Name: coronary progenitor cells and soluble biomarkers in cardiovascular prognosis after coronary angioplasty
Uploaded: 2020-01-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty at JoVE.com

Les auteurs remercient le soutien du programme institutionnel E015; et Fondo Sectorial FOSSIS-CONACYT, SALUD-2014-1-233947.

Ce protocole répond aux lignes directrices institutionnelles du Comité d'éthique de la recherche humaine.
1. Angiographie coronaire, échographie et prélèvement sanguin
<ol><li>Demander des renseignements cliniques et démographiques de base avant l'intervention coronaire. Recueillir les données de l'individu : l'âge, le sexe, l'état actuel du tabagisme, l'indice de masse corporelle (IMC), l'hypertension artérielle, la dyslipidémie, le diabète sucré, les médicaments et l'indicat...

<ol>
	<li>Cassar, A., Holmes, D. R., Rihal, C. S., Gersh, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+coronary+artery+disease:+diagnosis+and+management.">Chronic coronary artery disease: diagnosis and management.</a> Mayo Clinic Proceedings. 84 (12), 1130-1146 (2009).</li><li>Regueiro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mobilization+of+endothelial+progenitor+cells+in+acute+cardiovascular+events+in+the+PROCELL+study:+time-course+after+acute+myocardial+infarction+and+stroke.">Mobilization of endothelial progenitor cells in acute cardiovascular events in the PROCELL study: time-course after acute myocardial infarction and stroke.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 80, 146-155 (2015).</li><li>Sen, S., McDonald, S. P., Coates, P. T., Bonder, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells:+novel+biomarker+and+promising+cell+therapy+for+cardiovascular+disease.">Endothelial progenitor cells: novel biomarker and promising cell therapy for cardiovascular disease.</a> Clinical Science (Lond). 120 (7), 263-283 (2011).</li><li>Samman Tahhan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progenitor+Cells+and+Clinical+Outcomes+in+Patients+With+Acute+Coronary+Syndromes.">Progenitor Cells and Clinical Outcomes in Patients With Acute Coronary Syndromes.</a> Circulation Research. 122 (11), 1565-1575 (2018).</li><li>Tomuli&#263;, V., Gobi&#263;, D., Luli&#263;, D., &#381;idan, D., Zaputovi&#263;, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soluble+adhesion+molecules+in+patients+with+acute+coronary+syndrome+after+percutaneous+coronary+intervention+with+drug-coated+balloon,+drug-eluting+stent+or+bare+metal+stent.">Soluble adhesion molecules in patients with acute coronary syndrome after percutaneous coronary intervention with drug-coated balloon, drug-eluting stent or bare metal stent.</a> Medical Hypotheses. 95, 20-23 (2016).</li><li>Jaumdally, R., Varma, C., Macfadyen, R. J., Lip, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+sinus+blood+sampling:+an+insight+into+local+cardiac+pathophysiology+and+treatment?.">Coronary sinus blood sampling: an insight into local cardiac pathophysiology and treatment?.</a> European Heart Journal. 28 (8), 929-940 (2007).</li><li>Kremastinos, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracoronary+cyclic-GMP+and+cyclic-AMP+during+percutaneous+transluminal+coronary+angioplasty.">Intracoronary cyclic-GMP and cyclic-AMP during percutaneous transluminal coronary angioplasty.</a> International Journal of Cardiology. 53 (3), 227-232 (1996).</li><li>Karube, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+cytokine+levels+by+coronary+sinus+blood+sampling+during+cardiac+surgery+with+cardiopulmonary+bypass.">Measurement of cytokine levels by coronary sinus blood sampling during cardiac surgery with cardiopulmonary bypass.</a> American Society for Artificial Internal Organs Journal. 42 (5), M787-M791 (1996).</li><li>Truong, Q. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+sinus+biomarker+sampling+compared+to+peripheral+venous+blood+for+predicting+outcomes+in+patients+with+severe+heart+failure+undergoing+cardiac+resynchronization+therapy:+the+BIOCRT+study.">Coronary sinus biomarker sampling compared to peripheral venous blood for predicting outcomes in patients with severe heart failure undergoing cardiac resynchronization therapy: the BIOCRT study.</a> Heart Rhythm. 11 (12), 2167-2175 (2014).</li><li>Su&#225;rez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+circulating+mononuclear+progenitor+cells+and+soluble+biomarkers+in+the+cardiovascular+prognosis+after+coronary+angioplasty.">Coronary circulating mononuclear progenitor cells and soluble biomarkers in the cardiovascular prognosis after coronary angioplasty.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23 (7), 4844-4849 (2019).</li><li>Su&#225;rez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relation+of+Coronary+Artery+Lumen+with+Baseline,+Post-angioplasty+Coronary+Circulating+Pro-Inflammatory+Cytokines+in+Patients+with+Coronary+Artery+Disease.">Relation of Coronary Artery Lumen with Baseline, Post-angioplasty Coronary Circulating Pro-Inflammatory Cytokines in Patients with Coronary Artery Disease.</a> Angiology Open Access. 7, 01 (2019).</li><li>Schmidt-Lucke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+circulating+endothelial+progenitor+cells+using+the+modified+ISHAGE+protocol.">Quantification of circulating endothelial progenitor cells using the modified ISHAGE protocol.</a> PLoS One. 5 (1), e13790 (2010).</li><li>Moyer, C. F., Sajuthi, D., Tulli, H., Williams, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+IL-1+alpha+and+IL-1+beta+by+arterial+cells+in+atherosclerosis.">Synthesis of IL-1 alpha and IL-1 beta by arterial cells in atherosclerosis.</a> American Journal of Pathology. 138 (4), 951-960 (1991).</li><li>Morales-Portano, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Echocardiographic+measurements+of+epicardial+adipose+tissue+and+comparative+ability+to+predict+adverse+cardiovascular+outcomes+in+patients+with+coronary+artery+disease.">Echocardiographic measurements of epicardial adipose tissue and comparative ability to predict adverse cardiovascular outcomes in patients with coronary artery disease.</a> International Journal of Cardiovascular Imaging. 34 (9), 1429-1437 (2018).</li><li>Huang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells+correlated+with+oxidative+stress+after+mild+traumatic+brain+injury.">Endothelial progenitor cells correlated with oxidative stress after mild traumatic brain injury.</a> Yonsei Medical Journal. 58 (5), 1012-1017 (2017).</li></ol>

