Name: design of a biocompatible drug-eluting tracheal stent in mice with laryngotracheal stenosis
Uploaded: 2020-01-21T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Design of a Biocompatible Drug-Eluting Tracheal Stent in Mice with Laryngotracheal Stenosis at JoVE.com

המכון הלאומי על חירשות והפרעות תקשורת אחרות של המוסדות הלאומיים לבריאות תחת מספרי הפרס 1K23DC014082 ו 1K23DC014082 (אלכסנדר הלל). מחקר זה היה גם נתמך מבחינה כספית על ידי האגודה הטריולוגית והמכללה האמריקנית למנתחים (אלכסנדר הלל), קרן האגודה האמריקנית לרפואה, שיקגו, IL (Madhavi Duvvuri) ו מענק הכשרה T32 נדבך (קווין Motz).

הערה: כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים של אוניברסיטת ג'ונס הופקינס (MO12M354).
1. הכנת רפצין ב-PLLA-PCL
<ol><li>הכינו שתי בקבוקים מזכוכית (עם כמוסות) של 70:30 PLLA-PCL פולימר פתרונות (צמיגות הגלום 1.3 כ 1.8 DL/G; רשימת חומרים) פתרונות, עם בקבוקון אחד המכיל 1.0% rapamycin ...

<ol>
	<li>Minnigerode, B., Richter, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+subglottic+tracheal+stenosis+in+childhood.">Pathophysiology of subglottic tracheal stenosis in childhood.</a> Progress in Pediatric Surgery. 21, 1-7 (1987).</li><li>Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrotic+disease+and+the+T(H)1/T(H)2+paradigm.">Fibrotic disease and the T(H)1/T(H)2 paradigm.</a> Nature Reviews Immunology. 4 (8), 583-594 (2004).</li><li>Kaplan, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+Toxicity+Following+Administration+of+Sirolimus+(formerly+Rapamycin)+for+Psoriasis.">Systemic Toxicity Following Administration of Sirolimus (formerly Rapamycin) for Psoriasis.</a> Archives of Dermatology. 135 (5), 553-557 (1999).</li><li>Kalra, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New-Generation+Coronary+Stents:+Current+Data+and+Future+Directions.">New-Generation Coronary Stents: Current Data and Future Directions.</a> Currrent Atherosclerosis Reports. 19 (3), 14 (2017).</li><li>Chao, Y. K., Liu, K. S., Wang, Y. C., Huang, Y. L., Liu, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodegradable+cisplatin-eluting+tracheal+stent+for+malignant+airway+obstruction:+in+vivo+and+in+vitro+studies.">Biodegradable cisplatin-eluting tracheal stent for malignant airway obstruction: in vivo and in vitro studies.</a> Chest. 144 (1), 193-199 (2013).</li><li>Duvvuri, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+an+immunomodulatory+drug-eluting+stent+to+treat+laryngotracheal+stenosis.">Engineering an immunomodulatory drug-eluting stent to treat laryngotracheal stenosis.</a> Biomaterials Science. 7 (5), 1863-1874 (2019).</li><li>Mugru, S. D., Colt, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complications+of+silicone+stent+insertion+in+patients+with+expiratory+central+airway+collapse.">Complications of silicone stent insertion in patients with expiratory central airway collapse.</a> Annals of Thoracic Surgery. 84 (6), 1870-1877 (2007).</li><li>Hillel, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+situ,+in+vivo+murine+model+for+the+study+of+laryngotracheal+stenosis.">An in situ, in vivo murine model for the study of laryngotracheal stenosis.</a> JAMA Otolaryngolology Head Neck Surgery. 140 (10), 961-966 (2014).</li><li>Can, E., Udenir, G., Kanneci, A. I., Kose, G., Bucak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+PLLA/PCL+blends+and+paclitaxel+release+profiles.">Investigation of PLLA/PCL blends and paclitaxel release profiles.</a> AAPS PharmSciTech. 12 (4), 1442-1453 (2011).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paclitaxel+Drug-eluting+Tracheal+Stent+Could+Reduce+Granulation+Tissue+Formation+in+a+Canine+Model.">Paclitaxel Drug-eluting Tracheal Stent Could Reduce Granulation Tissue Formation in a Canine Model.</a> Chinese Medical Journal (Engl). 129 (22), 2708-2713 (2016).</li><li>Sigler, M., Klotzer, J., Quentin, T., Paul, T., Moller, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stent+implantation+into+the+tracheo-bronchial+system+in+rabbits:+histopathologic+sequelae+in+bare+metal+vs.+drug-eluting+stents.">Stent implantation into the tracheo-bronchial system in rabbits: histopathologic sequelae in bare metal vs. drug-eluting stents.</a> Molecularand Cellular Pediatrics. 2 (1), 10 (2015).</li><li>Robey, T. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+internal+bioabsorbable+PLGA+"finger-type"+stents+in+a+rabbit+tracheal+reconstruction+model.">Use of internal bioabsorbable PLGA "finger-type" stents in a rabbit tracheal reconstruction model.</a> Archives of Otolaryngology Head Neck Surgery. 126 (8), 985-991 (2000).</li></ol>

