Name: design of a biocompatible drug-eluting tracheal stent in mice with laryngotracheal stenosis
Uploaded: 2020-01-21T13:30:00
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Instituto Nacional sobre la Sordera y Otros Trastornos de la Comunicación de los Institutos Nacionales de Salud bajo los números de premio 1K23DC014082 y 1R21DC017225 (Alexander Hillel). Este estudio también fue apoyado financieramente por la Sociedad Tríológica y el Colegio Americano de Cirujanos (Alexander Hillel), la American Medical Association Foundation, Chicago, IL (Madhavi Duvvuri) y una beca de capacitación T32 NIDCD (Kevin Motz).

NOTA: Todos los métodos descritos aquí fueron aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad Johns Hopkins (MO12M354).
1. Preparación de la rapamicina en PLLA-PCL
<ol><li>Preparar dos viales de vidrio (con tapas) de soluciones de polímero PLLA-PCL 70:30 (viscosidad inherente 1.3 x 1.8 DL/G; Tabla de Materiales) soluciones, con un vial que contiene 1,0% de rapamicina y el otro sin rapamicina.<ol>
<li>Hacer una solución de polímero que contenga r...

<ol>
	<li>Minnigerode, B., Richter, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+subglottic+tracheal+stenosis+in+childhood.">Pathophysiology of subglottic tracheal stenosis in childhood.</a> Progress in Pediatric Surgery. 21, 1-7 (1987).</li><li>Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrotic+disease+and+the+T(H)1/T(H)2+paradigm.">Fibrotic disease and the T(H)1/T(H)2 paradigm.</a> Nature Reviews Immunology. 4 (8), 583-594 (2004).</li><li>Kaplan, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+Toxicity+Following+Administration+of+Sirolimus+(formerly+Rapamycin)+for+Psoriasis.">Systemic Toxicity Following Administration of Sirolimus (formerly Rapamycin) for Psoriasis.</a> Archives of Dermatology. 135 (5), 553-557 (1999).</li><li>Kalra, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New-Generation+Coronary+Stents:+Current+Data+and+Future+Directions.">New-Generation Coronary Stents: Current Data and Future Directions.</a> Currrent Atherosclerosis Reports. 19 (3), 14 (2017).</li><li>Chao, Y. K., Liu, K. S., Wang, Y. C., Huang, Y. L., Liu, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodegradable+cisplatin-eluting+tracheal+stent+for+malignant+airway+obstruction:+in+vivo+and+in+vitro+studies.">Biodegradable cisplatin-eluting tracheal stent for malignant airway obstruction: in vivo and in vitro studies.</a> Chest. 144 (1), 193-199 (2013).</li><li>Duvvuri, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+an+immunomodulatory+drug-eluting+stent+to+treat+laryngotracheal+stenosis.">Engineering an immunomodulatory drug-eluting stent to treat laryngotracheal stenosis.</a> Biomaterials Science. 7 (5), 1863-1874 (2019).</li><li>Mugru, S. D., Colt, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complications+of+silicone+stent+insertion+in+patients+with+expiratory+central+airway+collapse.">Complications of silicone stent insertion in patients with expiratory central airway collapse.</a> Annals of Thoracic Surgery. 84 (6), 1870-1877 (2007).</li><li>Hillel, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+situ,+in+vivo+murine+model+for+the+study+of+laryngotracheal+stenosis.">An in situ, in vivo murine model for the study of laryngotracheal stenosis.</a> JAMA Otolaryngolology Head Neck Surgery. 140 (10), 961-966 (2014).</li><li>Can, E., Udenir, G., Kanneci, A. I., Kose, G., Bucak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+PLLA/PCL+blends+and+paclitaxel+release+profiles.">Investigation of PLLA/PCL blends and paclitaxel release profiles.</a> AAPS PharmSciTech. 12 (4), 1442-1453 (2011).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paclitaxel+Drug-eluting+Tracheal+Stent+Could+Reduce+Granulation+Tissue+Formation+in+a+Canine+Model.">Paclitaxel Drug-eluting Tracheal Stent Could Reduce Granulation Tissue Formation in a Canine Model.</a> Chinese Medical Journal (Engl). 129 (22), 2708-2713 (2016).</li><li>Sigler, M., Klotzer, J., Quentin, T., Paul, T., Moller, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stent+implantation+into+the+tracheo-bronchial+system+in+rabbits:+histopathologic+sequelae+in+bare+metal+vs.+drug-eluting+stents.">Stent implantation into the tracheo-bronchial system in rabbits: histopathologic sequelae in bare metal vs. drug-eluting stents.</a> Molecularand Cellular Pediatrics. 2 (1), 10 (2015).</li><li>Robey, T. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+internal+bioabsorbable+PLGA+"finger-type"+stents+in+a+rabbit+tracheal+reconstruction+model.">Use of internal bioabsorbable PLGA "finger-type" stents in a rabbit tracheal reconstruction model.</a> Archives of Otolaryngology Head Neck Surgery. 126 (8), 985-991 (2000).</li></ol>

