Name: coronary progenitor cells and soluble biomarkers in cardiovascular prognosis after coronary angioplasty
Uploaded: 2020-01-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty at JoVE.com

Die Autoren danken der Unterstützung des Institutionellen Programms E015; und Fondo Sectorial FOSSIS-CONACYT, SALUD-2014-1-233947.

Dieses Protokoll entspricht den institutionellen Leitlinien der Ethikkommission für die menschliche Forschung.
1. Koronare Angiographie, Ultraschall und Blutentnahme
<ol><li>Fordern Sie klinische und demografische Basisinformationen an, bevor koronare Interventionen vorliegen. Sammeln Sie die Daten des Einzelnen: Alter, Geschlecht, aktueller Raucherstatus, Body-Mass-Index (BMI), Bluthochdruck, Dyslipidämie, Diabetes mellitus, Medikamente und die Indikation für die aktuelle koronare Angiog...

<ol>
	<li>Cassar, A., Holmes, D. R., Rihal, C. S., Gersh, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+coronary+artery+disease:+diagnosis+and+management.">Chronic coronary artery disease: diagnosis and management.</a> Mayo Clinic Proceedings. 84 (12), 1130-1146 (2009).</li><li>Regueiro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mobilization+of+endothelial+progenitor+cells+in+acute+cardiovascular+events+in+the+PROCELL+study:+time-course+after+acute+myocardial+infarction+and+stroke.">Mobilization of endothelial progenitor cells in acute cardiovascular events in the PROCELL study: time-course after acute myocardial infarction and stroke.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 80, 146-155 (2015).</li><li>Sen, S., McDonald, S. P., Coates, P. T., Bonder, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells:+novel+biomarker+and+promising+cell+therapy+for+cardiovascular+disease.">Endothelial progenitor cells: novel biomarker and promising cell therapy for cardiovascular disease.</a> Clinical Science (Lond). 120 (7), 263-283 (2011).</li><li>Samman Tahhan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progenitor+Cells+and+Clinical+Outcomes+in+Patients+With+Acute+Coronary+Syndromes.">Progenitor Cells and Clinical Outcomes in Patients With Acute Coronary Syndromes.</a> Circulation Research. 122 (11), 1565-1575 (2018).</li><li>Tomuli&#263;, V., Gobi&#263;, D., Luli&#263;, D., &#381;idan, D., Zaputovi&#263;, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soluble+adhesion+molecules+in+patients+with+acute+coronary+syndrome+after+percutaneous+coronary+intervention+with+drug-coated+balloon,+drug-eluting+stent+or+bare+metal+stent.">Soluble adhesion molecules in patients with acute coronary syndrome after percutaneous coronary intervention with drug-coated balloon, drug-eluting stent or bare metal stent.</a> Medical Hypotheses. 95, 20-23 (2016).</li><li>Jaumdally, R., Varma, C., Macfadyen, R. J., Lip, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+sinus+blood+sampling:+an+insight+into+local+cardiac+pathophysiology+and+treatment?.">Coronary sinus blood sampling: an insight into local cardiac pathophysiology and treatment?.</a> European Heart Journal. 28 (8), 929-940 (2007).</li><li>Kremastinos, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracoronary+cyclic-GMP+and+cyclic-AMP+during+percutaneous+transluminal+coronary+angioplasty.">Intracoronary cyclic-GMP and cyclic-AMP during percutaneous transluminal coronary angioplasty.