Name: coronary progenitor cells and soluble biomarkers in cardiovascular prognosis after coronary angioplasty
Uploaded: 2020-01-28T13:00:00
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저자는 기관 프로그램 E015의 지원에 감사드립니다; 및 폰도 섹터 FOSSIS-CONACYT, SALUD-2014-1-233947.

이 프로토콜은 인간 연구 윤리 위원회의 제도적 지침을 충족합니다.
1. 관상 동맥 혈관 조영술, 초음파 및 혈액 샘플링
<ol><li>관상 동맥 개입 전에 기준 임상 및 인구 통계 학적 정보를 요청하십시오. 개인의 데이터를 수집: 나이, 성별, 현재 흡연 상태, 체질량 지수 (BMI), 고혈압, 이상지질혈증, 당뇨병 mellitus, 약물, 현재 관상 동맥 혈관 조영술에 대한 표시.</li>
	<li>방사형 접근...

<ol>
	<li>Cassar, A., Holmes, D. R., Rihal, C. S., Gersh, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+coronary+artery+disease:+diagnosis+and+management.">Chronic coronary artery disease: diagnosis and management.</a> Mayo Clinic Proceedings. 84 (12), 1130-1146 (2009).</li><li>Regueiro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mobilization+of+endothelial+progenitor+cells+in+acute+cardiovascular+events+in+the+PROCELL+study:+time-course+after+acute+myocardial+infarction+and+stroke.">Mobilization of endothelial progenitor cells in acute cardiovascular events in the PROCELL study: time-course after acute myocardial infarction and stroke.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 80, 146-155 (2015).</li><li>Sen, S., McDonald, S. P., Coates, P. T., Bonder, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells:+novel+biomarker+and+promising+cell+therapy+for+cardiovascular+disease.">Endothelial progenitor cells: novel biomarker and promising cell therapy for cardiovascular disease.</a> Clinical Science (Lond). 120 (7), 263-283 (2011).</li><li>Samman Tahhan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progenitor+Cells+and+Clinical+Outcomes+in+Patients+With+Acute+Coronary+Syndromes.">Progenitor Cells and Clinical Outcomes in Patients With Acute Coronary Syndromes.</a> Circulation Research. 122 (11), 1565-1575 (2018).</li><li>Tomuli&#263;, V., Gobi&#263;, D., Luli&#263;, D., &#381;idan, D., Zaputovi&#263;, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soluble+adhesion+molecules+in+patients+with+acute+coronary+syndrome+after+percutaneous+coronary+intervention+with+drug-coated+balloon,+drug-eluting+stent+or+bare+metal+stent.">Soluble adhesion molecules in patients with acute coronary syndrome after percutaneous coronary intervention with drug-coated balloon, drug-eluting stent or bare metal stent.</a> Medical Hypotheses. 95, 20-23 (2016).</li><li>Jaumdally, R., Varma, C., Macfadyen, R. J., Lip, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+sinus+blood+sampling:+an+insight+into+local+cardiac+pathophysiology+and+treatment?.">Coronary sinus blood sampling: an insight into local cardiac pathophysiology and treatment?.</a> European Heart Journal. 28 (8), 929-940 (2007).</li><li>Kremastinos, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracoronary+cyclic-GMP+and+cyclic-AMP+during+percutaneous+transluminal+coronary+angioplasty.">Intracoronary cyclic-GMP and cyclic-AMP during percutaneous transluminal coronary angioplasty.</a> International Journal of Cardiology. 53 (3), 227-232 (1996).</li><li>Karube, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+cytokine+levels+by+coronary+sinus+blood+sampling+during+cardiac+surgery+with+cardiopulmonary+bypass.">Measurement of cytokine levels by coronary sinus blood sampling during cardiac surgery with cardiopulmonary bypass.</a> American Society for Artificial Internal Organs Journal. 42 (5), M787-M791 (1996).</li><li>Truong, Q. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+sinus+biomarker+sampling+compared+to+peripheral+venous+blood+for+predicting+outcomes+in+patients+with+severe+heart+failure+undergoing+cardiac+resynchronization+therapy:+the+BIOCRT+study.">Coronary sinus biomarker sampling compared to peripheral venous blood for predicting outcomes in patients with severe heart failure undergoing cardiac resynchronization therapy: the BIOCRT study.</a> Heart Rhythm. 11 (12), 2167-2175 (2014).</li><li>Su&#225;rez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+circulating+mononuclear+progenitor+cells+and+soluble+biomarkers+in+the+cardiovascular+prognosis+after+coronary+angioplasty.">Coronary circulating mononuclear progenitor cells and soluble biomarkers in the cardiovascular prognosis after coronary angioplasty.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23 (7), 4844-4849 (2019).</li><li>Su&#225;rez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relation+of+Coronary+Artery+Lumen+with+Baseline,+Post-angioplasty+Coronary+Circulating+Pro-Inflammatory+Cytokines+in+Patients+with+Coronary+Artery+Disease.">Relation of Coronary Artery Lumen with Baseline, Post-angioplasty Coronary Circulating Pro-Inflammatory Cytokines in Patients with Coronary Artery Disease.</a> Angiology Open Access. 7, 01 (2019).</li><li>Schmidt-Lucke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+circulating+endothelial+progenitor+cells+using+the+modified+ISHAGE+protocol.">Quantification of circulating endothelial progenitor cells using the modified ISHAGE protocol.</a> PLoS One. 5 (1), e13790 (2010).</li><li>Moyer, C. F., Sajuthi, D., Tulli, H., Williams, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+IL-1+alpha+and+IL-1+beta+by+arterial+cells+in+atherosclerosis.">Synthesis of IL-1 alpha and IL-1 beta by arterial cells in atherosclerosis.</a> American Journal of Pathology. 138 (4), 951-960 (1991).</li><li>Morales-Portano, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Echocardiographic+measurements+of+epicardial+adipose+tissue+and+comparative+ability+to+predict+adverse+cardiovascular+outcomes+in+patients+with+coronary+artery+disease.">Echocardiographic measurements of epicardial adipose tissue and comparative ability to predict adverse cardiovascular outcomes in patients with coronary artery disease.</a> International Journal of Cardiovascular Imaging. 34 (9), 1429-1437 (2018).</li><li>Huang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells+correlated+with+oxidative+stress+after+mild+traumatic+brain+injury.">Endothelial progenitor cells correlated with oxidative stress after mild traumatic brain injury.</a> Yonsei Medical Journal. 58 (5), 1012-1017 (2017).</li></ol>