Los pasos más críticos para construir y usar con éxito un stent de elución de drogas in vivo son 1) determinar la relación PLLA-PCL óptima para la tasa de elución de fármacos deseable, 2) determinar la concentración adecuada de fármaco a eluir, 3) moldear los stents alrededor del angiocatéter para uso in vivo, y 4) entrega transoralmente el stent en los ratones después de la inducción LTS sin causar obstrucción fatal de las vías respiratorias.
Si bien existen varios métodos par...

La estenosis laringotraqueal (LTS) es un estrechamiento patológico de la tráquea más a menudo debido a una lesión iatrogénica después de la intubación. La combinación de la colonización bacteriana, la respuesta del cuerpo extraño a una traqueotomía o tubo endotraqueal, y los factores específicos del paciente conducen a una respuesta inflamatoria aberrante. Esta respuesta inmunitaria maladaptista conduce a la deposición de colágeno en la tráquea, lo que resulta en estrechamiento luminal de la tráquea y la estenosis posterior1,2. Como el tratamiento actual para esta enfermedad es principalmente quirúrgico, se ha estudiado el desarrollo de un paradigma de tratamiento alternativo basado en la medicina dirigido a las vías inflamatorias y profibroticas aberrantes que conducen a la deposición excesiva de colágeno. La rapamicina, que inhibe el complejo de señalización mTOR, ha demostrado tener efectos inmunosupresores, así como un efecto antifibroblasto robusto. Sin embargo, cuando se administra rapamicina sistémicamente, efectos secundarios comunes (por ejemplo, hiperlipidemia, anemia, trombocitopenia) pueden pronunciarse3. El propósito de nuestra metodología es desarrollar un vehículo para la administración local de drogas factible para su uso en las vías respiratorias que disminuiría estos efectos sistémicos. Nuestras evaluaciones se centran en investigar la respuesta inmune local a la construcción de administración de fármacos, así como su capacidad para inhibir la función de fibroblastos y alterar el microambiente inmune local. Los resultados específicos de la enfermedad incluyen pruebas in vivo que evalúan marcadores de fibrosis.
Los stents biodegradables para elución de fármacos se han utilizado en modelos animales de enfermedad en múltiples sistemas de órganos, incluidas las víasrespiratorias 4. Para el manejo de la estenosis o colapso de las vías respiratorias, investigaciones anteriores han utilizado silicona recubierta de drogas y stents a base de níquel5. Una construcción PLLA-PCL fue elegida para este método particular debido a su perfil de elución de fármacos y fuerza mecánica en condiciones fisiológicas durante un período de 3 semanas, que se ha demostrado en estudios publicados anteriores6. PLLA-PCL es también un material biocompatible y biodegradable ya aprobado por la FDA4. Se han estudiado stents biocompatibles que eluyen cisplatino y MMC en modelos animales grandes como conejos y perros. Sin embargo, en estos modelos animales, los stents no se colocaban en un modelo animal de enfermedad y se implantaban de forma transcervical. Este estudio proporciona un método único para evaluar un stent de elución de fármacos biocompatible colocado transoralmente en un modelo de ratón de lesión en las vías respiratorias y estenosis laringotraqueal. Un stent biocompatible que eluye un fármaco inmunomodulador localmente y puede ser miniaturizado para su estudio en un modelo murino es valioso para la investigación preclínica traslacional. Los intentos anteriores de utilización de stent con otras construcciones de material generaron respuestas robustas de cuerpos extraños que empeoran la inflamación subyacente que distingue LTS7. Esta metodología, hasta nuestro conocimiento, es la primera de su tipo en estudiar los efectos inmunomoduladores y antifibrométicos de un sistema de administración de fármacos basado en stent en un modelo murino de LTS. El modelo murino en sí ofrece varias ventajas para el estudio de los efectos de un fármaco inmunomodulador en la tráquea. Se pueden estudiar ratones modificados genéticamente y cohortes experimentales de ratones sanos y enfermos, lo que puede conducir a la reproducibilidad experimental y mejorar la rentabilidad. Además, la entrega del stent transoralmente en la tráquea del ratón imita la entrega clínica de tal stent en humanos, lo que pone de relieve aún más la ventaja traslacional de este método. Por último, la relativa facilidad con la que se puede producir el stent PLLA-PCL con el fármaco permite modificaciones para ofrecer terapias alternativas dirigidas a reducir la formación de cicatrices en la tráquea.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1. For stent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22-gauge angiocatheter</td>
			<td>Jelco</td>
			<td>4050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichloromethane</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>270997-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>56-81-5</td>
			<td>Available from other vendors as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDLGA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>739955-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLLA-PCL (70 : 30)</td>
			<td>Evonik Industries AG</td>
			<td>65053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rapamycin</td>
			<td>LC Laboratories</td>
			<td>R-5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2. Animal surgery</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wire brush</td>
			<td>Mill-Rose Company</td>
			<td>320101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3. For immunohistochemistry staining</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antigen retrival buffer</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab93678</td>
			<td>Available from other vendors as well; acidic pH needed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>8961S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11965-092</td>
			<td>Available from other vendors as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS (Fetal Bovine Serum)</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>F4135-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit-488 antibody</td>
			<td>Lif technology</td>
			<td>a11008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rat-633 antibody</td>
			<td>Lif technology</td>
			<td>a21094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrophilic plus slide</td>
			<td>BSB7028</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>100-10023</td>
			<td>Available from other vendors as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-CD3 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab5690</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat antiF4/80 antibody</td>
			<td>Biolengend</td>
			<td>123101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss LSM 510 Meta Confocal Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4. For quantative PCR</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5mm glass beads</td>
			<td>OMNI International</td>
			<td>19-645</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bead Mill Homoginizer</td>
			<td>OMNI International</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gene Specific Forward/Reverse Primers</td>
			<td>Genomic Resources Core Facility</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop 2000 spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power SYBR Green Mastermix</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>4367659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy mini kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>80404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StepOnePlus Real Time PCR system</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

