Name: coronary progenitor cells and soluble biomarkers in cardiovascular prognosis after coronary angioplasty
Uploaded: 2020-01-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty at JoVE.com

המחברים מודים בתמיכת התוכנית המוסדית E015; וfondo Sectorial-CONACYT, SALUD-2014-1-233947.

פרוטוקול זה עונה על ההנחיות המוסדיים מוועדת האתיקה של המחקר האנושי.
1. אנגיוגרפיה כלילית, אולטרסאונד, ודגימת דם
<ol><li>בקשת מידע קליני ודמוגרפי בסיסי לפני התערבות כלילית. לאסוף את הנתונים של הפרט: גיל, סקס, מצב עישון הנוכחי, מדד מסת הגוף (BMI), לחץ דם גבוה, dyslipidemia, סוכרת, תרופות, וא?...

<ol>
	<li>Cassar, A., Holmes, D. R., Rihal, C. S., Gersh, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+coronary+artery+disease:+diagnosis+and+management.">Chronic coronary artery disease: diagnosis and management.</a> Mayo Clinic Proceedings. 84 (12), 1130-1146 (2009).</li><li>Regueiro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mobilization+of+endothelial+progenitor+cells+in+acute+cardiovascular+events+in+the+PROCELL+study:+time-course+after+acute+myocardial+infarction+and+stroke.">Mobilization of endothelial progenitor cells in acute cardiovascular events in the PROCELL study: time-course after acute myocardial infarction and stroke.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 80, 146-155 (2015).</li><li>Sen, S., McDonald, S. P., Coates, P. T., Bonder, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells:+novel+biomarker+and+promising+cell+therapy+for+cardiovascular+disease.">Endothelial progenitor cells: novel biomarker and promising cell therapy for cardiovascular disease.</a> Clinical Science (Lond). 120 (7), 263-283 (2011).</li><li>Samman Tahhan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progenitor+Cells+and+Clinical+Outcomes+in+Patients+With+Acute+Coronary+Syndromes.">Progenitor Cells and Clinical Outcomes in Patients With Acute Coronary Syndromes.</a> Circulation Research. 122 (11), 1565-1575 (2018).</li><li>Tomuli&#263;, V., Gobi&#263;, D., Luli&#263;, D., &#381;idan, D., Zaputovi&#263;, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soluble+adhesion+molecules+in+patients+with+acute+coronary+syndrome+after+percutaneous+coronary+intervention+with+drug-coated+balloon,+drug-eluting+stent+or+bare+metal+stent.">Soluble adhesion molecules in patients with acute coronary syndrome after percutaneous coronary intervention with drug-coated balloon, drug-eluting stent or bare metal stent.</a> Medical Hypotheses. 95, 20-23 (2016).</li><li>Jaumdally, R., Varma, C., Macfadyen, R. J., Lip, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+sinus+blood+sampling:+an+insight+into+local+cardiac+pathophysiology+and+treatment?.">Coronary sinus blood sampling: an insight into local cardiac pathophysiology and treatment?.</a> European Heart Journal. 28 (8), 929-940 (2007).</li><li>Kremastinos, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracoronary+cyclic-GMP+and+cyclic-AMP+during+percutaneous+transluminal+coronary+angioplasty.">Intracoronary cyclic-GMP and cyclic-AMP during percutaneous transluminal coronary angioplasty.</a> International Journal of Cardiology. 