Name: laser capture microdissection of mouse embryonic cartilage and bone for gene expression analysis
Uploaded: 2019-12-18T13:00:00
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इस काम को नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ डेंटल एंड क्रैनियोफेशियल रिसर्च (R01DE022988) और यूनिस कैनेडी श्रिवर नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ चाइल्ड हेल्थ एंड ह्यूमन डेवलपमेंट (P01HD078233) द्वारा समर्थित किया गया था। लेखक माउंट सिनाई में इकाहान स्कूल ऑफ मेडिसिन में लीका एलएमडी 6500 प्लेटफॉर्म तक पहुंच के लिए बायोरेपोसिटररी और पैथोलॉजी कोर का शुक्रिया अदा करते हैं।

चूहों से ऊतकों की देखभाल और प्रयोगशाला जानवरों के उपयोग के लिए स्वास्थ्य गाइड के राष्ट्रीय संस्थानों के अनुसार प्राप्त किए गए थे, और अध्ययन प्रोटोकॉल माउंट सिनाई में Icahn स्कूल ऑफ मेडिसिन में संस्थागत ?...

एलसीएम विषम ऊतकों से समृद्ध या समरूप कोशिका आबादी के अलगाव को सक्षम बनाता है। इसके फायदों में वीवो संदर्भ में कोशिकाओं का तेजी से और सटीक कब्जा शामिल है, जबकि संभावित नुकसान में यह समय लेने वाला, महं...

मस्कुलोस्केलेटल सिस्टम मांसपेशियों, संयोजी ऊतक, टेंडन, स्नायु, उपास्थि और हड्डी से बना एक बहुघटक प्रणाली है, जो नसों द्वारा अंतरवत और रक्त वाहिकाओं द्वारा संवहनीहै 1। कंकाल ऊतक सेलुलर विषमता और संरचनात्मक जटिलता में वृद्धि के साथ विकसित होते हैं। उपास्थि और हड्डी एक ही ऑस्टियोकोनड्रोजेनेटर वंश से विकसित होती है और अत्यधिक संबंधित होती है। भ्रूण उपास्थि और हड्डी मांसपेशियों, नसों, रक्त वाहिकाओं, और अविभेदित मेसेंचिम के सहयोग से विकसित होती है। उपास्थि भी हड्डी से घिरा हो सकता है, जैसे मेकेल का उपास्थि और मंडीबुलर हड्डी के भीतर मसाला उपास्थि। ये ऊतक शारीरिक रूप से जुड़े होते हैं और विकास के दौरान बाह्य संकेतों के माध्यम से एक दूसरे के साथ बातचीत करते हैं। उपास्थि और हड्डी के विकास में जीन अभिव्यक्ति के अध्ययन में, एक बाधा कई ऊतक प्रकारों से बना कंकाल संरचनाओं की विषमता है। ब्याज के विशिष्ट ऊतक का सटीक अलगाव सफल प्रतिलेखन विश्लेषण के लिए महत्वपूर्ण है।
लेजर कैप्चर माइक्रोडिससेक्शन (एलसीएम) विषम ऊतकों के भीतर कोशिका प्रकार या ब्याज के क्षेत्रों को अलग करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है, और प्रजनन योग्य है और एकल सेल स्तर2के प्रति संवेदनशील है। यह ठीक से लक्षित और प्रतिलेखन, जीनोमिक्स, और प्रोटेओमिक्स3,4में डाउनस्ट्रीम परख ों की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए ब्याज की कोशिकाओं पर कब्जा कर सकते हैं । अलग आरएनए, डीएनए या प्रोटीन की गुणवत्ता का आकलन बायोएनालाइजर या समकक्ष मंच के साथ किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, आरएनए गुणवत्ता आरएनए अखंडता संख्या (आरआईआर)5द्वारा इंगित की जाती है।
यहां, हम ताजा जमे हुए ऊतकों से एलसीएम द्वारा उपास्थि और हड्डी के तेजी से धुंधला और अलगाव के लिए एक प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं। हम माउस भ्रूण का उपयोग करने के लिए प्रदर्शित करता है कि इस प्रोटोकॉल के बाद ट्रांसक्रिप्टोमिक विश्लेषण के लिए उच्च गुणवत्ता आरएनए पैदावार, जैसे आरएनए अनुक्रमण (आरएनए-सीक्यू) ।

