Name: design of a biocompatible drug-eluting tracheal stent in mice with laryngotracheal stenosis
Uploaded: 2020-01-21T13:30:00
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수상 번호 1K23DC014082 및 1R21DC017225 (알렉산더 힐렐)에서 건강의 국립 연구소의 청각 장애 및 기타 통신 장애에 대한 국립 연구소. 이 연구는 또한 재정적으로 삼과 학회와 외과 의사의 미국 대학 (알렉산더 힐렐), 미국 의학 협회 재단, 시카고, 일리노이 (Madhavi Duvvuri) 및 T32 NIDCD 교육 보조금 (케빈 모츠)에 의해 지원되었다.

참고 : 여기에 설명 된 모든 방법은 존스 홉킨스 대학 동물 관리 및 사용위원회 (MO12M354)에 의해 승인되었습니다.
1. PLLA-PCL에서 라파마이신의 준비
<ol><li>70:30 PLLA-PCL 폴리머 용액(고유점도 1.3−1.8 DL/G)의 두 개의 유리 바이알(캡)을 준비합니다. 재료 표) 1.0% 라파마이신을 함유한 유리병과 라파마이신이 없는 다른 바이알이 있습니다.<ol>
<li>유리 병에 600 mg의 70:30 PLLA...

<ol>
	<li>Minnigerode, B., Richter, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+subglottic+tracheal+stenosis+in+childhood.">Pathophysiology of subglottic tracheal stenosis in childhood.</a> Progress in Pediatric Surgery. 21, 1-7 (1987).</li><li>Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrotic+disease+and+the+T(H)1/T(H)2+paradigm.">Fibrotic disease and the T(H)1/T(H)2 paradigm.</a> Nature Reviews Immunology. 4 (8), 583-594 (2004).</li><li>Kaplan, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+Toxicity+Following+Administration+of+Sirolimus+(formerly+Rapamycin)+for+Psoriasis.">Systemic Toxicity Following Administration of Sirolimus (formerly Rapamycin) for Psoriasis.</a> Archives of Dermatology. 135 (5), 553-557 (1999).</li><li>Kalra, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New-Generation+Coronary+Stents:+Current+Data+and+Future+Directions.">New-Generation Coronary Stents: Current Data and Future Directions.</a> Currrent Atherosclerosis Reports. 19 (3), 14 (2017).</li><li>Chao, Y. K., Liu, K. S., Wang, Y. C., Huang, Y. L., Liu, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodegradable+cisplatin-eluting+tracheal+stent+for+malignant+airway+obstruction:+in+vivo+and+in+vitro+studies.">Biodegradable cisplatin-eluting tracheal stent for malignant airway obstruction: in vivo and in vitro studies.</a> Chest. 144 (1), 193-199 (2013).</li><li>Duvvuri, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+an+immunomodulatory+drug-eluting+stent+to+treat+laryngotracheal+stenosis.">Engineering an immunomodulatory drug-eluting stent to treat laryngotracheal stenosis.</a> Biomaterials Science. 7 (5), 1863-1874 (2019).</li><li>Mugru, S. D., Colt, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complications+of+silicone+stent+insertion+in+patients+with+expiratory+central+airway+collapse.">Complications of silicone stent insertion in patients with expiratory central airway collapse.</a> Annals of Thoracic Surgery. 84 (6), 1870-1877 (2007).</li><li>Hillel, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+situ,+in+vivo+murine+model+for+the+study+of+laryngotracheal+stenosis.">An in situ, in vivo murine model for the study of laryngotracheal stenosis.</a> JAMA Otolaryngolology Head Neck Surgery. 140 (10), 961-966 (2014).</li><li>Can, E., Udenir, G., Kanneci, A. I., Kose, G., Bucak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+PLLA/PCL+blends+and+paclitaxel+release+profiles.">Investigation of PLLA/PCL blends and paclitaxel release profiles.</a> AAPS PharmSciTech. 12 (4), 1442-1453 (2011).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paclitaxel+Drug-eluting+Tracheal+Stent+Could+Reduce+Granulation+Tissue+Formation+in+a+Canine+Model.">Paclitaxel Drug-eluting Tracheal Stent Could Reduce Granulation Tissue Formation in a Canine Model.</a> Chinese Medical Journal (Engl). 129 (22), 2708-2713 (2016).</li><li>Sigler, M., Klotzer, J., Quentin, T., Paul, T., Moller, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stent+implantation+into+the+tracheo-bronchial+system+in+rabbits:+histopathologic+sequelae+in+bare+metal+vs.+drug-eluting+stents.">Stent implantation into the tracheo-bronchial system in rabbits: histopathologic sequelae in bare metal vs. drug-eluting stents.</a> Molecularand Cellular Pediatrics. 2 (1), 10 (2015).</li><li>Robey, T. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+internal+bioabsorbable+PLGA+"finger-type"+stents+in+a+rabbit+tracheal+reconstruction+model.">Use of internal bioabsorbable PLGA "finger-type" stents in a rabbit tracheal reconstruction model.</a> Archives of Otolaryngology Head Neck Surgery. 126 (8), 985-991 (2000).</li></ol>

