Name: design of a biocompatible drug-eluting tracheal stent in mice with laryngotracheal stenosis
Uploaded: 2020-01-21T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Design of a Biocompatible Drug-Eluting Tracheal Stent in Mice with Laryngotracheal Stenosis at JoVE.com

राष्ट्रीय बधिरता और स्वास्थ्य के अन्य संचार विकारों पर संस्थान पुरस्कार संख्या 1K23DC014082 और 1R21DC017225 (अलेक्जेंडर Hillel) के तहत स्वास्थ्य संस्थानों । इस अध्ययन को ट्राइओलॉजिकल सोसायटी और अमेरिकन कॉलेज ऑफ सर्जन (अलेक्जेंडर हिलेल), अमेरिकन मेडिकल एसोसिएशन फाउंडेशन, शिकागो, आईएल (माधवी डुवुपुरी) और एक T32 NIDCD प्रशिक्षण अनुदान (केविन Motz) द्वारा भी आर्थिक रूप से समर्थित किया गया था ।

नोट: यहां वर्णित सभी तरीकों को जॉन्स हॉपकिंस विश्वविद्यालय पशु देखभाल और उपयोग समिति (MO12M354) द्वारा अनुमोदित किया गया था ।
1. पीएलएलए-पीसीएल में रैपमाइसिन की तैयारी
<ol><li>70:30 पीएलए-पीसीएल बहुलक समा...

<ol>
	<li>Minnigerode, B., Richter, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+subglottic+tracheal+stenosis+in+childhood.">Pathophysiology of subglottic tracheal stenosis in childhood.</a> Progress in Pediatric Surgery. 21, 1-7 (1987).</li><li>Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrotic+disease+and+the+T(H)1/T(H)2+paradigm.">Fibrotic disease and the T(H)1/T(H)2 paradigm.</a> Nature Reviews Immunology. 4 (8), 583-594 (2004).</li><li>Kaplan, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+Toxicity+Following+Administration+of+Sirolimus+(formerly+Rapamycin)+for+Psoriasis.">Systemic Toxicity Following Administration of Sirolimus (formerly Rapamycin) for Psoriasis.</a> Archives of Dermatology. 135 (5), 553-557 (1999).</li><li>Kalra, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New-Generation+Coronary+Stents:+Current+Data+and+Future+Directions.">New-Generation Coronary Stents: Current Data and Future Directions.</a> Currrent Atherosclerosis Reports. 19 (3), 14 (2017).</li><li>Chao, Y. K., Liu, K. S., Wang, Y. C., Huang, Y. L., Liu, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodegradable+cisplatin-eluting+tracheal+stent+for+malignant+airway+obstruction:+in+vivo+and+in+vitro+studies.">Biodegradable cisplatin-eluting tracheal stent for malignant airway obstruction: in vivo and in vitro studies.</a> Chest. 144 (1), 193-199 (2013).</li><li>Duvvuri, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+an+immunomodulatory+drug-eluting+stent+to+treat+laryngotracheal+stenosis.">Engineering an immunomodulatory drug-eluting stent to treat laryngotracheal stenosis.</a> Biomaterials Science. 7 (5), 1863-1874 (2019).</li><li>Mugru, S. D., Colt, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complications+of+silicone+stent+insertion+in+patients+with+expiratory+central+airway+collapse.">Complications of silicone stent insertion in patients with expiratory central airway collapse.</a> Annals of Thoracic Surgery. 84 (6), 1870-1877 (2007).</li><li>Hillel, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+situ,+in+vivo+murine+model+for+the+study+of+laryngotracheal+stenosis.">An in situ, in vivo murine model for the study of laryngotracheal stenosis.</a> JAMA Otolaryngolology Head Neck Surgery. 140 (10), 961-966 (2014).</li><li>Can, E., Udenir, G., Kanneci, A. I., Kose, G., Bucak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+PLLA/PCL+blends+and+paclitaxel+release+profiles.">Investigation of PLLA/PCL blends and paclitaxel release profiles.</a> AAPS PharmSciTech. 12 (4), 1442-1453 (2011).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paclitaxel+Drug-eluting+Tracheal+Stent+Could+Reduce+Granulation+Tissue+Formation+in+a+Canine+Model.">Paclitaxel Drug-eluting Tracheal Stent Could Reduce Granulation Tissue Formation in a Canine Model.</a> Chinese Medical Journal (Engl). 129 (22), 2708-2713 (2016).</li><li>Sigler, M., Klotzer, J., Quentin, T., Paul, T., Moller, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stent+implantation+into+the+tracheo-bronchial+system+in+rabbits:+histopathologic+sequelae+in+bare+metal+vs.+drug-eluting+stents.">Stent implantation into the tracheo-bronchial system in rabbits: histopathologic sequelae in bare metal vs. drug-eluting stents.</a> Molecularand Cellular Pediatrics. 2 (1), 10 (2015).</li><li>Robey, T. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+internal+bioabsorbable+PLGA+"finger-type"+stents+in+a+rabbit+tracheal+reconstruction+model.">Use of internal bioabsorbable PLGA "finger-type" stents in a rabbit tracheal reconstruction model.</a> Archives of Otolaryngology Head Neck Surgery. 126 (8), 985-991 (2000).</li></ol>