</a> International Journal of Cardiology. 53 (3), 227-232 (1996).</li><li>Karube, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+cytokine+levels+by+coronary+sinus+blood+sampling+during+cardiac+surgery+with+cardiopulmonary+bypass.">Measurement of cytokine levels by coronary sinus blood sampling during cardiac surgery with cardiopulmonary bypass.</a> American Society for Artificial Internal Organs Journal. 42 (5), M787-M791 (1996).</li><li>Truong, Q. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+sinus+biomarker+sampling+compared+to+peripheral+venous+blood+for+predicting+outcomes+in+patients+with+severe+heart+failure+undergoing+cardiac+resynchronization+therapy:+the+BIOCRT+study.">Coronary sinus biomarker sampling compared to peripheral venous blood for predicting outcomes in patients with severe heart failure undergoing cardiac resynchronization therapy: the BIOCRT study.</a> Heart Rhythm. 11 (12), 2167-2175 (2014).</li><li>Su&#225;rez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+circulating+mononuclear+progenitor+cells+and+soluble+biomarkers+in+the+cardiovascular+prognosis+after+coronary+angioplasty.">Coronary circulating mononuclear progenitor cells and soluble biomarkers in the cardiovascular prognosis after coronary angioplasty.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23 (7), 4844-4849 (2019).</li><li>Su&#225;rez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relation+of+Coronary+Artery+Lumen+with+Baseline,+Post-angioplasty+Coronary+Circulating+Pro-Inflammatory+Cytokines+in+Patients+with+Coronary+Artery+Disease.">Relation of Coronary Artery Lumen with Baseline, Post-angioplasty Coronary Circulating Pro-Inflammatory Cytokines in Patients with Coronary Artery Disease.</a> Angiology Open Access. 7, 01 (2019).</li><li>Schmidt-Lucke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+circulating+endothelial+progenitor+cells+using+the+modified+ISHAGE+protocol.">Quantification of circulating endothelial progenitor cells using the modified ISHAGE protocol.</a> PLoS One. 5 (1), e13790 (2010).</li><li>Moyer, C. F., Sajuthi, D., Tulli, H., Williams, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+IL-1+alpha+and+IL-1+beta+by+arterial+cells+in+atherosclerosis.">Synthesis of IL-1 alpha and IL-1 beta by arterial cells in atherosclerosis.</a> American Journal of Pathology. 138 (4), 951-960 (1991).</li><li>Morales-Portano, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Echocardiographic+measurements+of+epicardial+adipose+tissue+and+comparative+ability+to+predict+adverse+cardiovascular+outcomes+in+patients+with+coronary+artery+disease.">Echocardiographic measurements of epicardial adipose tissue and comparative ability to predict adverse cardiovascular outcomes in patients with coronary artery disease.</a> International Journal of Cardiovascular Imaging. 34 (9), 1429-1437 (2018).</li><li>Huang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells+correlated+with+oxidative+stress+after+mild+traumatic+brain+injury.">Endothelial progenitor cells correlated with oxidative stress after mild traumatic brain injury.</a> Yonsei Medical Journal. 58 (5), 1012-1017 (2017).</li></ol>

