Name: coronary progenitor cells and soluble biomarkers in cardiovascular prognosis after coronary angioplasty
Uploaded: 2020-01-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty at JoVE.com

ويشكر المؤلفون دعم البرنامج المؤسسي E015؛ وفوندو قطاعي FOSSIS-CONACYT، SALUD-2014-1-233947.

ويلبي هذا البروتوكول المبادئ التوجيهية المؤسسية الواردة في لجنة أخلاقيات البحوث البشرية.
1. تصوير الأوعية التاجية، الموجات فوق الصوتية، وأخذ عينات الدم
<ol><li>طلب معلومات سريرية وديموغرافية أساسية قبل التدخل التاجي. جمع بيانات الفرد: العمر والجنس وحالة التدخين الحالية ومؤ?...

<ol>
	<li>Cassar, A., Holmes, D. R., Rihal, C. S., Gersh, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+coronary+artery+disease:+diagnosis+and+management.">Chronic coronary artery disease: diagnosis and management.</a> Mayo Clinic Proceedings. 84 (12), 1130-1146 (2009).</li><li>Regueiro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mobilization+of+endothelial+progenitor+cells+in+acute+cardiovascular+events+in+the+PROCELL+study:+time-course+after+acute+myocardial+infarction+and+stroke.">Mobilization of endothelial progenitor cells in acute cardiovascular events in the PROCELL study: time-course after acute myocardial infarction and stroke.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 80, 146-155 (2015).</li><li>Sen, S., McDonald, S. P., Coates, P. T., Bonder, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells:+novel+biomarker+and+promising+cell+therapy+for+cardiovascular+disease.">Endothelial progenitor cells: novel biomarker and promising cell therapy for cardiovascular disease.</a> Clinical Science (Lond). 120 (7), 263-283 (2011).</li><li>Samman Tahhan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progenitor+Cells+and+Clinical+Outcomes+in+Patients+With+Acute+Coronary+Syndromes.">Progenitor Cells and Clinical Outcomes in Patients With Acute Coronary Syndromes.</a> Circulation Research. 122 (11), 1565-1575 (2018).</li><li>Tomuli&#263;, V., Gobi&#263;, D., Luli&#263;, D., &#381;idan, D., Zaputovi&#263;, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soluble+adhesion+molecules+in+patients+with+acute+coronary+syndrome+after+percutaneous+coronary+intervention+with+drug-coated+balloon,+drug-eluting+stent+or+bare+metal+stent.">Soluble adhesion molecules in patients with acute coronary syndrome after percutaneous coronary intervention with drug-coated balloon, drug-eluting stent or bare metal stent.</a> Medical Hypotheses. 95, 20-23 (2016).</li><li>Jaumdally, R., Varma, C., Macfadyen, R. J., Lip, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+sinus+blood+sampling:+an+insight+into+local+cardiac+pathophysiology+and+treatment?.">Coronary sinus blood sampling: an insight into local cardiac pathophysiology and treatment?.</a> European Heart Journal. 28 (8), 929-940 (2007).</li><li>Kremastinos, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracoronary+cyclic-GMP+and+cyclic-AMP+during+percutaneous+transluminal+coronary+angioplasty.">Intracoronary cyclic-GMP and cyclic-AMP during percutaneous transluminal coronary angioplasty.</a> International Journal of Cardiology. 