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	<tbody>
		<tr>
			<td>2-Methylbutane</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>O3551-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioanalyzer</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>G2939BA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tube</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>339653</td>
			<td>Conical sterile polypropylene centrifuge tubes, 50 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cresyl violet acetate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>CM3050 S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate task wiper</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>06-666</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable embedding mold</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>1220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10977-015</td>
			<td>DNase/RNase-Free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, absolute (200 proof)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>BP2818</td>
			<td>Molecular biology grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass PEN membrane slide</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>11505158</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LCM system</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>Leica LMD6500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope cover glass</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>12-545FP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slides</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT compound</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>102094-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR tube with flat cap, 0.5 mL</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>PCR-05-C</td>
			<td>LCM collection tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permanent mounting medium</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA isolation kit</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>KIT0204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNase decontamination agent</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R2020</td>
			<td>RNase decontamination agent for cleaning surfaces</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>214736</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

laser capture microdissection of mouse embryonic cartilage and bone for gene expression analysis

लेजर कैप्चर माइक्रोडिसेक्शन (एलसीएम) विशिष्ट कोशिका प्रकार या विषम ऊतकों से ब्याज के क्षेत्रों को अलग करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है। कंकाल तत्वों की सेलुलर और आणविक जटिलता विकास के साथ बढ़ जाती है। ऊतक विषमता, जैसे एक दूसरे के साथ या आसपास के ऊतकों के साथ कार्टिलाजिनस और ओसियस तत्वों के इंटरफेस पर, उपास्थि और हड्डी के विकास के अध्ययन में एक बाधा है। हमारा प्रोटोकॉल ऊतक प्रसंस्करण और उपास्थि और हड्डी के अलगाव की एक तेजी से विधि प्रदान करता है जो जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण के लिए उच्च गुणवत्ता वाले आरएनए की पैदावार करता है। माउस भ्रूण के ताजा जमे हुए ऊतकों को खंडित किया जाता है और संक्षिप्त क्रेसिल बैंगनी धुंधला का उपयोग आसपास के ऊतकों से अलग रंगों के साथ उपास्थि और हड्डी की कल्पना करने के लिए किया जाता है। स्लाइड तो तेजी से निर्जलित हैं, और उपास्थि और हड्डी बाद में LCM द्वारा अलग कर रहे हैं । इस प्रक्रिया के दौरान जलीय समाधानों के संपर्क में आने का कमीकरण आरएनए अखंडता को बनाए रखता है। माउस मेकेल के उपास्थि और ई16.5 में मंडीबुलर हड्डी को सफलतापूर्वक एकत्र किया गया और जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण ने ऑस्टियोब्लास्ट, ऑस्टियोसाइट्स, ऑस्टियोप्लास्ट और कॉन्ड्रोसाइट्स के लिए मार्कर जीन की अंतर अभिव्यक्ति दिखाई। उच्च गुणवत्ता वाले आरएनए को ऊतकों और भ्रूणीय उम्र की एक श्रृंखला से भी अलग किया गया था। यह प्रोटोकॉल विवरण क्रायोएम्बेडिंग, सेक्शनिंग, धुंधला और ताजा जमे हुए ऊतकों को निर्जलित करने सहित एलसीएम के लिए नमूना तैयारी, और एलसीएम द्वारा उपास्थि और हड्डी के सटीक अलगाव के परिणामस्वरूप ट्रांसक्रिप्टोमिक विश्लेषण के लिए उच्च गुणवत्ता वाले आरएनए।

E16.5 पर ताजा जमे हुए माउस ऊतकों के कोरोनल वर्गों का उपयोग एलसीएम द्वारा मेकेल के उपास्थि (एमसी), कोंडिलार उपास्थि और मंडीबुलर हड्डी के अलगाव और संग्रह को प्रदर्शित करने के लिए किया गया था। E16.5 पर माउस भ्रूण ...

