Name: coronary progenitor cells and soluble biomarkers in cardiovascular prognosis after coronary angioplasty
Uploaded: 2020-01-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty at JoVE.com

Forfatterne takker støtten fra Institutional Program E015; og Fondo Sektoriel FOSSIS-CONACYT, SALUD-2014-1-233947.

Denne protokol er i overensstemmelse med de institutionelle retningslinjer fra den etiske komité for menneskelig forskning.
1. Koronar angiografi, ultralyd, og blodprøvetagning
<ol><li>Anmod om kliniske og demografiske oplysninger på basisbasis før koronarintervention. Indsamle den enkeltes data: alder, køn, nuværende rygning status, body mass index (BMI), højt blodtryk, dyslipidæmi, diabetes mellitus, medicin, og indikationen for nuværende koronar angiografi.</li>
	<li>Udfør koron...

<ol>
	<li>Cassar, A., Holmes, D. R., Rihal, C. S., Gersh, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+coronary+artery+disease:+diagnosis+and+management.">Chronic coronary artery disease: diagnosis and management.</a> Mayo Clinic Proceedings. 84 (12), 1130-1146 (2009).</li><li>Regueiro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mobilization+of+endothelial+progenitor+cells+in+acute+cardiovascular+events+in+the+PROCELL+study:+time-course+after+acute+myocardial+infarction+and+stroke.">Mobilization of endothelial progenitor cells in acute cardiovascular events in the PROCELL study: time-course after acute myocardial infarction and stroke.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 80, 146-155 (2015).</li><li>Sen, S., McDonald, S. P., Coates, P. T., Bonder, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells:+novel+biomarker+and+promising+cell+therapy+for+cardiovascular+disease.">Endothelial progenitor cells: novel biomarker and promising cell therapy for cardiovascular disease.</a> Clinical Science (Lond). 120 (7), 263-283 (2011).</li><li>Samman Tahhan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progenitor+Cells+and+Clinical+Outcomes+in+Patients+With+Acute+Coronary+Syndromes.">Progenitor Cells and Clinical Outcomes in Patients With Acute Coronary Syndromes.</a> Circulation Research. 122 (11), 1565-1575 (2018).</li><li>Tomuli&#263;, V., Gobi&#263;, D., Luli&#263;, D., &#381;idan, D., Zaputovi&#263;, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soluble+adhesion+molecules+in+patients+with+acute+coronary+syndrome+after+percutaneous+coronary+intervention+with+drug-coated+balloon,+drug-eluting+stent+or+bare+metal+stent.">Soluble adhesion molecules in patients with acute coronary syndrome after percutaneous coronary intervention with drug-coated balloon, drug-eluting stent or bare metal stent.</a> Medical Hypotheses. 95, 20-23 (2016).</li><li>Jaumdally, R., Varma, C., Macfadyen, R. J., Lip, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+sinus+blood+sampling:+an+insight+into+local+cardiac+pathophysiology+and+treatment?.">Coronary sinus blood sampling: an insight into local cardiac pathophysiology and treatment?.</a> European Heart Journal. 28 (8), 929-940 (2007).</li><li>Kremastinos, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracoronary+cyclic-GMP+and+cyclic-AMP+during+percutaneous+transluminal+coronary+angioplasty.">Intracoronary cyclic-GMP and cyclic-AMP during percutaneous transluminal coronary angioplasty.</a> International Journal of Cardiology. 53 (3), 227-232 (1996).</li><li>Karube, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+cytokine+levels+by+coronary+sinus+blood+sampling+during+cardiac+surgery+with+cardiopulmonary+bypass.">Measurement of cytokine levels by coronary sinus blood sampling during cardiac surgery with cardiopulmonary bypass.</a> American Society for Artificial Internal Organs Journal. 42 (5), M787-M791 (1996).</li><li>Truong, Q. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+sinus+biomarker+sampling+compared+to+peripheral+venous+blood+for+predicting+outcomes+in+patients+with+severe+heart+failure+undergoing+cardiac+resynchronization+therapy:+the+BIOCRT+study.">Coronary sinus biomarker sampling compared to peripheral venous blood for predicting outcomes in patients with severe heart failure undergoing cardiac resynchronization therapy: the BIOCRT study.</a> Heart Rhythm. 11 (12), 2167-2175 (2014).</li><li>Su&#225;rez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+circulating+mononuclear+progenitor+cells+and+soluble+biomarkers+in+the+cardiovascular+prognosis+after+coronary+angioplasty.">Coronary circulating mononuclear progenitor cells and soluble biomarkers in the cardiovascular prognosis after coronary angioplasty.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23 (7), 4844-4849 (2019).</li><li>Su&#225;rez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relation+of+Coronary+Artery+Lumen+with+Baseline,+Post-angioplasty+Coronary+Circulating+Pro-Inflammatory+Cytokines+in+Patients+with+Coronary+Artery+Disease.">Relation of Coronary Artery Lumen with Baseline, Post-angioplasty Coronary Circulating Pro-Inflammatory Cytokines in Patients with Coronary Artery Disease.</a> Angiology Open Access. 7, 01 (2019).</li><li>Schmidt-Lucke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+circulating+endothelial+progenitor+cells+using+the+modified+ISHAGE+protocol.">Quantification of circulating endothelial progenitor cells using the modified ISHAGE protocol.</a> PLoS One. 5 (1), e13790 (2010).</li><li>Moyer, C. F., Sajuthi, D., Tulli, H., Williams, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+IL-1+alpha+and+IL-1+beta+by+arterial+cells+in+atherosclerosis.">Synthesis of IL-1 alpha and IL-1 beta by arterial cells in atherosclerosis.</a> American Journal of Pathology. 138 (4), 951-960 (1991).</li><li>Morales-Portano, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Echocardiographic+measurements+of+epicardial+adipose+tissue+and+comparative+ability+to+predict+adverse+cardiovascular+outcomes+in+patients+with+coronary+artery+disease.">Echocardiographic measurements of epicardial adipose tissue and comparative ability to predict adverse cardiovascular outcomes in patients with coronary artery disease.</a> International Journal of Cardiovascular Imaging. 34 (9), 1429-1437 (2018).</li><li>Huang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells+correlated+with+oxidative+stress+after+mild+traumatic+brain+injury.">Endothelial progenitor cells correlated with oxidative stress after mild traumatic brain injury.</a> Yonsei Medical Journal. 58 (5), 1012-1017 (2017).</li></ol>

