Name: coronary progenitor cells and soluble biomarkers in cardiovascular prognosis after coronary angioplasty
Uploaded: 2020-01-28T13:00:00
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Gli autori ringraziano il sostegno del Programma Istituzionale E015; e PARTES-CONACYT Sectoria-CONACYT, SALUD-2014-1-233947.

Questo protocollo soddisfa le linee guida istituzionali del Comitato Etico per la ricerca umana.
1. Angiografia coronaria, ultrasuoni e campionamento del sangue
<ol><li>Richiedere informazioni cliniche e demografiche di base prima dell'intervento coronarica. Raccogliere i dati dell'individuo: età, sesso, stato di fumo attuale, indice di massa corporea (BMI), alta pressione sanguigna, dilipidemia, diabete mellito, farmaci e l'indicazione per l'attuale angiografia coronarica.</li>
	<li>Esegui...

<ol>
	<li>Cassar, A., Holmes, D. R., Rihal, C. S., Gersh, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+coronary+artery+disease:+diagnosis+and+management.">Chronic coronary artery disease: diagnosis and management.</a> Mayo Clinic Proceedings. 84 (12), 1130-1146 (2009).</li><li>Regueiro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mobilization+of+endothelial+progenitor+cells+in+acute+cardiovascular+events+in+the+PROCELL+study:+time-course+after+acute+myocardial+infarction+and+stroke.">Mobilization of endothelial progenitor cells in acute cardiovascular events in the PROCELL study: time-course after acute myocardial infarction and stroke.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 80, 146-155 (2015).</li><li>Sen, S., McDonald, S. P., Coates, P. T., Bonder, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells:+novel+biomarker+and+promising+cell+therapy+for+cardiovascular+disease.">Endothelial progenitor cells: novel biomarker and promising cell therapy for cardiovascular disease.</a> Clinical Science (Lond). 120 (7), 263-283 (2011).</li><li>Samman Tahhan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progenitor+Cells+and+Clinical+Outcomes+in+Patients+With+Acute+Coronary+Syndromes.">Progenitor Cells and Clinical Outcomes in Patients With Acute Coronary Syndromes.</a> Circulation Research. 122 (11), 1565-1575 (2018).</li><li>Tomuli&#263;, V., Gobi&#263;, D., Luli&#263;, D., &#381;idan, D., Zaputovi&#263;, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soluble+adhesion+molecules+in+patients+with+acute+coronary+syndrome+after+percutaneous+coronary+intervention+with+drug-coated+balloon,+drug-eluting+stent+or+bare+metal+stent.">Soluble adhesion molecules in patients with acute coronary syndrome after percutaneous coronary intervention with drug-coated balloon, drug-eluting stent or bare metal stent.</a> Medical Hypotheses. 95, 20-23 (2016).</li><li>Jaumdally, R., Varma, C., Macfadyen, R. J., Lip, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+sinus+blood+sampling:+an+insight+into+local+cardiac+pathophysiology+and+treatment?.">Coronary sinus blood sampling: an insight into local cardiac pathophysiology and treatment?.</a> European Heart Journal. 28 (8), 929-940 (2007).</li><li>Kremastinos, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracoronary+cyclic-GMP+and+cyclic-AMP+during+percutaneous+transluminal+coronary+angioplasty.">Intracoronary cyclic-GMP and cyclic-AMP during percutaneous transluminal coronary angioplasty.</a> International Journal of Cardiology. 53 (3), 227-232 (1996).</li><li>Karube, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+cytokine+levels+by+coronary+sinus+blood+sampling+during+cardiac+surgery+with+cardiopulmonary+bypass.">Measurement of cytokine levels by coronary sinus blood sampling during cardiac surgery with cardiopulmonary bypass.</a> American Society for Artificial Internal Organs Journal. 42 (5), M787-M791 (1996).</li><li>Truong, Q. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+sinus+biomarker+sampling+compared+to+peripheral+venous+blood+for+predicting+outcomes+in+patients+with+severe+heart+failure+undergoing+cardiac+resynchronization+therapy:+the+BIOCRT+study.">Coronary sinus biomarker sampling compared to peripheral venous blood for predicting outcomes in patients with severe heart failure undergoing cardiac resynchronization therapy: the BIOCRT study.</a> Heart Rhythm. 11 (12), 2167-2175 (2014).</li><li>Su&#225;rez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+circulating+mononuclear+progenitor+cells+and+soluble+biomarkers+in+the+cardiovascular+prognosis+after+coronary+angioplasty.">Coronary circulating mononuclear progenitor cells and soluble biomarkers in the cardiovascular prognosis after coronary angioplasty.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23 (7), 4844-4849 (2019).</li><li>Su&#225;rez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relation+of+Coronary+Artery+Lumen+with+Baseline,+Post-angioplasty+Coronary+Circulating+Pro-Inflammatory+Cytokines+in+Patients+with+Coronary+Artery+Disease.">Relation of Coronary Artery Lumen with Baseline, Post-angioplasty Coronary Circulating Pro-Inflammatory Cytokines in Patients with Coronary Artery Disease.</a> Angiology Open Access. 7, 01 (2019).</li><li>Schmidt-Lucke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+circulating+endothelial+progenitor+cells+using+the+modified+ISHAGE+protocol.">Quantification of circulating endothelial progenitor cells using the modified ISHAGE protocol.</a> PLoS One. 5 (1), e13790 (2010).</li><li>Moyer, C. F., Sajuthi, D., Tulli, H., Williams, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+IL-1+alpha+and+IL-1+beta+by+arterial+cells+in+atherosclerosis.">Synthesis of IL-1 alpha and IL-1 beta by arterial cells in atherosclerosis.</a> American Journal of Pathology. 138 (4), 951-960 (1991).</li><li>Morales-Portano, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Echocardiographic+measurements+of+epicardial+adipose+tissue+and+comparative+ability+to+predict+adverse+cardiovascular+outcomes+in+patients+with+coronary+artery+disease.">Echocardiographic measurements of epicardial adipose tissue and comparative ability to predict adverse cardiovascular outcomes in patients with coronary artery disease.</a> International Journal of Cardiovascular Imaging. 34 (9), 1429-1437 (2018).</li><li>Huang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells+correlated+with+oxidative+stress+after+mild+traumatic+brain+injury.">Endothelial progenitor cells correlated with oxidative stress after mild traumatic brain injury.</a> Yonsei Medical Journal. 58 (5), 1012-1017 (2017).</li></ol>

