Name: design of a biocompatible drug-eluting tracheal stent in mice with laryngotracheal stenosis
Uploaded: 2020-01-21T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Design of a Biocompatible Drug-Eluting Tracheal Stent in Mice with Laryngotracheal Stenosis at JoVE.com

Ulusal Sağlık Enstitüleri Sağırlık ve Diğer İletişim Bozuklukları Enstitüsü ödül numaraları 1K23DC014082 ve 1R21DC017225 (Alexander Hillel) altında. Bu çalışma aynı zamanda Trioloji Derneği ve American College of Surgeons (Alexander Hillel), American Medical Association Foundation, Chicago, IL (Madhavi Duvvuri) ve T32 NIDCD eğitim bursu (Kevin Motz) tarafından da desteklenmiştir.

NOT: Burada açıklanan tüm yöntemler Johns Hopkins Üniversitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (MO12M354) tarafından onaylanmıştır.
1. PLLA-PCL rapamisin hazırlanması
<ol><li>70:30 PLLA-PCL polimer çözeltileri (içsel viskozite 1.3−1.8 DL/G) iki cam şişe (kapaklı) hazırlayın; Malzeme Tablosu) % 1.0 rapamisin içeren bir şişe ve rapamisin olmadan diğer ile çözümler.<ol>
<li>Bir cam şişe de 70:30 PLLA-PCL 600 mg rapamycin 6 mg ekleyerek polimer ...

<ol>
	<li>Minnigerode, B., Richter, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+subglottic+tracheal+stenosis+in+childhood.">Pathophysiology of subglottic tracheal stenosis in childhood.</a> Progress in Pediatric Surgery. 21, 1-7 (1987).</li><li>Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrotic+disease+and+the+T(H)1/T(H)2+paradigm.">Fibrotic disease and the T(H)1/T(H)2 paradigm.</a> Nature Reviews Immunology. 4 (8), 583-594 (2004).</li><li>Kaplan, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+Toxicity+Following+Administration+of+Sirolimus+(formerly+Rapamycin)+for+Psoriasis.">Systemic Toxicity Following Administration of Sirolimus (formerly Rapamycin) for Psoriasis.</a> Archives of Dermatology. 135 (5), 553-557 (1999).</li><li>Kalra, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New-Generation+Coronary+Stents:+Current+Data+and+Future+Directions.">New-Generation Coronary Stents: Current Data and Future Directions.</a> Currrent Atherosclerosis Reports. 19 (3), 14 (2017).</li><li>Chao, Y. K., Liu, K. S., Wang, Y. C., Huang, Y. L., Liu, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodegradable+cisplatin-eluting+tracheal+stent+for+malignant+airway+obstruction:+in+vivo+and+in+vitro+studies.">Biodegradable cisplatin-eluting tracheal stent for malignant airway obstruction: in vivo and in vitro studies.</a> Chest. 144 (1), 193-199 (2013).</li><li>Duvvuri, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+an+immunomodulatory+drug-eluting+stent+to+treat+laryngotracheal+stenosis.">Engineering an immunomodulatory drug-eluting stent to treat laryngotracheal stenosis.</a> Biomaterials Science. 7 (5), 1863-1874 (2019).</li><li>Mugru, S. D., Colt, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complications+of+silicone+stent+insertion+in+patients+with+expiratory+central+airway+collapse.">Complications of silicone stent insertion in patients with expiratory central airway collapse.</a> Annals of Thoracic Surgery. 84 (6), 1870-1877 (2007).</li><li>Hillel, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+situ,+in+vivo+murine+model+for+the+study+of+laryngotracheal+stenosis.">An in situ, in vivo murine model for the study of laryngotracheal stenosis.</a> JAMA Otolaryngolology Head Neck Surgery. 140 (10), 961-966 (2014).</li><li>Can, E., Udenir, G., Kanneci, A. I., Kose, G., Bucak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+PLLA/PCL+blends+and+paclitaxel+release+profiles.">Investigation of PLLA/PCL blends and paclitaxel release profiles.</a> AAPS PharmSciTech. 12 (4), 1442-1453 (2011).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paclitaxel+Drug-eluting+Tracheal+Stent+Could+Reduce+Granulation+Tissue+Formation+in+a+Canine+Model.">Paclitaxel Drug-eluting Tracheal Stent Could Reduce Granulation Tissue Formation in a Canine Model.</a> Chinese Medical Journal (Engl). 129 (22), 2708-2713 (2016).</li><li>Sigler, M., Klotzer, J., Quentin, T., Paul, T., Moller, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stent+implantation+into+the+tracheo-bronchial+system+in+rabbits:+histopathologic+sequelae+in+bare+metal+vs.+drug-eluting+stents.">Stent implantation into the tracheo-bronchial system in rabbits: histopathologic sequelae in bare metal vs. drug-eluting stents.</a> Molecularand Cellular Pediatrics. 2 (1), 10 (2015).</li><li>Robey, T. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+internal+bioabsorbable+PLGA+"finger-type"+stents+in+a+rabbit+tracheal+reconstruction+model.">Use of internal bioabsorbable PLGA "finger-type" stents in a rabbit tracheal reconstruction model.</a> Archives of Otolaryngology Head Neck Surgery. 126 (8), 985-991 (2000).</li></ol>

