Name: design of a biocompatible drug-eluting tracheal stent in mice with laryngotracheal stenosis
Uploaded: 2020-01-21T13:30:00
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National Institute on Deafness and Other Communication Disorders of the National Institutes of Health sous les numéros de récompense 1K23DC014082 et 1R21DC017225 (Alexander Hillel). Cette étude a également été soutenue financièrement par la Triological Society et l'American College of Surgeons (Alexander Hillel), l'American Medical Association Foundation, Chicago, IL (Madhavi Duvvuri) et une bourse de formation T32 NIDCD (Kevin Motz).

REMARQUE : Toutes les méthodes décrites ici ont été approuvées par le Comité des soins et de l'utilisation des animaux de l'Université Johns Hopkins (MO12M354).
1. Préparation de la rapamycine en PLLA-PCL
<ol><li>Préparer deux flacons en verre (avec bouchons) de 70:30 solutions de polymère PLLA-PCL (viscosité inhérente 1,3 à 1,8 DL/G; Tableau des matériaux) solutions, avec une fiole contenant 1,0% de rapamycine et l'autre sans rapamycine.<ol>
<li>Faire une solu...

<ol>
	<li>Minnigerode, B., Richter, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+subglottic+tracheal+stenosis+in+childhood.">Pathophysiology of subglottic tracheal stenosis in childhood.</a> Progress in Pediatric Surgery. 21, 1-7 (1987).</li><li>Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrotic+disease+and+the+T(H)1/T(H)2+paradigm.">Fibrotic disease and the T(H)1/T(H)2 paradigm.</a> Nature Reviews Immunology. 4 (8), 583-594 (2004).</li><li>Kaplan, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+Toxicity+Following+Administration+of+Sirolimus+(formerly+Rapamycin)+for+Psoriasis.">Systemic Toxicity Following Administration of Sirolimus (formerly Rapamycin) for Psoriasis.</a> Archives of Dermatology. 135 (5), 553-557 (1999).</li><li>Kalra, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New-Generation+Coronary+Stents:+Current+Data+and+Future+Directions.">New-Generation Coronary Stents: Current Data and Future Directions.</a> Currrent Atherosclerosis Reports. 19 (3), 14 (2017).</li><li>Chao, Y. K., Liu, K. S., Wang, Y. C., Huang, Y. L., Liu, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodegradable+cisplatin-eluting+tracheal+stent+for+malignant+airway+obstruction:+in+vivo+and+in+vitro+studies.">Biodegradable cisplatin-eluting tracheal stent for malignant airway obstruction: in vivo and in vitro studies.</a> Chest. 144 (1), 193-199 (2013).</li><li>Duvvuri, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+an+immunomodulatory+drug-eluting+stent+to+treat+laryngotracheal+stenosis.">Engineering an immunomodulatory drug-eluting stent to treat laryngotracheal stenosis.</a> Biomaterials Science. 7 (5), 1863-1874 (2019).</li><li>Mugru, S. D., Colt, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complications+of+silicone+stent+insertion+in+patients+with+expiratory+central+airway+collapse.">Complications of silicone stent insertion in patients with expiratory central airway collapse.</a> Annals of Thoracic Surgery. 84 (6), 1870-1877 (2007).</li><li>Hillel, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+situ,+in+vivo+murine+model+for+the+study+of+laryngotracheal+stenosis.">An in situ, in vivo murine model for the study of laryngotracheal stenosis.</a> JAMA Otolaryngolology Head Neck Surgery. 140 (10), 961-966 (2014).</li><li>Can, E., Udenir, G., Kanneci, A. I., Kose, G., Bucak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+PLLA/PCL+blends+and+paclitaxel+release+profiles.">Investigation of PLLA/PCL blends and paclitaxel release profiles.</a> AAPS PharmSciTech. 12 (4), 1442-1453 (2011).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paclitaxel+Drug-eluting+Tracheal+Stent+Could+Reduce+Granulation+Tissue+Formation+in+a+Canine+Model.">Paclitaxel Drug-eluting Tracheal Stent Could Reduce Granulation Tissue Formation in a Canine Model.</a> Chinese Medical Journal (Engl). 129 (22), 2708-2713 (2016).</li><li>Sigler, M., Klotzer, J., Quentin, T., Paul, T., Moller, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stent+implantation+into+the+tracheo-bronchial+system+in+rabbits:+histopathologic+sequelae+in+bare+metal+vs.+drug-eluting+stents.">Stent implantation into the tracheo-bronchial system in rabbits: histopathologic sequelae in bare metal vs. drug-eluting stents.</a> Molecularand Cellular Pediatrics. 2 (1), 10 (2015).</li><li>Robey, T. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+internal+bioabsorbable+PLGA+"finger-type"+stents+in+a+rabbit+tracheal+reconstruction+model.">Use of internal bioabsorbable PLGA "finger-type" stents in a rabbit tracheal reconstruction model.</a> Archives of Otolaryngology Head Neck Surgery. 126 (8), 985-991 (2000).</li></ol>

