Name: design of a biocompatible drug-eluting tracheal stent in mice with laryngotracheal stenosis
Uploaded: 2020-01-21T13:30:00
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Instituto Nacional de Surdez e Outros Distúrbios de Comunicação dos Institutos Nacionais de Saúde os números de premiação 1K23DC014082 e 1R21DC017225 (Alexander Hillel). Este estudo também foi apoiado financeiramente pela Sociedade Triológica e pelo American College of Surgeons (Alexander Hillel), pela American Medical Association Foundation, Chicago, IL (Madhavi Duvvuri) e por uma bolsa de treinamento T32 NIDCD (Kevin Motz).

NOTA: Todos os métodos descritos aqui foram aprovados pelo Johns Hopkins University Animal Care and Use Committee (MO12M354).
1. Preparação de rapamicina em PLLA-PCL
<ol><li>Prepare dois frascos de vidro (com tampas) de 70:30 soluções de polímero PLLA-PCL (viscosidade inerente 1,3-1,8 DL/G; Tabela de Materiais) soluções, com um frasco contendo 1,0% de rapamicina e o outro sem rapamicina.<ol>
<li>Faça uma rapamicina de 1,0% contendo solução de polímero, adicionand...

<ol>
	<li>Minnigerode, B., Richter, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+subglottic+tracheal+stenosis+in+childhood.">Pathophysiology of subglottic tracheal stenosis in childhood.</a> Progress in Pediatric Surgery. 21, 1-7 (1987).</li><li>Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrotic+disease+and+the+T(H)1/T(H)2+paradigm.">Fibrotic disease and the T(H)1/T(H)2 paradigm.</a> Nature Reviews Immunology. 4 (8), 583-594 (2004).</li><li>Kaplan, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+Toxicity+Following+Administration+of+Sirolimus+(formerly+Rapamycin)+for+Psoriasis.">Systemic Toxicity Following Administration of Sirolimus (formerly Rapamycin) for Psoriasis.</a> Archives of Dermatology. 135 (5), 553-557 (1999).</li><li>Kalra, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New-Generation+Coronary+Stents:+Current+Data+and+Future+Directions.">New-Generation Coronary Stents: Current Data and Future Directions.</a> Currrent Atherosclerosis Reports. 19 (3), 14 (2017).</li><li>Chao, Y. K., Liu, K. S., Wang, Y. C., Huang, Y. L., Liu, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodegradable+cisplatin-eluting+tracheal+stent+for+malignant+airway+obstruction:+in+vivo+and+in+vitro+studies.">Biodegradable cisplatin-eluting tracheal stent for malignant airway obstruction: in vivo and in vitro studies.</a> Chest. 144 (1), 193-199 (2013).</li><li>Duvvuri, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+an+immunomodulatory+drug-eluting+stent+to+treat+laryngotracheal+stenosis.">Engineering an immunomodulatory drug-eluting stent to treat laryngotracheal stenosis.</a> Biomaterials Science. 7 (5), 1863-1874 (2019).</li><li>Mugru, S. D., Colt, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complications+of+silicone+stent+insertion+in+patients+with+expiratory+central+airway+collapse.">Complications of silicone stent insertion in patients with expiratory central airway collapse.</a> Annals of Thoracic Surgery. 84 (6), 1870-1877 (2007).</li><li>Hillel, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+situ,+in+vivo+murine+model+for+the+study+of+laryngotracheal+stenosis.">An in situ, in vivo murine model for the study of laryngotracheal stenosis.</a> JAMA Otolaryngolology Head Neck Surgery. 140 (10), 961-966 (2014).</li><li>Can, E., Udenir, G., Kanneci, A. I., Kose, G., Bucak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+PLLA/PCL+blends+and+paclitaxel+release+profiles.">Investigation of PLLA/PCL blends and paclitaxel release profiles.</a> AAPS PharmSciTech. 12 (4), 1442-1453 (2011).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paclitaxel+Drug-eluting+Tracheal+Stent+Could+Reduce+Granulation+Tissue+Formation+in+a+Canine+Model.">Paclitaxel Drug-eluting Tracheal Stent Could Reduce Granulation Tissue Formation in a Canine Model.</a> Chinese Medical Journal (Engl). 129 (22), 2708-2713 (2016).</li><li>Sigler, M., Klotzer, J., Quentin, T., Paul, T., Moller, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stent+implantation+into+the+tracheo-bronchial+system+in+rabbits:+histopathologic+sequelae+in+bare+metal+vs.+drug-eluting+stents.">Stent implantation into the tracheo-bronchial system in rabbits: histopathologic sequelae in bare metal vs. drug-eluting stents.</a> Molecularand Cellular Pediatrics. 2 (1), 10 (2015).</li><li>Robey, T. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+internal+bioabsorbable+PLGA+"finger-type"+stents+in+a+rabbit+tracheal+reconstruction+model.">Use of internal bioabsorbable PLGA "finger-type" stents in a rabbit tracheal reconstruction model.</a> Archives of Otolaryngology Head Neck Surgery. 126 (8), 985-991 (2000).</li></ol>