सफलतापूर्वक निर्माण और वीवो में एक दवा eluting स्टेंट का उपयोग करने के लिए सबसे महत्वपूर्ण कदम 1) वांछनीय दवा elution दर के लिए इष्टतम PLLA-पीसीएल अनुपात का निर्धारण, 2) दवा की उचित एकाग्रता का निर्धारण करने के लिए eluted,...

लैरिंगोट्रेचस्ट स्टेनोसिस (एलटीएस) इंट्राजेनिक पोस्ट-इंट्यूबेशन इंजरी के कारण अक्सर श्वासनली का एक पैथोलॉजिकल संकुचन होता है। बैक्टीरियल उपनिवेशीकरण का संयोजन, एक ट्रेकिस्टोमी या एंडोट्राचेल ट्यूब के लिए विदेशी शरीर की प्रतिक्रिया, और रोगी-विशिष्ट कारक एक अदम्य भड़काऊ प्रतिक्रिया का कारण बनते हैं। यह दुर्योधनी प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया श्वासनलिया में कोलेजन के जमाव की ओर ले जाती है, जिसके परिणामस्वरूप श्वासनलिया का चमकदार संकुचन होता है और बाद में स्टेनोसिस1,2होता है। चूंकि इस बीमारी के लिए वर्तमान उपचार मुख्य रूप से शल्य चिकित्सा है, एक वैकल्पिक चिकित्सकीय आधारित उपचार प्रतिमान विकसित करना जो अत्यधिक कोलेजन जमाव का कारण बनने वाले अदनागार भड़काऊ और अपवित्र मार्गों को लक्षित करता है। रैपमाइसिन, जो एमटीओआर सिग्नलिंग कॉम्प्लेक्स को रोकता है, को इम्यूनोसप्रेसिव प्रभाव के साथ-साथ एक मजबूत एंटीफिब्रोब्लास्ट प्रभाव दिखाया गया है। हालांकि, जब रैपामाइसिन को व्यवस्थित रूप से प्रशासित किया जाता है, तो सामान्य दुष्प्रभाव (उदाहरण के लिए, हाइपरलिपिडेमिया, एनीमिया, थ्रोम्बोसाइटोपेनिया) को3स्पष्ट किया जा सकता है। हमारी कार्यप्रणाली का उद्देश्य वायुमार्ग में उपयोग के लिए व्यावहारिक स्थानीय दवा वितरण के लिए एक वाहन विकसित करना है जो इन प्रणालीगत प्रभावों को कम करेगा। हमारा आकलन दवा वितरण निर्माण के लिए स्थानीय प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की जांच के साथ-साथ फाइब्रोब्लास्ट फ़ंक्शन को बाधित करने और स्थानीय प्रतिरक्षा माइक्रोएनवायरमेंट को बदलने की क्षमता पर केंद्रित है। रोग-विशिष्ट परिणामों में वीवो परीक्षण में शामिल है जो फाइब्रोसिस के मार्कर का मूल्यांकन करते हैं।
बायोडिग्रेडेबल ड्रग-एल्यूटिंग स्टेंट का इस्तेमाल एयरवे4सहित कई ऑर्गन सिस्टम में बीमारी के एनिमल मॉडल्स में किया गया है । वायुमार्ग स्टेनोसिस या पतन के प्रबंधन के लिए, पिछली जांच दवा लेपित सिलिकॉन और निकल आधारित स्टेंट5का इस्तेमाल किया है । एक पीएलए-पीसीएल निर्माण को इस विशेष विधि के लिए चुना गया था क्योंकि इसकी दवा एल्यूशन प्रोफाइल और 3 सप्ताह की अवधि में शारीरिक परिस्थितियों में यांत्रिक शक्ति थी, जिसे पिछले प्रकाशितअध्ययन6में प्रदर्शित किया गया है। पीएलएएलए-पीसीएल एफडीए4द्वारा पहले से ही अनुमोदित एक जैव संगत और बायोडिग्रेडेबल सामग्री भी है। सिस्प्लैटिन और एमएमसी को जटिल करने वाले बायोसंगत स्टेंट खरगोशों और कुत्तों जैसे बड़े पशु मॉडलों में अध्ययन किया गया है। हालांकि, इन एनिमल मॉडल्स में स्टेंट को डिजीज के एनिमल मॉडल में नहीं रखा गया और ट्रांससर्वाग्निसे इंप्लांट किया गया । यह अध्ययन वायुमार्ग चोट और लैरिंगोट्रेचेल स्टेनोसिस के माउस मॉडल में ट्रांसलीवाइज रूप से रखे गए जैव संगत दवा-एल्यूटिंग स्टेंट का आकलन करने के लिए एक अनूठी विधि प्रदान करता है। एक जैव संगत स्टेंट जो स्थानीय रूप से एक इम्यूनोमोडुलेटरी दवा को कम करता है और एक मूत्र मॉडल में अध्ययन के लिए लघुकृत किया जा सकता है, अनुवादपूर्व अनुसंधान के लिए मूल्यवान है। अन्य सामग्री के साथ स्टेंट उपयोग के पिछले प्रयासों से विदेशी शरीर की मजबूत प्रतिक्रियाएं उत्पन्न होती हैं जो एलटीएस7को अलग करती हैं। यह पद्धति, हमारी जानकारी के लिए, एलटीएस के एक मूत्र मॉडल में स्टेंट आधारित दवा वितरण प्रणाली के इम्यूनोमोडुलाटी और एंटीफिब्रोटिक प्रभावों का अध्ययन करने के लिए अपनी तरह की पहली है। मूत्र मॉडल ही श्वासनली पर एक इम्यूनोमोडुलरी दवा के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए कई फायदे प्रदान करता है। आनुवंशिक रूप से संशोधित चूहों और स्वस्थ और रोगग्रस्त चूहों के प्रयोगात्मक साथियों का अध्ययन किया जा सकता है, जो प्रायोगिक प्रजनन क्षमता का कारण बन सकता है और लागत प्रभावशीलता में सुधार कर सकता है। इसके अलावा, माउस ट्रेचिया में ट्रांसलीवली स्टेंट की डिलीवरी मनुष्यों में इस तरह के स्टेंट के नैदानिक वितरण की नकल करती है, जो इस विधि के अनुवादीय लाभ को और उजागर करती है। अंत में, सापेक्ष आसानी जिसके साथ दवा के साथ पीएलएलए-पीसीएल स्टेंट का उत्पादन किया जा सकता है, वह श्वासनली में निशान गठन को कम करने के उद्देश्य से वैकल्पिक दवा उपचार देने के लिए संशोधनों के लिए अनुमति देता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1. For stent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22-gauge angiocatheter</td>