הצעדים הקריטיים ביותר עבור בהצלחה בנייה ושימוש סטנט משחררי התרופה ב vivo הם 1) קביעת היחס האופטימלי של PLLA-PCL עבור שיעור התרופה הרצוי, 2) קביעת הריכוז המתאים של התרופה כדי להיות משתמט, 3) ליציקת סטנטים סביב הקטטר לשימוש vivo, ו 4) מעביר את הסטנט לתוך העכברים לאחר האינדוקציה של הארה ב מבלי לגרום לחסימ...

היצרות לרינגוקנה (הארה ב) היא היצרות פתולוגית של קנה הנשימה לרוב בשל פציעה הפוסט-צנרור. השילוב של הקולוניזציה החיידקית, תגובת גוף זר למעי הגס או צינורית אנדוקנה, וגורמים ספציפיים למטופל מובילים לתגובה דלקתית חריגה. זה התגובה החיסונית מסתגלת מוביל התצהיר של קולגן בקנה הנשימה, וכתוצאה מכך היצרות הלומיאל של קנה הנשימה ואת היצרות הבאים1,2. כמו הטיפול הנוכחי עבור מחלה זו היא כירורגית בעיקר, פיתוח אלטרנטיבה רפואית מבוססת טיפול הפרדיגמה מיקוד מסלולים דלקתיים והפרופיברוטיים להוביל התצהיר קולגן מוגזם נחקרו. Rapamycin, אשר מעכב את מתחם ה-mTOR איתות, הוכח כי יש אפקטים חיסוני מדכאים, כמו גם אפקט אנטיפיברוסט חזק. עם זאת, כאשר rapamycin הוא מנוהל באופן מערכתית, תופעות לוואי נפוצות (למשל, hyperlipidemia, אנמיה, תרומבוציטופניה) יכול להיות מבוטא3. מטרת המתודולוגיה שלנו היא לפתח רכב עבור משלוח סמים מקומי מעשית לשימוש בדרכי הנשימה כי היה להפחית את ההשפעות הללו מערכתית. ההערכות שלנו מתמקדות בחקירת התגובה החיסונית המקומית לבניית משלוח הסמים, כמו גם יכולתו לעכב את התפקוד הפיברוהפיצוץ ולשנות את הסביבה החיסונית המקומית. תוצאות ספציפיות למחלות כוללות בדיקות vivo כי הערכת סמנים של פיברוזיס.
סטנטים מתכלים לתרופות מתכלה שימשו במודלים של בעלי חיים של מחלות במערכות איברים מרובות, כולל נתיב האוויר4. לניהול היצרות בדרכי הנשימה או קריסה, החקירות הקודמות השתמשו סיליקון מצופה סמים וסטנטים מבוססי ניקל5. בניית PLLA-PCL נבחרה עבור שיטה זו מסוימת בגלל הפרופיל שלה משחרלי התרופה וחוזק מכני בתנאים פיסיולוגיים במשך תקופה של 3 שבועות, אשר הוכח במחקרים הקודמים שפורסמו6. PLLA-PCL הוא גם חומר ביולוגי תואם ומתכלה כבר אושרה על ידי ה-FDA4. משחררי סטנטים ביולוגיים ו-MMC נבדקו בדגמי בעלי חיים גדולים כגון ארנבים וכלבים. עם זאת, במודלים אלה של בעלי חיים, סטנטים לא הושמו במודל בעל חיים של מחלות והושתל השתלת עצמות. מחקר זה מספק שיטה ייחודית להערכת סטנט ביולוגי משחררי התרופות ממוקם transorally במודל העכבר של פציעה בדרכי הנשימה והיצרות לרינגוקנה. סטנט תואם ביולוגי המפריש תרופה חיסונית מקומית והוא יכול להיות מיניאטורי למחקר במודל murine הוא בעל ערך עבור מחקר טרום המחקר הקליני. נסיונות קודמים לניצול סטנט עם מבנה חומרים אחרים שנוצר תגובות גוף זר חזק החמרה הדלקת הבסיסית המבדיל את הארה ב7. מתודולוגיה זו, לידיעתנו, היא הראשונה מסוגו ללמוד את ההשפעות האימונומודולטיות והאנטי פיברופטיים של מערכת העברת תרופות מבוססת-סטנט במודל של מורטין. המודל המורין עצמו מציע מספר יתרונות לחקר ההשפעות של סם אימונומודוללי על קנה הנשימה. עכברים מהונדסים גנטית וגדודים ניסיוני של עכברים בריאים וחולים ניתן ללמוד, אשר יכול להוביל לשינוי ניסיוני ולשפר עלות יעילות. יתר על כן, המסירה של סטנט העברת לתוך קנה הנשימה של העכבר מחקה משלוח קליני של סטנט כזה בבני אדם, אשר עוד מדגיש את היתרון הטרנסלייתי של שיטה זו. לבסוף, הקלות היחסית שבה הסטנט PLLA-PCL עם התרופה ניתן לייצר מאפשר שינויים כדי לספק טיפולי סמים חלופיים מכוון להפחתת צלקת היווצרות בקנה הנשימה.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1. For stent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22-gauge angiocatheter</td>