Blodtapning fra de berørte koronararterie kan være svært. Nogle gange er koronararterien knap nok tilgængelig. I så fald kan prøveudtagning fra venøs sinus være et alternativ. Vi udførte valideringstest, der sammenlignede cirkulerende biomarkører i koronararterie vs venøs sinus, uden væsentlige forskelle. Udførelsen af cirkulerende biomarkører blev dog kun valideret for koronarprøvetagning. Derfor er udførelsen af biomarkører opnået fra venøs sinus er endnu ikke undersøgt.
...

Koronar angioplastik og stening repræsenterer en bjærgning procedure for patienter med koronararteriesygdom (CAD). Men, store bivirkninger hjerte-kar-hændelser (MacEs), herunder hjerte-kar-død, myokardieinfarkt, koronar restenose, og episoder af angina eller dekompensere hjertesvigt, kan forekomme måneder efter koronar intervention, hvilket fik uforudsete besøg på hospitalet. MacEs er almindelige på verdensplan, og deres morbi-dødelighed er høj1.
Koronar iskæmisk skade inducerer tidlig vaskulær respons og reparative mekanismer, der involverer mobilisering af MpCs på grund af deres differentiering evne og / eller angio-reparative potentiale, samt produktion af opløselige molekyler som intercellulære vedhæftning molekyler (ICAMs), matrix metalloproteinases (MMPs), og reaktiv ilt ilt, arter afspejler celle vedhæftning, væv remodeling, og oxidativ stress. Selv om iboende vaskulære træk som plaque egenskaber og koronararterie kompleksitet er blevet brugt til at forudsige MacEs, nogle undersøgelser har antydet, at biomarkører relateret til mekanismerne for skade og reparation forekommer i koronar endothelium kunne være meget nyttigt for tidlig identifikation og prognose af hjerte-kar-hændelser hos patienter med CAD forelagt koronar angioplastik2,3,4,5.
Fortsat interesse i at forstå de mekanismer, der ligger til grund for CAD-skade og reparation, har motiveret efterforskere til at studere intrakoronarcirkulerende biomarkører, fordi koronarprøvetagning i højere grad afspejler vaskulære skader og reparation6. Men, karakterisering af koronar biomarkører i humane undersøgelser har været knappe7,8,9. Formålet med denne undersøgelse var derfor at beskrive en metode til bestemmelse af mængden af koronarcirkulerende MpCs og opløselige molekyler, der afspejler både vaskulær skade og reparation, og at vise, om disse biomarkører er forbundet med MacEs og den kliniske prognose for CAD-patienter, der gennemgik koronar angioplastik. Denne metode er baseret på anvendelse af vaskulære-relaterede, cirkulerende MpCs og opløselige molekyler opnået ved prøveudtagning steder tættest på fartøjets skader. Det kan også være nyttigt for kliniske undersøgelser for underekstremitetisk, slagtilfælde, vaskulitis, venøs trombose, og andre skader, der involverer vaskulær skade og reparation.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10735086001</td>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA) as a buffering agent, stabilizer, standard and for blending.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calibration Beads</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-093-607</td>
			<td>MACQuant calibration beads are supplied in aqueous solution containing 0.05% sodium azide. 3.5 ml for up to 100 tests</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD133/1 (AC133)-PE</td>
			<td>Milteny Biotec / MACS</td>
			<td>#130-080-801</td>
			<td>Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD184 (CXCR4)-PE-VIO770</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-103-798</td>
			<td>Monoclonal, Isotype recombinant human IgG1, conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-093-601</td>