53 (3), 227-232 (1996).</li><li>Karube, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+cytokine+levels+by+coronary+sinus+blood+sampling+during+cardiac+surgery+with+cardiopulmonary+bypass.">Measurement of cytokine levels by coronary sinus blood sampling during cardiac surgery with cardiopulmonary bypass.</a> American Society for Artificial Internal Organs Journal. 42 (5), M787-M791 (1996).</li><li>Truong, Q. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+sinus+biomarker+sampling+compared+to+peripheral+venous+blood+for+predicting+outcomes+in+patients+with+severe+heart+failure+undergoing+cardiac+resynchronization+therapy:+the+BIOCRT+study.">Coronary sinus biomarker sampling compared to peripheral venous blood for predicting outcomes in patients with severe heart failure undergoing cardiac resynchronization therapy: the BIOCRT study.</a> Heart Rhythm. 11 (12), 2167-2175 (2014).</li><li>Su&#225;rez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+circulating+mononuclear+progenitor+cells+and+soluble+biomarkers+in+the+cardiovascular+prognosis+after+coronary+angioplasty.">Coronary circulating mononuclear progenitor cells and soluble biomarkers in the cardiovascular prognosis after coronary angioplasty.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23 (7), 4844-4849 (2019).</li><li>Su&#225;rez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relation+of+Coronary+Artery+Lumen+with+Baseline,+Post-angioplasty+Coronary+Circulating+Pro-Inflammatory+Cytokines+in+Patients+with+Coronary+Artery+Disease.">Relation of Coronary Artery Lumen with Baseline, Post-angioplasty Coronary Circulating Pro-Inflammatory Cytokines in Patients with Coronary Artery Disease.</a> Angiology Open Access. 7, 01 (2019).</li><li>Schmidt-Lucke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+circulating+endothelial+progenitor+cells+using+the+modified+ISHAGE+protocol.">Quantification of circulating endothelial progenitor cells using the modified ISHAGE protocol.</a> PLoS One. 5 (1), e13790 (2010).</li><li>Moyer, C. F., Sajuthi, D., Tulli, H., Williams, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+IL-1+alpha+and+IL-1+beta+by+arterial+cells+in+atherosclerosis.">Synthesis of IL-1 alpha and IL-1 beta by arterial cells in atherosclerosis.</a> American Journal of Pathology. 138 (4), 951-960 (1991).</li><li>Morales-Portano, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Echocardiographic+measurements+of+epicardial+adipose+tissue+and+comparative+ability+to+predict+adverse+cardiovascular+outcomes+in+patients+with+coronary+artery+disease.">Echocardiographic measurements of epicardial adipose tissue and comparative ability to predict adverse cardiovascular outcomes in patients with coronary artery disease.</a> International Journal of Cardiovascular Imaging. 34 (9), 1429-1437 (2018).</li><li>Huang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells+correlated+with+oxidative+stress+after+mild+traumatic+brain+injury.">Endothelial progenitor cells correlated with oxidative stress after mild traumatic brain injury.</a> Yonsei Medical Journal. 58 (5), 1012-1017 (2017).</li></ol>