			<td>Jelco</td>
			<td>4050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichloromethane</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>270997-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>56-81-5</td>
			<td>Available from other vendors as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDLGA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>739955-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLLA-PCL (70 : 30)</td>
			<td>Evonik Industries AG</td>
			<td>65053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rapamycin</td>
			<td>LC Laboratories</td>
			<td>R-5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2. Animal surgery</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wire brush</td>
			<td>Mill-Rose Company</td>
			<td>320101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3. For immunohistochemistry staining</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antigen retrival buffer</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab93678</td>
			<td>Available from other vendors as well; acidic pH needed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>8961S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11965-092</td>
			<td>Available from other vendors as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS (Fetal Bovine Serum)</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>F4135-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit-488 antibody</td>
			<td>Lif technology</td>
			<td>a11008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rat-633 antibody</td>
			<td>Lif technology</td>
			<td>a21094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrophilic plus slide</td>
			<td>BSB7028</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>100-10023</td>
			<td>Available from other vendors as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-CD3 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab5690</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat antiF4/80 antibody</td>
			<td>Biolengend</td>
			<td>123101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss LSM 510 Meta Confocal Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4. For quantative PCR</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5mm glass beads</td>
			<td>OMNI International</td>
			<td>19-645</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bead Mill Homoginizer</td>
			<td>OMNI International</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gene Specific Forward/Reverse Primers</td>
			<td>Genomic Resources Core Facility</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop 2000 spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power SYBR Green Mastermix</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>4367659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy mini kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>80404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StepOnePlus Real Time PCR system</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

design of a biocompatible drug-eluting tracheal stent in mice with laryngotracheal stenosis