Die Blutentnahme aus der betroffenen Herzkranzgefäße kann schwierig sein. Manchmal ist die Herzkranzgefäße kaum zugänglich. In diesem Fall kann die Probenahme aus der venösen Sinus eine Alternative sein. Wir führten Validierungstests durch, in denen zirkulierende Biomarker in der Herzkranzgefäße mit venösen Sinus verglichen wurden, ohne signifikante Unterschiede. Die Leistung zirkulierender Biomarker wurde jedoch nur für koronare Proben validiert. Daher muss die Leistung von Biomarkern, die aus der venösen Si...

Koronare Angioplastie und Stents stellen ein Bergungsverfahren für Patienten mit koronaren Herzerkrankungen (CAD) dar. Jedoch, große unerwünschte kardiovaskuläre Ereignisse (MACEs), einschließlich Herz-Kreislauf-Tod, Myokardinfarkt, koronare Restenose, und Episoden von Angina oder Dekompensierung Herzinsuffizienz, kann Monate nach koronaren Eingriff auftreten, was zu ungeplanten Besuchen im Krankenhaus. MACEs sind weltweit verbreitet und ihre Morbi-Sterblichkeit ist hoch1.
Koronare ischämische Verletzungen induzieren eine frühe vaskuläre Reaktion und reparative Mechanismen, die die Mobilisierung von MPCs aufgrund ihrer Differenzierungsfähigkeit und/oder ihres angio-reparativen Potenzials sowie der Produktion von löslichen Molekülen wie interzellulären Adhäsionsmolekülen (ICAMs), Matrix-Metalloproteinasen (MMPs) und reaktiven Sauerstoffspezies, die die Zelladhäsion, gewebeumbauenund, reflektieren, reflektieren. Obwohl intrinsische gefäßliche Merkmale wie Plaque-Eigenschaften und koronare Arterienkomplexität verwendet wurden, um MACEs vorherzusagen, haben einige Studien vorgeschlagen, dass Biomarker im Zusammenhang mit den Mechanismen der Verletzung und Reparatur im koronaren Endothel sehr nützlich für die frühe Identifizierung und Prognose von kardiovaskulären Ereignissen bei Patienten mit CAD, die koronare Angioplastie2,3,4,5.
Kontinuierliches Interesse am Verständnis der Mechanismen, die CAD-Verletzungen und -Reparaturen zugrunde liegen, hat die Forscher motiviert, intrakoronar zirkulierende Biomarker zu untersuchen, da die koronare Probenahme Gefäßschäden genauer widerspiegelt und6repariert. Die Charakterisierung von koronaren Biomarkern in Studien am Menschen war jedoch knapp7,8,9. Daher bestand der Zweck dieser Studie darin, eine Methode zur Bestimmung der Menge an koronar zirkulierenden MPCs und löslichen Molekülen zu beschreiben, die sowohl Gefäßverletzungen als auch Reparaturen widerspiegeln, und zu zeigen, ob diese Biomarker mit MACEs und der klinischen Prognose von CAD-Patienten, die einer koronaren Angioplastie unterzogen wurden, in Verbindung gebracht werden. Diese Methode basiert auf der Verwendung von vaskulären, zirkulierenden MPCs und löslichen Molekülen, die durch Probenahmevonstellen am nächsten an der Gefäßschädigung gewonnen werden. Es kann auch nützlich sein für klinische Studien für Dieschämien unterden Gliedmaßen, Schlaganfall, Vaskulitis, venöse Thrombose, und andere Verletzungen mit Gefäßverletzungen und Reparatur.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10735086001</td>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA) as a buffering agent, stabilizer, standard and for blending.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calibration Beads</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-093-607</td>
			<td>MACQuant calibration beads are supplied in aqueous solution containing 0.05% sodium azide. 3.5 ml for up to 100 tests</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD133/1 (AC133)-PE</td>
			<td>Milteny Biotec / MACS</td>
			<td>#130-080-801</td>
			<td>Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD184 (CXCR4)-PE-VIO770</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-103-798</td>
			<td>Monoclonal, Isotype recombinant human IgG1, conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-093-601</td>
			<td>Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD34-FITC</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-081-001</td>
			<td>The monoclonal antibody clone AC136 detecs a class III epitope of the CD34</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45- VioBlue</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-092-880</td>
			<td>Monoclonal CD45 Antibody, human conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Tubes</td>
			<td>Thermo SCIENTIFIC</td>
			<td>#339651</td>
			<td>15ml conical centrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytometry Tubes</td>
			<td>FALCON Corning Brand</td>
			<td>#352052</td>
			<td>5 mL Polystyrene Round-Bottom Tube. 12x75 style. Sterile.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>#161-0729</td>
			<td>Heavy metals, (as Pb) &#60;10ppm, Fe &#60;0.01%, As &#60;1ppm, Insolubles &#60;0.005%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Improved Neubauer</td>
			<td>Without brand</td>
			<td>Without catalog number</td>
			<td>Hemocytometer for cell counting. (range 0.1000mm, 0.0025mm2)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2 EDTA Blood Collection Tubes</td>
			<td>BD Vacutainer</td>
			<td>#367863</td>
			<td>Lilac plastic vacutainer tube (K2E) 10.8mg, 6 mL.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lymphoprep</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>01-63-12-002-A</td>
			<td>Sterile and checked on the presence of endotoxins. Density: 1.077&#177;0.001g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>#SZBF0920V</td>
			<td>Fixation of biological samples, (powder, 95%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Transfer 1,3mL</td>
			<td>CRM Globe</td>
			<td>PF1016, PF1015</td>
			<td>The transfer pipette is a tool that facilitates liquid transfer with greater accuracy.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test Tubes</td>
			<td>KIMBLE CHASE</td>
			<td>45060 13100</td>
			<td>Heat-resistant test tubes. SIZE/CAP 13 x 100 mm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

coronary progenitor cells and soluble biomarkers in cardiovascular prognosis after coronary angioplasty