			<td>Jelco</td>
			<td>4050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichloromethane</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>270997-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>56-81-5</td>
			<td>Available from other vendors as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDLGA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>739955-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLLA-PCL (70 : 30)</td>
			<td>Evonik Industries AG</td>
			<td>65053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rapamycin</td>
			<td>LC Laboratories</td>
			<td>R-5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2. Animal surgery</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wire brush</td>
			<td>Mill-Rose Company</td>
			<td>320101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3. For immunohistochemistry staining</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antigen retrival buffer</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab93678</td>
			<td>Available from other vendors as well; acidic pH needed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>8961S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11965-092</td>
			<td>Available from other vendors as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS (Fetal Bovine Serum)</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>F4135-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit-488 antibody</td>
			<td>Lif technology</td>
			<td>a11008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rat-633 antibody</td>
			<td>Lif technology</td>
			<td>a21094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrophilic plus slide</td>
			<td>BSB7028</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>100-10023</td>
			<td>Available from other vendors as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-CD3 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab5690</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat antiF4/80 antibody</td>
			<td>Biolengend</td>
			<td>123101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss LSM 510 Meta Confocal Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4. For quantative PCR</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5mm glass beads</td>
			<td>OMNI International</td>
			<td>19-645</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bead Mill Homoginizer</td>
			<td>OMNI International</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gene Specific Forward/Reverse Primers</td>
			<td>Genomic Resources Core Facility</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop 2000 spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power SYBR Green Mastermix</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>4367659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy mini kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>80404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StepOnePlus Real Time PCR system</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