53 (3), 227-232 (1996).</li><li>Karube, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+cytokine+levels+by+coronary+sinus+blood+sampling+during+cardiac+surgery+with+cardiopulmonary+bypass.">Measurement of cytokine levels by coronary sinus blood sampling during cardiac surgery with cardiopulmonary bypass.</a> American Society for Artificial Internal Organs Journal. 42 (5), M787-M791 (1996).</li><li>Truong, Q. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+sinus+biomarker+sampling+compared+to+peripheral+venous+blood+for+predicting+outcomes+in+patients+with+severe+heart+failure+undergoing+cardiac+resynchronization+therapy:+the+BIOCRT+study.">Coronary sinus biomarker sampling compared to peripheral venous blood for predicting outcomes in patients with severe heart failure undergoing cardiac resynchronization therapy: the BIOCRT study.</a> Heart Rhythm. 11 (12), 2167-2175 (2014).</li><li>Su&#225;rez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+circulating+mononuclear+progenitor+cells+and+soluble+biomarkers+in+the+cardiovascular+prognosis+after+coronary+angioplasty.">Coronary circulating mononuclear progenitor cells and soluble biomarkers in the cardiovascular prognosis after coronary angioplasty.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23 (7), 4844-4849 (2019).</li><li>Su&#225;rez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relation+of+Coronary+Artery+Lumen+with+Baseline,+Post-angioplasty+Coronary+Circulating+Pro-Inflammatory+Cytokines+in+Patients+with+Coronary+Artery+Disease.">Relation of Coronary Artery Lumen with Baseline, Post-angioplasty Coronary Circulating Pro-Inflammatory Cytokines in Patients with Coronary Artery Disease.</a> Angiology Open Access. 7, 01 (2019).</li><li>Schmidt-Lucke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+circulating+endothelial+progenitor+cells+using+the+modified+ISHAGE+protocol.">Quantification of circulating endothelial progenitor cells using the modified ISHAGE protocol.</a> PLoS One. 5 (1), e13790 (2010).</li><li>Moyer, C. F., Sajuthi, D., Tulli, H., Williams, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+IL-1+alpha+and+IL-1+beta+by+arterial+cells+in+atherosclerosis.">Synthesis of IL-1 alpha and IL-1 beta by arterial cells in atherosclerosis.</a> American Journal of Pathology. 138 (4), 951-960 (1991).</li><li>Morales-Portano, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Echocardiographic+measurements+of+epicardial+adipose+tissue+and+comparative+ability+to+predict+adverse+cardiovascular+outcomes+in+patients+with+coronary+artery+disease.">Echocardiographic measurements of epicardial adipose tissue and comparative ability to predict adverse cardiovascular outcomes in patients with coronary artery disease.</a> International Journal of Cardiovascular Imaging. 34 (9), 1429-1437 (2018).</li><li>Huang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells+correlated+with+oxidative+stress+after+mild+traumatic+brain+injury.">Endothelial progenitor cells correlated with oxidative stress after mild traumatic brain injury.</a> Yonsei Medical Journal. 58 (5), 1012-1017 (2017).</li></ol>