La collecte de sang de l'artère coronaire affectée peut être difficile. Parfois, l'artère coronaire est à peine accessible. Dans ce cas, l'échantillonnage du sinus veineux peut être une alternative. Nous avons exécuté des essais de validation comparant des biomarqueurs circulants dans l'artère coronaire contre le sinus veineux, sans différences significatives. Cependant, la performance des biomarqueurs circulants a été validée seulement pour l'échantillonnage coronaire. Par conséquent, la performance des ...

L'angioplastie coronaire et l'endoprothèse représentent une procédure de sauvetage pour les patients atteints de maladie coronarienne (CAD). Cependant, les événements cardio-vasculaires défavorables principaux (MACEs), y compris la mort cardio-vasculaire, l'infarctus du myocarde, la reposnose coronaire, et les épisodes d'angine ou décompensent l'insuffisance cardiaque, peuvent se produire des mois après l'intervention coronaire, incitant des visites imprévues à l'hôpital. Les MACE sont courants dans le monde entier et leur morbi-mortalité est élevée1.
Les dommages ischémiques coronaires induitlas la réponse vasculaire tôt et les mécanismes réparateurs impliquant la mobilisation des MPCs dus à leur capacité de différenciation et/ou potentiel angio-réparateur, aussi bien que la production des molécules solubles comme les molécules intercellulaires d'adhérence (ICAMs), les métalloproteinases de matrice (MMP), et les espèces réactives d'oxygène, reflétant l'adhérence de cellules, le remodelage de tissu, et le stress oxydatif. Bien que des dispositifs vasculaires intrinsèques comme des caractéristiques de plaque et la complexité d'artère coronaire aient été employés pour prévoir des MACEs, quelques études ont suggéré que les biomarqueurs liés aux mécanismes des dommages et de la réparation se produisant dans l'endothélium coronaire pourraient être très utiles pour l'identification tôt et le pronostic des événements cardio-vasculaires dans les patients présentant la CAO soumis à l'angioplastie coronaire2,3,4,5.
L'intérêt continu pour comprendre les mécanismes sous-jacents aux lésions et aux réparations de LA CORONARale a incité les chercheurs à étudier les biomarqueurs circulants intracoraires, parce que l'échantillonnage coronaire reflète plus étroitement les lésions vasculaires et la réparation6. Cependant, la caractérisation des biomarqueurs coronaires dans les études humaines a été rare7,8,9. Par conséquent, le but de la présente étude était de décrire une méthode pour déterminer la quantité de MPC sépariaux circulants et de molécules solubles, reflétant des dommages vasculaires et la réparation, et pour montrer si ces biomarqueurs sont associés aux MACEs et au pronostic clinique des patients de CAO qui ont subi l'angioplastie coronaire. Cette méthode est basée sur l'utilisation de MPC vasculaires et circulants et de molécules solubles obtenues en échantillonnant les endroits les plus proches des dommages du vaisseau. Il peut également être utile pour des études cliniques pour l'ischémie inférieure de membre, la course, la vasculite, la thrombose veineuse, et d'autres dommages vasculaires et la réparation.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10735086001</td>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA) as a buffering agent, stabilizer, standard and for blending.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calibration Beads</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-093-607</td>
			<td>MACQuant calibration beads are supplied in aqueous solution containing 0.05% sodium azide. 3.5 ml for up to 100 tests</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD133/1 (AC133)-PE</td>
			<td>Milteny Biotec / MACS</td>
			<td>#130-080-801</td>
			<td>Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD184 (CXCR4)-PE-VIO770</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-103-798</td>