Os passos mais críticos para construir e usar com sucesso um stent de luta contra drogas in vivo são 1) determinar a relação PLLA-PCL ideal para a taxa de elução de drogas desejável, 2) determinando a concentração adequada de drogas a ser eluted, 3) moldando os stents em torno do angiocateter para uso in vivo, e 4) transolvialmente entregando o stent para os ratos após a indução LTS sem causar obstrução das vias aéreas fatais.
Embora existam vários métodos para o parto de medi...

A estenose laringotraqueatra (LTS) é um estreitamento patológico da traqueia na maioria das vezes devido a lesões iagênicas pós-intubação. A combinação de colonização bacteriana, resposta corporal estranha a uma traqueostomia ou tubo de endotraqueano e fatores específicos do paciente levam a uma resposta inflamatória aberrante. Esta resposta imune desadaptativa leva à deposição de colágeno na traqueia, resultando em estreitamento luminal da traqueia e estenose subseqüente1,2. Como o tratamento atual para esta doença é principalmente cirúrgico, o desenvolvimento de um paradigma de tratamento alternativo medicamente baseado visando as vias inflamatórias e profibrotic aberrantes que levam à deposição excessiva de colágeno tem sido estudada. Rapamicina, que inibe o complexo de sinalização mTOR, tem sido mostrado para ter efeitos imunossupressores, bem como um efeito antifibroblasto robusto. No entanto, quando a rapamicina é administrada sistemicamente, efeitos colaterais comuns (por exemplo, hiperlipidemia, anemia, trombocitoopenia) podem ser pronunciados3. O objetivo da nossa metodologia é desenvolver um veículo para a entrega local de medicamentos praticável para uso nas vias aéreas que diminuiria esses efeitos sistêmicos. Nossas avaliações se concentram em investigar a resposta imune local à construção de entrega de drogas, bem como sua capacidade de inibir a função do fibroblasto e alterar o microambiente imunológico local. Os resultados específicos da doença incluem testes in vivo que avaliam marcadores de fibrose.
Stents biodegradáveis de luta contra drogas têm sido usados em modelos animais de doença em sistemas de múltiplos órgãos, incluindo as vias aéreas4. Para a gestão da estenose das vias aéreas ou colapso, investigações anteriores têm usado silicone revestido de drogas e stents à base de níquel5. Uma construção PLLA-PCL foi escolhida para este método particular por causa de seu perfil de elução de drogas e força mecânica em condições fisiológicas durante um período de 3 semanas, o que foi demonstrado em estudos publicados anteriores6. PLLA-PCL também é um material biocompatível e biodegradável já aprovado pelo FDA4. Stents biocompatíveis que elutam cisplatina e MMC têm sido estudados em grandes modelos animais, como coelhos e cães. No entanto, nesses modelos animais, os stents não foram colocados em um modelo animal de doença e foram implantados transcervicalmente. Este estudo fornece um método original para avaliar um stent droga-eluting biocompatível colocado transorally em um modelo do rato de ferimento da via aérea e de estenose laryngotracheal. Um stent biocompatível que inviabiliza uma droga imunomodulatória localmente e pode ser miniaturizado para estudo em um modelo de urina é valioso para pesquisa pré-clínica translacional. Tentativas anteriores de utilização de stent com outras construções materiais geraram respostas robustas do corpo estranho piorando a inflamação subjacente que distingue lts7. Esta metodologia, a nosso conhecimento, é a primeira de seu tipo para estudar os efeitos imunomodulatórios e antifibrotic de um sistema stent-baseado da entrega da droga em um modelo do murine de LTS. O modelo murine em si oferece várias vantagens para estudar os efeitos de uma droga imunomodulatória na traqueia. Camundongos geneticamente modificados e coortes experimentais de camundongos saudáveis e doentes podem ser estudados, o que pode levar à reprodutibilidade experimental e melhorar a relação custo-eficácia. Além disso, a entrega do stent transoralmente na traqueia do rato imita a entrega clínica de tal stent nos seres humanos, o que destaca ainda mais a vantagem translacional deste método. Finalmente, a relativa facilidade com que o stent PLLA-PCL com a droga pode ser produzida permite modificações para fornecer terapias medicamentosas alternativas destinadas a reduzir a formação de cicatriz na traqueia.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1. For stent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22-gauge angiocatheter</td>
			<td>Jelco</td>
			<td>4050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichloromethane</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>270997-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>56-81-5</td>
			<td>Available from other vendors as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDLGA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>739955-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLLA-PCL (70 : 30)</td>
			<td>Evonik Industries AG</td>
			<td>65053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rapamycin</td>
			<td>LC Laboratories</td>
			<td>R-5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2. Animal surgery</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wire brush</td>
			<td>Mill-Rose Company</td>
			<td>320101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3. For immunohistochemistry staining</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antigen retrival buffer</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab93678</td>
			<td>Available from other vendors as well; acidic pH needed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>8961S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11965-092</td>
			<td>Available from other vendors as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS (Fetal Bovine Serum)</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>F4135-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit-488 antibody</td>
			<td>Lif technology</td>
			<td>a11008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rat-633 antibody</td>
			<td>Lif technology</td>
			<td>a21094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrophilic plus slide</td>
			<td>BSB7028</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>100-10023</td>
			<td>Available from other vendors as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-CD3 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab5690</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat antiF4/80 antibody</td>
			<td>Biolengend</td>
			<td>123101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss LSM 510 Meta Confocal Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4. For quantative PCR</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5mm glass beads</td>
			<td>OMNI International</td>
			<td>19-645</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bead Mill Homoginizer</td>
			<td>OMNI International</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gene Specific Forward/Reverse Primers</td>
			<td>Genomic Resources Core Facility</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop 2000 spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power SYBR Green Mastermix</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>4367659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy mini kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>80404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StepOnePlus Real Time PCR system</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