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Laser Capture Microdissection of Mouse Embryonic Cartilage and Bone for Gene Expression Analysis

यह प्रोटोकॉल माउस भ्रूण के ताजा जमे हुए वर्गों से उपास्थि और हड्डी के अलगाव के लिए लेजर कैप्चर माइक्रोडिसेक्शन का वर्णन करता है। उपास्थि और हड्डी को तेजी से क्रेसिल वायलेट धुंधला द्वारा कल्पना की जा सकती है और ट्रांसक्रिप्टोमिक विश्लेषण के लिए उच्च गुणवत्ता वाले आरएनए को प्राप्त करने के लिए ठीक से एकत्र किया जा सकता है।

लेजर कैप्चर माइक्रोडिसेक्शन माउस भ्रूणीय उपास्थि और जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण के लिए हड्डी

Laser capture microdissection (LCM) is a powerful tool to isolate specific cell types or regions of interest from heterogeneous tissues. The cellular and ...

कंकाल संरचनाओं की विषमता उपास्थि और हड्डी के विकास में जीन अभिव्यक्ति का अध्ययन करने में एक बाधा है । यह प्रोटोकॉल आसन्न लेकिन विभिन्न ऊतकों के सटीक अलगाव के लिए एक विधि प्रदान करता है। हम बाद के विश्लेषण के लिए उच्च आरएनए अखंडता को बनाए रखने के द्वारा सटीक संग्रह के लिए इन ऊतकों की कल्पना करने के लिए क्रेसिल वायलेट धुंधला का उपयोग कर उपास्थि और हड्डी के लिए लेजर कैप्चर माइक्रोडिसेक्शन का अनुकूलन करते हैं।अन्य ऊतकों को अलग किया जा सकता है यदि क्रेसिल वायलेट लक्ष्य ऊतक का पर्याप्त अंतर प्रदान करता है और हमारे प्रसंस्करण विधि के बाद आरएनए गुणवत्ता उच्च बनी हुई है। इस तरह के ऊतकों में क्रैनियोफेशियल टांके और मस्तिष्क शामिल हैं। इस प्रोटोकॉल में क्रायोसेक्शनिंग सबसे अधिक मांग कौशल है।सुनिश्चित करें कि ऊतक विच्छेदन और आरएनए की उच्चतम अखंडता को बनाए रखने के लिए तेजी से एम्बेडेड है। इस प्रक्रिया को शुरू करने के लिए, भ्रूण या ब्याज के ऊतकों को काटना। नमूना को इष्टतम काटने के तापमान यौगिक के साथ डिस्पोजेबल एम्बेडिंग मोल्ड में एम्बेड करें, और नमूने के अभिविन्यास को टिप या सुई के साथ समायोजित करें।तेजी से एक सूखी बर्फ और मिथाइल-2-butene स्नान में नमूनों फ्रीज । इसके बाद, क्रायोसेक्शनिंग के दौरान विच्छेदन नमूना स्लाइड के अस्थायी भंडारण के लिए सूखी बर्फ पर एल्यूमीनियम पन्नी की एक चादर रखकर सूखी बर्फ के साथ एक लिडेड कंटेनर तैयार करें। ताजा जमे हुए नमूने को सूखी बर्फ की बाल्टी में स्थानांतरित करें।एक क्रायोस्टेट नमूना धारक पर इष्टतम काटने के तापमान यौगिक की एक परत रखें, और तुरंत नमूना को कोमल दबाव के साथ इष्टतम काटने वाले तापमान यौगिक के शीर्ष पर रखें। जब इष्टतम काटने का तापमान यौगिक पूरी तरह से जम जाता है, तो धारक को क्रायोस्टेट काटने वाले हाथ में नमूने के साथ जकड़ें। सैंपल को 15 मिनट के लिए क्रायोस्टेट में छोड़ दें ताकि इसे काटने के तापमान तक पहुंचाया जा सके ।