			<td>Monoclonal, Isotype recombinant human IgG1, conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-093-601</td>
			<td>Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD34-FITC</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-081-001</td>
			<td>The monoclonal antibody clone AC136 detecs a class III epitope of the CD34</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45- VioBlue</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-092-880</td>
			<td>Monoclonal CD45 Antibody, human conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Tubes</td>
			<td>Thermo SCIENTIFIC</td>
			<td>#339651</td>
			<td>15ml conical centrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytometry Tubes</td>
			<td>FALCON Corning Brand</td>
			<td>#352052</td>
			<td>5 mL Polystyrene Round-Bottom Tube. 12x75 style. Sterile.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>#161-0729</td>
			<td>Heavy metals, (as Pb) &#60;10ppm, Fe &#60;0.01%, As &#60;1ppm, Insolubles &#60;0.005%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Improved Neubauer</td>
			<td>Without brand</td>
			<td>Without catalog number</td>
			<td>Hemocytometer for cell counting. (range 0.1000mm, 0.0025mm2)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2 EDTA Blood Collection Tubes</td>
			<td>BD Vacutainer</td>
			<td>#367863</td>
			<td>Lilac plastic vacutainer tube (K2E) 10.8mg, 6 mL.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lymphoprep</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>01-63-12-002-A</td>
			<td>Sterile and checked on the presence of endotoxins. Density: 1.077&#177;0.001g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>#SZBF0920V</td>
			<td>Fixation of biological samples, (powder, 95%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Transfer 1,3mL</td>
			<td>CRM Globe</td>
			<td>PF1016, PF1015</td>
			<td>The transfer pipette is a tool that facilitates liquid transfer with greater accuracy.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test Tubes</td>
			<td>KIMBLE CHASE</td>
			<td>45060 13100</td>
			<td>Heat-resistant test tubes. SIZE/CAP 13 x 100 mm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

coronary progenitor cells and soluble biomarkers in cardiovascular prognosis after coronary angioplasty

Les événements cardio-vasculaires défavorables principaux (MACEs) ont un impact négatif le pronostic cardio-vasculaire des patients subissant l'angioplastie coronaire due aux dommages ischémiques coronaires. L'étendue des dommages coronaires et les mécanismes de réparation vasculaire sont des facteurs influençant le développement futur des MACE. Les dispositifs vasculaires intrinsèques comme les caractéristiques de plaque et la complexité d'artère coronaire ont démontré l'information pronostique pour DESMAC. Cependant, l'utilisation des biomarqueurs circulants intracoronary a été postulée comme méthode commode pour l'identification tôt et le pronostic des MACEs, car ils reflètent plus étroitement les mécanismes dynamiques impliquant des dommages et la réparation coronaires. La détermination des biomarqueurs circulants coronaires pendant l'angioplastie, comme le nombre de sous-populations de cellules progénitrices mononucléaires (MPC) ainsi que la concentration de molécules solubles reflétant l'inflammation, l'adhérence cellulaire et la réparation, permet évaluation des développements futurs et du pronostic des MACEs 6 mois après angioplastie coronaire. Cette méthode est mise en évidence par sa nature translationnelle et de meilleures performances que les biomarqueurs périphériques circulant dans le sang en ce qui concerne la prédiction des MACE et son effet sur le pronostic cardio-vasculaire, qui peut être appliqué pour la stratification du risque des patients avec la maladie coronarienne subissant l'angioplastie.