قد يكون جمع الدم من الشريان التاجي المصاب أمرًا صعبًا. في بعض الأحيان، الشريان التاجي بالكاد يمكن الوصول إليها. في هذه الحالة ، قد يكون أخذ العينات من الجيوب الأنفية الوفيدية بديلاً. قمنا بإجراء اختبارات التحقق من الصحة مقارنة المؤشرات الحيوية المتداولة في الشريان التاجي مقابل الجيوب الأ...

تمثل رأب الأوعية التاجية والدعامات إجراء ً إنقاذًا للمرضى الذين يعانون من مرض الشريان التاجي (CAD). ومع ذلك، قد تحدث الأحداث القلبية الوعائية السلبية الرئيسية (MACEs)، بما في ذلك موت القلب والأوعية الدموية، واحتشاء عضلة القلب، والإصابة باضطراب الشريان التاجي، ونوبات الذبحة الصدرية أو عدم تعويض فشل القلب، بعد أشهر من التدخل التاجي، مما يؤدي إلى زيارات غير مقررة إلى المستشفى. الـ "مايس" شائعة في جميع أنحاء العالم ومعدل وفياتهم الـ(morbi) مرتفع1.
الإصابة التاجية الدماغية يحفز استجابة الأوعية الدموية في وقت مبكر وآليات التعويض التي تنطوي على تعبئة MPCs بسبب قدرتها التمايز و / أو قدرة الانجيو - الانعكاسي، فضلا عن إنتاج جزيئات قابلة للذوبان مثل جزيئات الالتصاق بين الخلايا (ICAMs)، مصفوفة metalloproteinases (MMPs)، وأنواع الأكسجين التفاعلية، مما يعكس التصاق الخلية، وإعادة عرض الأنسجة، والإجهاد التأكسدي. على الرغم من أن السمات الوعائية الجوهرية مثل خصائص البلاك وتعقيد الشريان التاجي قد استخدمت للتنبؤ MACEs، وقد اقترحت بعض الدراسات أن المؤشرات الحيوية المتعلقة بآليات الإصابة والإصلاح التي تحدث في بطانة الشريان التاجي يمكن أن تكون مفيدة جدا لتحديد وتشخيص المبكر للأحداث القلب والأوعية الدموية في المرضى الذين يعانون من CAD المقدمة إلى رأب الأوعية التاجية2،3،4،5.
وقد حفز الاهتمام المستمر في فهم الآليات الكامنة وراء إصابة كاد وإصلاح المحققين لدراسة المؤشرات الحيوية تعميم داخل التاجية، وذلك لأن أخذ العينات التاجية أكثر عن كثب يعكس تلف الأوعية الدموية وإصلاح6. ومع ذلك ، فإن توصيف المؤشرات الحيوية التاجية في الدراسات البشرية كان نادرًا7،8،9. ولذلك، كان الغرض من هذه الدراسة لوصف طريقة لتحديد كمية MPCs تعميم التاجية والجزيئات القابلة للذوبان، مما يعكس كل من إصابة الأوعية الدموية وإصلاحها، وتبين ما إذا كانت هذه المؤشرات الحيوية ترتبط مع MACEs والتشخيص السريري لمرضى CAD التي خضعت لعملية رأب الأوعية التاجية. وتستند هذه الطريقة إلى استخدام مراكز إدارة الأنسجة المتعددة المؤشرات والمواد المتعددة المؤشرات والجزيئات القابلة للذوبان التي يتم الحصول عليها عن طريق مواقع أخذ العينات الأقرب إلى تلف السفينة. قد يكون مفيدًا أيضًا للدراسات السريرية لنقص التروية في الأطراف السفلية ، والسكتة الدماغية ، والتهاب الأوعية الدموية ، والتجلط الوريدي ، وغيرها من الإصابات التي تنطوي على إصابة الأوعية الدموية وإصلاحها.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10735086001</td>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA) as a buffering agent, stabilizer, standard and for blending.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calibration Beads</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-093-607</td>
			<td>MACQuant calibration beads are supplied in aqueous solution containing 0.05% sodium azide. 3.5 ml for up to 100 tests</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD133/1 (AC133)-PE</td>
			<td>Milteny Biotec / MACS</td>
			<td>#130-080-801</td>
			<td>Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD184 (CXCR4)-PE-VIO770</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-103-798</td>
			<td>Monoclonal, Isotype recombinant human IgG1, conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-093-601</td>
			<td>Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD34-FITC</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-081-001</td>
			<td>The monoclonal antibody clone AC136 detecs a class III epitope of the CD34</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45- VioBlue</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-092-880</td>
			<td>Monoclonal CD45 Antibody, human conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Tubes</td>
			<td>Thermo SCIENTIFIC</td>
			<td>#339651</td>
			<td>15ml conical centrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytometry Tubes</td>
			<td>FALCON Corning Brand</td>
			<td>#352052</td>
			<td>5 mL Polystyrene Round-Bottom Tube. 12x75 style. Sterile.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>#161-0729</td>
			<td>Heavy metals, (as Pb) &#60;10ppm, Fe &#60;0.01%, As &#60;1ppm, Insolubles &#60;0.005%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Improved Neubauer</td>
			<td>Without brand</td>
			<td>Without catalog number</td>
			<td>Hemocytometer for cell counting. (range 0.1000mm, 0.0025mm2)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2 EDTA Blood Collection Tubes</td>
			<td>BD Vacutainer</td>
			<td>#367863</td>
			<td>Lilac plastic vacutainer tube (K2E) 10.8mg, 6 mL.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lymphoprep</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>01-63-12-002-A</td>
			<td>Sterile and checked on the presence of endotoxins. Density: 1.077&#177;0.001g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>#SZBF0920V</td>
			<td>Fixation of biological samples, (powder, 95%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Transfer 1,3mL</td>
			<td>CRM Globe</td>
			<td>PF1016, PF1015</td>
			<td>The transfer pipette is a tool that facilitates liquid transfer with greater accuracy.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test Tubes</td>
			<td>KIMBLE CHASE</td>
			<td>45060 13100</td>
			<td>Heat-resistant test tubes. SIZE/CAP 13 x 100 mm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

coronary progenitor cells and soluble biomarkers in cardiovascular prognosis after coronary angioplasty