Wichtige unerwünschte kardiovaskuläre Ereignisse (MACEs) wirken sich negativ auf die kardiovaskuläre Prognose von Patienten aus, die aufgrund einer koronaren ischämischen Verletzung einer koronaren Angioplastie unterzogen werden. Das Ausmaß der koronaren Schäden und die Mechanismen der Gefäßreparatur sind Faktoren, die die zukünftige Entwicklung von MACEs beeinflussen. Intrinsische gefäßliche Merkmale wie die Plaqueeigenschaften und die Komplexität der Koronararterie haben prognostische Informationen für MACEs gezeigt. Die Verwendung von intrakoronar zirkulierenden Biomarkern wurde jedoch als bequeme Methode zur Früherkennung und Prognose von MACEs postuliert, da sie dynamische Mechanismen mit koronaren Schäden und Reparaturen stärker widerspiegeln. Die Bestimmung koronar zirkulierender Biomarker während der Angioplastie, wie die Anzahl der Subpopulationen mononuklearer Vorläuferzellen (MPCs) sowie die Konzentration löslicher Moleküle, die Entzündungen, Zellhaftung und -reparatur reflektieren, Bewertung zukünftiger Entwicklungen und Prognose von MACEs 6 Monate nach der koronaren Angioplastie. Diese Methode wird durch ihre translationale Natur und bessere Leistung als periphere blutzirkulierende Biomarker in Bezug auf die Vorhersage von MACEs und ihre Auswirkungen auf die kardiovaskuläre Prognose, die für die Risikoschichtung von Patienten angewendet werden kann, hervorgehoben. mit koronaren Herzkrankheit unter angioplasty.

Koronare, venöse Sinus und peripheres Blut wurden von 52 Patienten entnommen, die einer koronaren Angiographie unterzogen wurden (Abbildung 1) und eine hohe Prävalenz von Bluthochdruck und Dyslipidämie zeigten. Bei der klinischen Nachbeobachtung wurden 11 (21,1%) MACEs traten 6 Monate nach koronarer Angiographie auf: Tod (n = 1), Angina, die einen Krankenhausaufenthalt erfordert (n = 6), Myokardinfarkt (n = 2) und/oder Hinweise auf Herzinsuffizienz (n = 4)...

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Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty

Die Entwicklung von schweren kardiovaskulären Ereignissen, die die kardiovaskuläre Prognose nach der koronaren Angioplastie beeinflussen, wird durch das Ausmaß der koronaren Schäden und der Gefäßreparatur beeinflusst. Die Verwendung neuartiger koronarer zellulärer und löslicher Biomarker, die auf Gefäßschäden und -reparaturen reagieren, sind nützlich, um die Entwicklung von MACEs und Prognosen vorherzusagen.

Koronare Vorläuferzellen und lösliche Biomarker bei kardiovaskulärer Prognossie nach koronarer Angioplastie

Major adverse cardiovascular events (MACEs) negatively impact the cardiovascular prognosis of patients undergoing coronary angioplasty due to coronary ...