design of a biocompatible drug-eluting tracheal stent in mice with laryngotracheal stenosis

लैरिंगोट्रेचेल स्टेनोसिस (एलटीएस) सबग्लोटिस और ट्रेचिया का एक पैथोलॉजिकल संकुचन है जिससे बाहरी बाधा और सांस लेने में महत्वपूर्ण तकलीफ होती है। LTS श्वासनली में एक विदेशी शरीर से म्यूकोसल चोट से परिणाम है, ऊतक क्षति और एक स्थानीय भड़काऊ प्रतिक्रिया है कि धराशायी हो जाता है, रोगगोनिक निशान ऊतक के बयान के लिए अग्रणी के लिए अग्रणी । प्रभावी चिकित्सा उपचारों की कमी के कारण एलटीएस के लिए उपचार शल्य चिकित्सा है। इस विधि का उद्देश्य एक जैव संगत स्टेंट का निर्माण करना है जिसे एलटीएस के साथ चूहों में रखने के लिए छोटा किया जा सकता है। हमने दिखा दिया कि एक पीएलएएलए-पीसीएल (70% पॉली-एल-लैक्टाइड और 30% पॉलीकैप्रोलैक्टोन) के निर्माण में इष्टतम जैव यांत्रिक शक्ति थी, जैव संगत थी, जो वीवो प्लेसमेंट स्टेंट में एक के लिए व्यवहार्य थी, और दवा को कम करने में सक्षम थी। यह विधि स्थानीय रूप से सूजन को बाधित करने और वायुमार्ग फाइब्रोसिस को कम करने के लिए विभिन्न इम्यूनोमोडुलेक्टरी एजेंटों के परीक्षण के लिए एक दवा वितरण प्रणाली प्रदान करती है। स्टेंट का निर्माण 28−30 घंटे लेता है और इसे आसानी से पुन: पेश किया जा सकता है, जिससे बड़े साथियों के साथ प्रयोगों की अनुमति मिल जाती है। यहां हमने फाइब्रोसिस और कोलेजन जमाव को कम करने में इसकी प्रभावशीलता का परीक्षण करने के लिए स्टेंट के भीतर दवा रैपमाइसिन को शामिल किया। परिणामों से पता चला है कि पीएलए-पीसीएल टेंट ने विश्वसनीय रैपमाइसिन रिलीज दिखाई, शारीरिक परिस्थितियों में यांत्रिक रूप से स्थिर थे, और जैव संगत थे, श्वासनली में थोड़ी भड़काऊ प्रतिक्रिया को प्रेरित कर रहे थे। इसके अलावा राप्राविसिन-एल्यूटिंग पीएलएलए-पीसीएल स्टेंट ने वीवो में ट्रेलिया में निशान बनने में कमी की।

इस अध्ययन में उपयोग किए जाने वाले रैपमाइसिन से भरा बायोडिग्रेडेबल पीएलएलए-पीसीएल स्टेंट निर्माण शारीरिक परिस्थितियों में एक सुसंगत और उम्मीद के मुताबिक फैशन में रैपमाइसिन को eluting करने में सक्षम था<strong...