생체 내에서 약물 용출 스텐트를 성공적으로 생성하고 사용하기 위한 가장 중요한 단계는 1) 바람직한 약물 용출 속도에 대한 최적의 PLLA-PCL 비율을 결정하고, 2) 용출될 약물의 적절한 농도를 결정하는 것, 3) 스텐트를 성형하는 것입니다. 생체 내 사용을 위한 angiocatheter 의 주위에, 및 4) 치명적인 기도 방해를 일으키지 않고 LTS 유도 후에 마우스로 스텐트를 장전하게 전달한다.
<p class="jove_content"...

후두 절제 (LTS)는 자궁 내 외 삽관 손상으로 인해 기관의 병리학 적 협착이 가장 빈번합니다. 세균성 식민지화의 조합, 기관 절제술 또는 내시경 관에 대한 이물질 반응 및 환자 별 요인은 비정상적인 염증 반응으로 이어집니다. 이러한 부적응 면역 반응은 기관내 의 콜라겐 침착으로 이어지며, 기관 및 후속 협착의 발광 을 초래합니다1,2. 이 질병에 대한 현재의 치료는 주로 외과적이기 때문에, 과도한 콜라겐 침착으로 이어지는 비정상적인 염증 및 성섬유성 경로를 대상으로 하는 대체 의학 기반 치료 패러다임을 개발하는 것이 연구되고 있다. MTOR 신호 복합체를 억제하는 라파마이신은 면역 억제 효과뿐만 아니라 강력한 항섬유아세포 효과가 있는 것으로 나타났습니다. 그러나 라파마이신이 체계적으로 투여되면 일반적인 부작용(예를 들어, 고지혈증, 빈혈, 혈소판 감소증)이 발음될 수있다 3. 우리의 방법론의 목적은 이러한 전신 효과를 줄이는 기도에서 사용하기 위해 실용적 인 국소 약물 전달을위한 차량을 개발하는 것입니다. 우리의 평가는 섬유아세포 기능을 억제하고 국소 면역 미세 환경을 변경하는 능력뿐만 아니라 약물 전달 구조에 대한 국소 면역 반응을 조사하는 데 중점을 둡니다. 질병 특정 결과는 섬유증의 마커를 평가하는 생체 내 시험을 포함합니다.
생분해성 약물 용출 스텐트는 기도4를포함한 여러 장기 시스템에서 질병의 동물 모델에서 사용되어 왔다. 기도 협착 또는 붕괴의 관리를 위해, 이전 조사는 약물 코팅 실리콘 및 니켈 기지를 둔 스텐트를사용했습니다 5. PLLA-PCL 시공은 3주 동안의 생리학적 조건에서의 약물 용출 프로파일 및 기계적 강도 때문에 이 특정 방법에 대해 선택되었으며, 이는 이전 발표된 연구에서 입증된6. PLLA-PCL은 또한 FDA4에의해 이미 승인 된 생체 적합성 및 생분해성 물질입니다. 시스플라틴과 MMC를 용출하는 생체 적합성 스텐트는 토끼와 개와 같은 대형 동물 모델에서 연구되었습니다. 그러나, 이러한 동물 모델에서, 스텐트는 질병의 동물 모델에 배치되지 않았고, 뇌전적으로 이식되었다. 본 연구는 기도 손상 및 후두 골착증의 마우스 모델에 횡단적으로 배치된 생체 적합성 약물 용출 스텐트를 평가하기 위한 독특한 방법을 제공한다. 면역 조절 약물을 국소적으로 용해시키고 뮤린 모델에서 연구를 위해 소형화 할 수있는 생체 적합성 스텐트는 번역 전 임상 연구에 유용합니다. 다른 재료 구성과 스텐트 활용에 대한 이전의 시도는 LTS7을구별하는 근본적인 염증을 악화시키는 강력한 이물질 반응을 생성했습니다. 이 방법론은, 우리의 지식에, LTS의 murine 모형에 있는 스텐트 기지를 둔 약 납품 시스템의 면역 조절 및 항섬유성 효력을 공부하는 그것의 종류의 첫번째입니다. 뮤린 모델 자체는 기관에 면역 조절 약물의 효과를 연구하기위한 몇 가지 장점을 제공합니다. 유전자 변형 마우스와 건강하고 병에 걸린 마우스의 실험 집단을 연구 할 수 있습니다, 이는 실험 재현으로 이어질 비용 효율성을 향상시킬 수 있습니다. 더욱이, 마우스 기관으로 스텐트를 횡단적으로 전달하는 것은 인간에서 그러한 스텐트의 임상 적 전달을 모방하여, 이 방법의 번역적 이점을 더욱 강조한다. 마지막으로, 약물과 PLLA-PCL 스텐트가 생성 될 수있는 상대적 용이성은 기관에서 흉터 형성을 감소시키기위한 대체 약물 요법을 제공하기 위해 수정을 허용합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1. For stent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22-gauge angiocatheter</td>
			<td>Jelco</td>
			<td>4050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichloromethane</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>270997-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>56-81-5</td>
			<td>Available from other vendors as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDLGA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>739955-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLLA-PCL (70 : 30)</td>
			<td>Evonik Industries AG</td>
			<td>65053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rapamycin</td>