			<td>Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD34-FITC</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-081-001</td>
			<td>The monoclonal antibody clone AC136 detecs a class III epitope of the CD34</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45- VioBlue</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-092-880</td>
			<td>Monoclonal CD45 Antibody, human conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Tubes</td>
			<td>Thermo SCIENTIFIC</td>
			<td>#339651</td>
			<td>15ml conical centrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytometry Tubes</td>
			<td>FALCON Corning Brand</td>
			<td>#352052</td>
			<td>5 mL Polystyrene Round-Bottom Tube. 12x75 style. Sterile.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>#161-0729</td>
			<td>Heavy metals, (as Pb) &#60;10ppm, Fe &#60;0.01%, As &#60;1ppm, Insolubles &#60;0.005%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Improved Neubauer</td>
			<td>Without brand</td>
			<td>Without catalog number</td>
			<td>Hemocytometer for cell counting. (range 0.1000mm, 0.0025mm2)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2 EDTA Blood Collection Tubes</td>
			<td>BD Vacutainer</td>
			<td>#367863</td>
			<td>Lilac plastic vacutainer tube (K2E) 10.8mg, 6 mL.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lymphoprep</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>01-63-12-002-A</td>
			<td>Sterile and checked on the presence of endotoxins. Density: 1.077&#177;0.001g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>#SZBF0920V</td>
			<td>Fixation of biological samples, (powder, 95%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Transfer 1,3mL</td>
			<td>CRM Globe</td>
			<td>PF1016, PF1015</td>
			<td>The transfer pipette is a tool that facilitates liquid transfer with greater accuracy.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test Tubes</td>
			<td>KIMBLE CHASE</td>
			<td>45060 13100</td>
			<td>Heat-resistant test tubes. SIZE/CAP 13 x 100 mm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

coronary progenitor cells and soluble biomarkers in cardiovascular prognosis after coronary angioplasty

Større bivirkninger hjerte-kar-hændelser (MacEs) har en negativ indvirkning på den kardiovaskulære prognose hos patienter, der gennemgår koronarangioplastik på grund af koronarisk iskæmisk skade. Omfanget af koronarskader og mekanismerne i vaskulær reparation er faktorer, der påvirker den fremtidige udvikling af MacEs. Iboende vaskulære funktioner som plak egenskaber og koronararterie kompleksitet har vist prognose oplysninger for MacEs. Brugen af intrakoronarcirkulerende biomarkører er imidlertid blevet postuleret som en bekvem metode til tidlig identifikation og prognose for MacEs, da de i højere grad afspejler dynamiske mekanismer, der involverer koronarskader og reparation. Bestemmelse af koronar cirkulerende biomarkører under angioplastik, såsom antallet af subpopulationer af mononukleare stamceller celler (MPCs) samt koncentrationen af opløselige molekyler, der afspejler inflammation, cellevedhæftning og reparation, giver mulighed for vurdering af den fremtidige udvikling og prognose for MacEs seks måneder efter koronarangioplasty. Denne metode fremhæves af dens translationelle karakter og bedre ydeevne end perifere blod cirkulerende biomarkører vedrørende forudsigelse af MacEs og dens virkning på den kardiovaskulære prognose, som kan anvendes til risikostratificering af patienter med koronararteriesygdom, der gennemgår angioplastik.