Obwohl Die Angioplastie Patienten mit koronaren Herzkrankheiten hilft, können kardiovaskuläre Ereignisse auch nach dem Eingriff auftreten. Da MPCs und lösliche Moleküle aus der koronaren Zirkulation gewonnen werden, können sie mit dem Grad der Gefäßschäden und der Reparatur korreliert werden. Koronare MPC- und lösliche Mediator-Spiegel können daher verwendet werden, um kardiovaskuläre Ereignisse und Prognose bei Patienten mit koronaren Herzerkrankungen zu schätzen, die sich einer koronaren Angioplasie unterziehen.MPCs und lösliche Moleküle können auch verwendet werden, um Komplikationen und Prognosen zu schätzen, die unter verschiedenen ischämischen Einstellungen auftreten, wie zum Beispiel rezidivierender Gliedmaßen-Ischmiary-Schlag. Demonstriert werden Eduardo Vera-Gomez und Alejandro Hernandez-Patricio, Labortechniker, sowie Karen De La Vega-Moreno und Carlos Zamora-Aleman, Studenten unter der Klasse. Mit dabei sind auch Gabriela Alexandra Dominguez-Perez, Master-Studentin der Naturwissenschaften, Alberto Melchor-Lopez, Doktorand, und Mario Antonio Tellez-Gonzalez, ein Master-Mitarbeiter für Wissenschaft.Innerhalb einer Stunde nach der Entnahme sechs Milliliter der geernteten Blutprobe in eine 15 Milliliter konische Röhre übertragen und das Blut in PBS im Verhältnis eins zu eins verdünnen. Fügen Sie zwei Milliliter DichteGradientmedium zu drei Reagenzgläsern hinzu und übertragen Sie sorgfältig drei gleiche Aliquots verdünntes Blut in jedes Rohr mit Dichtegradientenmedium. Trennen Sie die Zellen durch Zentrifugation und übertragen Sie die Zellen an der Schnittstelle in ein neues Rohr.Waschen Sie die gesammelten Zellen einmal in zwei Milliliter PBS für sechs Minuten, gefolgt von sechs Wäschen in zwei Millilitern frischer PBS pro Wäsche für zwei Minuten. Nach der letzten Wäsche das MPC-haltige Zellpellet in einem Milliliter PBS zum Zählen wieder aufsetzen und den sechs Zellen ein mal zehn zu den markierten Fünf-Milliliter-Flow-Zytometrieröhren hinzufügen. Pellet die Zellen durch Zentrifugation und fügen Sie 100 Mikroliter des entsprechenden Antikörpers von Interesse, in Antikörper-Inkubationslösung zu jeder Röhre verdünnt.Mischen Sie die Zellen mit jedem zugesetzten Antikörpercocktail für 10 Sekunden und legen Sie die Proben bei vier Grad Celsius, geschützt vor Licht, für 20 Minuten. Zentrifugieren Sie am Ende der Inkubation die Proben und setzen Sie die Pellets in 500 Mikroliter PBS wieder auf, ergänzt durch zwei Millimolar EDTA. Analysieren Sie die Proben mithilfe isotypübereinstimmender Steuerelemente, um die Hintergrundfärbung einzurichten, anhand von Durchflusszytometrie gemäß Standardprotokollen, indem Sie die Lymphozyten in einem vorwärts-neben-Seiten-Streudiagramm verkleben, um Restpartikel, Zellablagerungen und andere Partikel auszuschließen.Legen Sie ein Tor fest, das eine hohe Anzahl von Zellen mit einem CD45-positiven CD34-positiven Phänotyp enthält. Als Nächstes verwenden Sie das CD45-positive CD34-positive Gate, um für Kinase-Insert-Domänenrezeptor-CD133- oder CD184-positive Zellen auszuwählen. Die MPC-Unterpopulationen können dann anhand ihrer spezifischen Zelloberflächenmarker identifiziert und als Prozentsatz der gated Ereignisse gemeldet werden.Um die Konzentration von löslichen Biomarkern in den gesammelten Blutproben zu bestimmen, waschen Sie zunächst die entsprechenden vorbeschichteten ELISA-Platten zweimal mit dem mit dem Kit bereitgestellten Waschpuffer und beschriften Sie die Standard-, Proben- und Steuerröhrchen. Zentrifuge die Blutprobe, um die Blutbestandteile zu trennen und das Plasma in die Probenröhrchen zu aliquote. Übertragen Sie die Normen, Proben und Kontrollen auf die entsprechenden Brunnen und versiegeln und bebrüten die Platte bei 37 Grad Celsius für 90 Minuten.Am Ende der Inkubation den Brunneninhalt entsorgen und den Biotin-Detektionsantikörper in jeden Brunnen geben. Nach einer einstündigen Inkubation bei 37 Grad Celsius den Platteninhalt entsorgen und die Brunnen dreimal mit frischem Waschpuffer pro Waschgang waschen. Nach der letzten Wäsche, inkubieren Sie die Proben mit Streptavidin Arbeitslösung