फिर, 12 माइक्रोमीटर की मोटाई पर ऊतक अनुभाग और कलम झिल्ली स्लाइड पर स्लाइस इकट्ठा । झिल्ली पर लगातार अनुभागों को संरेखित करें। एक बार स्लाइड पूरा हो जाने के बाद, अनुभागों को कुछ मिनटों के लिए सूखने दें, और फिर स्लाइड को सूखे बर्फ कंटेनर में पन्नी पर स्थानांतरित करें जब तक कि सभी आवश्यक स्लाइड एकत्र न हो जाएं।स्लाइड बॉक्स में माइनस 80 डिग्री सेल्सियस पर स्लाइड स्टोर करें। शुरू करने के लिए, तीन लेबल 15 मिलीलीटर सेंट्रलाइज ट्यूब तैयार करें। प्रत्येक ट्यूब में 80% इथेनॉल के 45 मिलीलीटर जोड़ें।बर्फ पर तीन ट्यूब रखें। एक ट्यूब जिसमें 95% इथेनॉल के 45 मिलीलीटर और बर्फ पर 100% इथेनॉल युक्त ट्यूब रखें। इसके बाद, कमरे के तापमान पर 50 मिलीलीटर सेंट्रलाइज ट्यूब में 45 मिलीलीटर जाइलीन जोड़ें।एक कलम झिल्ली स्लाइड संक्षेप में यह एक दस्ताने हाथ के खिलाफ रखकर स्लाइड गल, और यह दो बार 30 सेकंड के लिए 30 सेकंड के लिए आंदोलन के साथ ८०% इथेनॉल युक्त इष्टतम काटने के तापमान यौगिक को दूर करने के लिए धो । फिर, एल्यूमीनियम पन्नी की एक चादर पर स्लाइड रखना। पिपेट 8 मिलीलीटर 1% क्रेसिल वायलेट और 50% इथेनॉल स्लाइड पर और 30 सेकंड के लिए दाग।30 सेकंड के लिए 80% इथेनॉल युक्त तीसरी ट्यूब में स्लाइड धोएं। 30 सेकंड के लिए 95% इथेनॉल युक्त ट्यूब के माध्यम से इसे पारित करके स्लाइड को निर्जलित करें, 30 सेकंड के लिए 100% इथेनॉल युक्त ट्यूब, और अंत में, 30 सेकंड के लिए जाइलीन युक्त ट्यूब। इसके बाद, स्लाइड्स को पांच मिनट के लिए एक नाजुक टास्क वाइपर पर रखें ताकि जाइलीन नाली को छोड़ सके और सेक्शन को सूखने दें ।सबसे पहले, लेजर कैप्चर माइक्रोडिसेक्शन माइक्रोस्कोप, लेजर और कंप्यूटर को चालू करें। कंप्यूटर पर लॉग इन करें और सॉफ्टवेयर शुरू करें। जब हरी बत्ती चालन हो जाए तो लेजर को एक्टिवेट करने के लिए लाल बटन दबाएं।जब प्रकाश लाल हो जाता है, लेजर का उपयोग करने के लिए तैयार है। कलेक्टोरेट में 5 मिलीलीटर पीसीआर ट्यूब की कैप डालें। पिपेट 50 माइक्रोलीटर एक्सट्रैक्टिंग बफर को कैप में और कलेक्शन डिवाइस को माइक्रोस्कोप में डालें।चेंज कलेक्टर डिवाइस विंडो में, कलेक्टर को संदर्भ बिंदु पर ले जाने के लिए संदर्भ बिंदु बटन पर क्लिक करें। संदर्भ बिंदु को स्पष्ट रूप से देखने के लिए ध्यान समायोजित करें। आगे स्लाइड होल्डर को कम करने के लिए टूलबार में लेफ्ट अनलोड बटन पर क्लिक करें।नीचे की ओर आ रहे ऊतक अनुभाग के साथ धारक में स्लाइड रखें, और धारक को वापस चरण में डालें। परिवर्तन नमूना खिड़की में जारी क्लिक करें। लेजर पैरामीटर स्थापित करने के लिए, लेजर मेनू के नियंत्रण विकल्प का चयन करें या लेजर आइकन पर क्लिक करें।वांछित, शक्ति के रूप में निम्नलिखित मापदंडों को समायोजित करें, जो लेजर, एपर्चर की शक्ति है, जो लेजर की चौड़ाई है, और गति है, जो ड्रा और कट मोड में काटने की गति है। ब्याज के क्षेत्रों को खोजने के लिए 5X उद्देश्य के साथ शुरू करें, और उस उद्देश्य पर स्विच करें जो सर्वोत्तम हित के क्षेत्र को दिखाता है। कलेक्टर पर निशान पर क्लिक करके संग्रह के लिए ट्यूब चुनें, फिर चाल चुनें और काटें या आकर्षित करें और काटें।