a Mouse Model

بذر وغرس الاختلاس الرغامى السكروز هندسة الأنسجة في طراز الماوس

Treatment options for congenital or secondary long segment tracheal defects have historically been limited due to an inability to replace functional ...