איסוף הדם מעורק העורקים המושפע עלול להיות קשה. לפעמים, עורק העורק הראשי. בקושי נגיש במקרה זה, דגימת סינוס של הורידים עשויה להיות חלופה. בוצעו בדיקות אימות השוואת ביורים מחזורי הסמנים בעורק כלילי לעומת הסינוס ורידי, ללא הבדלים משמעותיים. עם זאת, הביצועים של מחזורי הסמנים הבין-מסתובבים אומתו...

אנגיופלסטיקה כלילית והסטטינג מייצגים הליך הצלה עבור חולים עם מחלת עורקים כלילית (CAD). עם זאת, אירועים משמעותיים וכלי דם שליליים (MACEs), כולל מוות לב וכלי דם, אוטם שריר הלב, היצרות מחדש כלילית, ופרקים של אי ספיקת לב או חוסר התאמה, עלול להתרחש חודשים לאחר התערבות כלילית, הצגת ביקורים לא מתוכננת לבית החולים. מק נפוצים ברחבי העולם והתמותה המורבית שלהם הוא גבוה1.
פגיעה איסכמי כלילית גורמת התגובה כלי דם מוקדם מנגנונים מגיבים מעורבים הגיוס של mpcs בשל יכולת הבידול שלהם ו/או הפוטנציאל מגיב, כמו גם את הייצור של מולקולות מסיסים כמו מולקולות הדבקה התרבות (icams), מטריקס מטלומטיות (mmps), ומינים חמצן תגובתי, המשקף תא ה למרות התכונות הפנימיות כלי דם כמו מאפייני פלאק ומורכבות עורק כלילי שימשו כדי לנבא maces, מחקרים מסוימים הראו כי בסמנים הקשורים מנגנונים של פציעה ותיקון המתרחשים אנדותל כלילית יכול להיות מאוד שימושי לזיהוי מוקדם ופרוגנוזה של אירועי לב וכלי דם בחולים עם CAD נשלח לניתוח כלילית2,
עניין מתמשך של הבנת המנגנונים בבסיס הפציעה CAD ותיקון יש מוטיבציה חוקרים לחקור בסמנים מחזורי במחזור תאיים, כי דגימה כלילית יותר משקף נזק כלי דם ותיקון6. עם זאת, אפיון של סמנים כליליים במחקרים אנושיים כבר נדיר7,8,9. לכן, מטרת המחקר הנוכחי היה לתאר שיטה כדי לקבוע את הכמות של מחזורי כלילית MPCs ו מולקולות מסיסים, המשקף הן פגיעה בכלי הדם ותיקון, כדי להראות אם אלה בסמנים הקשורים MACEs ואת הפרוגנוזה הקלינית של מטופלים CAD שעברו כלילית אנגיופלסטיקה. שיטה זו מבוססת על שימוש בכלי דם הקשורים, מחזורי MPCs ו מולקולות מסיסים שהתקבלו על ידי מיקומים דגימה הקרובה ביותר לנזק כלי. זה עשוי גם להיות שימושי עבור מחקרים קליניים עבור איסכמיה הגפיים התחתונה, שבץ, דלקת כלי דם, פקקת ורידי, ופציעות אחרות הקשורות לפציעה ותיקון של נימי דם.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10735086001</td>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA) as a buffering agent, stabilizer, standard and for blending.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calibration Beads</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-093-607</td>
			<td>MACQuant calibration beads are supplied in aqueous solution containing 0.05% sodium azide. 3.5 ml for up to 100 tests</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD133/1 (AC133)-PE</td>
			<td>Milteny Biotec / MACS</td>
			<td>#130-080-801</td>
			<td>Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD184 (CXCR4)-PE-VIO770</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-103-798</td>
			<td>Monoclonal, Isotype recombinant human IgG1, conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-093-601</td>
			<td>Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD34-FITC</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-081-001</td>
			<td>The monoclonal antibody clone AC136 detecs a class III epitope of the CD34</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45- VioBlue</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-092-880</td>
			<td>Monoclonal CD45 Antibody, human conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Tubes</td>
			<td>Thermo SCIENTIFIC</td>
			<td>#339651</td>
			<td>15ml conical centrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytometry Tubes</td>
			<td>FALCON Corning Brand</td>
			<td>#352052</td>
			<td>5 mL Polystyrene Round-Bottom Tube. 12x75 style. Sterile.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>#161-0729</td>
			<td>Heavy metals, (as Pb) &#60;10ppm, Fe &#60;0.01%, As &#60;1ppm, Insolubles &#60;0.005%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Improved Neubauer</td>
			<td>Without brand</td>
			<td>Without catalog number</td>
			<td>Hemocytometer for cell counting. (range 0.1000mm, 0.0025mm2)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2 EDTA Blood Collection Tubes</td>
			<td>BD Vacutainer</td>
			<td>#367863</td>
			<td>Lilac plastic vacutainer tube (K2E) 10.8mg, 6 mL.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lymphoprep</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>01-63-12-002-A</td>
			<td>Sterile and checked on the presence of endotoxins. Density: 1.077&#177;0.001g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>#SZBF0920V</td>
			<td>Fixation of biological samples, (powder, 95%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Transfer 1,3mL</td>
			<td>CRM Globe</td>
			<td>PF1016, PF1015</td>
			<td>The transfer pipette is a tool that facilitates liquid transfer with greater accuracy.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test Tubes</td>
			<td>KIMBLE CHASE</td>
			<td>45060 13100</td>
			<td>Heat-resistant test tubes. SIZE/CAP 13 x 100 mm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

coronary progenitor cells and soluble biomarkers in cardiovascular prognosis after coronary angioplasty