Başarılı bir şekilde inşa etmek ve vivo bir ilaç eluting stent kullanmak için en kritik adımlar 1) arzu edilen ilaç elüsülasyon oranı için optimal PLLA-PCL oranını belirleme, 2) eluted için ilaç uygun konsantrasyonu belirlenmesi, 3) stent kalıplama in vivo kullanım için anjiyokateter etrafında, ve 4) transoral ölümcül hava yolu tıkanıklığı neden olmadan LTS indüksiyon sonrası fareler içine stent teslim.
Hava yolu hastalığının hayvan modellerinde stent kullan...

Laringorrakheal darlık (LTS), en sık iyatrojenik post-entübasyon yaralanmasına bağlı olarak trakeanın patolojik olarak daraltılmasıdır. Bakteriyel kolonizasyon kombinasyonu, trakeostomi veya endotrakeal tüpyabancı cisim yanıtı, ve hastaya özgü faktörler anormal inflamatuar yanıtyol açar. Bu maladaptif immün yanıt trakea kollajen birikimine yol açar, trakea ve sonraki darlık luminal daralma ile sonuçlanan1,2. Bu hastalığın mevcut tedavisi öncelikle cerrahi olduğundan, aşırı kollajen birikimine yol açan anormal inflamatuar ve profibrotik yolları hedefleyen tıbbi temelli alternatif bir tedavi paradigması geliştirilmesi incelenmiştir. Rapamisin, hangi mTOR sinyal kompleksi inhibe, immünsupresif etkileri yanı sıra sağlam bir antifibroblast etkisi olduğu gösterilmiştir. Ancak, rapamisin sistemik olarak uygulandığında, yaygın yan etkiler (örn. hiperlipidemi, anemi, trombositopeni)3. Metodolojimizin amacı, bu sistemik etkileri azaltacak hava yolunda kullanılmak üzere yerel ilaç teslimatı için uygun bir araç geliştirmektir. Değerlendirmelerimiz, ilaç dağıtım yapısına verilen yerel immün yanıtın yanı sıra fibroblast fonksiyonunu inhibe etme ve yerel immün mikroçevreyi değiştirme kapasitesini araştırmaya odaklanmaktadır. Hastalığa özgü sonuçlar fibrozis belirteçlerini değerlendiren in vivo testleri içerir.
Biyobozunur ilaç eluting stentler birden fazla organ sistemlerinde hastalığın hayvan modellerinde kullanılmıştır, hava yolu da dahil olmak üzere4. Hava yolu darlığı veya çökme yönetimi için, önceki araştırmalar ilaç kaplı silikon ve nikel bazlı stent kullanmış5. Bir PLLA-PCL yapısı nedeniyle ilaç elüsyon profili ve fizyolojik koşullarda mekanik gücü nedeniyle bu özel yöntem için seçildi 3 haftalık bir süre içinde, hangi önceki yayınlanan çalışmalarda gösterilmiştir6. PLLA-PCL de biyouyumlu ve biyobozunur malzeme zaten FDA tarafından onaylanmış4. Sisplatin ve MMC'yi elüt eden biyouyumlu stentler tavşan ve köpek gibi büyük hayvan modellerinde incelenmiştir. Ancak bu hayvan modellerinde stentler hayvansal bir hastalık modeline yerleştirilmemiş ve transcerevik olarak implante edilmiştir. Bu çalışma, hava yolu yaralanması ve laringgotracheal darlık bir fare modeli transoral yerleştirilen biyouyumlu bir ilaç eluting stent değerlendirmek için benzersiz bir yöntem sağlar. Bir biyouyumlu stent yerel bir immünomodülatör ilaç elutes ve bir murine modelinde çalışma için minyatür olabilir çeviri preklinik araştırma için değerlidir. Diğer malzeme yapıları ile stent kullanımı önceki girişimleriLTSayıran altta yatan iltihabı kötüleştiren sağlam yabancı cisim tepkileri üretti 7 . Bu metodoloji, bizim bilgimize göre, LTS bir murine modelinde stent bazlı ilaç dağıtım sisteminin immünomodülatör ve antifibrotik etkilerini inceleyen türünün ilk ıdır. Murine modeli kendisi trakea üzerinde bir immünomodülatör ilacın etkilerini incelemek için çeşitli avantajlar sunuyor. Genetik olarak modifiye edilmiş fareler ve sağlıklı ve hastalıklı farelerin deneysel kohortları incelenebilir, bu da deneysel tekrarlanabilirliğe yol açabilir ve maliyet etkinliğini artırabilir. Ayrıca, stentin fare trakeasına transoral olarak verilmesi, bu yöntemin çevirisel avantajını daha da vurgulayan, insanlarda böyle bir stentin klinik olarak teslimini taklit eder. Son olarak, ilaç ile PLLA-PCL stent üretilebilir göreceli kolaylığı trakea skar oluşumunu azaltmaya yönelik alternatif ilaç tedavileri sunmak için değişiklikler için izin verir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1. For stent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22-gauge angiocatheter</td>
			<td>Jelco</td>
			<td>4050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichloromethane</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>270997-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>56-81-5</td>
			<td>Available from other vendors as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDLGA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>739955-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLLA-PCL (70 : 30)</td>
			<td>Evonik Industries AG</td>
			<td>65053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rapamycin</td>
			<td>LC Laboratories</td>
			<td>R-5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2. Animal surgery</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wire brush</td>
			<td>Mill-Rose Company</td>
			<td>320101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3. For immunohistochemistry staining</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antigen retrival buffer</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab93678</td>
			<td>Available from other vendors as well; acidic pH needed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>8961S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11965-092</td>
			<td>Available from other vendors as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS (Fetal Bovine Serum)</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>F4135-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit-488 antibody</td>
			<td>Lif technology</td>
			<td>a11008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rat-633 antibody</td>
			<td>Lif technology</td>
			<td>a21094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrophilic plus slide</td>
			<td>BSB7028</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>100-10023</td>
			<td>Available from other vendors as well.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-CD3 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab5690</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat antiF4/80 antibody</td>
			<td>Biolengend</td>
			<td>123101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss LSM 510 Meta Confocal Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4. For quantative PCR</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5mm glass beads</td>
			<td>OMNI International</td>
			<td>19-645</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bead Mill Homoginizer</td>
			<td>OMNI International</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gene Specific Forward/Reverse Primers</td>
			<td>Genomic Resources Core Facility</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop 2000 spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power SYBR Green Mastermix</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>4367659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy mini kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>80404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StepOnePlus Real Time PCR system</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