			<td>LC Laboratories</td>
			<td>R-5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2. Animal surgery</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wire brush</td>
			<td>Mill-Rose Company</td>
			<td>320101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3. For immunohistochemistry staining</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antigen retrival buffer</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab93678</td>
			<td>Available from other vendors as well; acidic pH needed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>8961S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11965-092</td>
			<td>Available from other vendors as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS (Fetal Bovine Serum)</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>F4135-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit-488 antibody</td>
			<td>Lif technology</td>
			<td>a11008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rat-633 antibody</td>
			<td>Lif technology</td>
			<td>a21094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrophilic plus slide</td>
			<td>BSB7028</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>100-10023</td>
			<td>Available from other vendors as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-CD3 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab5690</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat antiF4/80 antibody</td>
			<td>Biolengend</td>
			<td>123101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss LSM 510 Meta Confocal Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4. For quantative PCR</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5mm glass beads</td>
			<td>OMNI International</td>
			<td>19-645</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bead Mill Homoginizer</td>
			<td>OMNI International</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gene Specific Forward/Reverse Primers</td>
			<td>Genomic Resources Core Facility</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop 2000 spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power SYBR Green Mastermix</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>4367659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy mini kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>80404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StepOnePlus Real Time PCR system</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

design of a biocompatible drug-eluting tracheal stent in mice with laryngotracheal stenosis