מייג אירועים שליליים לב וכלי דם (MACEs) השפעה שלילית על הפרוגנוזה לב וכלי דם של חולים שעברו אנגיופלסטיקה כלילית עקב פציעה איסכמי כלילית. היקף הנזק הכלילי ומנגנוני תיקון כלי הדם הם גורמים המשפיעים על התפתחות עתידית של MACEs. תכונות כלי דם פנימיים כמו מאפייני הפלאק ומורכבות עורק כלילית הפגינו מידע התחזיות של MACEs. עם זאת, השימוש בסמנים מחזורי במחזור תאיים כבר היסוד כשיטה נוחה לזיהוי מוקדם הפרוגנוזה של MACEs, כפי שהם יותר קרוב לשקף מנגנונים דינאמיים מעורבים נזק כלילית ותיקון. קביעת כלילית מחזורי הסמנים במהלך הניתוח אנגיופלסטיקה, כגון מספר אוכלוסיות משנה של בתאי מחולל קדמון (MPCs), כמו גם ריכוז של מולקולות מסיסים המשקף דלקת, הדבקה תא, ותיקון, מאפשר הערכה של ההתפתחויות בעתיד ואת הפרוגנוזה של MACEs 6 חודשים לאחר הניתוח אנגיופלסטיקה. שיטה זו מודגשת על ידי הטבע הטרנסג שלה וביצועים טובים יותר מאשר דם היקפי מחזורי ביואריטים לגבי חיזוי של MACEs ואת השפעתו על פרוגנוזה לב וכלי דם, אשר ניתן להחיל על ריבוד סיכון של חולים עם מחלת עורקים בעורק כלילי.

כלילית, סינוס ורידי דם היקפי נאספו מ 52 חולים שעברו אנגיוגרפיה כלילית (איור 1) והראה שכיחות גבוהה של יתר לחץ דם, dyslipidemia. במהלך הטיפול הקליני, 11 (21.1%) MACEs התרחשה 6 חודשים לאחר אנגיוגרפיה כלילית: מוות (n = 1), אנגינה הדורשת נוכחות בבית החולים (n = 6), אוטם שריר הלב (n = 2), ו...

Watch this Scientific Journal Video about Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty at JoVE.com

Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty

פיתוח של אירועים משמעותיים וכלי דם לוואי, אשר השפעה פרוגנוזה לב וכלי דם לאחר הניתוח אנגיוקולרי, מושפעים במידה של נזק כלילית ותיקון כלי דם. השימוש בסמנים מסיסים בעלי כלילית תאית ומסיס, מגיב לנזק ולתיקון כלי דם, שימושיים לניבוי התפתחות של MACEs ופרוגנוזה.

תאים כליליים ובסמנים מסיסים בפרוגנוזה לב וכלי דם לאחר אנגיופלסטיקה כלילית

Major adverse cardiovascular events (MACEs) negatively impact the cardiovascular prognosis of patients undergoing coronary angioplasty due to coronary ...