היצרות לרינגוקנה (הארה ב) היא היצרות פתולוגית של תת-הבית וקנה הנשימה המוביל לחסימה מחוץ לבית החזה וקוצר נשימה משמעותי. התוצאות של המנהיג מפציעה מגוף זר בקנה הנשימה, המובילה לפגיעה ברקמות ותגובה דלקתית מקומית אשר משתבש, המובילה לתצהיר של רקמת צלקת פתולוגית. הטיפול עבור הארה הוא כירורגי עקב חוסר טיפולים רפואיים יעילים. מטרת שיטה זו היא לבנות סטנט תואם ביולוגי זה יכול להיות מיניאטורי למקום עכברים עם הארה. הדגמנו כי PLLA-PCL (70% פולי-L-lactide ו-30% polycaprolactone) בונה היה חוזק ביומכאני אופטימלי, היה ביולוגי תואם, מעשית עבור vivo מיקום סטנט, ומסוגל להתחמק תרופה. שיטה זו מספקת מערכת העברת תרופות לבדיקת סוכנים אימונומודולטוריים שונים כדי לעכב את הדלקת באופן מקומי ולהפחית פיברוזיס של דרכי הנשימה. ייצור סטנטים לוקח 28 שעות וניתן לשכפל בקלות ולאפשר ניסויים עם כנופיית גדולים. כאן אנו שילב את rapamycin התרופה בתוך סטנט כדי לבדוק את יעילותו בהפחתת פיברוזיס והתצהיר קולגן. התוצאות התגלו כי האוהלים PLLA-PCL הראו לשחרר rapamycin אמין, היו יציבים מכנית בתנאים פיסיולוגיים, היו תואמים ביולוגית, וגרימת תגובה דלקתית קטנה בקנה הנשימה. נוסף על כך, הפחתת הצלקת של היווצרות הצלקות בקנה הנשימה בvivo.

מתכלה PLLA-PCL סטנט לבנות טעון עם rapamycin בשימוש במחקר זה היה מסוגל להתחמק rapamycin בצורה עקבית וצפויה בתנאים פיסיולוגיים (איור 1). איור 2 מראה את הסטנט של plla-PCL בסביבות 22 G אנגיוקטטר לשימוש במודל murine של הארה. כדי לקבוע אם ההשפעות של הימנעות rapamycin בקנה הנשימה היא יעילה פי...

Watch this Scientific Journal Video about Design of a Biocompatible Drug-Eluting Tracheal Stent in Mice with Laryngotracheal Stenosis at JoVE.com

Design of a Biocompatible Drug-Eluting Tracheal Stent in Mice with Laryngotracheal Stenosis

היצרות לרינגוקנה התוצאות מתוך התצהיר צלקת פתולוגית כי באופן ביקורתי מצמצמת את דרכי הנשימה הקנה וחסר טיפולים רפואיים יעילים. באמצעות PLLA-PCL (70% פולי-L-lactide ו-30% pvc) סטנט כמערכת שילוח סמים מקומי, טיפולים פוטנציאליים המיועדים להפחתת התפשטות הצלקת בקנה הנשימה ניתן ללמוד.

עיצוב של משחררי ביוטינג לסמים ביולוגיים בעכברים עם היצרות לרינגוקנה

Laryngotracheal stenosis (LTS) is a pathologic narrowing of the subglottis and trachea leading to extrathoracic obstruction and significant shortness of ...

