Name: coronary progenitor cells and soluble biomarkers in cardiovascular prognosis after coronary angioplasty
Uploaded: 2020-01-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty at JoVE.com

De auteurs danken de steun van institutioneel programma E015; en Fondo Sectorial FOSSIS-CONACYT, SALUD-2014-1-233947.

Dit protocol voldoet aan de institutionele richtlijnen van de Human Research Ethics Committee.
1. Coronaire angiografie, echografie en bloedafname
<ol><li>Vraag basisklinische en demografische informatie aan voor coronaire interventie. Verzamel de gegevens van het individu: leeftijd, geslacht, huidige rookstatus, body mass index (BMI), hoge bloeddruk, dyslipidemie, diabetes mellitus, medicijnen en de indicatie voor de huidige coronaire angiografie.</li>
	<li>Voer coronaire angiografie uit do...

<ol>
	<li>Cassar, A., Holmes, D. R., Rihal, C. S., Gersh, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+coronary+artery+disease:+diagnosis+and+management.">Chronic coronary artery disease: diagnosis and management.</a> Mayo Clinic Proceedings. 84 (12), 1130-1146 (2009).</li><li>Regueiro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mobilization+of+endothelial+progenitor+cells+in+acute+cardiovascular+events+in+the+PROCELL+study:+time-course+after+acute+myocardial+infarction+and+stroke.">Mobilization of endothelial progenitor cells in acute cardiovascular events in the PROCELL study: time-course after acute myocardial infarction and stroke.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 80, 146-155 (2015).</li><li>Sen, S., McDonald, S. P., Coates, P. T., Bonder, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells:+novel+biomarker+and+promising+cell+therapy+for+cardiovascular+disease.">Endothelial progenitor cells: novel biomarker and promising cell therapy for cardiovascular disease.</a> Clinical Science (Lond). 120 (7), 263-283 (2011).</li><li>Samman Tahhan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progenitor+Cells+and+Clinical+Outcomes+in+Patients+With+Acute+Coronary+Syndromes.">Progenitor Cells and Clinical Outcomes in Patients With Acute Coronary Syndromes.</a> Circulation Research. 122 (11), 1565-1575 (2018).</li><li>Tomuli&#263;, V., Gobi&#263;, D., Luli&#263;, D., &#381;idan, D., Zaputovi&#263;, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soluble+adhesion+molecules+in+patients+with+acute+coronary+syndrome+after+percutaneous+coronary+intervention+with+drug-coated+balloon,+drug-eluting+stent+or+bare+metal+stent.">Soluble adhesion molecules in patients with acute coronary syndrome after percutaneous coronary intervention with drug-coated balloon, drug-eluting stent or bare metal stent.</a> Medical Hypotheses. 95, 20-23 (2016).</li><li>Jaumdally, R., Varma, C., Macfadyen, R. J., Lip, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+sinus+blood+sampling:+an+insight+into+local+cardiac+pathophysiology+and+treatment?.">Coronary sinus blood sampling: an insight into local cardiac pathophysiology and treatment?.</a> European Heart Journal. 28 (8), 929-940 (2007).</li><li>Kremastinos, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracoronary+cyclic-GMP+and+cyclic-AMP+during+percutaneous+transluminal+coronary+angioplasty.">Intracoronary cyclic-GMP and cyclic-AMP during percutaneous transluminal coronary angioplasty.</a> International Journal of Cardiology. 53 (3), 227-232 (1996).</li><li>Karube, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+cytokine+levels+by+coronary+sinus+blood+sampling+during+cardiac+surgery+with+cardiopulmonary+bypass.">Measurement of cytokine levels by coronary sinus blood sampling during cardiac surgery with cardiopulmonary bypass.</a> American Society for Artificial Internal Organs Journal. 42 (5), M787-M791 (1996).</li><li>Truong, Q. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+sinus+biomarker+sampling+compared+to+peripheral+venous+blood+for+predicting+outcomes+in+patients+with+severe+heart+failure+undergoing+cardiac+resynchronization+therapy:+the+BIOCRT+study.">Coronary sinus biomarker sampling compared to peripheral venous blood for predicting outcomes in patients with severe heart failure undergoing cardiac resynchronization therapy: the BIOCRT study.</a> Heart Rhythm. 11 (12), 2167-2175 (2014).</li><li>Su&#225;rez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+circulating+mononuclear+progenitor+cells+and+soluble+biomarkers+in+the+cardiovascular+prognosis+after+coronary+angioplasty.">Coronary circulating mononuclear progenitor cells and soluble biomarkers in the cardiovascular prognosis after coronary angioplasty.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23 (7), 4844-4849 (2019).</li><li>Su&#225;rez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relation+of+Coronary+Artery+Lumen+with+Baseline,+Post-angioplasty+Coronary+Circulating+Pro-Inflammatory+Cytokines+in+Patients+with+Coronary+Artery+Disease.">Relation of Coronary Artery Lumen with Baseline, Post-angioplasty Coronary Circulating Pro-Inflammatory Cytokines in Patients with Coronary Artery Disease.</a> Angiology Open Access. 7, 01 (2019).</li><li>Schmidt-Lucke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+circulating+endothelial+progenitor+cells+using+the+modified+ISHAGE+protocol.">Quantification of circulating endothelial progenitor cells using the modified ISHAGE protocol.</a> PLoS One. 5 (1), e13790 (2010).</li><li>Moyer, C. F., Sajuthi, D., Tulli, H., Williams, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+IL-1+alpha+and+IL-1+beta+by+arterial+cells+in+atherosclerosis.">Synthesis of IL-1 alpha and IL-1 beta by arterial cells in atherosclerosis.</a> American Journal of Pathology. 138 (4), 951-960 (1991).</li><li>Morales-Portano, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Echocardiographic+measurements+of+epicardial+adipose+tissue+and+comparative+ability+to+predict+adverse+cardiovascular+outcomes+in+patients+with+coronary+artery+disease.">Echocardiographic measurements of epicardial adipose tissue and comparative ability to predict adverse cardiovascular outcomes in patients with coronary artery disease.</a> International Journal of Cardiovascular Imaging. 34 (9), 1429-1437 (2018).</li><li>Huang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells+correlated+with+oxidative+stress+after+mild+traumatic+brain+injury.">Endothelial progenitor cells correlated with oxidative stress after mild traumatic brain injury.</a> Yonsei Medical Journal. 58 (5), 1012-1017 (2017).</li></ol>