Koronar, venøs sinus og perifert blod blev indsamlet fra 52 patienter, der gennemgik koronarangiografi (figur 1) og viste en høj forekomst af hypertension og dyslipidæmi. Ved den kliniske opfølgning var 11 (21,1 %) MacEs fandt sted 6 måneder efter koronar angiografi: død (n = 1), angina kræver hospitalsdeltagelse (n = 6), myokardieinfarkt (n = 2), og / eller tegn på hjertesvigt (n = 4).
Base...

Watch this Scientific Journal Video about Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty at JoVE.com

Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty

Udvikling af større bivirkninger hjerte-kar-hændelser, som påvirker hjerte-kar-prognose efter koronar angioplastik, er påvirket af omfanget af koronar skader og vaskulær reparation. Brugen af nye koronar cellulære og opløselige biomarkører, reaktiv til vaskulære skader og reparation, er nyttige til at forudsige udviklingen af MacEs og prognose.

Koronar progenitor celler og opløselige biomarkører i hjerte-kar-prognose efter koronar Angioplasty

Major adverse cardiovascular events (MACEs) negatively impact the cardiovascular prognosis of patients undergoing coronary angioplasty due to coronary ...

Selv om angioplastik hjælper patienter med koronararteriesygdom, hjerte-kar-hændelser kan stadig forekomme efter proceduren. Som MPCs og opløselige molekyler er fremstillet af koronar cirkulation, kan de korreleres til graden af vaskulære skader og reparation. Koronar MPC og opløselige mediator niveauer kan derfor bruges til at vurdere kardiovaskulære hændelser og prognose hos patienter med koronararteriesygdom gennemgår koronar angioplastik.MPC og opløselige molekyler kan også bruges til at vurdere komplikationer og prognoser, der opstår under forskellige iskæmiske indstillinger, såsom tilbagevendende lemmer iskæmiær slagtilfælde. Demonstration af proceduren vil være Eduardo Vera-Gomez og Alejandro Hernandez-Patricio, lab teknikere, og Karen De La Vega-Moreno og Carlos Zamora-Aleman, undergrad studerende. Også demonstrere vil være Gabriela Alexandra Dominguez-Perez, en Master's of Science studerende, Alberto Melchor-Lopez, en ph.d.-studerende, og Mario Antonio Tellez-Gonzalez, en Master's of Science samarbejdspartner.Inden for en time efter indsamlingen overføres seks milliliter af den høstede blodprøve til et konisk rør på 15 milliliter, og blodet fortyndes i et forhold på 1-1 i PBS. Der tilsættes to milliliter densitetsgradientmedium til tre reagensglas, og der overføres omhyggeligt tre lige aliquoter fortyndet blod ind i hvert rør af tæthedsgradientmedium. Cellerne adskilles ved centrifugering, og cellerne ved grænsefladen overføres til et nyt rør.De indsamlede celler vaskes én gang i to milliliter PBS i seks minutter efterfulgt af seks skiver i to milliliter frisk PBS pr. vask i to minutter. Efter den sidste vask suspenderes den MPC-holdige cellepellet igen i en milliliter PBS til tælling, og der tilsættes en gang ti til de seks celler til mærket fem milliliterflowcytomeryrør. Cellerne pellets ved centrifugering, og der tilsættes 100 mikroliter af det relevante relevante antistof, fortyndet i antistofinkubationsopløsning på hvert rør.Bland forsigtigt cellerne med hver tilsat antistofcocktail i 10 sekunder, og placer prøverne ved fire grader Celsius, beskyttet mod lys, i 20 minutter. Ved inkubationens afslutning centrifugeres prøverne og pellets i 500 mikroliter PBS igen suppleret med 2 millimolar EDTA. Brug isotype-matchede kontroller til at oprette baggrunden farvning, analysere prøverne ved flow cytometri i henhold til standard protokoller, gating på lymfocytter i en fremad for side scatter plot, at udelukke resterende granulocytter, cellulære snavs, og andre partikler.Indstil en port til at indeholde et stort antal celler med en CD45-positiv CD34-positiv fænotype. Brug derefter cd45-positive CD34-positive port til at vælge for kinase indsætte domænereceptor CD133 eller CD184-positive celler. MPC-delpopulationerne kan derefter identificeres ved hjælp af deres specifikke celleoverflademarkører og rapporteres som procentdelen af indhegnede hændelser.For at bestemme koncentrationen af opløselige biomarkører i de indsamlede blodprøver vaskes først de relevante forbelagte ELISA-plader to gange med den kit-forfølgende vaskebuffer og mærke standard-, prøve- og