für 30 Minuten bei 37 Grad Celsius gefolgt von drei Wäschen, wie gezeigt.Nach der letzten Wäsche die Proben mit Tetramethylbenzidinsubstrat 30 Minuten bei 37 Grad Celsius behandeln. Wenn sich die Farbe entwickelt, fügen Sie die Stop-Lösung aus dem Kit hinzu und lesen Sie die optische Dichteabsorption in einem Mikroplatten-ELISA-Reader. Um die Konzentration des Tumornekrosefaktors alpha und Interleukin-1 beta mit hilfe immunmagnetischem Multiplexing zu bestimmen, beschriften Sie die Standard-, Proben- und Steuerröhrchen und wirbeln die magnetischen Perlenfläschchen 30 Sekunden lang.Fügen Sie Perlen zu den entsprechenden Brunnen der Multiplexing-Assay-Platte hinzu. Wenn alle Perlen hinzugefügt wurden, legen Sie die Handscheibe der magnetischen Plattenscheibe sicher ein und warten Sie zwei Minuten, bis sich die Perlen auf der Unterseite jedes Brunnens ansammeln, bevor Sie schnell sowohl den Handscheibenscheibenbecher als auch die Plattenmontage über einem Abfallbehälter umkehren. Als nächstes fügen Sie 150 Mikroliter Waschpuffer zu jedem Brunnen hinzu und warten Sie 30 Sekunden, damit sich die Perlen auf dem Boden ansammeln.Entsorgen Sie den Inhalt wieder, wie gerade gezeigt, und fügen Sie 25 Mikroliter universellen Assaypuffer und 25 Mikroliter der vorbereiteten Standards, Proben und Kontrollen hinzu. Versiegeln Sie die Platte für eine mindestens 60-minütige Inkubation, die bei Raumtemperatur vor Licht geschützt ist, und 500 Umdrehungen pro Minute. Am Ende der Inkubation 150 Mikroliter Waschpuffer zu jedem Brunnen hinzufügen und die Perlen für 30 Sekunden begleichen lassen.Verwenden Sie dann die Plattenscheibe, um den Brunneninhalt zu entsorgen und jeden Brunnen mit 25 Mikrolitern Detektionsantikörper-Mischung, gefolgt von zwei Waschungen, zu kennzeichnen, wie gezeigt. Nach der zweiten Wäsche die Proben mit 25 MikroliterStreptavidin PE 30 Minuten bei Raumtemperatur bebrüten. Am Ende der Inkubation 120 Mikroliter Lesepuffer zu jedem Brunnen hinzufügen und die Platte für eine fünfminütige Inkubation, geschützt vor Licht bei Raumtemperatur, für 500 Umdrehungen pro Minute versiegeln.Laden Sie dann die Platte auf einen Multiplexing-Assay-Reader und passen Sie die Leseparameter an jeden Analyten an. Koronare, Venus-Sinus und peripheres Blut wurden von 52 Patienten entnommen, die einer koronaren Angiographie unterzogen wurden und eine hohe Prävalenz von Bluthochdruck und Dyslipidämie zeigten. Die koronare Ausgangskonzentration der meisten MPC war bei Patienten, die große unerwünschte kardiovaskuläre Ereignisse entwickelten, signifikant niedriger, mit einem größeren Rückgang der MPC-Subpopulationen CD34-positiv CD133-positiv und CD45-positiv, CD34-positiv, CD133-positiv, CD184-positiv.Ebenso hatten Patienten, die große unerwünschte kardiovaskuläre Ereignisse entwickelten, eine erhöhte Ausgangsbasis in koronaren Mengen an löslichem ICAM-1 und geringere Mengen an Metallomatrix-Protein 9. Koronare MPCs und lösliches ICAM-1 zeigten eine prognostische Fähigkeit für ein schweres kardiovaskuläres ereignisfreies Überleben. Interessanterweise zeigte die Expression des Tumornekrosefaktors Alpha Variationen je nach Messzeitpunkt und der Lage der koronaren Probenahme auf der Grundlage eines Vergleichs verschiedener Lumenbereiche an derselben Herzkranzgefäße mit intravaskulärem Ultraschall.Achten Sie während der MPC-Isolierung darauf, das Blut auf den Dichtegradienten zu übertragen und die Zellen nach der Zentrifugation sorgfältig von der Schnittstelle zu sammeln. Periodische Wirbel verhindert Perlenfällung und die Verwendung einer magnetischen Plattenscheibe hilft, die Perlen in den Brunnen während der Wäsche zu halten. Koronare MPCs und lösliche Moleküle sind nützlich, um das Risiko kardiovaskulärer Ereignisse während der Nachbeobachtung nach der Angioplastie zu stratieren und bei der Bereitstellung von sekundären Präventionen für Personen mit hohem Risiko zu unterstützen, da diese Technik den pathophysiologischen Prozess widerspiegelt, der während des Lösungsstopps auftritt, es könnte für Bedingungen nützlich sein, bei denen die Gefäßbiologie eine Rolle spielt.