design of a biocompatible drug-eluting tracheal stent in mice with laryngotracheal stenosis

A estenose laringotraqueaca (LTS) é um estreitamento patológico da subglotee e traqueia, levando à obstrução extratorácica e significativa falta de ar. Lts resulta de lesão mucosa de um corpo estranho na traqueia, levando a danos nos tecidos e uma resposta inflamatória local que dá errado, levando à deposição de tecido cicatricial patológico. O tratamento para LTS é cirúrgico devido à falta de terapias médicas eficazes. O objetivo deste método é construir um stent biocompatível que pode ser miniaturizado para colocar em camundongos com LTS. Demonstramos que uma construção PLLA-PCL (70% poli-L-lactide e 30% policaprolactona) tinha força biomecânica ideal, era biocompatível, praticável para um stent de colocação in vivo e capaz de combater a droga. Este método fornece um sistema de entrega de drogas para testar vários agentes imunomodulatórios para inibir localmente a inflamação e reduzir a fibrose das vias aéreas. A fabricação dos stents leva de 28 a 30 h e pode ser reproduzida facilmente, permitindo experimentos com grandes coortes. Aqui incorporamos a droga rapamicina dentro do stent para testar sua eficácia na redução da fibrose e deposição de colágeno. Os resultados revelaram que as tendas PLLA-PCL apresentaram liberação confiável de rapamicina, eram mecanicamente estáveis em condições fisiológicas e eram biocompatíveis, induzindo pouca resposta inflamatória na traqueia. Além disso, os stents PLLA-PCL que eluting à rapamicina reduziram a formação de cicatrizes na traqueia in vivo.