후두 척막증 (LTS)은 외인성 방해및 호흡곤란으로 이어지는 기관및 기관의 병리학적 협착입니다. LTS는 기관에서 이물질에서 점막 손상으로 인해 조직 손상및 병리학 적 흉터 조직의 침착으로 이어지는 국소 염증 반응을 초래합니다. LTS에 대한 치료는 효과적인 의료 치료의 부족으로 인해 수술이다. 이 방법의 목적은 LTS를 사용하여 마우스에 배치하기 위해 소형화 될 수있는 생체 적합성 스텐트를 구성하는 것입니다. 우리는 PLLA-PCL (70 % 폴리 L-락티드 및 30 % 폴리 카프로 롤락톤) 구성이 최적의 생체 역학 적 강도를 가지고 있으며 생체 적합성, 생체 내 배치 스텐트에 대한 실용성 및 용출 약물을 할 수 있음을 입증했습니다. 이 방법은 염증을 국소적으로 억제하고 기도 섬유증을 감소시키기 위해 다양한 면역 조절제를 테스트하기 위한 약물 전달 시스템을 제공한다. 스텐트를 제조하는 데는 28-30h가 소요되며 쉽게 재현할 수 있으므로 대형 코호트를 실험할 수 있습니다. 여기에서 우리는 섬유증과 콜라겐 침착을 감소시키는 그것의 효력을 시험하기 위하여 스텐트의 안에 약 rapamycin를 통합했습니다. 결과는 PLLA-PCL 텐트가 신뢰할 수 있는 라파마이신 방출을 보여주었고, 생리학적 조건에서 기계적으로 안정되었으며, 생체 적합성이 있었으며, 기관에서 염증 반응을 거의 유도하지 않는 것으로 나타났습니다. 또한, 라파마이신 용출 PLLA-PCL 스텐트는 생체 내 기관에서 흉터 형성을 감소시켰습니다.

본 연구에 사용된 라파마이신을 적재한 생분해성 PLLA-PCL 스텐트 생성물은 생리학적 조건에서 일관되고 예측 가능한 방식으로 라파마이신을 용출할 수있었다(도 1). 도 2는 LTS의 뮤린 모델에서 사용하기 위해 22 G angiocatheter 주위에 캐스팅된 PLLA-PCL 스텐트를 나타낸다. 기관에서 라파마이신 용출의 효과가 섬유증 감쇠에 효과적인지 확인하기 위해, 급성 ?...

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Design of a Biocompatible Drug-Eluting Tracheal Stent in Mice with Laryngotracheal Stenosis

Laryngotracheal 협착증은 기관 기도를 비판적으로 좁히고 효과적인 의학 치료가 결여되는 병리학적인 흉터 침착에서 유래합니다. PLLA-PCL (70% 폴리-L-락티드 및 30% 폴리카프롤락톤) 스텐트를 국소 약물 전달 시스템으로 사용하여, 기관내 흉터 증식을 감소시키는 것을 목표로 하는 잠재적치료법을 연구할 수 있다.

후두절협증을 가진 마우스에 있는 생체 적합성 약 용출 기관 스텐트의 디자인

Laryngotracheal stenosis (LTS) is a pathologic narrowing of the subglottis and trachea leading to extrathoracic obstruction and significant shortness of ...