design of a biocompatible drug-eluting tracheal stent in mice with laryngotracheal stenosis

La estenosis laringotraqueal (LTS) es un estrechamiento patológico de la subglotis y la tráquea que conduce a la obstrucción extratorácica y a una dificultad respiratoria significativa. LTS es el resultado de una lesión mucosa de un cuerpo extraño en la tráquea, que conduce a daño tisular y una respuesta inflamatoria local que va mal, lo que conduce a la deposición de tejido cicatricial patológico. El tratamiento para LTS es quirúrgico debido a la falta de terapias médicas eficaces. El propósito de este método es construir un stent biocompatible que se puede miniaturizar para colocar en ratones con LTS. Demostramos que una construcción PLLA-PCL (70% poli-L-lactide y 30% policaprolactona) tenía una resistencia biomecánica óptima, era biocompatible, factible para un stent de colocación in vivo y capaz de eludir el fármaco. Este método proporciona un sistema de administración de fármacos para probar varios agentes inmunomoduladores para inhibir localmente la inflamación y reducir la fibrosis de las vías respiratorias. La fabricación de los stents toma de 28 a 30 h y se puede reproducir fácilmente, lo que permite experimentos con grandes cohortes. Aquí incorporamos el fármaco rapamicina dentro del stent para probar su eficacia en la reducción de la fibrosis y la deposición de colágeno. Los resultados revelaron que las tiendas PLLA-PCL mostraron una liberación confiable de rapamicina, eran mecánicamente estables en condiciones fisiológicas y eran biocompatibles, induciendo poca respuesta inflamatoria en la tráquea. Además, los stents PLLA-PCL que eluyen la rapamicina redujeron la formación de cicatrices en la tráquea in vivo.