A construção biodegradável do stent PLLA-PCL carregada com rapamicina utilizada neste estudo foi capaz de dialoar a rapamicina de forma consistente e previsível em condições fisiológicas (Figura 1). A figura 2 mostra o stent PLLA-PCL lançado em torno de um angiocateter 22 G para uso em um modelo de urina de LTS. Para determinar se os efeitos da elução da rapamicina na traqueia são eficazes na fibrose atenuante, alterações medidas na expressão gêni...

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Design of a Biocompatible Drug-Eluting Tracheal Stent in Mice with Laryngotracheal Stenosis

A estenose de laringotracura resulta da deposição patológica da cicatriz que estreita crìtica a via aérea do traqueal e falta terapias médicas eficazes. Usando um stent PLLA-PCL (70% poli-L-lactide e 30% policaprolactona) como um sistema local de entrega de drogas, terapias potenciais destinadas a diminuir a proliferação de cicatrizna traqueia podem ser estudadas.

Design de um stent traqueal biocompatível de droga em camundongos com estenose laringotraquena

Laryngotracheal stenosis (LTS) is a pathologic narrowing of the subglottis and trachea leading to extrathoracic obstruction and significant shortness of ...

Este protocolo nos permite investigar stents que elugem de drogas em um pequeno modelo animal de estenose laringotraqueal, permitindo-nos aproveitar animais geneticamente modificados de forma econômica. A colocação transoral do stent das vias aéreas que eluia de drogas poupa os animais de uma incisão aberta na traqueia representando um modelo mais clinicamente relevante de estenose laringotraqueal. Esta técnica facilita a investigação pré-clínica das estratégias locais de entrega de medicamentos para tratar a estenose laringotraqueal.Esta técnica fornece uma plataforma viável e eficaz para a investigação translacional de stents de vias aéreas que eluem drogas em um pequeno modelo animal que pode ser aplicado para investigação futura em modelos animais maiores, bem como aplicação clínica. técnica particularmente a intubação transoral, indução de lesão traqueia, e a etapa de colocação do stent das vias aéreas. A demonstração visual desta cirurgia tecnicamente desafiadora é crítica, pois muitos dos detalhes finos não podem ser totalmente descritos em palavras.Para fazer uma solução de 1%rapamicina contendo polímero, adicione seis miligramas de rapamicina a 600 miligramas de 70-30 PLLA-PCL em um frasco de vidro. Sob um capô de fumaça, adicione seis mililitros de diclorometano ao frasco de rapamicina suplementado e controle e adicione 120 microliters de glicerol a cada frasco. Em seguida, tampe os frascos e deixe a solução PLLA-PCL homogeneizar por seis a 12 horas em temperatura ambiente.Para criar um stent das vias aéreas murinas, utilizando materiais estéreis e técnica, aplique um mililitro de solução PLLA-PCL suplementada de rapamicina na cânula venosa de um angiocateter à base de etileno fluorado de 22 bitolas enquanto retarda a rotação do cateter. Quando toda a solução tiver sido aplicada, apoie o angiocateter moldado com a ponta do angiocateter voltado para baixo e o punho do cateter na borda de uma placa de vidro Petri em uma capa de vácuo. Após 24 horas sob vácuo à temperatura ambiente, torça suavemente e deslize o cateter a partir da construção do stent seco e verifique circunferencialmente o stent quanto a quaisquer defeitos que possam ter resultado durante o processo de fundição.Para ajudar na visualização, é útil desenhar uma linha preta fina pelo comprimento do stent. Corte cada extremidade dos stents fundidos com uma tesoura reta fina para que as bordas sejam axiais e use a tesoura para cortar cada stent em segmentos axial de três milímetros. Em seguida, carregue cada stent de três milímetros em um novo cateter venoso calibre 22.Para indução de estenose laringotraqueal, depois de confirmar a falta de resposta ao dedo do pé, coloque o primeiro mouse em uma plataforma cirúrgica na posição supina e dê um loop de um pequeno pedaço de rosca afixado no topo da plataforma em torno dos incisivos centrais. Fixar os membros na mesa com fita adesiva e fazer uma