La raccolta di sangue dall'arteria coronaria interessata può essere difficile. A volte, l'arteria coronaria è a malapena accessibile. In questo caso, il campionamento dal seno venoso può essere un'alternativa. Abbiamo eseguito test di convalida confrontando biomarcatori circolanti nell'arteria coronaria contro il seno venoso, senza differenze significative. Tuttavia, le prestazioni dei biomarcatori circolanti sono state convalidate solo per il campionamento coronario. Pertanto, le prestazioni dei biomarcatori ottenuti...

L'angioplastica coronarica e lo stenting rappresentano una procedura di recupero per i pazienti con malattia coronarica (CAD). Tuttavia, importanti eventi cardiovascolari avversi (MACE), tra cui la morte cardiovascolare, l'infarto miocardico, la restenosi coronarica e gli episodi di angina o insufficienza cardiaca di scompensare, possono verificarsi mesi dopo l'intervento coronarico, spingendo visite non programmate in ospedale. I MACE sono comuni in tutto il mondo e la loro morbi-mortalità è alta1.
La lesione coronarica ischemica induce la risposta vascolare precoce e meccanismi riparativi che coinvolgono la mobilitazione dei MMP a causa della loro capacità di differenziazione e/o del potenziale angio-reparativo, così come la produzione di molecole solubili come molecole di adesione intercellulare (ICAM), metalloproteine a matrice (MMM), e specie reattive dell'ossigeno, che riflette l'adesione cellulare, la rimodellamento dei tessuti e lo stress ossidativo. Anche se caratteristiche vascolari intrinseche come le caratteristiche della placca e la complessità dell'arteria coronaria sono state utilizzate per prevedere i MACE, alcuni studi hanno suggerito che i biomarcatori correlati ai meccanismi di lesione e riparazione che si verificano nell'endotelio coronario potrebbero essere molto utili per l'identificazione precoce e la prognosi di eventi cardiovascolari in pazienti con CAD sottoposti all'angioplastica coronaria2,3,4,5.
Il continuo interesse per la comprensione dei meccanismi alla base delle lesioni e della riparazione CAD ha motivato gli sperimentatori a studiare i biomarcatori circolanti intracoronari, perché il campionamento coronarica riflette più da vicino i danni vascolari e la riparazione6. Tuttavia, la caratterizzazione dei biomarcatori coronarici negli studi sull'uomo è stata scarsa7,8,9. Pertanto, lo scopo del presente studio era descrivere un metodo per determinare la quantità di MPC circolanti coronarici e molecole solubili, riflettendo sia lesioni vascolari che riparazioni, e per mostrare se questi biomarcatori sono associati ai MACE e alla prognosi clinica dei pazienti CAD che hanno subito un'angioplastica coronarica. Questo metodo si basa sull'uso di MPC vascolari circolanti, circolanti e molecole solubili ottenute campionando posizioni più vicine al danno del vaso. Può anche essere utile per studi clinici per l'ischemia degli arti inferiori, ictus, vavulite, trombosi venosa, e altre lesioni che coinvolgono lesioni vascolari e riparazione.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10735086001</td>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA) as a buffering agent, stabilizer, standard and for blending.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calibration Beads</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-093-607</td>
			<td>MACQuant calibration beads are supplied in aqueous solution containing 0.05% sodium azide. 3.5 ml for up to 100 tests</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD133/1 (AC133)-PE</td>
			<td>Milteny Biotec / MACS</td>
			<td>#130-080-801</td>
			<td>Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD184 (CXCR4)-PE-VIO770</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-103-798</td>