Watch this Scientific Journal Video about Design of a Biocompatible Drug-Eluting Tracheal Stent in Mice with Laryngotracheal Stenosis at JoVE.com

Design of a Biocompatible Drug-Eluting Tracheal Stent in Mice with Laryngotracheal Stenosis

लारिंगोट्रेचेल स्टेनोसिस रोगविस्टिक निशान जमाव से परिणाम देता है जो सांस के लिए वायुमार्ग को गंभीर रूप से संकुचित करता है और प्रभावी चिकित्सा उपचारों का अभाव है। एक स्थानीय दवा वितरण प्रणाली के रूप में पीएलएएल-पीसीएल (70% पॉली-एल-लैक्टाइड और 30% पॉलीकैप्रोलेक्टोन) स्टेंट का उपयोग करना, श्वासनली में निशान प्रसार को कम करने के उद्देश्य से संभावित उपचारों का अध्ययन किया जा सकता है।

लारिंगोट्रेचेल स्टेनोसिस के साथ चूहों में एक जैव संगत दवा-Eluting Tracheal स्टेंट का डिजाइन

Laryngotracheal stenosis (LTS) is a pathologic narrowing of the subglottis and trachea leading to extrathoracic obstruction and significant shortness of ...

यह प्रोटोकॉल हमें लैनगोट्राचियल स्टेनोसिस के एक छोटे जानवर मॉडल में दवा-eluting स्टेंट की जांच करने देता है जिससे हमें लागत प्रभावी तरीके से आनुवंशिक रूप से संशोधित जानवरों का लाभ मिलता है। दवा-एल्यूटिंग एयरवे स्टेंट का ट्रांसोरल प्लेसमेंट जानवरों को एक खुले चीरा से ट्रेचिया में छोड़ देता है जो लैरिनगोट्रेक्ल स्टेनोसिस के अधिक चिकित्सकीय प्रासंगिक मॉडल का प्रतिनिधित्व करता है। यह तकनीक लैरिनगोट्राक्यागल स्टेनोसिस के इलाज के लिए स्थानीय दवा वितरण रणनीतियों की प्रीक्लिनिकल जांच की सुविधा प्रदान करती है।यह तकनीक एक छोटे पशु मॉडल में दवा-eluting एयरवे स्टेंट की ट्रांसलेशनल जांच के लिए एक व्यवहार्य और प्रभावी मंच प्रदान करती है जिसे बड़े पशु मॉडल के साथ-साथ नैदानिक अनुप्रयोग में भविष्य की जांच के लिए लागू किया जा सकता है। तकनीक विशेष रूप से ट्रांसोरल इंस्टुबेशन, श्वासनली चोट का शामिल होना, और एयरवे स्टेंट प्लेसमेंट कदम। इस तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण सर्जरी के दृश्य प्रदर्शन के रूप में ठीक विवरण के कई पूरी तरह से शब्दों में वर्णित नहीं किया जा सकता है महत्वपूर्ण है ।पॉलीमर समाधान युक्त 1% रैपामाइसिन बनाने के लिए, एक ग्लास शीशी में 70-30 पीएलएलए-पीसीएल के 600 मिलीग्राम में रैपामाइसिन के छह मिलीग्राम जोड़ें। एक धूम हुड के तहत, रैपामाइसिन पूरक और नियंत्रण शीशी में डाइक्लोरोमेथेन के छह मिलीलीटर जोड़ें और प्रत्येक शीशी में ग्लाइसरोल के 120 माइक्रोलीटर जोड़ें। फिर शीशियों को कैप करें और पीएलएलए-पीसीएल समाधान को कमरे के तापमान पर छह से 12 घंटे के लिए समरूप बनाने की अनुमति दें।