design of a biocompatible drug-eluting tracheal stent in mice with laryngotracheal stenosis

Laringotracheal darlığı (LTS), subglottis ve trakeanın patolojik olarak daraltması sonucu ekstratorasik obstrüksiyon ve önemli nefes darlığı. LTS trakea yabancı bir cisimden mukozal yaralanma sonuçları, doku hasarı ve ters gider lokal inflamatuar yanıta yol açan, patolojik skar dokusunun birikimine yol açan. LTS tedavisi etkili tıbbi tedavilerin eksikliği nedeniyle cerrahidir. Bu yöntemin amacı LTS ile fareler içine yerleştirmek için minyatür olabilir bir biyouyumlu stent inşa etmektir. Biz bir PLLA-PCL (%70 poli-L-laktit ve% 30 polikaprolakton) yapı optimal biyomekanik mukavemeti olduğunu gösterdi, biyouyumlu, in vivo yerleştirme stent için uygulanabilir, ve ilaç eluting yeteneğine sahip. Bu yöntem lokal inflamasyonu inhibe etmek ve hava yolu fibrozisini azaltmak için çeşitli immünomodülatör ajanları test etmek için bir ilaç dağıtım sistemi sağlar. Stentlerin imalatı 28−30 h sürer ve kolayca çoğaltılarak büyük kohortlarla deneyler yapılmasına olanak sağlar. Burada fibrozis ve kollajen birikimini azaltmada etkinliğini test etmek için stent içinde ilaç rapamisin dahil. Sonuçlar PLLA-PCL çadırgüvenilir rapamisin salınımı gösterdi, fizyolojik koşullarda mekanik olarak stabil olduğunu ve biyouyumlu olduğunu ortaya koymuştur, trakea küçük inflamatuar yanıt indükleyen. Ayrıca, rapamisin eluting PLLA-PCL stentler in vivo trakea skar oluşumunu azalttı.