incisão vertical de 1,5 centímetros no pescoço do mouse. Divida o timo sobrelado e lateralize os dois lóbulos resultantes para visualizar a traqueia.Divida os músculos esternonióides e esternotireóides no apego superior bilateralmente e passe um angiocateter de 22 bitola transorly através da laringe na traqueia. Utilizando pequenas fórceps, aplique pressão na laringe anterior do mouse para auxiliar na colocação correta do cateter. Um angiocateter corretamente colocado pode ser visualizado por sua cor branca através da traqueia.Para induzir a lesão, passe uma escova de arame revestida de Bleomycin através do angiocateter inserido e retire lentamente o cateter para que apenas a escova de arame permaneça dentro da traqueia. Usando fórceps finos, aplique contrapressão na traqueia para interromper mecanicamente o lúmen traqueal com a escova antes de reinserir o cateter na traqueia sobre a escova. Remova a escova de arame e reaplique a Bleomycin antes de inserir e remover a escova mais quatro vezes, como apenas demonstrado.Após a última aplicação de Bleomimicina, remova o cateter da traqueia. Para a colocação transoral de um PLLA-PCL, certifique-se de que uma linha vertical preta fina tenha sido incorporada em cada stent e entubar transorally o mouse com o angiocateter pré-carregado. O stent deve ser visualizado dentro da traqueia através da incisão transcervical.Quando o stent estiver no lugar, use fórceps finos para segurar firmemente, mas suavemente a traqueia através da incisão para manter o stent no lugar e remover o cateter. É fundamental colocar o stent o mais cuidadosamente possível. Muita pressão sobre a traqueia resultará no colapso do stent causando obstrução das vias aéreas e morte ao animal.Feche a incisão com cola tecidual ou suturas cromicas absorvíveis 4-0 usadas aqui e permita que o rato se recupere com monitoramento antes de devolver o animal à gaiola de origem. No ponto final experimental apropriado, coloque o mouse de interesse na posição supina na plataforma cirúrgica e use uma tesoura de íris curva fina para reabrir a incisão. Exponha a traqueia como demonstrado e use a tesoura para dividir a traqueia distal abaixo do nível do stent.Em seguida, divida a traqueia proximal abaixo da laringe e acima do stent e separe a traqueia dividida do esôfago posteriormente. Em seguida, remova o stent da traqueia e fixe a traqueia em 10% de formalina por 24 horas. A construção de stent PLLA-PCL carregado biodegradável utilizada neste estudo é capaz de eluir a rapamicina de forma consistente e previsível em condições fisiológicas.Nesta imagem, o stent biocompatível miniaturizado pode ser observado in situ dentro da traqueia, conforme indicado pelo marcador preto no stent visualizado através da traqueia translúcida do rato. Após 21 dias, o marcador de corante preto pode ser usado para confirmar a manutenção da posição do stent dentro da traqueia. Testes de biocompatibilidade utilizando coloração imunofluorescente para marcadores de inflamação aguda e crônica demonstram que o edifício de stent PLLA-PCL não é imunoreactive, conforme determinado pelo número mínimo de células imunes presentes após a colocação na ausência de lesão.Manipular as vias aéreas de forma delicada e atraumática é fundamental para o sucesso do procedimento. Força excessiva, múltiplas intubações e colapso do stent podem levar à morte de animais. Após o tratamento com stent de eluição de rapamicina, avaliação da sobrevivência, expressão genética via PCR quantitativo em tempo real, imunoensatórios incluindo citometria de fluxo, ELISA e imunohistoquímica podem ser realizados.Como fornece uma plataforma de sucesso para a elução de medicamentos em um modelo de camundongo, esta técnica abre caminho para futuras investigações de terapêuticas aplicadas localmente em estenose laringotraqueal. Diclorometano é um líquido corrosivo. Certifique-se de sempre usar um capô de fumaça, equipamentos de proteção individual e materiais não corrosivos

Research

JoVE Journal

Bioengineering

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Bioengenharia

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