이 프로토콜은 우리가 우리가 비용 효과적인 방식으로 유전자 변형 동물을 활용시키는 후두 리팔가르드 협착의 작은 동물 모델에서 약물 용출 스텐트를 조사 할 수 있습니다. 약물 용출기도 스텐트의 경구 배치는 후두림 협착증의 임상적으로 관련된 모델을 나타내는 기관으로 열린 절개에서 동물을 절약. 이 기술은 후두를 취급하기 위하여 현지 약 납품 전략의 전임상 조사를 용이하게 합니다.이 기술은 더 큰 동물 모델뿐만 아니라 임상 응용 프로그램에서 향후 조사를 신청할 수있는 작은 동물 모델에서 약물 용출기도 스텐트의 번역 조사를위한 실현 가능하고 효과적인 플랫폼을 제공합니다. 특히 뇌관, 기관 손상 유도 및 기도 스텐트 배치 단계. 기술적으로 도전적인 이 수술의 시각적 데모는 많은 미세 한 세부 사항이 단어로 완전히 설명 될 수 없기 때문에 중요합니다.폴리머 용액을 함유한 1%라파마이신을 만들려면 6밀리그램의 라파마이신을 유리 바이알에 70-30 PLLA-PCL의 600밀리그램에 추가합니다. 연기 후드 아래에 는 라파마이신에 디클로로메탄 6밀리리터를 넣고 바이알을 조절하고 각 유리병에 120 마이크로리터의 글리세롤을 추가합니다. 그런 다음 바이알을 캡하고 PLLA-PCL 용액이 실온에서 6~12시간 동안 균질화되도록 합니다.멸균 재료와 기술을 사용하여 뮤린 기도 스텐트를 만들려면 카테터를 느리게하면서 22 게이지 불소 에틸렌 프로필렌 기반 협안회체의 정맥 캐뉼라에 라파마이신 보충제 PLLA-PCL 용액 1밀리리터를 적용합니다. 모든 솔루션이 적용되면, 진공 후드에 유리 페트리 접시의 가장자리에 카테터의 끝에 있는 성형 된 협경골테터를 소품. 실온에서 진공 상태에서 24 시간 후, 부드럽게 비틀고 건조 된 스텐트 구조에서 카테터를 밀어 주조 과정에서 발생할 수있는 결함이 있는지 스텐트를 검사합니다.시각화를 돕기 위해 스텐트의 길이 아래로 얇은 검은 선을 그리는 것이 도움이됩니다. 주조된 스텐트의 각 끝을 미세한 직선 가위로 트리밍하여 가장자리가 축축되도록 하고 가위를 사용하여 각 스텐트를 3mm 축 세그먼트로 자른다. 그런 다음 3밀리미터 스텐트를 새로운 22 게이지 정맥 카테터에 로드합니다.후두 협착증 유도의 경우 발가락 핀치에 대한 반응이 없음을 확인한 후 첫 번째 마우스를 척추 위치에 있는 수술 플랫폼에 배치하고 중앙 절개 주위플랫폼 상단에 부착된 작은 실조각을 반복합니다. 테이프로 테이블에 팔다리를 고정하고 마우스 목에 1.5 센티미터 중간 선 수직 절개를합니다. 지나치게 되는 흉구를 나누고 두 개의 결과된 엽을 측면화하여 기관진을 시각화합니다.오버리 스테노하이드와 스테르노갑 근육을 우수한 부착에 간질적으로 나누고 후두를 통해 트랜스오시카테터를 기관으로 전달합니다. 작은 집게를 사용하여, 카테터의 올바른 배치를 돕기 위해 마우스의 전방 후두에 압력을 가하십시오. 올바르게 배치된 협경골은 기관을 통해 흰색으로 시각화할 수 있습니다.부상을 유도하기 위해 삽입된 협막심을 통해 Bleomycin 코팅 와이어 브러시를 전달하고 카테터를 천천히 철회하여 와이어 브러시만 기관 내에 유지되도록 합니다. 미세 한 집게를 사용 하 여, 기계적 브러시와 기관 루멘을 방해 하는 기관체에 카운터 압력을 적용 하 고 브러시 위에 기관으로 카테터를 다시 삽입 합니다. 와이어 브러시를 제거하고 Bleomycin을 다시 바르고 브러시를 4번 더 삽입하고 제거합니다.마지막 Bleomycin 응용 프로그램 후, 기관에서 카테터를 제거합니다. PLLA-PCL의 경구 배치의 경우 얇은 검은색 세로 선이 각 스텐트에 통합되었는지 확인하고 미리 로드된 협안토테터로 마우스를 트랜스터로 삽관합니다. 스텐트는 경부 절개를 통해 기관 내에서 시각화되어야합니다.스텐트가 제자리에 있을 때, 절개를 통해 기관지를 단단히 단단히 잡지만 부드럽게 잡아 스텐트를 제자리에 고정하고 카테터를 제거하려면 미세 한 집게를 사용합니다. 스텐트를 가능한 한 신중하게 배치하는 것이 중요합니다. 기관에 너무 많은 압력은 동물에 기도 방해와 죽음을 일으키는 스텐트의 붕괴귀착될 것입니다.여기에 사용되는 조직 접착제 또는 흡수 가능한 4-0 색색 봉합사로 절개를 닫고 마우스가 동물을 홈 케이지로 되돌리기 전에 모니터링을 통해 복구 할 수 있습니다. 