Bloedafname van de aangetaste kransslagader kan moeilijk zijn. Soms is de kransslagader nauwelijks toegankelijk. In dit geval kan bemonstering van de veneuze sinus een alternatief zijn. We hebben validatietests uitgevoerd waarbij circulerende biomarkers in kransslagader vergeleken met veneuze sinus, zonder significante verschillen. Echter, de prestaties van circulerende biomarkers werd alleen gevalideerd voor coronaire bemonstering. Daarom moet de prestaties van biomarkers verkregen uit de veneuze sinus nog worden onderz...

Coronaire angioplastie en stenting vormen een bergingsprocedure voor patiënten met coronaire hartziekten (CAD). Echter, grote bijwerkingen cardiovasculaire voorvallen (MacEs), met inbegrip van cardiovasculaire dood, hartinfarct, coronaire restenose, en episodes van angina of decompenseren hartfalen, kan maanden na coronaire interventie optreden, waardoor ongeplande bezoeken aan het ziekenhuis. Maces komen wereldwijd vaak voor en hun morbisterfte is hoog1.
Coronaire ischemische schade veroorzaakt vroege vasculaire respons en herstellende mechanismen waarbij mobilisatie van MpCs als gevolg van hun differentiatie vermogen en / of angio-herstellend potentieel, evenals de productie van oplosbare moleculen zoals intercellulaire hechting moleculen (ICAMs), matrix metalloproteinases (MMP's), en reactieve zuurstofsoorten, als gevolg van celverkleving, weefsel remodelleren, en oxidatieve stress. Hoewel intrinsieke vasculaire kenmerken zoals plaquekenmerken en coronaire hartcomplexiteit zijn gebruikt om MACEs te voorspellen, hebben sommige studies gesuggereerd dat biomarkers met betrekking tot de mechanismen van letsel en herstel die zich voordoen in het coronaire endotheel zeer nuttig kunnen zijn voor de vroege identificatie en prognose van cardiovasculaire voorvallen bij patiënten met CAD die aan coronaire angioplastie2,3,4,5worden voorgelegd.
Voortdurende interesse in het begrijpen van de mechanismen die ten grondslag liggen aan CAD letsel en reparatie heeft onderzoekers gemotiveerd om intracoronaire circulerende biomarkers te bestuderen, omdat coronaire bemonstering nauwer vasculaire schade weerspiegelt enherstel 6. Echter, karakterisering van coronaire biomarkers in menselijke studies is schaars7,8,9. Daarom was het doel van deze studie om een methode te beschrijven om de hoeveelheid coronaire circulerende MpCs en oplosbare moleculen te bepalen, als gevolg van zowel vasculairletsel als herstel, en om aan te tonen of deze biomarkers geassocieerd zijn met MACEs en de klinische prognose van CAD-patiënten die coronaire angioplastie ondergingen. Deze methode is gebaseerd op het gebruik van vasculaire, circulerende MpCs en oplosbare moleculen verkregen door bemonsteringslocaties die het dichtst bij de schade aan het vat staan. Het kan ook nuttig zijn voor klinische studies voor onderste ledematen ischemie, beroerte, vasculitis, veneuze trombose, en andere verwondingen waarbij vasculaire letsel en reparatie.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10735086001</td>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA) as a buffering agent, stabilizer, standard and for blending.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calibration Beads</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-093-607</td>
			<td>MACQuant calibration beads are supplied in aqueous solution containing 0.05% sodium azide. 3.5 ml for up to 100 tests</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD133/1 (AC133)-PE</td>
			<td>Milteny Biotec / MACS</td>
			<td>#130-080-801</td>
			<td>Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD184 (CXCR4)-PE-VIO770</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-103-798</td>
			<td>Monoclonal, Isotype recombinant human IgG1, conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-093-601</td>
			<td>Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD34-FITC</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-081-001</td>
			<td>The monoclonal antibody clone AC136 detecs a class III epitope of the CD34</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45- VioBlue</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-092-880</td>
			<td>Monoclonal CD45 Antibody, human conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Tubes</td>
			<td>Thermo SCIENTIFIC</td>
			<td>#339651</td>
			<td>15ml conical centrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytometry Tubes</td>
			<td>FALCON Corning Brand</td>
			<td>#352052</td>
			<td>5 mL Polystyrene Round-Bottom Tube. 12x75 style. Sterile.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>#161-0729</td>
			<td>Heavy metals, (as Pb) &#60;10ppm, Fe &#60;0.01%, As &#60;1ppm, Insolubles &#60;0.005%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Improved Neubauer</td>
			<td>Without brand</td>
			<td>Without catalog number</td>
			<td>Hemocytometer for cell counting. (range 0.1000mm, 0.0025mm2)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2 EDTA Blood Collection Tubes</td>
			<td>BD Vacutainer</td>
			<td>#367863</td>
			<td>Lilac plastic vacutainer tube (K2E) 10.8mg, 6 mL.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lymphoprep</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>01-63-12-002-A</td>
			<td>Sterile and checked on the presence of endotoxins. Density: 1.077&#177;0.001g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>#SZBF0920V</td>
			<td>Fixation of biological samples, (powder, 95%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Transfer 1,3mL</td>
			<td>CRM Globe</td>
			<td>PF1016, PF1015</td>
			<td>The transfer pipette is a tool that facilitates liquid transfer with greater accuracy.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test Tubes</td>
			<td>KIMBLE CHASE</td>
			<td>45060 13100</td>
			<td>Heat-resistant test tubes. SIZE/CAP 13 x 100 mm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

coronary progenitor cells and soluble biomarkers in cardiovascular prognosis after coronary angioplasty

Grote bijwerkingen (MACEs) hebben een negatieve invloed op de cardiovasculaire prognose van patiënten die coronaire angioplastie ondergaan als gevolg van coronaire ischemische letsel. De omvang van coronaire schade en de mechanismen van vasculaire reparatie zijn factoren die van invloed zijn op de toekomstige ontwikkeling van MACE's. Intrinsieke vasculaire kenmerken zoals de plaque kenmerken en coronaire slagader complexiteit hebben aangetoond prognostische informatie voor MACEs. Het gebruik van intracoronaire circulerende biomarkers is echter als een handige methode voor de vroege identificatie en prognose van MACE's geposteerd, omdat ze beter aansluiten bij dynamische mechanismen waarbij coronaire schade en herstel betrokken zijn. Bepaling van coronaire circulerende biomarkers tijdens angioplastie, zoals het aantal subpopulaties van mononucleaire voorlopercellen (Mp's) en de concentratie van oplosbare moleculen die ontstekingen, celhechting en reparatie reflecteren, beoordeling van toekomstige ontwikkelingen en de prognose van MACE's 6 maanden na coronaire angioplastie. Deze methode wordt benadrukt door zijn translationele aard en betere prestaties dan perifere bloed circulerende biomarkers met betrekking tot de voorspelling van MACE's en het effect ervan op de cardiovasculaire prognose, die kan worden toegepast voor risicogelaagdheid van patiënten met coronaire hartziekte die angioplastie ondergaat.