एक मुरीन एयरवे स्टेंट बनाने के लिए, बाँझ सामग्री और तकनीक का उपयोग करके, कैथेटर को धीमा करते हुए 22 गेज फ्लोरिनेटेड एथिलीन प्रोपलीन आधारित एंजियोकैथटर के वेनस कैनुला पर रैपामाइसिन पूरक पीएलए-पीसीएल समाधान का एक मिलीलीटर लागू करें। जब समाधान के सभी लागू किया गया है, नीचे का सामना करना पड़ एंजियोकैथेटर की नोक और एक वैक्यूम हुड में एक गिलास पेट्री डिश के किनारे पर कैथेटर के हिंट के साथ ढाला एंजियोकैथेटर सहारा । कमरे के तापमान पर वैक्यूम के तहत 24 घंटे के बाद, धीरे मोड़ और सूखे स्टेंट निर्माण से कैथेटर स्लाइड और परिधि से किसी भी दोष है कि कास्टिंग प्रक्रिया के दौरान हुई हो सकता है के लिए स्टेंट की जांच करें ।दृश्य में सहायता करने के लिए, स्टेंट की लंबाई के नीचे एक पतली काली रेखा खींचना उपयोगी है। ठीक सीधे कैंची के साथ डाले गए स्टेंट के प्रत्येक छोर को ट्रिम करें ताकि किनारों अक्षीय हों और प्रत्येक स्टेंट को तीन मिलीमीटर अक्षीय खंडों में काटने के लिए कैंची का उपयोग करें। फिर प्रत्येक तीन मिलीमीटर स्टेंट को एक नए 22 गेज शिरस कैथेटर पर लोड करें।गलागोत्राकल स्टेनोसिस प्रेरण के लिए, पैर की अंगुली चुटकी के लिए प्रतिक्रिया की कमी की पुष्टि करने के बाद, पहले माउस को रीढ़ की स्थिति में एक शल्य चिकित्सा मंच पर रखें और केंद्रीय छेदक के चारों ओर मंच के शीर्ष पर चिपका धागे का एक छोटा सा टुकड़ा लूप करें। अंगों को टेप के साथ मेज पर सुरक्षित करें और माउस की गर्दन में 1.5 सेंटीमीटर मिडलाइन ऊर्ध्वाधर चीरा बनाएं। ओवरलाइंग थाइमस को विभाजित करें और श्वासनली की कल्पना करने के लिए दो परिणामस्वरूप लोब्स को लेटलतीज़ी करें।बेहतर लगाव पर ओवरलाइंग स्टर्नोहॉयइड और स्टर्नोथायराइड मांसपेशियों को द्विपक्षीय रूप से विभाजित करें और कंठ के माध्यम से 22 गेज एंजियोकैटर को ट्रेकिया में पारित करें। छोटे संदंश का उपयोग करना, कैथेटर के सही प्लेसमेंट में सहायता करने के लिए माउस के पूर्वकाल गला पर दबाव लागू करें। एक सही ढंग से रखा एंजियोकैथेटर श्वासनली के माध्यम से अपने सफेद रंग से कल्पना की जा सकती है।चोट को प्रेरित करने के लिए, डाला एंजियोकैथटर के माध्यम से एक Bleomycin-लेपित तार ब्रश पारित करें और धीरे-धीरे कैथेटर को वापस लें ताकि केवल तार ब्रश श्वासनली के भीतर रहता है। ठीक संदंश का उपयोग करके, ब्रश पर श्वासनली में कैथेटर को फिर से लगाने से पहले ब्रश के साथ श्वासनली ल्यूमेन को यांत्रिक रूप से बाधित करने के लिए श्वासनली पर प्रतिद्वीप लागू करें। तार ब्रश निकालें और डालने से पहले Bleomycin फिर से लागू करने और ब्रश चार बार हटाने के रूप में सिर्फ प्रदर्शन किया ।अंतिम ब्लेओमाइसिन आवेदन के बाद, कैथेटर को श्वासनली से हटा दें। एक PLLA-PCL के ट्रांसोरल प्लेसमेंट के लिए, यह सुनिश्चित करें कि प्रत्येक स्टेंट में एक पतली काली ऊर्ध्वाधर रेखा को शामिल किया गया है और पूर्व-लोडेड एंजियोकैथेटर के साथ माउस को ट्रांसऑर्ैल रूप से इंस्टुटेट किया गया है। स्टेंट को ट्रांससेर्विकल चीरा के माध्यम से श्वासनली के भीतर कल्पना की जानी चाहिए।