Les étapes les plus critiques pour construire et utiliser avec succès un stent d'élution de drogue in vivo sont 1) déterminer le rapport optimal De PLLA-PCL pour le taux d'élution de drogue souhaitable, 2) déterminer la concentration appropriée de drogue à élucer, 3) moulant les endoprothèses autour de l'angiocatheter pour l'utilisation in vivo, et 4) transorally livrant l'endoprothèse dans les souris après induction de LTS sans causer l'obstruction mortelle de voie aérienne.
Bien...

La sténose laryngotratrachéale (LTS) est un rétrécissement pathologique de la trachée le plus souvent dû aux dommages iatrogènes de post-intubation. La combinaison de la colonisation bactérienne, de la réponse de corps étranger à un tube trachéochéatif ou endotrachéal, et des facteurs patient-spécifiques mènent à une réponse inflammatoire anormale. Cette réponse immunitaire inadaptée conduit au dépôt de collagène dans la trachée, ayant pour résultat le rétrécissement luminal de la trachée et la sténose suivante1,2. Comme le traitement actuel pour cette maladie est principalement chirurgical, le développement d'un paradigme de traitement médicalement basé alternative ciblant les voies inflammatoires et profibrotiques aberrantes qui mènent au dépôt excessif de collagène a été étudié. La rapamycine, qui inhibe le complexe de signalisation mTOR, a été montrée pour avoir des effets immunosuppresseurs aussi bien qu'un effet antifibroblaste robuste. Cependant, lorsque la rapamycine est administrée de façon systémique, les effets secondaires courants (p. ex. hyperlipidémie, anémie, thrombocytopenie) peuvent être prononcés3. Le but de notre méthodologie est de développer un véhicule pour l'administration locale de médicaments praticable pour une utilisation dans les voies respiratoires qui réduirait ces effets systémiques. Nos évaluations se concentrent sur l'étude de la réponse immunitaire locale à la construction de l'administration de médicaments ainsi que sa capacité à inhiber la fonction du fibroblaste et à modifier le microenvironnement immunitaire local. Les résultats spécifiques à la maladie comprennent des tests in vivo qui évaluent les marqueurs de la fibrose.
Des endoprothèses biodégradables ont été utilisées dans les modèles animaux de la maladie dans plusieurs systèmes d'organes, y compris les voies respiratoires4. Pour la gestion de la sténose ou de l'effondrement des voies respiratoires, des enquêtes antérieures ont utilisé du silicone enduit de drogue et des endoprothèses à base de nickel5. Une construction de PLLA-PCL a été choisie pour cette méthode particulière en raison de son profil d'élution de drogue et de la force mécanique dans des conditions physiologiques sur une période de 3 semaines, qui a été démontrée dans les études éditées précédentes6. PLLA-PCL est également un matériau biocompatible et biodégradable déjà approuvé par la FDA4. Les endoprothèses biocompatibles en cequissant le cisplatine et le MMC ont été étudiées dans de grands modèles animaux tels que les lapins et les chiens. Cependant, dans ces modèles animaux, les endoprothèses n'ont pas été placées dans un modèle animal de la maladie et ont été implantées transcervicalement. Cette étude fournit une méthode unique pour évaluer un stent biocompatible de drogue-élutage placé transorally dans un modèle de souris des dommages de voie aérienne et de la sténose laryngotraheal. Un stent biocompatible qui élude un médicament immunomodulateur localement et peut être miniaturisé pour l'étude dans un modèle murine est valable pour la recherche préclinique translationnelle. Les tentatives précédentes à l'utilisation d'endoprothèse avec d'autres constructions matérielles ont généré des réponses robustes de corps étranger aggravant l'inflammation fondamentale qui distingue LTS7. Cette méthodologie, à notre connaissance, est la première de son genre à étudier les effets immunomodulatoires et antifibrotiques d'un système d'administration de drogue à base d'endoprothèse dans un modèle murine de LTS. Le modèle murine lui-même offre plusieurs avantages pour étudier les effets d'un médicament immunomodulateur sur la trachée. Des souris génétiquement modifiées et des cohortes expérimentales de souris saines et malades peuvent être étudiées, ce qui peut mener à une reproductibilité expérimentale et améliorer la rentabilité. En outre, la livraison de l'endoprothèse transoralement dans la trachée de souris imite la livraison clinique d'un tel stent chez l'homme, qui accentue davantage l'avantage translationnel de cette méthode. Enfin, la facilité relative avec laquelle l'endoprothèse PLLA-PCL avec le médicament peut être produite permet des modifications pour fournir d'autres thérapies médicamenteuses visant à réduire la formation de cicatrices dans la trachée.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1. For stent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22-gauge angiocatheter</td>
			<td>Jelco</td>
			<td>4050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichloromethane</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>270997-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>56-81-5</td>
			<td>Available from other vendors as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDLGA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>739955-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLLA-PCL (70 : 30)</td>
			<td>Evonik Industries AG</td>
			<td>65053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rapamycin</td>
			<td>LC Laboratories</td>
			<td>R-5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2. Animal surgery</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wire brush</td>
			<td>Mill-Rose Company</td>
			<td>320101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3. For immunohistochemistry staining</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antigen retrival buffer</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab93678</td>
			<td>Available from other vendors as well; acidic pH needed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>8961S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11965-092</td>
			<td>Available from other vendors as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS (Fetal Bovine Serum)</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>F4135-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit-488 antibody</td>
			<td>Lif technology</td>
			<td>a11008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rat-633 antibody</td>
			<td>Lif technology</td>
			<td>a21094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrophilic plus slide</td>
			<td>BSB7028</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>100-10023</td>
			<td>Available from other vendors as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-CD3 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab5690</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat antiF4/80 antibody</td>
			<td>Biolengend</td>
			<td>123101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss LSM 510 Meta Confocal Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4. For quantative PCR</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5mm glass beads</td>
			<td>OMNI International</td>
			<td>19-645</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bead Mill Homoginizer</td>
			<td>OMNI International</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gene Specific Forward/Reverse Primers</td>
			<td>Genomic Resources Core Facility</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop 2000 spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power SYBR Green Mastermix</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>4367659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy mini kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>80404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StepOnePlus Real Time PCR system</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