La construcción biodegradable de stent PLLA-PCL cargada de rapamicina utilizada en este estudio fue capaz de eludir la rapamicina de una manera consistente y predecible en condiciones fisiológicas(Figura 1). La Figura 2 muestra el stent PLLA-PCL fundido alrededor de un angiocatéter de 22 G para su uso en un modelo murino de LTS. Para determinar si los efectos de la elución de rapamicina en la tráquea son eficaces en la atenuación de la fibrosis, los cambio...

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Design of a Biocompatible Drug-Eluting Tracheal Stent in Mice with Laryngotracheal Stenosis

La estenosis laringotraqueal es el resultado de la deposición patológica de cicatrices que estrecha críticamente las vías respiratorias traqueales y carece de terapias médicas eficaces. Utilizando un stent PLLA-PCL (70% poli-L-lactide y 30% policaprolactone) como un sistema local de administración de fármacos, se pueden estudiar posibles terapias destinadas a disminuir la proliferación de cicatrices en la tráquea.

Diseño de un Stent Traqueal De la Droga-Eluting Biocompatible en Ratones con Estenosis Laringotraqueal

Laryngotracheal stenosis (LTS) is a pathologic narrowing of the subglottis and trachea leading to extrathoracic obstruction and significant shortness of ...

Este protocolo nos permite investigar los stents que eluyen drogas en un pequeño modelo animal de estenosis laringotraqueal que nos permite aprovechar a los animales modificados genéticamente de una manera rentable. La colocación transoral del stent de las vías respiratorias que eluyen a los fármacos evita a los animales una incisión abierta en la tráquea que representa un modelo más clínicamente relevante de estenosis laringotraqueal. Esta técnica facilita la investigación preclínica de las estrategias locales de administración de fármacos para tratar la estenosis laringotraqueal.Esta técnica proporciona una plataforma factible y eficaz para la investigación traslacional de los stents de las vías respiratorias que eluyen fármacos en un modelo animal pequeño que se puede aplicar para la investigación futura en modelos animales más grandes, así como la aplicación clínica. técnica particularmente la intubación transoral, la inducción de la lesión de la tráquea, y el paso de colocación del stent de las vías respiratorias. La demostración visual de esta cirugía técnicamente desafiante es crítica, ya que muchos de los detalles finos no se pueden describir completamente con palabras.Para hacer una solución de polímero 1%rapamicina que contenga, agregue seis miligramos de rapamicina a 600 miligramos de 70-30 PLLA-PCL-PCL en un vial de vidrio. Bajo una campana de humo, añadir seis mililitros de diclorometano al vial de rapamicina suplementado y controlar y añadir 120 microlitros de glicerol a cada vial. A continuación, tapice los viales y deje que la solución PLLA-PCL homogeneice durante seis a 12 horas a temperatura ambiente.Para crear un stent de vías respiratorias murinos, utilizando materiales estériles y técnica, aplique un mililitro de solución PLLA-PCL suplementada con rapamicina suplementada sobre la cánula venosa de un angiocatéter a base de etileno propileno fluorado de calibre 22 mientras ralentiza la rotación del catéter. Cuando se haya aplicado toda la solución, propicie el angiocatéter moldeado con la punta del angiocatéter hacia abajo y la empuñadura del catéter en el borde de un plato petri de vidrio en una campana de vacío. Después de 24 horas bajo vacío a temperatura ambiente, gire suavemente y deslice el catéter de la construcción de stent seco y compruebe circunferencialmente el stent en busca de defectos que puedan haber resultado durante el proceso de fundición.Para ayudar en la visualización, es útil dibujar una delgada línea negra a lo largo del stent. Recorte cada extremo de los stents fundidos con finas tijeras rectas para que los bordes sean axiales y utilice las tijeras para cortar cada ptent en segmentos axiales de tres milímetros. A continuación, cargue cada ptent de tres milímetros en un nuevo catéter venoso de calibre 22.Para la inducción de la estenosis laringotraqueal, después de confirmar la falta de respuesta al pellizco del dedo del pie, coloque el primer ratón en una plataforma quirúrgica en la posición supina y coloque un pequeño trozo de hilo colocado en la parte superior de la plataforma alrededor de los incisivos centrales. Asegure las extremidades a la mesa con cinta adhesiva y haga una incisión vertical de 1,5 centímetros en el cuello del