जब स्टेंट जगह में होता है, तो दृढ़ता से लेकिन धीरे-धीरे चीरा के माध्यम से श्वासनली को समझने के लिए ठीक संदंश का उपयोग करें ताकि स्टेंट को जगह में पकड़ सके और कैथेटर को हटा दिया जा सके। स्टेंट को जितना संभव हो उतना ध्यान से रखना महत्वपूर्ण है। श्वासनली पर बहुत अधिक दबाव के परिणामस्वरूप स्टेंट के पतन के कारण वायुमार्ग बाधा और जानवर को मौत हो जाएगी।यहां उपयोग किए जाने वाले ऊतक गोंद या अवशोषित 4-0 क्रोमिक टांके के साथ चीरा बंद करें और माउस को जानवर को अपने घर के पिंजरे में लौटने से पहले निगरानी के साथ ठीक होने की अनुमति दें। उपयुक्त प्रयोगात्मक अंत बिंदु पर, सर्जिकल प्लेटफॉर्म पर रीढ़ की स्थिति में रुचि के माउस को रखें और चीरा को फिर से खोलने के लिए ठीक घुमावदार आईरिस कैंची का उपयोग करें। प्रदर्शन के रूप में श्वासनली का पर्दाफाश करें और स्टेंट के स्तर से नीचे डिस्टल ट्रेकिया को विभाजित करने के लिए कैंची का उपयोग करें।इसके बाद, शूल के नीचे और स्टेंट के ऊपर समीपस्थ श्वासनली को विभाजित करें और विभाजित श्वासनली को पीछे से घेघा से अलग करें। इसके बाद श्वासनली से स्टेंट निकालें और 24 घंटे के लिए 10% फॉर्मेलिन में ट्रेंचिया को ठीक करें। इस अध्ययन में उपयोग किए जाने वाले बायोडिग्रेडेबल रैपमाइसिन लोडेड पीएलएलए-पीसीएल स्टेंट का निर्माण शारीरिक परिस्थितियों में एक सुसंगत और उम्मीद के मुताबिक फैशन में रैपामाइसिन को eluting करने में सक्षम है।इस छवि में, लघुकृत जैव संगत स्टेंट को श्वासनली के भीतर सीटू में देखा जा सकता है जैसा कि पारदर्शी माउस ट्रेकिया के माध्यम से कल्पना किए गए स्टेंट पर काले मार्कर द्वारा इंगित किया गया है। 21 दिनों के बाद, ब्लैक डाई मार्कर का उपयोग श्वासनली के भीतर स्टेंट की स्थिति के रखरखाव की पुष्टि करने के लिए किया जा सकता है। तीव्र और पुरानी सूजन के मार्कर के लिए इम्यूनोफ्लोरेटेंट धुंधला का उपयोग करके जैव अनुकूलता परीक्षण यह प्रदर्शित करता है कि पीएलएलए-पीसीएल स्टेंट का निर्माण चोट की अनुपस्थिति में प्लेसमेंट के बाद मौजूद प्रतिरक्षा कोशिकाओं की न्यूनतम संख्या के अनुसार इम्यूनोरिएक्टिव नहीं है।एक नाजुक और नाटकीय फैशन में वायुमार्ग में हेरफेर प्रक्रिया की सफलता के लिए महत्वपूर्ण है। अत्यधिक बल, कई intubations, और स्टेंट पतन पशु मौत के लिए नेतृत्व कर सकते हैं । रैपामाइसिन-इल्यूटिंग स्टेंट के साथ उपचार के बाद, जीवित रहने का आकलन, मात्रात्मक वास्तविक समय पीसीआर के माध्यम से जीन अभिव्यक्ति, प्रवाह साइटोमेट्री, एलिसा और इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री सहित इम्यूनोसे।चूंकि यह माउस मॉडल में दवा उन्मूलन के लिए एक सफल मंच प्रदान करता है, इसलिए यह तकनीक लैरिनगोट्रागल स्टेनोसिस में स्थानीय रूप से लागू चिकित्सीय की भविष्य की जांच का मार्ग प्रशस्त करती है। डाइक्लोरोमेथेन एक संक्षारक तरल है। हमेशा एक धूम हुड, व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण, और गैर संक्षारक सामग्री का उपयोग करने के लिए सुनिश्चित करें