design of a biocompatible drug-eluting tracheal stent in mice with laryngotracheal stenosis

La sténose laryngotratrachéle (LTS) est un rétrécissement pathologique du subglottis et de la trachée menant à l'obstruction extrathoracique et à l'essoufflement significatif. LTS résulte de dommages muqueux d'un corps étranger dans la trachée, menant aux dommages de tissu et à une réponse inflammatoire locale qui va mal, menant au dépôt du tissu pathologique de cicatrice. Le traitement du SLR est chirurgical en raison de l'absence de thérapies médicales efficaces. Le but de cette méthode est de construire un stent biocompatible qui peut être miniaturisé pour placer dans les souris avec LTS. Nous avons démontré qu'une construction de PLLA-PCL (70% poly-L-lactide et 30% de polycaprolactone) avait la force biomécanique optimale, était biocompatible, réalisable pour un stent de placement in vivo, et capable d'élusiper le médicament. Cette méthode fournit un système d'administration de médicaments pour tester divers agents immunomodulatoires afin d'inhiber localement l'inflammation et de réduire la fibrose des voies respiratoires. La fabrication des endoprothèses prend de 28 à 30 h et peut être reproduite facilement, ce qui permet d'expérimenter avec de grandes cohortes. Ici, nous avons incorporé la rapamycine médicament dans l'endoprothèse pour tester son efficacité dans la réduction de la fibrose et le dépôt de collagène. Les résultats ont indiqué que les tentes de PLLA-PCL ont montré la libération fiable de rapamycine, étaient mécaniquement stables dans des conditions physiologiques, et étaient biocompatibles, induisant peu de réponse inflammatoire dans la trachée. En outre, les endoprothèses PLLA-PCL de rapamycine-eluting ont réduit la formation de cicatrice dans la trachée in vivo.