Coronaire, veneuze sinus, en perifere bloed werden verzameld van 52 patiënten die coronaire angiografie onderging (Figuur 1) en toonde een hoge prevalentie van hypertensie en dyslipidemie. Bij de klinische follow-up werd 11 (21,1%) Maces traden op 6 maanden na coronaire angiografie: overlijden (n = 1), angina die ziekenhuisbezoek vereist (n = 6), hartinfarct (n = 2) en/of bewijs van hartfalen (n = 4).
<p class="jove_content" fo:keep-together.within-page=...

Watch this Scientific Journal Video about Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty at JoVE.com

Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty

Ontwikkeling van grote bijwerkingen cardiovasculaire voorvallen, die van invloed zijn cardiovasculaire prognose na coronaire angioplastie, worden beïnvloed door de omvang van coronaire schade en vasculaire reparatie. Het gebruik van nieuwe coronaire cellulaire en oplosbare biomarkers, reactief op vasculaire schade en reparatie, zijn nuttig om de ontwikkeling van MacEs en prognose te voorspellen.

Coronaire voorlopercellen en oplosbare biomarkers in cardiovasculaire prognose na coronaire angioplastie

Major adverse cardiovascular events (MACEs) negatively impact the cardiovascular prognosis of patients undergoing coronary angioplasty due to coronary ...