تؤثر الأحداث القلبية الوعائية السلبية الرئيسية (MACEs) سلبًا على تشخيص القلب والأوعية الدموية للمرضى الذين يخضعون لعملية رأب الأوعية التاجية بسبب الإصابة الإقفارية التاجية. مدى الضرر التاجي وآليات إصلاح الأوعية الدموية هي العوامل التي تؤثر على التنمية المستقبلية للMACEs. وقد أظهرت السمات الوعائية الجوهرية مثل خصائص البلاك وتعقيد الشريان التاجي معلومات التكهن لMACEs. ومع ذلك، فقد افترض أن استخدام المؤشرات الحيوية المتداولة داخل الرسياق ة هو طريقة ملائمة للتحديد المبكر للأجهزة النشطة الماسية وتشخيصها، لأنها تعكس على نحو أوثق الآليات الدينامية التي تنطوي على تلف الشريان التاجي وإصلاحه. تحديد المؤشرات الحيوية المتداولة التاجية أثناء رأب الأوعية ، مثل عدد الفئات السكانية الفرعية من خلايا السلف أحادية النواة (MPCs) ، وكذلك تركيز الجزيئات القابلة للذوبان التي تعكس الالتهاب ، التصاق الخلية ، وإصلاحها ، يسمح تقييم التطورات المستقبلية وتشخيص MACEs 6 أشهر بعد رأب الأوعية التاجية. وتبرز هذه الطريقة من خلال طبيعتها الانتقالية وأداء أفضل من الدم المحيطي المتداول المؤشرات الحيوية فيما يتعلق بالتنبؤ بالمواد الماسية وتأثير ذلك على تشخيص القلب والأوعية الدموية، والتي يمكن تطبيقها على مخاطر تقسيم المرضى مع مرض الشريان التاجي يخضع لعملية رأب الأوعية.

تم جمع الشريان التاجي والجيوب الأنفية والوريد والدم المحيطي من 52 مريضًا خضعوا لتصوير الأوعية التاجية(الشكل 1)وأظهر وارتفعت نسبة انتشار ارتفاع ضغط الدم وdyslipidemia. في المتابعة السريرية، 11 (21.1%) حدث MACEs بعد 6 أشهر من تصوير الأوعية التاجية: الوفاة (n = 1) ، والذبحة ا...

Watch this Scientific Journal Video about Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty at JoVE.com

Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty

يتأثر تطور الأحداث القلبية الوعائية السلبية الرئيسية ، والتي تؤثر على تشخيص القلب والأوعية الدموية بعد رأب الأوعية التاجية ، بمدى الضرر التاجي وإصلاح الأوعية الدموية. استخدام المؤشرات الحيوية الخلوية التاجية وقابلة للذوبان جديدة، رد الفعل على تلف الأوعية الدموية وإصلاحها، هي مفيدة للتنبؤ تطور MACEs والتكهن.

خلايا بروجكتور التاجية والمؤشرات الحيوية القابلة للذوبان في تشخيص القلب والأوعية الدموية بعد رأب الأوعية التاجية

Major adverse cardiovascular events (MACEs) negatively impact the cardiovascular prognosis of patients undergoing coronary angioplasty due to coronary ...