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Monitoring the Wall Mechanics During Stent Deployment in a Vessel

एक बर्तन में स्टेंट तैनाती के दौरान दीवार यांत्रिकी निगरानी

Clinical trials have reported different restenosis rates for various stent designs1. It is speculated that stent-induced strain concentrations on the ...

Design of a Biaxial Mechanical Loading Bioreactor for Tissue Engineering

ऊतक इंजीनियरिंग के लिए एक द्विअक्षीय यांत्रिक लोड हो रहा है बायोरिएक्टर का डिजाइन

We  designed a loading device that is capable of applying uniaxial or biaxial  mechanical strain to a tissue engineered biocomposites fabricated for  ...

Experimental Investigation of Secondary Flow Structures Downstream of a Model Type IV Stent Failure in a 180&#176; Curved Artery Test Section

Experimental Investigation of Secondary Flow Structures Downstream of a Model Type IV Stent Failure in a 180Ãƒâ€šÃ‚Â° Curved Artery Test Section

एक 180 डिग्री घुमावदार धमनी जांच खंड में एक मॉडल प्रकार चतुर्थ स्टेंट विफलता के डाउनस्ट्रीम माध्यमिक प्रवाह संरचनाएं की प्रयोगात्मक जांच

The arterial network in the human vasculature comprises of ubiquitously present blood vessels with complex geometries (branches, curvatures and ...

Ferromagnetic Bare Metal Stent for Endothelial Cell Capture and Retention

Endothelial सेल पर कब्जा है और बनाए रखने के लिए Ferromagnetic नंगे धातु स्टेंट

Rapid endothelialization of cardiovascular stents is needed to reduce stent thrombosis and to avoid anti-platelet therapy which can reduce bleeding risk. ...

Automated Robotic Liquid Handling Assembly of Modular DNA Devices

स्वचालित रोबोट तरल हैंडलिंग मॉड्यूलर डीएनए उपकरणों की विधानसभा

Recent advances in modular DNA assembly techniques have enabled synthetic biologists to test significantly more of the available &#34;design space&#34; ...

Synthesis of Biocompatible Liquid Crystal Elastomer Foams as Cell Scaffolds for 3D Spatial Cell Cultures

3 डी स्थानिक सेल संस्कृतियों के लिए सेल Scaffolds के रूप में Biocompatible लिक्विड क्रिस्टल Elastomer Foams का संश्लेषण

Here, we present a step-by-step preparation of a 3D, biodegradable, foam-like cell scaffold. These scaffolds were prepared by cross-linking star block ...

Anatomically Realistic Neonatal Heart Model for Use in Neonatal Patient Simulators

नवजात रोगी सिमुलेटर में उपयोग के लिए Anatomically यथार्थवादी नवजात हार्ट मॉडल

Neonatal patient simulators (NPS) are artificial patient surrogates used in the context of medical simulation training. Neonatologists and nursing staff ...

Repressing Gene Transcription by Redirecting Cellular Machinery with Chemical Epigenetic Modifiers

रासायनिक Epigenetic संशोधक के साथ सेलुलर मशीनरी को पुनः निर्देशित करके जीन प्रतिलेखन का दमन

Regulation of chromatin compaction is an important process that governs gene expression in higher eukaryotes. Although chromatin compaction and gene ...

Design and Synthesis of a Reconfigurable DNA Accordion Rack

डिजाइन और एक पुनर्विन्यास डीएनए accordion रैक के संश्लेषण

DNA nanostructure-based mechanical systems or DNA nanomachines, which produce complex nanoscale motion in 2D and 3D in the nanometer to &#229;ngstr&#246;m ...

Seeding and Implantation of a Biosynthetic Tissue-engineered Tracheal Graft in a Mouse Model

एक माउस मॉडल में एक जैव सिंथेटिक ऊतक इंजीनियर Tracheal भ्रष्टाचार के बोने और आरोपण

Treatment options for congenital or secondary long segment tracheal defects have historically been limited due to an inability to replace functional ...