Hoewel angioplastie patiënten met coronaire hartziekte helpt, kunnen cardiovasculaire voorvallen nog steeds optreden na de procedure. Als MpCs en oplosbare moleculen worden verkregen uit coronaire circulatie, kunnen ze worden gecorreleerd aan de mate van vasculaire schade en reparatie. Coronaire MPC- en oplosbare bemiddelaarniveaus kunnen daarom worden gebruikt om cardiovasculaire voorvallen en prognose te schatten bij patiënten met coronaire hartziekten die coronaire angioplasties ondergaan.MpCs en oplosbare moleculen kunnen ook worden gebruikt om complicaties en prognoses te schatten die optreden onder verschillende ischemische instellingen, zoals terugkerende ledemaat ischemiary beroerte. Demonstreren van de procedure zal worden Eduardo Vera-Gomez en Alejandro Hernandez-Patricio, laboranten, en Karen De La Vega-Moreno en Carlos Zamora-Aleman, undergrad studenten. Ook demonstreren zal Gabriela Alexandra Dominguez-Perez, een Master of Science student, Alberto Melchor-Lopez, een promovendus, en Mario Antonio Tellez-Gonzalez, een Master of Science medewerker.Breng binnen een uur na het verzamelen zes milliliter van het geoogste bloedmonster over naar een conische buis van 15 milliliter en verdun het bloed met een één-op-één verhouding in PBS. Voeg twee milliliter dichtheidsgradiëntmedium toe aan drie reageerbuizen en breng voorzichtig drie gelijke aliquots verdund bloed over in elke buis van dichtheidsgradiëntmedium. Scheid de cellen door centrifugatie en breng de cellen bij de interface over naar een nieuwe buis.Was de verzamelde cellen een keer in twee milliliter PBS gedurende zes minuten, gevolgd door zes wasbeurten in twee milliliter verse PBS per was gedurende twee minuten. Na de laatste wasbeurt, opnieuw opschorten de MPC-bevattende cel pellet in een milliliter van PBS voor het tellen en voeg een keer tien aan de zes cellen aan gelabeld vijf milliliter stroom cytometrie buizen. Pellet de cellen door centrifugatie en voeg 100 microliters van de juiste antilichaam van belang, verdund in antilichaam incubatieoplossing aan elke buis.Meng de cellen voorzichtig met elke toegevoegde antilichaamcocktail gedurende 10 seconden en plaats de monsters op vier graden Celsius, beschermd tegen licht, gedurende 20 minuten. Aan het einde van de incubatie, centrifugeren de monsters en opnieuw opschorten de pellets in 500 microliter van PBS aangevuld met twee millimolar EDTA. Met behulp van isotype-matched controles om het opzetten van de achtergrond vlekken, analyseren van de monsters door de stroom cytometrie volgens standaard protocollen, gating op de lymfocyten in een voorwaartse door zij strooi plot, om resterende granulocyten, cellulaire puin, en andere deeltjes uit te sluiten.Stel een poort in om een groot aantal cellen te bevatten met een CD45-positief CD34-positief fenotype. Gebruik vervolgens de CD45-positieve CD34-positieve poort om te selecteren voor kinase insert domeinreceptor CD133- of CD184-positieve cellen. De Subpopulaties van MPC kunnen vervolgens worden geïdentificeerd aan de gelang van hun specifieke celoppervlakmarkeringen en gerapporteerd als het percentage gated events.Om de concentratie van oplosbare biomarkers in de verzamelde bloedmonsters te bepalen, wast u eerst twee maal de juiste voorgecoate ELISA-platen met de kit-meegeleverde wasbuffer en label de standaard-, monster- en controlebuizen. Centrifuge het bloedmonster om de bloedbestanddelen te scheiden en aliquot het plasma in het monster buizen. Breng de normen, monsters en controles over naar de juiste putten en verzegel en broed de plaat gedurende 90 minuten op 37 graden Celsius.Gooi aan het einde van de incubatie de putinhoud weg en voeg het biotinedetectieantilichaam toe aan elke put. Na een incubatie van een uur bij 37 graden Celsius, gooi de inhoud van de plaat weg en was de putten drie keer met een verse wasbuffer per wasmachine. Na de laatste wasbeurt, incubeer de monsters met Streptavidin werkoplossing