למרות אנגיופלסטיקה מסייעת לחולים עם מחלת לב כלילית, אירועי לב וכלי דם עדיין יכול להתרחש לאחר ההליך. כמו MPCs ומולקולות מסיסים מתקבלים ממחזור הכלילי, הם יכולים להיות בקורלציה עד מידת נזק כלי הדם ותיקון. MPC כלילית ורמות מתווך מסיס ולכן ניתן להשתמש כדי להעריך אירועי לב וכלי דם ופרוגנוזה בחולים עם מחלת לב כלילית עוברים אנגיופלסטיקה כללית.MPCs ומולקולות מסיסים עשויים לשמש גם כדי להעריך סיבוכים ופרוגנוזה המתרחשים תחת הגדרות איסכמיות שונות, כגון שבץ איסכמי גפיים חוזר. הדגמת ההליך תהיה אדוארדו ורה-גומז ואלחנדרו הרננדז-פטריסיו, טכנאי מעבדה, וקארן דה לה וגה-מורנו וקרלוס זמורה-אלמן, סטודנטים לתואר ראשון. כמו כן יפגינו גבריאלה אלכסנדרה דומינגז-פרז, סטודנטית לתואר שני במדעים, אלברטו מלכיור-לופז, דוקטורנט, ומריו אנטוניו טלס-גונזלס, אמן המדעים.בתוך שעה אחת של איסוף, להעביר שישה מיליליטר של דגימת הדם שנקטפו לצינור חרוט 15 מיליליטר ולדלל את הדם ביחס של אחד לאחד PBS. מוסיפים שני מיליליטר של צפיפות הדרגתית בינונית לשלוש מבחנות ומעבירים בזהירות שלושה אליקוטים שווים של דם מדולל לכל צינור של מדיום שיפוע צפיפות. להפריד את התאים על ידי צנטריפוגה ולהעביר את התאים בממשק לצינור חדש.לשטוף את התאים שנאספו פעם אחת בשני מיליליטר של PBS במשך שש דקות, ואחריו שש שטיפות בשני מיליליטר של PBS טרי לכל לשטוף במשך שתי דקות. לאחר הכביסה האחרונה, להשעות מחדש את גלולת התא המכיל MPC במיליליטר אחד של PBS לספירה ולהוסיף פעם אחת עשרה לש ששת התאים שכותרתו חמישה צינורות ציטומטריה זרימה מיליליטר. גלולה את התאים על ידי צנטריפוגה ולהוסיף 100 microliters של הנוגדן המתאים של עניין, מדולל בתת פתרון דגירה נוגדנים לכל צינור.מערבבים בעדינות את התאים עם כל קוקטייל נוגדנים נוסף במשך 10 שניות, ומ מניחים את הדגימות בארבע מעלות צלזיוס, מוגנות מפני אור, במשך 20 דקות. בסוף הדגירה, צנטריפוגה הדגימות מחדש להשעות את כדורי 500 microliters של PBS בתוספת שני EDTA מילימולר. באמצעות פקדים תואמי isotype כדי להגדיר את כתמי הרקע, לנתח את הדגימות על ידי ציטומטריית זרימה על פי פרוטוקולים סטנדרטיים, gating על הלימפוציטים בעלילה פיזור קדימה לצד זה, כדי לא לכלול גרנולוציטים שיורית, פסולת תאית, וחלקיקים אחרים.הגדר שער כך שיכיל מספר גבוה של תאים עם פנוטיפ CD34 חיובי ל- CD45. לאחר מכן, השתמש בשער CD34 חיובי CD34 חיובי כדי לבחור עבור קינאז הכנס קולטן תחום CD133 או CD184 חיובי תאים. לאחר מכן ניתן לזהות את אוכלוסיות המשנה של MPC על-ידי סמני פני התא הספציפיים שלהן ולדווח כאחוז האירועים המגודרים.כדי לקבוע את הריכוז של סמנים ביולוגיים מסיסים בדגימות הדם שנאספו, ראשית, לשטוף את צלחות ELISA מצופה מראש המתאים פעמיים עם מאגר לשטוף המסופק על ידי ערכה ולתייג את תקן, מדגם, צינורות בקרה. צנטריפוגה דגימת הדם כדי להפריד את מרכיבי הדם aliquot הפלזמה לתוך צינורות מדגם. מעבירים את התקנים, הדגימות והבקרות ל בארות המתאימות וחותמים ודגירה את הצלחת ב-37 מעלות צלזיוס למשך 90 דקות.בסוף הדגירה, להשליך את תכולת הבאר ולהוסיף את הנוגדן גילוי ביוטין לכל באר. לאחר דגירה של שעה ב 37 מעלות צלזיוס, להשליך את תכולת הצלחת ולשטוף את הבארים שלוש פעמים עם חיץ לשטוף טרי לכל לשטוף. לאחר הכביסה האחרונה, הדגירה את הדגימות עם פתרון עבודה סטרפטוודין במשך 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס ואחריו שלוש שטיפות, כפי שהוכח.