			<td>Monoclonal, Isotype recombinant human IgG1, conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-093-601</td>
			<td>Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD34-FITC</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-081-001</td>
			<td>The monoclonal antibody clone AC136 detecs a class III epitope of the CD34</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45- VioBlue</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-092-880</td>
			<td>Monoclonal CD45 Antibody, human conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Tubes</td>
			<td>Thermo SCIENTIFIC</td>
			<td>#339651</td>
			<td>15ml conical centrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytometry Tubes</td>
			<td>FALCON Corning Brand</td>
			<td>#352052</td>
			<td>5 mL Polystyrene Round-Bottom Tube. 12x75 style. Sterile.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>#161-0729</td>
			<td>Heavy metals, (as Pb) &#60;10ppm, Fe &#60;0.01%, As &#60;1ppm, Insolubles &#60;0.005%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Improved Neubauer</td>
			<td>Without brand</td>
			<td>Without catalog number</td>
			<td>Hemocytometer for cell counting. (range 0.1000mm, 0.0025mm2)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2 EDTA Blood Collection Tubes</td>
			<td>BD Vacutainer</td>
			<td>#367863</td>
			<td>Lilac plastic vacutainer tube (K2E) 10.8mg, 6 mL.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lymphoprep</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>01-63-12-002-A</td>
			<td>Sterile and checked on the presence of endotoxins. Density: 1.077&#177;0.001g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>#SZBF0920V</td>
			<td>Fixation of biological samples, (powder, 95%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Transfer 1,3mL</td>
			<td>CRM Globe</td>
			<td>PF1016, PF1015</td>
			<td>The transfer pipette is a tool that facilitates liquid transfer with greater accuracy.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test Tubes</td>
			<td>KIMBLE CHASE</td>
			<td>45060 13100</td>
			<td>Heat-resistant test tubes. SIZE/CAP 13 x 100 mm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

coronary progenitor cells and soluble biomarkers in cardiovascular prognosis after coronary angioplasty

I principali eventi cardiovascolari avversi (MACE) influiscono negativamente sulla prognosi cardiovascolare dei pazienti sottoposti a angioplastica coronarica a causa di lesioni ischemiche coronariche. L'entità del danno coronario e i meccanismi di riparazione vascolare sono fattori che influenzano il futuro sviluppo dei MACE. Caratteristiche vascolari intrinseche come le caratteristiche della placca e la complessità dell'arteria coronaria hanno dimostrato informazioni prognostiche per i MACE. Tuttavia, l'uso di biomarcatori circolanti intracoronarici è stato postulato come un metodo conveniente per l'identificazione precoce e la prognosi dei MACE, in quanto riflettono più da vicino meccanismi dinamici che coinvolgono danni coronarici e riparazione. La determinazione dei biomarcatori circolanti coronarici durante l'angioplastica, come il numero di sottopopolazioni di cellule progenitrici mononucleari (PPC) e la concentrazione di molecole solubili che riflettono l'infiammazione, l'adesione cellulare e la riparazione, valutazione degli sviluppi futuri e della prognosi dei MACE 6 mesi dopo l'angioplastica coronarica. Questo metodo è evidenziato dalla sua natura traslazionale e dalle migliori prestazioni rispetto ai biomarcatori periferici circolanti sul sangue per quanto riguarda la previsione dei MACE e il suo effetto sulla prognosi cardiovascolare, che possono essere applicati per la stratificazione del rischio dei pazienti con malattia coronarica in fase di angioplastica.