على الرغم من أن رأب الأوعية يساعد المرضى الذين يعانون من مرض الشريان التاجي، لا يزال من الممكن أن تحدث أحداث القلب والأوعية الدموية بعد العملية. كما يتم الحصول على الـ MPCs والجزيئات القابلة للذوبان من الدورة الدموية التاجية، يمكن ربطها بدرجة تلف الأوعية الدموية وإصلاحها. ولذلك يمكن استخدام MPC التاجية واللذوبان المستويات وسيط لتقدير أحداث القلب والأوعية الدموية والتكهن في المرضى الذين يعانون من مرض الشريان التاجي يخضع للرأب الوعائي التاجي.يمكن أيضاً استخدام الـ MPCs والجزيئات القابلة للذوبان لتقدير المضاعفات والتكهنات التي تحدث في ظل ظروف نقص تروية مختلفة، مثل السكتة الدماغية الإقفارية المتكررة للأطراف. ومن بين الاجراءات سيكون ادواردو فيرا-غوميز واليخاندرو هرنانديز-باتريسيو، فنيان مختبر، وكارين دي لا فيغا-مورينو وكارلوس زامورا-اليمان، طلاب الدراسات العليا. كما ستتظاهر غابرييلا ألكسندرا دومينغيز بيريز، طالبة ماجستير العلوم، وألبرتو ميلشور لوبيز، وهو طالب دكتوراه، وماريو أنطونيو تيليز غونزاليس، وهو متعاون في ماجستير العلوم.في غضون ساعة واحدة من جمع، ونقل ستة ملليلتر من عينة الدم المقطوع إلى أنبوب مخروطي 15 ملليلتر وتمييع الدم بنسبة واحد إلى واحد في برنامج تلفزيوني. إضافة ملليلترين من كثافة التدرج المتوسطة إلى ثلاثة أنابيب الاختبار ونقل بعناية ثلاثة aliquots متساوية من الدم المخفف في كل أنبوب من متوسطة الكثافة الانحدار. فصل الخلايا عن طريق الطرد المركزي ونقل الخلايا في واجهة إلى أنبوب جديد.غسل الخلايا التي تم جمعها مرة واحدة في ملليلترين من برنامج تلفزيوني لمدة ست دقائق، تليها ستة يغسل في ملليلتر من برنامج تلفزيوني جديد لكل غسل لمدة دقيقتين. بعد الغسيل الأخير، إعادة تعليق بيليه الخلية التي تحتوي على MPC في ملليلتر واحد من برنامج تلفزيوني للعد وإضافة واحد مرة عشر مرات إلى الخلايا الست إلى المسمى خمسة أنابيب تدفق المليلتر. بيليه الخلايا عن طريق الطرد المركزي وإضافة 100 ميكرولترات من الأجسام المضادة المناسبة من الفائدة، مخففة في محلول احتضان الأجسام المضادة لكل أنبوب.خلط بلطف الخلايا مع كل كوكتيل الأجسام المضادة المضافة لمدة 10 ثوان، ووضع العينات في أربع درجات مئوية، محمية من الضوء، لمدة 20 دقيقة. في نهاية الحضانة، الطرد المركزي العينات وإعادة تعليق الكريات في 500 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني تكملها اثنين من ملليمولار EDTA. باستخدام عناصر التحكم المتطابقة مع الأيزوتايب لإعداد تلطيخ الخلفية ، وتحليل العينات حسب قياس التدفق وفقًا للبروتوكولات القياسية ، والبوابات على الخلايا الليمفاوية في مؤامرة مبعثرة إلى الأمام من خلال الجانب ، لاستبعاد الحبيبات الحبيبية المتبقية ، والحطام الخلوي ، والجسيمات الأخرى.تعيين بوابة تحتوي على عدد كبير من الخلايا مع CD45-إيجابية CD34-النمط الظاهري إيجابي. بعد ذلك ، استخدم CD45 -positive CD34-positive gate لتحديد كيناز إدراج مستقبلات المجال CD133 أو خلايا CD184 إيجابية. ويمكن بعد ذلك تحديد الفئات الفرعية التابعة للـ MPC من خلال علامات سطح الخلايا المحددة الخاصة بها، كما يمكن الإبلاغ عنها كنسبة مئوية من الأحداث المسورة.لتحديد تركيز العلامات الحيوية القابلة للذوبان في عينات الدم التي تم جمعها ، أولاً ، قم بغسل لوحات ELISA المغلفة مسبقًا مرتين مع مخزن الغسيل الذي توفره مجموعة الأدوات وتسمية أنابيب القياسية والعينة والتحكم. جهاز طرد مركزي عينة الدم لفصل مكونات الدم و aliquot البلازما في أنابيب العينة. نقل المعايير والعينات والضوابط إلى الآبار المناسبة وختم واحتضان لوحة في 37 درجة مئوية لمدة 90 دقيقة.