לאחר הכביסה האחרונה, לטפל בדגימות עם מצע tetramethylbenzidine במשך 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס. כאשר הצבע מתפתח, להוסיף פתרון עצירה מהערכה ולקרוא את ספיגת צפיפות אופטית קורא ELISA מיקרופלאט. כדי לקבוע את הריכוז של אלפא גורם נמק הגידול, אינטרלוקין-1 בטא, באמצעות מולטיפלקסינג אימונומגנטי, תווית רגיל, מדגם, צינורות בקרה ומערבולת בקבוקונים חרוז מגנטי במשך 30 שניות.מוסיפים חרוזים לבאנות המתאימות של צלחת ההתמדה המרובת. כאשר כל חרוזים נוספו, להכניס בבטחה את מכונת הכביסה צלחת מגנטית כף יד, ולחכות שתי דקות עבור חרוזים לצבור על החלק התחתון של כל באר, לפני היפוך מהיר הן מכונת כביסה מגנטית כף יד, ואת הרכבה צלחת מעל מיכל פסולת. לאחר מכן, להוסיף 150 microliters של חיץ לשטוף לכל באר ולחכות 30 שניות כדי לאפשר את חרוזים לצבור בתחתית.השלך את התוכן שוב כפי שהוכח זה בלבד והוסף 25 מיקרוליטרים של מאגר בדיקה אוניברסלי ו- 25 מיקרוליטרים של הסטנדרטים, הדגימות והפקדים המוכנים. לאטום את הצלחת לפחות 60 דקות דגירה, מוגן מפני אור בטמפרטורת החדר, ו 500 סיבובים לדקה. בסוף הדגירה, מוסיפים 150 מיקרוליטרים של חיץ שטיפה לכל באר ומאפשרים לחדדים להתיישב במשך 30 שניות.לאחר מכן, השתמש בכביסה כדי להשליך את תכולת הבאר ולתייג כל באר עם 25 microliters של תערובת נוגדנים זיהוי ואחריו שתי שטיפות, כפי שהודגם. לאחר הכביסה השנייה, הדגירה את הדגימות עם 25 microliters של סטרפטבידין PE במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר. בסוף הדגירה, מוסיפים 120 מיקרוליטרים של חיץ קריאה לכל באר ואוטמים את הצלחת במשך חמש דקות דגירה, מוגנת מפני אור בטמפרטורת החדר, במשך 500 סיבובים לדקה.לאחר מכן, לטעון את הצלחת על קורא מים multiplexing ולהתאים את פרמטרי הקריאה על פי כל analyte. כלילי, ונוס-סינוס, ודם היקפי נאספו מ 52 חולים שעברו אנגיוגרפיה כלילת והפגינו שכיחות גבוהה של יתר לחץ דם ודיסליפידמיה. הריכוז הכלילי הבסיסי של רוב MPCs היה נמוך משמעותית בחולים שפיתחו אירועי לב וכלי דם שליליים גדולים, עם ירידה גדולה יותר בתת-תפוקות MPC CD34 חיובי CD133 חיובי, ו- CD45 חיובי, CD34 חיובי, CD133 חיובי, CD184 חיובי.כמו כן, חולים שפיתחו אירועי לב וכלי דם שליליים גדולים היו בסיס מוגבר בכמויות הכליליות של ICAM-1 מסיסים כמויות נמוכות יותר של חלבון metallomatrix 9. MPCs כליליים ו ICAM-1 מסיסים הפגינו יכולת פרוגנוסטית להישרדות גדולה ללא אירועים קרדיווסקולריים שליליים. מעניין, הביטוי של אלפא גורם נמק הגידול הפגינו וריאציות על פי זמן המדידה ואת המיקום של דגימה כלילית מבוסס על השוואה של אזורי לומן שונים באותו עורק הכלילי, באמצעות אולטרסאונד תוך וסקולרי.במהלך בידוד MPC, הקפד להעביר את הדם על שיפוע הצפיפות, ולאסוף את התאים מהממשק לאחר צנטריפוגה בזהירות. מערבולת תקופתית מונעת משקעים של חרוזים ושימוש בכביסה מגנטית מסייע לשמור את חרוזים בתוך בארות במהלך שטיפה. MPCs כלילי ומולקולות מסיסים שימושיים עבור ריבוד הסיכון של אירועי לב וכלי דם במהלך מעקב לאחר אנגיופלסטיקה, סיוע במתן מניעות משניות לאנשים בסיכון גבוה כמו טכניקה זו משקפת את התהליך הפתופיזיולוגי המתרחשת במהלך הפסקת הפתרון, זה עשוי להיות שימושי עבור תנאים שבהם ביולוגיה של כלי הדם ממלא תפקיד.