Coronaria, seno venoso e sangue periferico sono stati raccolti da 52 pazienti sottoposti ad angiografia coronarica (Figura 1) e hanno mostrato un'alta prevalenza di ipertensione e dislipidemia. Al follow-up clinico, 11 (21,1%) I MACE si sono verificati 6 mesi dopo l'angiografia coronarica: morte (n ) e angina che richiedono la frequenza ospedaliera (n . 6), infarto miocardico (n ) e/o prove di insufficienza cardiaca (n . 4).
<p class="jove_content" fo:kee...

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Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty

Lo sviluppo di importanti eventi cardiovascolari avversi, che influenzano la prognosi cardiovascolare dopo l'angioplastica coronarica, sono influenzati dall'entità del danno coronarica e dalla riparazione vascolare. L'uso di nuovi biomarcatori cellulari e solubili, reattivi ai danni vascolari e alla riparazione, sono utili per prevedere lo sviluppo di MACE e prognosi.

Cellule progenitrici coronariche e biomarcatori solubili nella prognosi cardiovascolare dopo l'angioplastica coronaria

Major adverse cardiovascular events (MACEs) negatively impact the cardiovascular prognosis of patients undergoing coronary angioplasty due to coronary ...

Sebbene l'angioplastica aiuti i pazienti con malattia coronarica, gli eventi cardiovascolari possono ancora verificarsi dopo la procedura. Poiché gli MPC e le molecole solubili sono ottenuti dalla circolazione coronarica, possono essere correlati al grado di danno vascolare e riparazione. L'MPC coronarica e i livelli di mediatore solubili possono quindi essere utilizzati per stimare eventi cardiovascolari e prognosi in pazienti con malattia coronarica sottoposta ad angioplastica coronarica.Gli MPC e le molecole solubili possono anche essere usati per stimare complicazioni e prognosi che si verificano in diverse impostazioni ischemiche, come l'ictus ischimico degli arti ricorrente. A dimostrare la procedura saranno Eduardo Vera-Gomez e Alejandro Hernandez-Patricio, tecnici di laboratorio, e Karen De La Vega-Moreno e Carlos Zamora-Aleman, studenti universitari. Saranno inoltre manifestati Gabriela Alexandra Dominguez-Perez, studentessa di Master of Science, Alberto Melchor-Lopez, dottorando, e Mario Antonio Tellez-Gonzalez, collaboratore di Master of Science.Entro un'ora dalla raccolta, trasferire sei millilitri del campione di sangue raccolto in un tubo conico da 15 millilitri e diluire il sangue con un rapporto uno a uno in PBS. Aggiungere due millilitri di gradiente di densità medio a tre provette e trasferire con cura tre aliquote uguali di sangue diluito in ogni tubo di mezzo gradiente di densità. Separare le cellule per centrifugazione e trasferire le cellule all'interfaccia in un nuovo tubo.Lavare le cellule raccolte una volta in due millilitri di PBS per sei minuti, seguite da sei lavaggi in due millilitri di PBS fresco per lavaggio per due minuti. Dopo l'ultimo lavaggio, sospendere di nuovo il pellet di cellule contenente MPC in un millilitro di PBS per il conteggio e aggiungere uno per dieci alle sei celle etichettate cinque tubi di citometria a flusso millilitro. Pellet le cellule per centrifugazione e aggiungere 100 microlitri dell'anticorpo di interesse appropriato, diluito in soluzione di incubazione anticorpale ad ogni tubo.Mescolare delicatamente le cellule con ogni cocktail anticorpale aggiunto per 10 secondi e posizionare i campioni a quattro gradi Celsius, protetti dalla luce, per 20 minuti. Al termine dell'incubazione, centrifugare i campioni e sospendere nuovamente i pellet in 500 microlitri di PBS integrati con due EDTA millimolare. Utilizzando controlli abbinati all'isotipo per impostare la colorazione di fondo, analizzare i campioni per citometria a flusso secondo protocolli standard, gating sui linfociti in un grafico a dispersione avanti per lato, per escludere granulociti residui, detriti cellulari e altre particelle.Impostare un gate per contenere un numero elevato di celle con un fenotipo CD34 positivo cd45-positivo. Utilizzare quindi il gate CD34-positive CD34-positive CD45 per selezionare per l'inserimento della chinasi il recettore del dominio CD133 o le cellule positive del CD184. Le sotto-popolazioni MPC possono quindi essere identificate dai loro specifici marcatori di superficie cellulare e riportate come la percentuale di eventi gated.Per determinare la concentrazione di biomarcatori solubili nei campioni di sangue raccolti, in primo luogo, lavare due volte le piastre ELISA pre-rivestite appropriate con il tampone di lavaggio fornito dal kit ed etichettare i tubi standard, campione e di controllo. Centrifugare il campione di sangue per separare i componenti del sangue e aliquotare il plasma nei tubi