kontrolrørene. Centrifuge blodprøven for at adskille blodkomponenterne og aliquot plasmaet i prøveglassene. Overfør standarder, prøver og kontroller til de relevante brønde og forsegle og inkubere pladen ved 37 grader Celsius i 90 minutter.Ved slutningen af inkubationen kasseres brøndindholdet og tilsættes biotindetektionsantistoffet til hver brønd. Efter en times inkubation ved 37 grader Celsius kasseres pladeindholdet og vaskes brøndene tre gange med frisk vaskepude pr. vask. Efter den sidste vask inkuberes prøverne med Streptavidin arbejdsopløsning i 30 minutter ved 37 grader Celsius efterfulgt af tre vaske, som påvist.Efter den sidste vask behandles prøverne med tetramethylbenzidin underlag i 30 minutter ved 37 grader Celsius. Når farven udvikler sig, tilsættes stopopløsning fra sættet og aflæs den optiske tæthedsabsorberende i en elisa-læser med mikroplader. At bestemme koncentrationen af tumor nekrose faktor alpha, og interleukin-1 beta, ved hjælp af immunmagnetisk multiplexing, mærke standard, prøve, og kontrol rør og vortex den magnetiske perle hætteglas i 30 sekunder.Tilføj perler til de relevante brønde af multiplexing assay plade. Når alle perlerne er blevet tilføjet, skal du indsætte den håndholdte magnetiske pladevasker sikkert og vente to minutter på, at perlerne ophobes i bunden af hver brønd, før du hurtigt vender både den håndholdte magnetiske pladevasker og pladesamlingen over en affaldsbeholder. Dernæst tilsættes 150 mikroliter vaskebuffer til hver brønd og vent 30 sekunder for at tillade perlerne at akkumulere på bunden.Kassér indholdet igen som netop påvist, og tilsæt 25 mikroliter af universalanalysebuffer og 25 mikroliter af de forberedte standarder, prøver og kontroller. Pladen forsegles i mindst 60 minutters inkubation, beskyttet mod lys ved stuetemperatur, og 500 omdrejninger i minuttet. I slutningen af inkubationen tilsættes 150 mikroliter vaskebuffer til hver brønd og lad perlerne slå sig ned i 30 sekunder.Brug derefter pladevaskeren til at kassere brøndindholdet og mærke hver brønd med 25 mikroliter af detektionsantistofblanding efterfulgt af to vaske, som påvist. Efter den anden vask inkuberes prøverne med 25 mikroliter Streptavidin PE i 30 minutter ved stuetemperatur. Ved inkubationens afslutning tilsættes der 120 mikroliter af læsebufferen til hver brønd, og pladen forsegles i en fem minutters inkubation, beskyttet mod lys ved stuetemperatur, i 500 rotationer i minuttet.Derefter indlæses pladen på en multiplexing analyselæser, og juster aflæsningsparametrene i henhold til hver analysand. Koronar, venus-sinus, og perifert blod blev indsamlet fra 52 patienter, der gennemgik koronar angiografi og viste en høj forekomst af hypertension og dyslipidæmi. Baseline koronarkoncentrationen af de fleste MPC'er var signifikant lavere hos patienter, der udviklede store uønskede kardiovaskulære hændelser, med et større fald i MPC-delpopulationer CD34-positive CD133-positive og CD45-positive, CD34-positive, CD133-positive, CD184-positive.På samme måde havde patienter, som udviklede større uønskede kardiovaskulære hændelser, en øget baseline i koronarmængder af opløselige ICAM-1 og lavere mængder metallomatrixprotein 9. Koronar MPCs og opløselige ICAM-1 viste en prognostisk evne til større negative hjerte-kar-hændelsesfri overlevelse. Interessant, udtrykket af tumor nekrose faktor alfa demonstreret variationer i henhold til tidspunktet for måling og placeringen af koronar prøvetagning baseret på en sammenligning af forskellige lumen områder på samme koronararterie, ved hjælp af intravaskulær ultralyd.Under MPC isolation, skal du sørge for at overføre blodet på tætheden gradient, og at indsamle cellerne fra grænsefladen efter centrifugering omhyggeligt. Periodisk vortexing forhindrer perle nedbør og ved hjælp af en magnetisk plade vaskemaskine hjælper med at holde perlerne inde i brøndene under vasker. Koronar MPC og opløselige molekyler er nyttige til stratificering af risikoen for hjerte-kar-hændelser under opfølgning efter angioplastik, bistå i levering af sekundære forebyggelser til høj-risiko individer, da denne teknik afspejler den patofysiologiske proces, der opstår under ophør af opløsningen, kan det være nyttigt for betingelser, hvor vaskulær biologi spiller en rolle.