gedurende 30 minuten bij 37 graden Celsius, gevolgd door drie wasbeurten, zoals aangetoond.Behandel de monsters na de laatste wasbeurt 30 minuten met tetramethylbenzidine substraat bij 37 graden Celsius. Wanneer de kleur zich ontwikkelt, voeg stop oplossing van de kit en lees de optische dichtheid absorptie in een microplate ELISA-lezer. Om de concentratie van tumor necrose factor alpha, en interleukine-1 beta te bepalen, met behulp van immunomagnetische multiplexing, label de standaard, monster, en controle buizen en vortex de magnetische kraal flacons gedurende 30 seconden.Voeg kralen toe aan de juiste putten van de multiplexing testplaat. Wanneer alle kralen zijn toegevoegd, stevig invoegen van de handheld magnetische plaat wasmachine, en wacht twee minuten voor de kralen te accumuleren op de bodem van elke put, voordat snel omkeren zowel de handheld magnetische plaat wasmachine, en de plaat montage over een afvalcontainer. Voeg vervolgens 150 microliters wasbuffer toe aan elke put en wacht 30 seconden om de kralen op de bodem te kunnen ophopen.Gooi de inhoud opnieuw zoals net aangetoond en voeg 25 microliter universele testbuffer en 25 microliter van de voorbereide normen, monsters en controles toe. Verzegel de plaat gedurende ten minste 60 minuten incubatie, beschermd tegen licht bij kamertemperatuur, en 500 rotaties per minuut. Voeg aan het einde van de incubatie 150 microliter wasbuffer toe aan elke put en laat de kralen 30 seconden ophouden.Gebruik vervolgens de plaatwasser om de putinhoud weg te gooien en label elk goed met 25 microliters van detectieantilichaammengsel gevolgd door twee wasbeurten, zoals aangetoond. Na de tweede wasbeurt, incubeer de monsters met 25 microliters van Streptavidin PE gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur. Voeg aan het einde van de incubatie 120 microliter leesbuffer toe aan elke put en verzegel de plaat gedurende een vijf minuten durende incubatie, beschermd tegen licht bij kamertemperatuur, gedurende 500 rotaties per minuut.Laad vervolgens de plaat op een multiplexing testlezer en pas de leesparameters aan op basis van elke analyt. Coronaire, venus-sinus, en perifeer bloed werden verzameld van 52 patiënten die coronaire angiografie ondergingen en een hoge prevalentie van hypertensie en dyslipidemie aangetoond. De coronaire concentratie bij de baseline van de meeste MpC's was aanzienlijk lager bij patiënten die grote bijwerkingen ontwikkelden, met een grotere afname van MPC-subpopulaties CD34-positieve CD133-positief en CD45-positief, CD34-positief, CD133-positief, CD184-positief.Ook patiënten die grote bijwerkingen ontwikkelden hadden een verhoogde uitgangswaarde in coronaire hoeveelheden oplosbare ICAM-1 en lagere hoeveelheden metallomatrix-eiwit 9. Coronaire MpCs en oplosbare ICAM-1 toonden een prognostisch vermogen voor grote negatieve cardiovasculaire gebeurtenis-vrije overleving. Interessant is dat de expressie van tumornecrosefactor alpha variaties aantoonde volgens het tijdstip van meting en de locatie van de coronaire bemonstering op basis van een vergelijking van verschillende lumengebieden in dezelfde kransslagader, met behulp van intravasculaire echografie.Tijdens MPC isolatie, zorg ervoor dat het bloed over te dragen op de dichtheid gradiënt, en om de cellen te verzamelen van de interface na centrifugatie zorgvuldig. Periodieke vortexing voorkomt kraalneerslag en het gebruik van een magnetische plaatwasser helpt om de kralen in de putten te houden tijdens wasbeurten. Coronaire MpCs en oplosbare moleculen zijn nuttig voor het stratificeren van het risico van cardiovasculaire gebeurtenissen tijdens de follow-up na angioplastie, helpen bij het verstrekken van secundaire preventies aan personen met een hoog risico als deze techniek weerspiegelt de pathofysiologische proces dat optreedt tijdens het einde van de oplossing, kan het nuttig zijn voor aandoeningen waarin vasculaire biologie een rol speelt.