del campione. Trasferire gli standard, i campioni e i controlli nei pozzi appropriati e sigillare e incubare la piastra a 37 gradi Celsius per 90 minuti.Alla fine dell'incubazione, scartare il contenuto del pozzo e aggiungere l'anticorpo di rilevamento della biotina ad ogni pozzo. Dopo un'incubazione di un'ora a 37 gradi Celsius, scartare il contenuto della piastra e lavare i pozzi tre volte con tampone di lavaggio fresco per lavaggio. Dopo l'ultimo lavaggio, incubare i campioni con soluzione di lavoro Streptavidin per 30 minuti a 37 gradi Celsius seguita da tre lavaggi, come dimostrato.Dopo l'ultimo lavaggio, trattare i campioni con substrato di tetrametilbenzidina per 30 minuti a 37 gradi Celsius. Quando il colore si sviluppa, aggiungere la soluzione di arresto dal kit e leggere l'assorbanza della densità ottica in un lettore ELISA micropiastra. Per determinare la concentrazione del fattore alfa della necrosi tumorale e dell'interleuchina-1 beta, usando il multiplexing immunomagnetico, etichettare i tubi standard, campione e di controllo e vortice le fiale magnetiche perline per 30 secondi.Aggiungere perline ai pozzi appropriati della piastra di dosaggio multiplexing. Una volta aggiunte tutte le perline, inserire in modo sicuro la rondella magnetica portatile e attendere due minuti che le perline si accumulino sul fondo di ogni pozzo, prima di invertire rapidamente sia la rondella magnetica portatile che il gruppo piastra su un contenitore di rifiuti. Quindi, aggiungere 150 microlitri di tampone di lavaggio a ciascun pozzo e attendere 30 secondi per consentire alle perline di accumularsi sul fondo.Scartare nuovamente il contenuto come appena dimostrato e aggiungere 25 microlitri di tampone universale per saggi e 25 microlitri degli standard, campioni e controlli preparati. Sigillare la piastra per un'incubazione di almeno 60 minuti, protetta dalla luce a temperatura ambiente, e 500 rotazioni al minuto. Alla fine dell'incubazione, aggiungere 150 microlitri di tampone di lavaggio ad ogni pozzo e lasciare che le perline si sistemino per 30 secondi.Quindi, utilizzare la rondella per scartare il contenuto del pozzo ed etichettare ogni bene con 25 microlitri di miscela di anticorpi di rilevamento seguiti da due lavaggi, come dimostrato. Dopo il secondo lavaggio, incubare i campioni con 25 microlitri di Streptavidin PE per 30 minuti a temperatura ambiente. Al termine dell'incubazione, aggiungere 120 microlitri di tampone di lettura ad ogni pozzo e sigillare la piastra per un'incubazione di cinque minuti, protetta dalla luce a temperatura ambiente, per 500 rotazioni al minuto.Quindi, caricare la piastra su un lettore di saggi multiplexing e regolare i parametri di lettura in base a ciascun alita. Coronarico, venere-seno e sangue periferico sono stati raccolti da 52 pazienti che sono stati sottoposti ad angiografia coronarica e hanno dimostrato un'alta prevalenza di ipertensione e dislipidemia. La concentrazione coronarica di base della maggior parte degli MPC è stata significativamente inferiore nei pazienti che hanno sviluppato importanti eventi cardiovascolari avversi, con una maggiore diminuzione delle sottopopolazioni MPC CD34-positivo CD133-positivo, e CD45-positivo, CD34-positivo, CD133-positivo, CD184-positivo.Allo stesso modo, i pazienti che hanno sviluppato importanti eventi cardiovascolari avversi hanno avuto un aumento della linea di base nelle quantità coronarie di ICAM-1 solubile e quantità inferiori di proteina metallomatrix 9. Gli MPC coronari e l'ICAM-1 solubile hanno dimostrato una capacità prognostica per una maggiore sopravvivenza avversa senza eventi cardiovascolari. È interessante notare che l'espressione del fattore di necrosi tumorale alfa ha dimostrato variazioni in base al tempo di misurazione e alla posizione del campionamento coronarico basato su un confronto di diverse aree di lume nella stessa arteria coronarica, utilizzando ultrasuoni intravascolari.Durante l'isolamento MPC, assicurarsi di trasferire il sangue sul gradiente di densità e di raccogliere le cellule dall'interfaccia dopo la centrifugazione con attenzione. Il vortice periodico previene la precipitazione delle perline e l'uso di una rondella magnetica aiuta a mantenere le perline all'interno dei pozzi durante i lavaggi. Gli MPC coronarici e le molecole solubili sono utili per stratificare il rischio di eventi cardiovascolari durante il follow-up dopo l'angioplastica, aiutando nella fornitura di prevenzione secondaria agli individui ad alto rischio in quanto questa tecnica riflette il processo fisiopatizzante che si verifica durante la cessazione della soluzione, potrebbe essere utile per le condizioni in cui la biologia vascolare gioca un ruolo.