Bu çalışmada kullanılan rapamisin yüklü biyobozunur PLLA-PCL stent yapısı fizyolojik koşullarda tutarlı ve öngörülebilir bir şekilde rapamisin eluting yeteneğine sahip oldu(Şekil 1). Şekil 2, LTS'nin bir murine modelinde kullanılmak üzere 22 G anjiyaterin etrafına serpişne plla-PCL stentini göstermektedir. Trakeada rapamisin elusiyon etkilerinin fibrozisin zayıflatılmasında etkili olup olmadığını belirlemek için, fibrozis ile ilgili...

Watch this Scientific Journal Video about Design of a Biocompatible Drug-Eluting Tracheal Stent in Mice with Laryngotracheal Stenosis at JoVE.com

Design of a Biocompatible Drug-Eluting Tracheal Stent in Mice with Laryngotracheal Stenosis

Laringotracheal stenoz, trakeal hava yolunu kritik derecede daraltan ve etkili tıbbi tedavilerden yoksun patolojik skar birikiminden kaynaklanır. PlLA-PCL (%70 poli-L-laktit ve %30 polikaprolakon) stent kullanılarak lokal ilaç dağıtım sistemi olarak, trakeada skar proliferünü azaltmaya yönelik potansiyel tedaviler incelenebilir.

Laringotracheal Stenozlu Farelerde Biyouyumlu İlaç Eluting Trakeal Stent Tasarımı

Laryngotracheal stenosis (LTS) is a pathologic narrowing of the subglottis and trachea leading to extrathoracic obstruction and significant shortness of ...