في نهاية الحضانة، والتخلص من محتويات البئر وإضافة الأجسام المضادة للكشف عن البيوتين إلى كل بئر. بعد فترة حضانة لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية، تخلص من محتويات اللوحة واغسل الآبار ثلاث مرات مع عازلة غسيل طازجة لكل غسل. بعد الغسيل الأخير، احتضان العينات مع Streptavidin حل العمل لمدة 30 دقيقة في 37 درجة مئوية تليها ثلاثة يغسل، كما هو موضح.بعد الغسيل الأخير، علاج العينات مع الركيزة رباعي الميثيل بنزين لمدة 30 دقيقة في 37 درجة مئوية. عندما يتطور اللون، إضافة وقف الحل من عدة وقراءة امتصاص الكثافة البصرية في قارئ ELISA microplate. لتحديد تركيز عامل نخر الورم ألفا، وinterleukin-1 بيتا، وذلك باستخدام متعدد المثبط المناعي، وتسمية معيار، عينة، والتحكم في أنابيب ودوامة قوارير حبة المغناطيسي لمدة 30 ثانية.إضافة الخرز إلى الآبار المناسبة من لوحة المقايسة متعددة. عندما تم إضافة كل من الخرز، إدراج بإحكام غسالة لوحة مغناطيسية المحمولة، وانتظر دقيقتين للخرز لتتراكم على الجزء السفلي من كل بئر، قبل عكس بسرعة كل من غسالة لوحة مغناطيسية المحمولة، وتجميع لوحة على حاوية النفايات. بعد ذلك، إضافة 150 ميكرولترات من الغسيل العازلة لكل بئر والانتظار 30 ثانية للسماح للخرز تتراكم على الجزء السفلي.تجاهل محتويات مرة أخرى كما أظهرت للتو وإضافة 25 ميكرولترات من المخزن المؤقت الشامل و 25 ميكرولترات من المعايير المعدة والعينات والضوابط. ختم لوحة لاحتضان ما لا يقل عن 60 دقيقة، محمية من الضوء في درجة حرارة الغرفة، و 500 التناوب في الدقيقة الواحدة. في نهاية الحضانة، إضافة 150 ميكرولترات من العازلة غسل إلى كل بئر والسماح للخرز لتسوية لمدة 30 ثانية.ثم، استخدام غسالة لوحة لتجاهل محتويات البئر وتسمية كل بئر مع 25 ميكرولترات من الكشف عن خليط الأجسام المضادة تليها اثنين من يغسل، كما هو موضح. بعد الغسيل الثاني، احتضان العينات مع 25 ميكرولترات من Streptavidin PE لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. في نهاية الحضانة، إضافة 120 ميكرولترات من قراءة العازلة لكل بئر وختم لوحة لاحتضان لمدة خمس دقائق، محمية من الضوء في درجة حرارة الغرفة، لمدة 500 التناوب في الدقيقة الواحدة.ثم، تحميل لوحة على قارئ مقايسة متعددة وضبط المعلمات القراءة وفقا لكل تحليل. تم جمع الشريان التاجي والزهرة والجيوب الأنفية والدم المحيطي من 52 مريضًا خضعوا لتصوير الأوعية التاجية وأظهروا انتشارًا مرتفعًا لارتفاع ضغط الدم وعسر الدم. وكان التركيز التاجي الأساسي لمعظم MPCs أقل بكثير في المرضى الذين طوروا الأحداث القلبية الوعائية السلبية الرئيسية، مع انخفاض أكبر في السكان الفرعية MPC CD34 إيجابية CD133-positive، وD45-positive، CD34-positive، CD133-positive، CD184-positive.وبالمثل، كان المرضى الذين طوروا الأحداث القلبية الوعائية السلبية الرئيسية خط أساس زيادة في كميات التاجية من ICAM-1 القابل للذوبان وكميات أقل من البروتين metallomatrix 9. أظهرت الـ MPCs التاجية والذوبان ICAM-1 قدرة التكهن لبقاء القلب والأوعية الدموية السلبية الرئيسية خالية من الحدث. ومن المثير للاهتمام، التعبير عن عامل نخر الورم ألفا أظهرت الاختلافات وفقا لوقت القياس وموقع أخذ العينات التاجية على أساس مقارنة مناطق مختلفة من التجويف في الشريان التاجي نفسه، وذلك باستخدام الموجات فوق الصوتية داخل الأوعية.أثناء عزل MPC، تأكد من نقل الدم إلى تدرج الكثافة، وجمع الخلايا من الواجهة بعد الطرد المركزي بعناية. الدوامة الدورية تمنع حبة هطول الأمطار واستخدام غسالة لوحة مغناطيسية يساعد على الحفاظ على الخرز داخل الآبار أثناء غسل. إن الـMPCs التاجية والجزيئات القابلة للذوبان مفيدة لتحديد مخاطر أحداث القلب والأوعية الدموية أثناء المتابعة بعد رأب الأوعية، مما يساعد في توفير الوقاية الثانوية للأفراد المعرضين للخطر لأن هذه التقنية تعكس العملية الفسيولوجية التي تحدث أثناء توقف الحل، وقد يكون من المفيد للظروف التي تلعب فيها بيولوجيا الأوعية الدموية دورًا.