Research

JoVE Journal

Medicine

Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

Koronare Ligation und intramyokardialen Injection in einem Mausmodell der Infarkt

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo.  With the advent of genetic modifications to ...

Forschung

Medizin

Modified Technique for Coronary Artery Ligation in Mice

Geändert Technik für Coronary Artery Ligation in Mäuse

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI ...

Retrograde Perfusion and Filling of Mouse Coronary Vasculature as Preparation for Micro Computed Tomography Imaging

Retrograde Perfusion und Abfüllung von Maus Koronargefäße als Vorbereitung für die Mikro-Computertomographie Imaging

Visualization of the vasculature is becoming increasingly important for understanding many different disease states. While several techniques exist for ...

Permanent Ligation of the Left Anterior Descending Coronary Artery in Mice: A Model of Post-myocardial Infarction Remodelling and Heart Failure

Permanent Ligation des linken vorderen absteigenden Koronararterie bei Mäusen: Ein Modell der Post-Myokardinfarkt Umbau und Herzinsuffizienz

Heart failure is a syndrome in which the heart fails to pump blood at a rate commensurate with cellular oxygen requirements at rest or during stress. It ...

Ultrasound Based Assessment of Coronary Artery Flow and Coronary Flow Reserve Using the Pressure Overload Model in Mice

Ultraschall Basierend Beurteilung der koronaren Herzfluss und koronare Flussreserve Mit der Drucküberlastung Modell an der Maus

Transthoracic Doppler echocardiography (TTDE) is a clinically useful, noninvasive tool for studying coronary artery flow velocity and coronary flow ...

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery (ALCAPA)

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery ALCAPA

Direkter Wieder Implantation von linken Koronararterie in die Aorta bei Erwachsenen mit Anomale Ursprung der linken Koronararterie aus der Lungenarterie (ALCAPA)

Anomalous origin of the left coronary artery from the pulmonary artery (ALCAPA) is a rare congenital anomaly which is one of leading causes of myocardial ...

Identifying Coronary Artery Calcification on Non-gated Computed Tomography Scans

Identifizierung von koronarer Verkalkungen auf berechnet Tomographie Scans nicht eingezäunt

Coronary artery calcification (CAC) provides an objective measure of coronary artery disease and can readily be identified on non-gated computed ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Bewertung des koronaren Flussreservats nach Myokard-Ischämie-Reperfusion bei Ratten

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

In Vitro Model of Coronary Angiogenesis

In Vitro Modell der koronaren Angiogenese

Here, we describe an in vitro culture assay to study coronary angiogenesis. Coronary vessels feed the heart muscle and are of clinical importance. Defects ...

Novel Percutaneous Approach for Deployment of 3D Printed Coronary Stenosis Implants in Swine Models of Ischemic Heart Disease

Neuartiger perkutaner Ansatz für den Einsatz von 3D gedruckten koronaren Stenose-Implantaten in Schweinemodellen ischämischer Herzkrankheit

Minimally invasive methods for creating models of focal coronary narrowing in large animals are challenging. Rapid prototyping using three-dimensionally ...