एक बार कटौती पूरी हो जाने के बाद, पेन झिल्ली के साथ लक्ष्य ऊतक गुरुत्वाकर्षण द्वारा संग्रह ट्यूब की टोपी में गिर जाएगा। यदि आवश्यक हो तो ब्याज के कई क्षेत्रों को खींचने के लिए इस चयन और काटने की प्रक्रिया को दोहराएं। इसके बाद कलेक्टर को उतार दें और सावधानी से पीसीआर ट्यूब बंद करें।सूखी बर्फ पर माइक्रोडिसेक्टेड ऊतकों को रखें। कमरे के तापमान पर माइक्रोडिसेक्टेड ऊतकों को पिघलाएं, फिर संक्षेप में अपकेंद्रित्र करें, और नमूनों को 30 मिनट के लिए 42 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें। इसके बाद, लाइसिस बफर को 5 मिलीलीटर पीसीआर ट्यूब में नीचे स्पिन करें।निर्माता के निर्देशों का पालन करते हुए आरएनए आइसोलेशन किट का उपयोग करके DNase उपचार और आरएनए निष्कर्षण करें। इस अध्ययन में, उपास्थि और हड्डी के एक अनुकूलित लेजर कैप्चर माइक्रोडिसेक्शन किया जाता है, जो बाद के विश्लेषण के लिए उच्च आरएनए अखंडता को बनाए रखते हुए सटीक ऊतक संग्रह के लिए उपास्थि और हड्डी की कल्पना करने के लिए एक तेजी से प्रक्रिया में क्रेसिल वायलेट धुंधला के उपयोग को रेखांकित करता है। स्लाइड्स के अवलोकन से पता चलता है कि जांच की गई सभी काराॅ्सेंट मैजेंटा हैं, और सभी खनिज ऊतक भूरे या काले रंग के होते हैं।उपास्थि और हड्डी दोनों आसानी से कई शारीरिक साइटों पर अन्य ऊतकों से प्रतिष्ठित हैं। मेकेल के उपास्थि, कॉन्डीलर उपास्थि, और मंडीबुलर हड्डी क्षेत्रों का चयन किया जाता है और लेजर कैप्चर माइक्रोडिसेक्शन द्वारा अलग किया जाता है। अनुक्रमण के लिए पर्याप्त आरएनए प्राप्त करने के लिए, मेकेल के उपास्थि के 10 क्षेत्रों, कॉन्डायलर उपास्थि के 10 क्षेत्रों, या मंडीबुलर हड्डी के चार क्षेत्रों को क्रमशः तीन व्यक्तिगत संग्रह ट्यूबों में खींचें।आरएनए तो निकाला जाता है, और कुल आरएनए एक bioanalyzer का उपयोग कर विश्लेषण किया है । यह लेजर कैप्चर माइक्रोडिसेक्शन प्रोटोकॉल का उपयोग विभिन्न विकासात्मक चरणों में विभिन्न ऊतकों पर किया जाता है, और आरएनए अखंडता संख्या माप उच्च आरएनए गुणवत्ता का संकेत देता है। अंतर जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण तो किया जाता है ।मंडीबुलर हड्डी और मेकेल के उपास्थि के बीच 4, 006 जीन काफी और अलग तरह से व्यक्त किए गए हैं। ऑस्टियोब्लास्ट या ऑस्टियोसाइट्स के लिए विशिष्ट जीन मंडीबुलर हड्डी में अधिक व्यक्त किए जाते हैं जबकि मेकेल के उपास्थि में चोंड्रोसाइट विशिष्ट जीन अधिक उच्च व्यक्त किए जाते हैं। इसके अलावा, ऑस्टियोक्लास्ट मार्कर मंडीबुलर हड्डी में अधिक व्यक्त किए जाते हैं, जो लक्षित ऊतकों के सफल अलगाव का संकेत देते हैं।इस प्रक्रिया के बाद, क्यूपीसीआर और आरएनए-एसईक्यू सहित जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण किया जा सकता है। ये विधियां विशिष्ट ऊतकों या विषम ऊतकों के भीतर रुचि के क्षेत्रों में ट्रांसक्रिप्टोम की जीन अभिव्यक्ति का विश्लेषण कर सकती हैं।