Bu protokol, laringgotracheal darlığı küçük bir hayvan modelinde ilaç eluting stentler araştırmak bize bize maliyet etkin bir şekilde genetiği değiştirilmiş hayvanlar kaldıraç sağlar sağlar. İlaç eluting hava yolu stentinin transoral yerleşimi, hayvanları açık bir kesiden trakeaya daha klinik olarak uygun bir laringgotracheal darlığı modelini temsil eden bir kesiden uzaktır. Bu teknik laringokraheal darlığı tedavisinde lokal ilaç dağıtım stratejilerinin klinik öncesi araştırmasını kolaylaştırmaktadır.Bu teknik, küçük bir hayvan modelinde ilaç eluting hava yolu stentlerinin daha büyük hayvan modellerinde ve klinik uygulamada ileride araştırılması için uygulanabilecek çevirisel araştırma için uygulanabilir ve etkili bir platform sağlar. tekniği özellikle transoral entübasyon, trakea yaralanması indüksiyonu ve hava yolu stent yerleştirme adımı. Bu teknik olarak zorlu ameliyatın görsel gösterimi çok önemlidir, çünkü ince detayların çoğu kelimelerle tam olarak açıklanamaz.Polimer çözeltisi içeren% 1 rapamisin yapmak için, bir cam şişe 70-30 PLLA-PCL 600 miligram rapamycin altı miligram ekleyin. Bir duman kaputunun altında, rapamisin takviye li ve kontrol şişesine altı mililitre diklorometan ekleyin ve her şişeye 120 mikrolitre gliserol ekleyin. Daha sonra şişeleri kaplayın ve PLLA-PCL çözeltisinin oda sıcaklığında altı ila 12 saat homojenize olmasını bekleyin.Bir murine hava yolu stent oluşturmak için, steril malzemeler ve teknik kullanarak, kateter dönerken yavaşlarken bir 22 gauge florlu etilen propilen bazlı anjiyatörün venöz kanül üzerine rapamisin takviyeli PLLA-PCL çözeltisi bir mililitre uygulayın. Tüm çözelti uygulandığında, anjiyokateterin ucu aşağıya bakacak şekilde kalıplanmış anjiyokateteri ve bir vakum kaputunda cam petri kabının kenarındaki kateterin kabzasını hareket lendirin. Oda sıcaklığında vakum altında 24 saat sonra, yavaşça büküm ve kurutulmuş stent yapıkateti slayt ve circumferentially döküm işlemi sırasında ortaya çıkabilecek herhangi bir kusur için stent kontrol edin.Görselleştirmeye yardımcı olmak için, stent uzunluğu aşağı ince bir siyah çizgi çizmek için yararlıdır. Kenarları eksenel olacak şekilde ince düz makas ile döküm stent her ucunu kırpın ve üç milimetre eksenel segmentler halinde her stent kesmek için makas kullanın. Daha sonra her üç milimetrelik stenti yeni bir 22 gauge venöz kateter üzerine yükleyin.Laringorracheal stenoz indüksiyon için, parmak sıkışma yanıt eksikliği doğruladıktan sonra, supine pozisyonda bir cerrahi platform üzerine ilk fare yerleştirin ve merkezi kesici dişlerin etrafında platformun üst yapıştırılmış iplik küçük bir parça döngü. Bant ile masaya uzuvları güvenli ve farenin boynunda 1,5 santimetre orta hat dikey kesi yapmak. Üstteki timusu bölün ve trakeayı görselleştirmek için ortaya çıkan iki lobu lateralize edin.Üstteki sternohyoid ve sternotiroid kasları iki taraflı olarak superior eki bölün ve gırtlak yoluyla transoral bir 22 gauge anjiyokateter geçmek trakea içine. Küçük büterler kullanarak, kateterin doğru yerleştirilmesine yardımcı olmak için farenin ön gırtlağa basınç uygulayın. Doğru yerleştirilmiş bir anjiyokateter, trakea yoluyla beyaz rengi ile görüntülenebilir.Yaralanmayı tetiklemek için, içine yerleştirilen anjiyokateterden Bleomisin kaplı tel fırça geçirin ve kateteri yavaşça geri çekin, böylece sadece tel fırça nefes borusunda kalır. İnce pratisyen ler kullanarak, kateteri fırçanın üzerine trakeaya yeniden takmadan önce trakeal lümeni fırçayla mekanik olarak bozmak için trakeaya karşı basınç uygulayın. Tel fırçasını çıkarın ve fırçayı sadece gösterildiği gibi dört kez daha takmadan ve çıkarmadan önce Bleomisin'i yeniden uygulayın.Son Bleomisin uygulamasından sonra kateteri trakeadan çıkarın. PLLA-PCL'nin transoral yerleşimi için, her stentin içine ince siyah dikey bir çizgi nin dahil olduğundan emin olun ve önceden yüklenmiş anjiyokateter ile fareyi transoral entübasyona dönüştürün. Stent transservikal kesi ile trakea içinde görselleştirilmelidir.Stent yerinde yken, stenti yerinde tutmak ve kateteri çıkarmak için kesiği kesin olarak ancak nazikçe kavramak için ince çerterler kullanın. Stenti mümkün olduğunca dikkatli yerleştirmek çok önemlidir. Trakea üzerinde çok fazla basınç stent çökmesine neden olacak hava yolu tıkanıklığı ve hayvan ölümüne neden olur.Burada kullanılan doku tutkal veya emilebilir 4-0 kromik dikişler ile kesi kapatın ve fare ev kafese hayvan dönmeden önce izleme ile kurtarmak için izin. Uygun deneysel bitiş noktasında, cerrahi platformda supine pozisyonda ilgi fare yerleştirin ve kesi yeniden açmak için ince kavisli iris makası kullanın. Gösterildiği gibi trakea maruz ve stent seviyesinin altına distal trakea bölmek için makas kullanın.Daha sonra proksimal trakeayı gırtlak ve stentin üzerine bölve bölünmüş trakeayı yemek borusundan posteriora ayırın. Daha sonra stenti trakeadan çıkarın ve 24 saat boyunca %10 formalin le trakeayı düzeltin. Bu çalışmada kullanılan biyobozunur rapamisin yüklü PLLA-PCL stent yapısı fizyolojik koşullar altında tutarlı ve öngörülebilir bir şekilde rapamisin eluting yeteneğine sahiptir.Bu resimde, minyatürleştirilmiş biyouyumlu stent, yarı saydam fare trakeası ile görselleştirilen stentteki siyah marker ile gösterildiği gibi trakea içinde yerinde gözlemlenebilir. 21 gün sonra, siyah boya işareti trakea içinde stent pozisyonunun bakım onaylamak için kullanılabilir. Akut ve kronik inflamasyon belirteçleri için immünofloresan boyama kullanılarak yapılan biyouyumluluk testleri, PLLA-PCL stent yapısının, yaralanma yokluğunda yerleştirildikten sonra mevcut olan immün hücrelerin en az sayıda tespit edilerek immünreaktif olmadığını göstermektedir.Hava yolunu hassas ve atravmatik bir şekilde manipüle etmek işlemin başarısı için çok önemlidir. Aşırı güç, çoklu entübasyonlar ve stent çökmesi hayvan ölümüne yol açabilir. Rapamisin eluting stenti ile tedavi den sonra, sağkalım değerlendirmesi, kantitatif gerçek zamanlı PCR ile gen ekspresyonu, akış sitometrisi dahil immünoassay, ELISA ve immünohistokimya yapılabilir.Bir fare modelinde ilaç elüsyonu için başarılı bir platform sağladığından, bu teknik laringgotracheal darlıkta lokal olarak uygulanan terapötiklerin gelecekteki araştırmalarının önünü açmaktadır. Diklorometan aşındırıcı bir sıvıdır. Her zaman bir duman başlık, kişisel koruyucu ekipman ve aşındırıcı olmayan malzemeler kullandığınızdan emin olun