La construction d'endoprothèse stent Biodégradable PLLA-PCL chargée de rapamycine utilisée dans cette étude était capable d'éluder la rapamycine d'une manière cohérente et prévisible dans des conditions physiologiques (figure 1). La figure 2 montre l'endoprothèse PLLA-PCL projetée autour d'un angiocatheter de 22 G pour une utilisation dans un modèle murine de LTS. Pour déterminer si les effets de l'élution de rapamycine dans la trachée sont effic...

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Design of a Biocompatible Drug-Eluting Tracheal Stent in Mice with Laryngotracheal Stenosis

La sténose laryngotratrale résulte d'un dépôt pathologique de cicatrices qui rétrécit de façon critique les voies respiratoires trachéales et manque de thérapies médicales efficaces. À l'aide d'un stent PLLA-PCL (70% poly-L-lactiure et 30% de polycaprolactone) comme système local d'administration de médicaments, des thérapies potentielles visant à diminuer la prolifération des cicatrices dans la trachée peuvent être étudiées.

Conception d'un Stent trachéal trachéheal biocompatible dans des souris avec la sténose laryngotratrahéheal

Laryngotracheal stenosis (LTS) is a pathologic narrowing of the subglottis and trachea leading to extrathoracic obstruction and significant shortness of ...

Ce protocole nous permet d’étudier les stents d’échappement des médicaments dans un petit modèle animal de sténose laryngotracheal nous permettant de tirer parti des animaux génétiquement modifiés d’une manière rentable. Le placement transoral du stent de voie aérienne drogue-eluting épargne les animaux d’une incision ouverte dans la trachée représentant un modèle plus médicalement pertinent de sténose laryngotracheal. Cette technique facilite l’investigation préclinique des stratégies locales d’administration de drogue pour traiter la sténose laryngotracheal.Cette technique fournit une plate-forme réalisable et efficace pour l’étude translationnelle des endosseurs de voies respiratoires d’échappement de drogue dans un modèle de petit animal qui peut être appliqué pour l’étude future dans de plus grands modèles animaux aussi bien que l’application clinique. particulièrement l’intubation transorale, l’induction des dommages de trachée, et l’étape de placement d’enfilent de voie aérienne. Démonstration visuelle de cette chirurgie techniquement difficile est critique que beaucoup de détails fins ne peuvent pas être entièrement décrits en mots.Pour faire une solution de polymère contenant 1% de rapamycine, ajoutez six milligrammes de rapamycine à 600 milligrammes de 70-30 PLLA-PCL dans un flacon de verre. Sous un capot de fumée, ajouter six millilitres de dichloromethane au flacon complété et contrôler la rapamycine et ajouter 120 microlitres de glycérol à chaque flacon. Ensuite, plafonnez les flacons et laissez la solution PLLA-PCL homogénéiser pendant six à 12 heures à température ambiante.Pour créer un enfilage des voies respiratoires murines, à l’aide de matériaux stériles et de techniques, appliquez un millilitre de rapamycine complété la solution PLLA-PCL sur la canule veineuse d’un propylène fluoré de 22 jauges à base d’angiocathéter à base d’angiocathéter tout en ralentissant la rotation du cathéter. Lorsque toute la solution a été appliquée, soutenir l’angiocathéter moulé avec la pointe de l’angiocathéter orienté vers le bas et la poignée du cathéter sur le bord d’une boîte de Pétri en verre dans une hotte sous vide. Après 24 heures sous vide à température ambiante, tordez et faites glisser doucement le cathéter de la construction de stent séchée et vérifiez circonférentiellement le stent pour tous les défauts qui pourraient avoir résulté pendant le processus de coulée.Pour faciliter la visualisation, il est utile de tracer une mince ligne noire sur toute la longueur de l’enfilage. Coupez chaque extrémité des enfilents moulés avec de fins ciseaux droits de sorte que les bords soient axiaux et utilisez les ciseaux pour couper chaque enhent en segments axiaux de trois millimètres. Chargez ensuite chaque stent de trois millimètres sur un nouveau cathéter veineux de calibre 22.Pour l’induction de sténose laryngotracheal, après confirmation d’un manque de réponse au pincement d’orteil, placez la première souris sur une plate-forme chirurgicale dans la position de supine et bouclez un petit morceau de fil fixé au dessus de la plate-forme autour des incisives centrales. Fixez les membres à la