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Culture of Embryonic Mouse Cochlear Explants and Gene Transfer by Electroporation

Electroporation द्वारा भ्रूण माउस Cochlear explants की संस्कृति और जीन स्थानांतरण

Auditory hair cells located within the mouse organ of Corti detect and transmit sound information to the central nervous system. The mechanosensory hair ...

Analysis of Cardiomyocyte Development using Immunofluorescence in Embryonic Mouse Heart

भ्रूण माउस दिल में immunofluorescence का उपयोग cardiomyocyte विकास का विश्लेषण

During heart development, the generation of myocardial-specific structural and functional units including sarcomeres, contractile myofibrils, intercalated ...

Visualization of Chondrocyte Intercalation and Directional Proliferation via Zebrabow Clonal Cell Analysis in the Embryonic Meckel&#8217;s Cartilage

Visualization of Chondrocyte Intercalation and Directional Proliferation via Zebrabow Clonal Cell Analysis in the Embryonic MeckelÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Cartilage

भ्रूण मेकेल कार्टिलेज में Zebrabow क्लोनल सेल विश्लेषण के माध्यम से उपास्थिकोशिका अंतनिवेश और दिशात्मक प्रसार के दृश्य

Development of the vertebrate craniofacial structures requires precise coordination of cell migration, proliferation, adhesion and differentiation. ...

Temporal Ordering of Dynamic Expression Data from Detailed Spatial Expression Maps

विस्तृत स्थानिक अभिव्यक्ति मानचित्र से गतिशील अभिव्यक्ति डेटा के अस्थायी आदेश

During somitogenesis, pairs of epithelial somites form in a progressive manner, budding off from the anterior end of the pre-somitic mesoderm (PSM) with a ...

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

भ्रूणीय एंजियोजेनेसिस के विज़ुअलाइज़ेशन और क्वांटिटेटिव विश्लेषण<em&gt; ज़ीनोपस ट्रॉपिकलिस</em

Blood vessels supply oxygen and nutrients throughout the body, and the formation of the vascular network is under tight developmental control. The ...

Dissection and Culture of Mouse Embryonic Kidney

माउस भ्रूणीय किडनी की विच्छेदन और संस्कृति

The goal of this protocol is to describe a method for the dissection, isolation, and culture of mouse metanephric rudiments. 
During mammalian kidney ...

Tracing Gene Expression Through Detection of &#946;-galactosidase Activity in Whole Mouse Embryos

Tracing Gene Expression Through Detection of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-galactosidase Activity in Whole Mouse Embryos

पूरे माउस भ्रूण में β-galactosidase गतिविधि का पता लगाने के माध्यम से जीन अभिव्यक्ति अनुरेखण

The Escherichia coli LacZ gene, encoding &#946;-galactosidase, is largely used as a reporter for gene expression and as a tracer in cell lineage studies. ...

Tissue Preparation and Immunostaining of Mouse Craniofacial Tissues and Undecalcified Bone

ऊतक तैयारी और माउस Craniofacial ऊतकों और undecalified हड्डी के इम्यूनोस्टेनिंग

Tissue immunostaining provides highly specific and reliable detection of proteins of interest within a given tissue. Here we describe a complete and ...

Isolation and Staining of Mouse Skin Keratinocytes for Cell Cycle Specific Analysis of Cellular Protein Expression by Mass Cytometry

अलगाव और मास साइटोमेट्री द्वारा सेलुलर प्रोटीन अभिव्यक्ति के सेल चक्र विशिष्ट विश्लेषण के लिए माउस त्वचा Keratincytes के दाग

The goal of this protocol is to detect and quantify protein expression changes in a cell cycle-dependent manner using single cells isolated from the ...

Hemogenic Reprogramming of Human Fibroblasts by Enforced Expression of Transcription Factors

ट्रांसक्रिप्शन कारकों की प्रबल अभिव्यक्ति द्वारा मानव फाइब्रोब्लास्ट्स के हेमोजेनिक रिप्रोग्रामन

The cellular and molecular mechanisms underlying specification of human hematopoietic stem cells (HSCs) remain elusive. Strategies to recapitulate human ...