Le sinus coronaire, veineux, et le sang périphérique ont été rassemblés de 52 patients qui ont subi l'angiographie coronaire (figure 1) et ont montré une prédominance élevée de l'hypertension et de la dyslipidémie. Au suivi clinique, 11 (21,1 %) Les MACEs se sont produits 6 mois après l'angiographie coronaire : décès (n - 1), angine nécessitant la présence à l'hôpital (n - 6), infarctus du myocarde (n - 2), et/ou évidence de l'insuffisance c...

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Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty

Le développement des événements cardio-vasculaires défavorables principaux, qui affectent le pronostic cardio-vasculaire après l'angioplastie coronaire, sont influencés par l'ampleur des dommages coronaires et de la réparation vasculaire. L'utilisation de nouveaux biomarqueurs cellulaires et solubles coronaires, réactifs aux dommages et à la réparation vasculaires, sont utiles pour prévoir le développement des MACE et du pronostic.

Cellules de progéniture coronaire et biomarqueurs solubles dans le pronostic cardio-vasculaire après angioplastie coronaire

Major adverse cardiovascular events (MACEs) negatively impact the cardiovascular prognosis of patients undergoing coronary angioplasty due to coronary ...

Bien que l’angioplastie aide des patients présentant la maladie coronaire, les événements cardio-vasculaires peuvent toujours se produire après la procédure. Comme les MPC et les molécules solubles sont obtenus à partir de la circulation coronaire, ils peuvent être corrélés au degré de dommages vasculaires et de réparation. Les niveaux coronaires de MPC et de médiateur soluble peuvent donc être utilisés pour estimer des événements cardio-vasculaires et le pronostic dans les patients présentant la maladie coronaire subissant des angioplasties coronaires.Les MPCs et les molécules solubles peuvent également être utilisés pour estimer les complications et les pronostics qui se produisent dans différents milieux ischémiques, tels que l’AVC ischémique récurrent des membres. Eduardo Vera-Gomez et Alejandro Hernandez-Patricio, techniciens de laboratoire, ainsi que Karen De La Vega-Moreno et Carlos Zamora-Aleman, étudiants de premier cycle, feront la démonstration de la procédure. Gabriela Alexandra Dominguez-Perez, étudiante à la maîtrise en sciences, Alberto Melchor-Lopez, doctorant, et Mario Antonio Tellez-Gonzalez, collaborateur à la maîtrise en sciences, seront également de la partie.Dans l’heure qui suit la collecte, transférer six millilitres de l’échantillon de sang récolté dans un tube conique de 15 millilitres et diluer le sang à un rapport d’un pour un dans PBS. Ajouter deux millilitres de gradient de densité moyen à trois tubes à essai et transférer soigneusement trois aliquots égaux de sang dilué dans chaque tube de milieu de gradient de densité. Séparez les cellules par centrifugation et transférez les cellules à l’interface vers un nouveau tube.Lavez les cellules recueillies une fois en deux millilitres de PBS pendant six minutes, suivies de six lavages en deux millilitres de PBS frais par lavage pendant deux minutes. Après le dernier lavage, suspendre à nouveau la pastille cellulaire contenant du MPC dans un millilitre de PBS pour compter et ajouter une fois dix aux six cellules aux tubes de cytométrie à débit de cinq millilitres étiquetés. Pelleter les cellules par centrifugation et ajouter 100 microlitres de l’anticorps approprié d’intérêt, dilué dans la solution d’incubation d’anticorps à chaque tube.Mélanger délicatement les cellules avec chaque cocktail d’anticorps ajouté pendant 10 secondes, et placer les échantillons à quatre degrés Celsius, à l’abri de la lumière, pendant 20 minutes. À la fin de l’incubation, centrifuger les échantillons et suspendre à nouveau les granulés dans 500 microlitres de PBS complétés par deux millimolaires EDTA. À l’aide de contrôles appariés à l’isotype pour mettre en place la coloration de fond, analyser les échantillons par cytométrie d’écoulement selon les protocoles standard, gating sur les lymphocytes dans une parcelle de dispersion avant par côté, pour exclure les granulocytes résiduels, les débris cellulaires, et d’autres particules.Réglez une porte pour contenir un nombre élevé de cellules avec un phénotype CD45-positif CD34-positif. Ensuite, utilisez la porte CD34-positive CD34-positive cd45 pour sélectionner pour kinase insérer récepteur de domaine CD133 ou CD184 cellules positives. Les sous-populations de MPC peuvent alors être identifiées par leurs marqueurs spécifiques de surface cellulaire et signalées comme le pourcentage d’événements fermés.Pour déterminer la concentration de biomarqueurs solubles dans les échantillons de sang prélevés, lavez d’abord les plaques ELISA préendues appropriées deux fois avec le tampon de lavage fourni par kit et étiquetez les tubes standard, échantillon et contrôle. Centrifugez l’échantillon de sang pour séparer les composants sanguins et aliquot le plasma dans les tubes de l’échantillon. Transférez les normes, les échantillons et les contrôles aux puits appropriés et scellez et incubez la plaque à 37 degrés Celsius pendant 90 minutes.