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Monitoring the Wall Mechanics During Stent Deployment in a Vessel

Bir Gemi Stent Dağıtım sırasında Duvar Mekaniği izlenmesi

Clinical trials have reported different restenosis rates for various stent designs1. It is speculated that stent-induced strain concentrations on the ...

Design of a Biaxial Mechanical Loading Bioreactor for Tissue Engineering

Doku Mühendisliği için iki eksenli Mekanik Yükleniyor Biyoreaktör tasarımı

We  designed a loading device that is capable of applying uniaxial or biaxial  mechanical strain to a tissue engineered biocomposites fabricated for  ...

Experimental Investigation of Secondary Flow Structures Downstream of a Model Type IV Stent Failure in a 180&#176; Curved Artery Test Section

Experimental Investigation of Secondary Flow Structures Downstream of a Model Type IV Stent Failure in a 180Ãƒâ€šÃ‚Â° Curved Artery Test Section

180 ° Kavisli Arter Testi Bölüm Model Tip IV Stent Başarısızlık Mansap İkincil Akış Yapıların Deneysel İncelenmesi

The arterial network in the human vasculature comprises of ubiquitously present blood vessels with complex geometries (branches, curvatures and ...

Ferromagnetic Bare Metal Stent for Endothelial Cell Capture and Retention

Endotel Hücre yakalama ve Saklanmasına İlişkin ferromanyetik Bare Metal Stent

Rapid endothelialization of cardiovascular stents is needed to reduce stent thrombosis and to avoid anti-platelet therapy which can reduce bleeding risk. ...

Automated Robotic Liquid Handling Assembly of Modular DNA Devices

Robot sıvı işleme derleme modüler DNA cihazların otomatik

Recent advances in modular DNA assembly techniques have enabled synthetic biologists to test significantly more of the available &#34;design space&#34; ...

Synthesis of Biocompatible Liquid Crystal Elastomer Foams as Cell Scaffolds for 3D Spatial Cell Cultures

3D Mekansal Hücre Kültürleri için hücre yapı iskeleleri olarak biyo-uyumlu sıvı kristal Elastomer Köpüklerin sentezi

Here, we present a step-by-step preparation of a 3D, biodegradable, foam-like cell scaffold. These scaffolds were prepared by cross-linking star block ...

Anatomically Realistic Neonatal Heart Model for Use in Neonatal Patient Simulators

Anatomik olarak gerçekçi yenidoğan kalp modeli kullanılmak üzere yenidoğan hasta simülatörleri

Neonatal patient simulators (NPS) are artificial patient surrogates used in the context of medical simulation training. Neonatologists and nursing staff ...

Repressing Gene Transcription by Redirecting Cellular Machinery with Chemical Epigenetic Modifiers

Kimyasal epigenetik değiştiriciler ile hücresel makine yeniden yönlendirerek Gen transkripsiyonu bastırmak

Regulation of chromatin compaction is an important process that governs gene expression in higher eukaryotes. Although chromatin compaction and gene ...

Design and Synthesis of a Reconfigurable DNA Accordion Rack

Tasarım ve Reconfigurable DNA akordeon raf sentezi

DNA nanostructure-based mechanical systems or DNA nanomachines, which produce complex nanoscale motion in 2D and 3D in the nanometer to &#229;ngstr&#246;m ...

Seeding and Implantation of a Biosynthetic Tissue-engineered Tracheal Graft in a Mouse Model

Tohum ve bir biyosentetik doku Mühendisliği trakeal greft bir fare modeli implantasyonu

Treatment options for congenital or secondary long segment tracheal defects have historically been limited due to an inability to replace functional ...