Research

JoVE Journal

Medicine

Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

الشريان التاجي ربط Intramyocardial وحقن الفئران في نموذج من احتشاء

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo.  With the advent of genetic modifications to ...

Modified Technique for Coronary Artery Ligation in Mice

تقنية لربط تعديل الشريان التاجي في الفئران

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI ...

Retrograde Perfusion and Filling of Mouse Coronary Vasculature as Preparation for Micro Computed Tomography Imaging

إلى الوراء الإرواء وملء الأوعية الدموية التاجية الفأر كما التحضير للتصوير المقطعي بالكمبيوتر مايكرو

Visualization of the vasculature is becoming increasingly important for understanding many different disease states. While several techniques exist for ...

Permanent Ligation of the Left Anterior Descending Coronary Artery in Mice: A Model of Post-myocardial Infarction Remodelling and Heart Failure

ربط دائم في الشريان التاجي الأيسر الأمامي تنازلي في الفئران: نموذج ما بعد إعادة تشكيل عضلة القلب احتشاء وقصور القلب

Heart failure is a syndrome in which the heart fails to pump blood at a rate commensurate with cellular oxygen requirements at rest or during stress. It ...

Ultrasound Based Assessment of Coronary Artery Flow and Coronary Flow Reserve Using the Pressure Overload Model in Mice

تقييم الموجات فوق الصوتية وبناء من الشريان التاجي تدفق وتدفق التاجي الاحتياطي باستخدام نموذج الزائد الضغط في الفئران

Transthoracic Doppler echocardiography (TTDE) is a clinically useful, noninvasive tool for studying coronary artery flow velocity and coronary flow ...

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery (ALCAPA)

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery ALCAPA

مباشر إعادة زرع الشريان التاجي الأيسر إلى الشريان الأبهر في البالغين الذين يعانون الشاذة منشأ الشريان التاجي الأيسر من الشريان الرئوي (ALCAPA)

Anomalous origin of the left coronary artery from the pulmonary artery (ALCAPA) is a rare congenital anomaly which is one of leading causes of myocardial ...

Identifying Coronary Artery Calcification on Non-gated Computed Tomography Scans

تحديد تكلس الشريان التاجي على بوابات غير المحسوبة التصوير المقطعي بالأشعة

Coronary artery calcification (CAC) provides an objective measure of coronary artery disease and can readily be identified on non-gated computed ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

تقييم احتياطي التدفق التاجي بعد إعادة ضخ الإقفارية عضلة القلب في الفئران

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

In Vitro Model of Coronary Angiogenesis

في المختبر نموذج الأوعية التاجية

Here, we describe an in vitro culture assay to study coronary angiogenesis. Coronary vessels feed the heart muscle and are of clinical importance. Defects ...

Novel Percutaneous Approach for Deployment of 3D Printed Coronary Stenosis Implants in Swine Models of Ischemic Heart Disease

رواية عن طريق الجلد نهج لنشر 3D المطبوعة يزرع تضيق الشريان التاجي في نماذج الخنازير من أمراض القلب الإقفارية

Minimally invasive methods for creating models of focal coronary narrowing in large animals are challenging. Rapid prototyping using three-dimensionally ...