Research

JoVE Journal

Medicine

Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

קשירת עורקים כלילית לבין הזרקת Intramyocardial ב מודל Murine של אוטם

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo.  With the advent of genetic modifications to ...

Modified Technique for Coronary Artery Ligation in Mice

טכניקה שונה לקשירת עורקים הכליליים בעכברים

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI ...

Retrograde Perfusion and Filling of Mouse Coronary Vasculature as Preparation for Micro Computed Tomography Imaging

זלוף מדרדר ומילוי בכלי הדם הכליליים עכבר כהכנה מיקרו טומוגרפיה ממוחשבת והדמיה

Visualization of the vasculature is becoming increasingly important for understanding many different disease states. While several techniques exist for ...

Permanent Ligation of the Left Anterior Descending Coronary Artery in Mice: A Model of Post-myocardial Infarction Remodelling and Heart Failure

קשירת קבע של העורק השמאלי קדמי יורד כלילית בעכברים: דגם של Remodelling אוטם שריר לב ופוסט-אי ספיקת לב

Heart failure is a syndrome in which the heart fails to pump blood at a rate commensurate with cellular oxygen requirements at rest or during stress. It ...

Ultrasound Based Assessment of Coronary Artery Flow and Coronary Flow Reserve Using the Pressure Overload Model in Mice

הערכת אולטראסאונד מבוססת של עורקים הכליליים זרימה והזרימה כלילית ריזרב שימוש בדגם עומס יתר הלחץ בעכברים

Transthoracic Doppler echocardiography (TTDE) is a clinically useful, noninvasive tool for studying coronary artery flow velocity and coronary flow ...

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery (ALCAPA)

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery ALCAPA

Re-ההשתלה ישיר של העורקים הכליליים שמאל לתוך אבי העורקים של מבוגרים עם אנומליים מוצא העורקים הכליליים שמאל מן העורק הריאתי (ALCAPA)

Anomalous origin of the left coronary artery from the pulmonary artery (ALCAPA) is a rare congenital anomaly which is one of leading causes of myocardial ...

Identifying Coronary Artery Calcification on Non-gated Computed Tomography Scans

זיהוי הסתיידות עורקים על שאינם ממותגת שחושב סריקות טומוגרפיה ממוחשבת

Coronary artery calcification (CAC) provides an objective measure of coronary artery disease and can readily be identified on non-gated computed ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

הערכה של שמורת זרם כלילית לאחר איסכמיה אוטם שריר הלב Reperfusion בחולדות

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

In Vitro Model of Coronary Angiogenesis

מודל מבחנה של אנגיוגנזה כלילית

Here, we describe an in vitro culture assay to study coronary angiogenesis. Coronary vessels feed the heart muscle and are of clinical importance. Defects ...

Novel Percutaneous Approach for Deployment of 3D Printed Coronary Stenosis Implants in Swine Models of Ischemic Heart Disease

רומן פרעורית הגישה לפריסה של 3D הודפס שתלים היצרות כלילית בתוך מודלים החזירים של מחלת לב איסכמי

Minimally invasive methods for creating models of focal coronary narrowing in large animals are challenging. Rapid prototyping using three-dimensionally ...