פרוטוקול זה מאפשר לנו לחקור סטנים מרוממים במודל בעלי חיים קטן של התעצמות laryngotracheal ומאפשר לנו למנף בעלי חיים מהונדסים גנטית בצורה חסכונית. מיקום טרנסורל של סטנט דרכי הנשימה eluting התרופה חוסך את בעלי החיים מחתך פתוח לתוך קנה הנשימה המייצג מודל רלוונטי יותר קלינית של התעצמות laryngotracheal. טכניקה זו מקלה על חקירה פרה-קלינית של אסטרטגיות אספקת תרופות מקומיות לטיפול בהטנוזה בגרינגוטרצ'אל.טכניקה זו מספקת פלטפורמה אפשרית ויעילה לחקירה תרגום של סטנטים בדרכי הנשימה eluting סמים במודל בעלי חיים קטן שניתן ליישם לחקירה עתידית במודלים גדולים יותר של בעלי חיים, כמו גם יישום קליני. טכניקה במיוחד צנרור transoral, אינדוקציה של פגיעה קנה הנשימה, ואת שלב מיקום סטנט דרכי הנשימה. הדגמה חזותית של ניתוח מאתגר מבחינה טכנית זה היא קריטית כמו רבים של הפרטים הקטנים לא ניתן לתאר באופן מלא במילים.כדי להפוך 1%rapamycin המכיל פתרון פולימר, להוסיף שישה מיליגרם של rapamycin ל 600 מיליגרם של 70-30 PLLA-PCL בבקבוקון זכוכית. מתחת למכסה המנוע של האדים, הוסיפו שישה מיליליטר של דיכלורומטן לבקבוקון הראפאמיצין בתוספת ושליטה והוסיפו 120 מיקרוליטרים של גליצרול לכל בקבוקון. לאחר מכן מכסים את הבקבוקונים ומאפשרים לפתרון PLLA-PCL להומוגניזציה למשך 6 עד 12 שעות בטמפרטורת החדר.כדי ליצור סטנט דרכי הנשימה מורין, באמצעות חומרים סטריליים וטכניקה, להחיל מיליליטר אחד של פתרון PCL תוסף rapamycin על הקנטולה הוורידית של 22 מד מפילן פלואורלן מבוסס אנגיוקטטר תוך האטת סיבוב הקטטר. כאשר כל הפתרון יושם, אביזר אנגיוקטטר מעוצב עם קצה אנגיוקטטר פונה כלפי מטה ואת הידית של קטטר על קצה צלחת פטרי זכוכית במכסה המנוע ואקום. לאחר 24 שעות תחת ואקום בטמפרטורת החדר, לסובב בעדינות להחליק את הקטטר ממבנה סטנט מיובש ולבדוק היקף את הסטנט עבור כל פגמים שאולי גרמו במהלך תהליך הליהוק.כדי לסייע בהדמיה, מומלץ לצייר קו שחור דק לאורך הסטנט. חותכים כל קצה של הסטנטים יצוק עם מספריים ישר דק, כך הקצוות הם סרנים ולהשתמש במספריים לחתוך כל סטנט לשלושה מקטעים סרנים מילימטר. ואז לטעון כל סטנט שלושה מילימטר על קטטר ורדים חדש 22 מד.עבור אינדוקציה של היטנה laryngotracheal, לאחר אישור חוסר תגובה קמצוץ בוהן, מניחים את העכבר הראשון על פלטפורמה כירורגית במצב supine לולאה חתיכה קטנה של חוט מודבק על החלק העליון של הפלטפורמה סביב החותכים המרכזיים. אבטח את הגפיים לשולחן עם סרט הדבקה ובצע חתך אנכי בקו האמצע באורך 1.5 ס"מ בצוואר העכבר. מחלקים את התימוס overlying ו משני האונות וכתוצאה מכך כדי לדמיין את קנה הנשימה.מחלקים את השרירים השטרנוהיאידים והשטרנותירואידים מעליהם בהחזקה הנעלה דו-צדדית ומעבירים 22 אנגיו-קתטר מד רוחבי דרך הגרון לקנה הנשימה. באמצעות ממטרים קטנים, להפעיל לחץ על הגרון הראשון של העכבר כדי לסייע במיקום הנכון של הקטטר. אנגיוקטר ממוקם כראוי יכול להיות חזותי על ידי צבע לבן שלה דרך קנה הנשימה.