적절한 실험 적 끝점에서, 수술 플랫폼에 supine 위치에 관심있는 마우스를 배치하고 절개를 다시 열 미세 곡선 홍채 가위를 사용합니다. 기관체를 입증된 대로 노출시키고 가위를 사용하여 스텐트 수준 이하로 탈구 기관을 나눕니다.다음으로, 근위 기관체를 후두 아래와 스텐트 위에 나누고 분할된 기관체를 식도로부터 후방으로 분리한다. 그런 다음 기관에서 스텐트를 제거하고 24 시간 동안 10 %의 포르말린으로 기관을 수정합니다. 이 연구에서 사용되는 생분해성 라파마이신로드 PLLA-PCL 스텐트 구조는 생리학적 조건하에서 일관되고 예측 가능한 방식으로 라파마이신을 용연할 수 있습니다.본 이미지에서, 소형생체적합성 스텐트는 반투명 마우스 기관을 통해 시각화된 스텐트상 검정 마커에 의해 표시된 바와 같이 기관 내의 좌막에서 관찰될 수 있다. 21일 후, 검은 염료 마커를 사용하여 기관 내의 스텐트 위치의 유지를 확인할 수 있다. 급성 및 만성 염증의 마커에 대한 면역 형광 염색을 이용한 생체 적합성 테스트는 PLLA-PCL 스텐트 구조가 부상이 없는 경우 배치 후 존재하는 면역 세포의 최소 수에 의해 결정된 바와 같이 면역 반응성이 없음을 보여줍니다.섬세하고 외상적인 방식으로 기도를 조작하는 것은 절차의 성공에 매우 중요합니다. 과도한 힘, 여러 삽관 및 스텐트가 붕괴되면 동물의 사망이 발생할 수 있습니다. 라파마이신-용출 스텐트, 생존 평가, 정량적 실시간 PCR을 통한 유전자 발현, 유동 세포측정, ELISA 및 면역작용화학을 포함한 면역분석작용을 통해 치료한 후 수행될 수 있다.마우스 모델에서 약물 용출을 위한 성공적인 플랫폼을 제공하므로, 이 기술은 후두리가르드 협착증에서 국소 적용 된 치료법에 대한 향후 조사를위한 길을 열어줍니다. 디클로로메탄은 부식성 액체입니다. 항상 연기 후드, 개인 보호 장비 및 비 부식성 재료를 사용해야 합니다.

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Anatomically Realistic Neonatal Heart Model for Use in Neonatal Patient Simulators

신생아 환자 시뮬레이터에 사용 하기 위해 해부학 현실적인 신생아 심장 모델

Neonatal patient simulators (NPS) are artificial patient surrogates used in the context of medical simulation training. Neonatologists and nursing staff ...

Repressing Gene Transcription by Redirecting Cellular Machinery with Chemical Epigenetic Modifiers

세포질 기계 화학 Epigenetic 한정자를 리디렉션하여 억압 유전자 전사

Regulation of chromatin compaction is an important process that governs gene expression in higher eukaryotes. Although chromatin compaction and gene ...

Design and Synthesis of a Reconfigurable DNA Accordion Rack

재구성 가능한 DNA 아코디언 랙의 설계 및 합성

DNA nanostructure-based mechanical systems or DNA nanomachines, which produce complex nanoscale motion in 2D and 3D in the nanometer to &#229;ngstr&#246;m ...

Seeding and Implantation of a Biosynthetic Tissue-engineered Tracheal Graft in a Mouse Model

시드 및 마우스 모델에서 생 합성 조직 설계 Tracheal 이식의 이식

Treatment options for congenital or secondary long segment tracheal defects have historically been limited due to an inability to replace functional ...