table avec du ruban adhésif et faites une incision verticale médiane de 1,5 centimètre dans le cou de la souris. Divisez le thymus qui s’enlise etéralisez les deux lobes qui en résultent pour visualiser la trachée.Divisez les muscles sternohyoid et sternothyroid overlying à l’attachement supérieur bilatéralement et passez un angiocatheter de calibre 22 transorally par le larynx dans la trachée. À l’aide de petits forceps, appliquer une pression sur le larynx antérieur de la souris pour faciliter le placement correct du cathéter. Un angiocathéter correctement placé peut être visualisé par sa couleur blanche à travers la trachée.Pour induire la blessure, passez une brosse en fil enduit de bleomycine à travers l’angiocathéter inséré et retirez lentement le cathéter de sorte que seule la brosse de fil reste dans la trachée. À l’aide de forceps fins, appliquer une contre-pression sur la trachée pour perturber mécaniquement le lumen trachéal avec la brosse avant de réinsérer le cathéter dans la trachée au-dessus de la brosse. Retirez la brosse à fil et réappliquez la bleomycine avant d’insérer et d’enlever la brosse quatre fois de plus comme cela vient d’être démontré.Après la dernière application de bleomycine, retirer le cathéter de la trachée. Pour le placement transoral d’un PLLA-PCL, assurez-vous qu’une mince ligne verticale noire a été incorporée dans chaque stent et intuber transorally la souris avec l’angiocathéter préchargé. Le stent doit être visualisé dans la trachée par l’incision transcervicale.Lorsque le stent est en place, utilisez des forceps fins pour saisir fermement mais doucement la trachée à travers l’incision pour maintenir le stent en place et enlever le cathéter. Il est essentiel de placer le stent aussi soigneusement que possible. Trop de pression sur la trachée entraînera l’effondrement du stent causant l’obstruction des voies respiratoires et la mort de l’animal.Fermez l’incision avec de la colle tissulaire ou des sutures chromiques absorbables 4-0 utilisées ici et permettez à la souris de récupérer avec surveillance avant de retourner l’animal dans sa cage d’origine. Au point de terminaison expérimental approprié, placez la souris d’intérêt dans la position de supine sur la plate-forme chirurgicale et utilisez les ciseaux incurvés fins d’iris pour rouvrir l’incision. Exposez la trachée comme démontré et utilisez les ciseaux pour diviser la trachée distale au-dessous du niveau du stent.Ensuite, divisez la trachée proximale au-dessous du larynx et au-dessus du stent et séparez la trachée divisée de l’œsophage postérieurement. Retirez ensuite le stent de la trachée et fixez la trachée dans 10% de formaline pendant 24 heures. La construction de stent PLLA-PCL chargée de rapamycine biodégradable utilisée dans cette étude est capable d’éluder la rapamycine d’une manière cohérente et prévisible dans des conditions physiologiques.Dans cette image, le stent biocompatible miniaturisé peut être observé in situ dans la trachée comme indiqué par le marqueur noir sur le stent visualisé par la trachée translucide de souris. Après 21 jours, le marqueur de colorant noir peut être utilisé pour confirmer le maintien de la position de stent dans la trachée. Les tests de biocompatibilité utilisant la coloration immunofluorescente pour les marqueurs de l’inflammation aiguë et chronique démontrent que la construction de stent PLLA-PCL n’est pas immunoréactive déterminée par le nombre minimal de cellules immunitaires présentes après le placement en l’absence de blessure.Manipuler les voies respiratoires d’une manière délicate et atraumatique est essentiel au succès de la procédure. Une force excessive, de multiples intubations et un effondrement de stent peuvent entraîner la mort d’animaux. Après traitement avec le stent rapamycine-eluting, l’évaluation de la survie, l’expression de gène par PCR en temps réel quantitatif, l’immunoassay comprenant la cytométrie de flux, ELISA, et l’immunohistochimie peuvent être exécutées.Comme il fournit une plate-forme réussie pour l’élitution des médicaments dans un modèle de souris, cette technique ouvre la voie à de futures investigations de thérapeutiques appliquées localement dans la sténose laryngotracheal. Le dichloromethane est un liquide corrosif. Assurez-vous d’utiliser toujours un capot à fumée, un équipement de protection individuelle et des matériaux non corrosifs

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