כדי לגרום לפציעה, להעביר מברשת תיל מצופה Bleomycin דרך אנגיוקטטר מוכנס לאט למשוך את הקטטר, כך שרק מברשת תיל נשאר בתוך קנה הנשימה. באמצעות ממטרים עדין, להחיל לחץ נגדי על קנה הנשימה כדי לשבש מכנית את לומן קנה הנשימה עם המברשת לפני החזרת קטטר לתוך קנה הנשימה מעל המברשת. הסר את מברשת התיל ולהטמיע מחדש את Bleomycin לפני החדרה והסרה של המברשת ארבע פעמים נוספות כפי שהודגם רק.לאחר היישום האחרון Bleomycin, להסיר את הקטטר מן קנה הנשימה. למיקום טרנס-אורל של PLLA-PCL, ודא שקו אנכי שחור דק שולבו בכל סטנט וצנרר באופן רוחבי את העכבר עם האנגיוקטר שנטען מראש. הסטנט צריך להיות חזותי בתוך קנה הנשימה דרך החתך הטרנסרבי.כאשר הסטנט נמצא במקום, השתמש בממטרים עדין כדי לתפוס בחוזקה אך בעדינות את קנה הנשימה דרך החתך כדי להחזיק את הסטנט במקום ולהסיר את הקטטר. זה קריטי למקם את הסטנט בזהירות רבה ככל האפשר. יותר מדי לחץ על קנה הנשימה יגרום לקריסת הסטנט ולגרום לחסימת דרכי הנשימה ומוות לחיה.סגור את החתך עם דבק רקמות או תפרים כרומיים 4-0 נספגים המשמשים כאן ולאפשר לעכבר להתאושש עם ניטור לפני החזרת החיה לכלוב הבית שלה. בנקודת הקצה הניסיונית המתאימה, מניחים את העכבר של עניין בתצב supine על הפלטפורמה הכירורגית ולהשתמש מספריים איריס מעוקל עדין כדי לפתוח מחדש את החתך. חשוף את קנה הנשימה כפי שהוכח ולהשתמש במספריים כדי לחלק את קנה הנשימה הדיסטלי מתחת לרמת הסטנט.לאחר מכן, מחלקים את קנה הנשימה הפרוקסימלי מתחת לגרון ומעל הסטנט ומפרידים את קנה הנשימה המחולק מהוושט האחורי. לאחר מכן הסירו את הסטנט מקנה הנשימה ותקן את קנה הנשימה ב-10% פורמלין למשך 24 שעות. מבנה סטנט PLLA-PCL טעון מתכלה בשימוש במחקר זה הוא מסוגל לאסוף rapamycin באופן עקבי וצפוי בתנאים פיזיולוגיים.בתמונה זו, סטנט biocompatible מיניאטורציה ניתן לראות באתרו בתוך קנה הנשימה כפי שצוין על ידי הסמן השחור על הסטנט דמיינו דרך קנה הנשימה של העכבר שקוף. לאחר 21 ימים, סמן הצבע השחור יכול לשמש כדי לאשר את התחזוקה של מיקום סטנט בתוך קנה הנשימה. בדיקות תאימות ביולוגית באמצעות כתמים immunofluorescent עבור סמנים של דלקת חריפה וכרונית מראים כי מבנה סטנט PLLA-PCL אינו immunoreactive כפי שנקבע על ידי המספר המינימלי של תאים חיסוניים נוכח לאחר המיקום בהעדר פציעה.מניפולציה של דרכי הנשימה בצורה עדינה ואטראומטית היא קריטית להצלחת ההליך. כוח מופרז, צנרורים מרובים והתמוטטות סטנט עלולים להוביל למוות של בעלי חיים. לאחר טיפול בסטנט rapamycin-eluting, הערכת הישרדות, ביטוי גנים באמצעות PCR כמותי בזמן אמת, immunoassay כולל ציטומטריה זרימה, ELISA, אימונוהיסטוכימיה יכול להתבצע.כפי שהוא מספק פלטפורמה מוצלחת עבור elution סמים במודל העכבר, טכניקה זו סוללת את הדרך לחקירות עתידיות של טיפולים מקומיים מיושמים בהטמנת הגרון. דיכלורומתאן הוא נוזל מאכל. הקפד תמיד להשתמש ברדס אדים, ציוד מגן אישי, וחומרים שאינם קורוזיביים