Research

JoVE Journal

Medicine

Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo.  With the advent of genetic modifications to ...

Modified Technique for Coronary Artery Ligation in Mice

Modificeret Teknik for Koronararterie Ligering i mus

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI ...

Retrograde Perfusion and Filling of Mouse Coronary Vasculature as Preparation for Micro Computed Tomography Imaging

Retrograd perfusion og påfyldning af Mouse koronar kar som forberedelse til Micro Computed Tomography Imaging

Visualization of the vasculature is becoming increasingly important for understanding many different disease states. While several techniques exist for ...

Permanent Ligation of the Left Anterior Descending Coronary Artery in Mice: A Model of Post-myocardial Infarction Remodelling and Heart Failure

Permanent ligering af venstre forreste nedadgående kranspulsåre i mus: En Model af Post-myokardieinfarkt Ombygning og hjertesvigt

Heart failure is a syndrome in which the heart fails to pump blood at a rate commensurate with cellular oxygen requirements at rest or during stress. It ...

Ultrasound Based Assessment of Coronary Artery Flow and Coronary Flow Reserve Using the Pressure Overload Model in Mice

Ultralyd funderet vurdering af koronararterie Flow og koronar Flow Reserve Brug af trykoverbelastning Model i mus

Transthoracic Doppler echocardiography (TTDE) is a clinically useful, noninvasive tool for studying coronary artery flow velocity and coronary flow ...

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery (ALCAPA)

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery ALCAPA

Direkte Re-implantation af venstre koronararterie i aorta i Voksne med Anomalous Oprindelse af venstre koronararterie fra lungepulsåren (ALCAPA)

Anomalous origin of the left coronary artery from the pulmonary artery (ALCAPA) is a rare congenital anomaly which is one of leading causes of myocardial ...

Identifying Coronary Artery Calcification on Non-gated Computed Tomography Scans

At identificere koronararterie forkalkning på beregnet ikke-gated tomografi scanninger

Coronary artery calcification (CAC) provides an objective measure of coronary artery disease and can readily be identified on non-gated computed ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Evaluering af koronar flow reserve efter myokardieiskæmi reperfusion hos rotter

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

In Vitro Model of Coronary Angiogenesis

In Vitro Model af koronar Angiogenese

Here, we describe an in vitro culture assay to study coronary angiogenesis. Coronary vessels feed the heart muscle and are of clinical importance. Defects ...

Novel Percutaneous Approach for Deployment of 3D Printed Coronary Stenosis Implants in Swine Models of Ischemic Heart Disease

Novel Perkutan tilgang til indsættelse af 3D-trykte koronar stenose implantater i svin Modeller af iskæmisk hjertesygdom

Minimally invasive methods for creating models of focal coronary narrowing in large animals are challenging. Rapid prototyping using three-dimensionally ...