Research

JoVE Journal

Medicine

Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

Legatura dell&#39;arteria coronarica e di iniezione intramiocardico in un modello murino di infarto

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo.  With the advent of genetic modifications to ...

Ricerca

Medicina

Modified Technique for Coronary Artery Ligation in Mice

Tecnica modificata di legatura dell&#39;arteria coronarica in Mouse

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI ...

Retrograde Perfusion and Filling of Mouse Coronary Vasculature as Preparation for Micro Computed Tomography Imaging

Perfusione retrograda e riempimento del sistema vascolare coronarico mouse come preparazione per la Micro Computed Tomography Imaging

Visualization of the vasculature is becoming increasingly important for understanding many different disease states. While several techniques exist for ...

Permanent Ligation of the Left Anterior Descending Coronary Artery in Mice: A Model of Post-myocardial Infarction Remodelling and Heart Failure

Legatura permanente dell&#39;arteria discendente anteriore sinistra coronarica nei topi: un modello di post-infarto rimodellante miocardico e insufficienza cardiaca

Heart failure is a syndrome in which the heart fails to pump blood at a rate commensurate with cellular oxygen requirements at rest or during stress. It ...

Ultrasound Based Assessment of Coronary Artery Flow and Coronary Flow Reserve Using the Pressure Overload Model in Mice

Valutazione Ecografia base di coronaropatia Flow e flusso coronarico Reserve Utilizzando la pressione Sovraccarico modello nei topi

Transthoracic Doppler echocardiography (TTDE) is a clinically useful, noninvasive tool for studying coronary artery flow velocity and coronary flow ...

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery (ALCAPA)

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery ALCAPA

Diretto Re-impianto di sinistra coronarica nell&#39;aorta in Adulti con Anomala origine della coronaria sinistra dall&#39;arteria polmonare (ALCAPA)

Anomalous origin of the left coronary artery from the pulmonary artery (ALCAPA) is a rare congenital anomaly which is one of leading causes of myocardial ...

Identifying Coronary Artery Calcification on Non-gated Computed Tomography Scans

Identificazione di calcificazione dell'arteria coronaria su Non-gated scansioni con tomografia computerizzata

Coronary artery calcification (CAC) provides an objective measure of coronary artery disease and can readily be identified on non-gated computed ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Valutazione della riserva del flusso coronario dopo la miaocardia Ischemia Reperfusione nei ratti

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

In Vitro Model of Coronary Angiogenesis

Modello in vitro dell'angiogenesi coronarica

Here, we describe an in vitro culture assay to study coronary angiogenesis. Coronary vessels feed the heart muscle and are of clinical importance. Defects ...

Novel Percutaneous Approach for Deployment of 3D Printed Coronary Stenosis Implants in Swine Models of Ischemic Heart Disease

Nuovo approccio percutaneo per la distribuzione di impianti coronarici stampati in 3D in modelli suini di malattie cardiache ischemiche

Minimally invasive methods for creating models of focal coronary narrowing in large animals are challenging. Rapid prototyping using three-dimensionally ...