Research

JoVE Journal

Medicine

Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

Kransslagader Ligatie en Intramyocardial Injectie in een muizenmodel van Infarction

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo.  With the advent of genetic modifications to ...

Modified Technique for Coronary Artery Ligation in Mice

Gewijzigd Techniek voor Coronary Artery Ligatie in Muizen

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI ...

Retrograde Perfusion and Filling of Mouse Coronary Vasculature as Preparation for Micro Computed Tomography Imaging

Retrograde Perfusie en vullen van Muis coronaire bloedvaten als voorbereiding op Micro Computed Tomography Imaging

Visualization of the vasculature is becoming increasingly important for understanding many different disease states. While several techniques exist for ...

Permanent Ligation of the Left Anterior Descending Coronary Artery in Mice: A Model of Post-myocardial Infarction Remodelling and Heart Failure

Permanente Ligatie van de linker anterior Aflopend Kransslagader in Muizen: Een model van Post-myocardinfarct Remodelling en hartfalen

Heart failure is a syndrome in which the heart fails to pump blood at a rate commensurate with cellular oxygen requirements at rest or during stress. It ...

Ultrasound Based Assessment of Coronary Artery Flow and Coronary Flow Reserve Using the Pressure Overload Model in Mice

Echografie gebaseerde beoordeling van coronaire Flow en Coronaire Flow Reserve Met behulp van de druk overbelasting Model in Muizen

Transthoracic Doppler echocardiography (TTDE) is a clinically useful, noninvasive tool for studying coronary artery flow velocity and coronary flow ...

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery (ALCAPA)

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery ALCAPA

Direct Re-implantatie van linker kransslagader in de aorta in Volwassenen met Abnormale Origin of linker kransslagader van de longslagader (ALCAPA)

Anomalous origin of the left coronary artery from the pulmonary artery (ALCAPA) is a rare congenital anomaly which is one of leading causes of myocardial ...

Identifying Coronary Artery Calcification on Non-gated Computed Tomography Scans

Identificeren van verkalking van de kransslagader op berekend niet-gated tomografie Scans

Coronary artery calcification (CAC) provides an objective measure of coronary artery disease and can readily be identified on non-gated computed ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Evaluatie van coronaire stroom reserve na myocardiale ischemie reperfusie bij ratten

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

In Vitro Model of Coronary Angiogenesis

Here, we describe an in vitro culture assay to study coronary angiogenesis. Coronary vessels feed the heart muscle and are of clinical importance. Defects ...

Novel Percutaneous Approach for Deployment of 3D Printed Coronary Stenosis Implants in Swine Models of Ischemic Heart Disease

Nieuwe percutane benadering voor de inzet van 3D-geprinte coronaire stenose implantaten in varkensmodellen van ischemische hart-en vaatziekten

Minimally invasive methods for creating models of focal coronary narrowing in large animals are challenging. Rapid prototyping using three-dimensionally ...