ratón. Divide el timo supero y lateraliza los dos lóbulos resultantes para visualizar la tráquea.Divida los músculos esternoideoide y esternotiroides en el accesorio superior bilateralmente y pase un angiocatéter de calibre 22 transotéro a través de la laringe en la tráquea. Con pequeños fórceps, aplique presión sobre la laringe anterior del ratón para ayudar en la colocación correcta del catéter. Un angiocatéter colocado correctamente puede visualizarse por su color blanco a través de la tráquea.Para inducir la lesión, pase un cepillo de alambre recubierto de Bleomicina a través del angiocatéter insertado y retire lentamente el catéter de modo que sólo quede el cepillo de alambre dentro de la tráquea. Usando fórceps finos, aplique contrapresión en la tráquea para interrumpir mecánicamente el lumen traqueal con el cepillo antes de reinsertar el catéter en la tráquea sobre el cepillo. Retire el cepillo de alambre y vuelva a aplicar la Bleomycin antes de insertar y quitar el cepillo cuatro veces más como se acaba de demostrar.Después de la última aplicación de Bleomycin, retire el catéter de la tráquea. Para la colocación transoral de un PLLA-PCL, asegúrese de que se ha incorporado una delgada línea vertical negra en cada stent e intuba el ratón transoralmente con el angiocatéter precargado. El stent debe visualizarse dentro de la tráquea a través de la incisión transcervical.Cuando el stent esté en su lugar, utilice fórceps finos para agarrar firmemente pero suavemente la tráquea a través de la incisión para mantener el stent en su lugar y retirar el catéter. Es fundamental colocar el stent con el cuidado posible. Demasiada presión sobre la tráquea resultará en el colapso del stent causando obstrucción de las vías respiratorias y la muerte al animal.Cierre la incisión con pegamento tisú o suturas cromáticos 4-0 absorbibles utilizadas aquí y permita que el ratón se recupere con monitoreo antes de devolver al animal a su jaula de origen. En el punto final experimental apropiado, coloque el ratón de interés en la posición supina en la plataforma quirúrgica y utilice tijeras de iris curvadas finas para reabrir la incisión. Exponga la tráquea como se ha demostrado y utilice las tijeras para dividir la tráquea distal por debajo del nivel del stent.A continuación, divida la tráquea proximal por debajo de la laringe y por encima del stent y separe la tráquea dividida del esófago posteriormente. A continuación, retire el stent de la tráquea y fije la tráquea en 10% de formalina durante 24 horas. La construcción de stent PLLA-PCL cargada de rapamicina biodegradable utilizada en este estudio es capaz de eluirse a la rapamicina de una manera consistente y predecible en condiciones fisiológicas.En esta imagen, el stent biocompatible miniaturizado se puede observar in situ dentro de la tráquea como lo indica el marcador negro en el stent visualizado a través de la tráquea de ratón translúcido. Después de 21 días, el marcador de tinte negro se puede utilizar para confirmar el mantenimiento de la posición del stent dentro de la tráquea. Las pruebas de biocompatibilidad con tinción inmunofluorescente para marcadores de inflamación aguda y crónica demuestran que la construcción del stent PLLA-PCL no es inmunorreactiva según lo determinado por el número mínimo de células inmunitarias presentes después de la colocación en ausencia de lesión.Manipular las vías respiratorias de una manera delicada y atraumática es fundamental para el éxito del procedimiento. La fuerza excesiva, las intubaciones múltiples y el colapso del stent pueden conducir a la muerte de los animales. Después del tratamiento con stent de rapamicina, se puede realizar la evaluación de la supervivencia, la expresión génica a través de PCR cuantitativa en tiempo real, inmunoensayo que incluye citometría de flujo, ELISA e inmunohistoquímica.Como proporciona una plataforma exitosa para la elución de drogas en un modelo de ratón, esta técnica allana el camino para futuras investigaciones de terapias aplicadas localmente en estenosis laringotraqueal. El diclorometano es un líquido corrosivo. Asegúrese de usar siempre una campana de humos, equipo de protección personal y materiales no corrosivos

Research

JoVE Journal

Bioengineering

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El seguimiento de los mecánica de la pared durante la implementación del stent en un buque

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Investigación

Bioingeniería

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