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Monitoring the Wall Mechanics During Stent Deployment in a Vessel

מעקב אחר מכניקה קיר במהלך פריסה סטנט בכלי

Clinical trials have reported different restenosis rates for various stent designs1. It is speculated that stent-induced strain concentrations on the ...

Design of a Biaxial Mechanical Loading Bioreactor for Tissue Engineering

עיצוב של Bioreactor טוען מכונות Biaxial להנדסת רקמות

We  designed a loading device that is capable of applying uniaxial or biaxial  mechanical strain to a tissue engineered biocomposites fabricated for  ...

Experimental Investigation of Secondary Flow Structures Downstream of a Model Type IV Stent Failure in a 180&#176; Curved Artery Test Section

Experimental Investigation of Secondary Flow Structures Downstream of a Model Type IV Stent Failure in a 180Ãƒâ€šÃ‚Â° Curved Artery Test Section

חקירה ניסויית של מבנים זרימה משני Downstream של כישלון IV סטנט דגם הקלד סעיף מבחן עורק 180 ° מפותל

The arterial network in the human vasculature comprises of ubiquitously present blood vessels with complex geometries (branches, curvatures and ...

Ferromagnetic Bare Metal Stent for Endothelial Cell Capture and Retention

Bare Metal פרומגנטי סטנט ללכיד תא האנדותל ושייר

Rapid endothelialization of cardiovascular stents is needed to reduce stent thrombosis and to avoid anti-platelet therapy which can reduce bleeding risk. ...

Automated Robotic Liquid Handling Assembly of Modular DNA Devices

אוטומטית רובוטית טיפול בנוזלים הרכבה של התקנים DNA מודולרי

Recent advances in modular DNA assembly techniques have enabled synthetic biologists to test significantly more of the available &#34;design space&#34; ...

Synthesis of Biocompatible Liquid Crystal Elastomer Foams as Cell Scaffolds for 3D Spatial Cell Cultures

סינתזה של ביולוגית Liquid Crystal אלסטומר קצף כמו פיגומים Cell עבור תא תרבויות מרחבי 3D

Here, we present a step-by-step preparation of a 3D, biodegradable, foam-like cell scaffold. These scaffolds were prepared by cross-linking star block ...

Anatomically Realistic Neonatal Heart Model for Use in Neonatal Patient Simulators

מודל הלב Neonatal מציאותי אנטומית לשימוש ב- Neonatal סימולטורים החולה

Neonatal patient simulators (NPS) are artificial patient surrogates used in the context of medical simulation training. Neonatologists and nursing staff ...

Repressing Gene Transcription by Redirecting Cellular Machinery with Chemical Epigenetic Modifiers

הדחקת שעתוק גנים על ידי ניתוב מחדש מכונות הסלולר עם המגבילים Epigenetic כימי

Regulation of chromatin compaction is an important process that governs gene expression in higher eukaryotes. Although chromatin compaction and gene ...

Design and Synthesis of a Reconfigurable DNA Accordion Rack

עיצוב, סינתזה של ארון אקורדיון דנ א Reconfigurable

DNA nanostructure-based mechanical systems or DNA nanomachines, which produce complex nanoscale motion in 2D and 3D in the nanometer to &#229;ngstr&#246;m ...

Seeding and Implantation of a Biosynthetic Tissue-engineered Tracheal Graft in a Mouse Model

Seeding, השרשת biosynthetic הוחלף נגזר רקמות מהונדסים בקנה הנשימה השתלה במודל של עכברים

Treatment options for congenital or secondary long segment tracheal defects have historically been limited due to an inability to replace functional ...