À la fin de l’incubation, jeter le contenu du puits et ajouter l’anticorps de détection de biotine à chaque puits. Après une incubation d’une heure à 37 degrés Celsius, jetez le contenu de la plaque et lavez les puits trois fois avec un tampon de lavage frais par lavage. Après le dernier lavage, incuber les échantillons avec streptavidine solution de travail pendant 30 minutes à 37 degrés Celsius suivie de trois lavages, comme démontré.Après le dernier lavage, traiter les échantillons avec du substrat de tétraméthylbenzidine pendant 30 minutes à 37 degrés Celsius. Lorsque la couleur se développe, ajouter la solution stop du kit et lire l’absorption de densité optique dans un lecteur ELISA microplaqué. Pour déterminer la concentration du facteur alpha de nécrose de tumeur, et de bêta d’interleukin-1, utilisant le multiplexage immunomagnétique, étiquetez la norme, échantillon, et contrôlez des tubes et vortex les flacons magnétiques de perle pendant 30 secondes.Ajouter des perles aux puits appropriés de la plaque d’analyse multiplexe. Lorsque toutes les perles ont été ajoutées, insérez solidement la laveuse à plaque magnétique portatif et attendez deux minutes que les perles s’accumulent au fond de chaque puits, avant d’inverser rapidement la laveuse à plaque magnétique portatif et l’assemblage de la plaque sur un conteneur à déchets. Ensuite, ajoutez 150 microlitres de tampon de lavage à chaque puits et attendez 30 secondes pour permettre aux perles de s’accumuler sur le fond.Jetez le contenu à nouveau comme il vient de le démontrer et ajoutez 25 microlitres de tampon d’analyse universel et 25 microlitres des normes préparées, des échantillons et des contrôles. Sceller la plaque pendant au moins 60 minutes d’incubation, à l’abri de la lumière à température ambiante, et 500 rotations par minute. À la fin de l’incubation, ajouter 150 microlitres de tampon de lavage à chaque puits et laisser les perles se contenter de 30 secondes.Ensuite, utilisez la laveuse de plaque pour jeter le contenu du puits et étiquetez chaque puits avec 25 microlitres de mélange d’anticorps de détection suivis de deux lavages, comme démontré. Après le deuxième lavage, incuber les échantillons avec 25 microlitres de Streptavidin PE pendant 30 minutes à température ambiante. À la fin de l’incubation, ajouter 120 microlitres de tampon de lecture à chaque puits et sceller la plaque pendant une incubation de cinq minutes, protégée de la lumière à température ambiante, pendant 500 rotations par minute.Ensuite, chargez la plaque sur un lecteur d’analyse multiplexe et ajustez les paramètres de lecture en fonction de chaque analyte. Coronaire, vénus-sinus, et le sang périphérique ont été rassemblés de 52 patients qui ont subi l’angiographie coronaire et ont démontré une prédominance élevée de l’hypertension et du dyslipidemia. La concentration coronaire de base de la plupart des MPCs était sensiblement inférieure dans les patients qui ont développé des événements cardio-vasculaires défavorables principaux, avec une plus grande diminution des sous-populations de MPC CD34-positif CD133-positif, et CD45-positif, CD34-positif, CD133-positif, CD184-positif.De même, les patients qui ont développé des événements cardio-vasculaires défavorables principaux ont eu une ligne de base accrue dans les quantités coronaires de l’ICAM-1 soluble et des quantités inférieures de protéine de métallomatrix 9. Les MPCs coronaires et l’ICAM-1 soluble ont démontré une capacité pronostique pour la survie cardio-vasculaire principale sans événement. Fait intéressant, l’expression du facteur alpha de nécrose de tumeur a démontré des variations selon le temps de mesure et l’endroit de l’échantillonnage coronaire basé sur une comparaison des différentes secteurs de lumen à la même artère coronaire, utilisant l’ultrason intravasculaire.Pendant l’isolement de MPC, assurez-vous de transférer le sang sur le gradient de densité, et de recueillir les cellules de l’interface après centrifugation soigneusement. Le vortex périodique empêche les précipitations de perles et l’utilisation d’une laveuse à plaques magnétiques aide à garder les perles à l’intérieur des puits pendant les lavages. Les MPCs coronaires et les molécules solubles sont utiles pour stratifier le risque d’événements cardiovasculaires pendant le suivi après l’angioplastie, aidant à fournir des préventions secondaires aux individus à haut risque car cette technique reflète le processus pathophysiologique qui se produit pendant l’arrêt de la solution, elle pourrait être utile pour les conditions dans lesquelles la biologie vasculaire joue un rôle.

Research

JoVE Journal

Medicine

Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

Ligature de l&#39;artère coronaire et injection intramyocardique dans un modèle murin d&#39;infarctus

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo.  With the advent of genetic modifications to ...

Recherche

Médecine

Modified Technique for Coronary Artery Ligation in Mice

Technique de modification de ligature de l&#39;artère coronaire chez la souris

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI ...

Retrograde Perfusion and Filling of Mouse Coronary Vasculature as Preparation for Micro Computed Tomography Imaging

Perfusion rétrograde et remplissage de la vascularisation coronaire souris comme préparation à l&#39;imagerie par ordinateur Micro tomographie

Visualization of the vasculature is becoming increasingly important for understanding many different disease states. While several techniques exist for ...

Permanent Ligation of the Left Anterior Descending Coronary Artery in Mice: A Model of Post-myocardial Infarction Remodelling and Heart Failure

Ligature permanente de l&#39;artère interventriculaire antérieure coronaire chez la souris: Un modèle de post-infarctus du myocarde et de remodelage de l&#39;insuffisance cardiaque

Heart failure is a syndrome in which the heart fails to pump blood at a rate commensurate with cellular oxygen requirements at rest or during stress. It ...

Ultrasound Based Assessment of Coronary Artery Flow and Coronary Flow Reserve Using the Pressure Overload Model in Mice

Évaluation Basé échographie de l&#39;artère coronaire de débit et de Flow Reserve coronaire Utilisation de la surcharge de pression modèle chez la souris

Transthoracic Doppler echocardiography (TTDE) is a clinically useful, noninvasive tool for studying coronary artery flow velocity and coronary flow ...

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery (ALCAPA)

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery ALCAPA

Re-implantation directe de gauche de l&#39;artère coronaire dans l&#39;aorte chez les adultes atteints de gauche Origine anomale coronarienne de l&#39;artère pulmonaire (ALCAPA)

Anomalous origin of the left coronary artery from the pulmonary artery (ALCAPA) is a rare congenital anomaly which is one of leading causes of myocardial ...

Identifying Coronary Artery Calcification on Non-gated Computed Tomography Scans

Identifier la Calcification coronarienne sur Non bloquées calculée par tomodensitométrie

Coronary artery calcification (CAC) provides an objective measure of coronary artery disease and can readily be identified on non-gated computed ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Évaluation de la réserve de flux coronaire après la réperfusion d'ischémie myocardique chez les rats

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

In Vitro Model of Coronary Angiogenesis

Modèle in Vitro de l’angiogenèse coronaire

Here, we describe an in vitro culture assay to study coronary angiogenesis. Coronary vessels feed the heart muscle and are of clinical importance. Defects ...

Novel Percutaneous Approach for Deployment of 3D Printed Coronary Stenosis Implants in Swine Models of Ischemic Heart Disease

Nouvelle approche percutanée pour le déploiement d’implants de sténose coronaire imprimés en 3D dans les modèles porcins de la maladie cardiaque ischémique

Minimally invasive methods for creating models of focal coronary narrowing in large animals are challenging. Rapid prototyping using three-dimensionally ...