영향 받은 관상 동맥에서 혈액 수집은 어려울 지도 모릅니다. 때로는 관상 동맥에 거의 접근 할 수 없습니다. 이 경우 정맥 부비동에서 샘플링하는 것이 대안이 될 수 있습니다. 우리는 관상 동맥에 있는 순환 biomarkers 대 정맥 부비동에 있는 비교하는 유효성 검사 시험을, 유의한 다름 없이 수행했습니다. 그러나, 순환 바이오마커의 성능은 관상 동맥 샘플링에 대해서만 검증되었다. 따라서 정맥 부...

관상 동맥 혈관 성형술 및 스텐트 삽입은 관상 동맥 질환 (CAD)을 가진 환자를위한 인양 절차를 나타냅니다. 그러나, 심장 혈관 죽음, 심근 경색, 관상 동맥 재협착 및 협심증 또는 보상 심부전의 에피소드를 포함하여 중요한 불리한 심장 혈관 사건 (MACEs는, 관상 동맥 내정간섭 후에 달, 병원에 예정되지 않은 방문을 자극하는 생길 수 있습니다. MACEs는 전 세계적으로 일반적이며, 그들의 morbi 사망률은 높은1.
관상 동맥 허혈성 상해는 그들의 분화 능력 및/또는 혈관 회복 잠재력 때문에 MPC의 동원을 관련시키는 초기 혈관 반응 및 회복 기계장치를 유도합니다, 세포 간 접착 분자 같이 수용성 분자의 생산 뿐만 아니라 (ICAMs), 매트릭스 금속 loloproteinases (MMPs), 및 반응성 산소 종, 세포 접착, 반사성, 조직 을 반영하는. 플라크 특성 및 관상 동맥 복잡성과 같은 본질적인 혈관 특징이 MACE를 예측하는 데 사용되었지만, 일부 연구는 관상 동맥 내피에서 발생하는 부상 및 수리 메커니즘과 관련된 바이오 마커가 관상 동맥 혈관 성형술2,4,4에제출 된 CAD 환자의 심장 혈관 사건의 조기 식별 및 예후에 매우 유용 할 수 있다고 제안했습니다.
COR 손상 및 수리의 근본적인 메커니즘을 이해하는 데 지속적인 관심은 관상 동맥 샘플링이 혈관 손상을 더 밀접하게 반영하고 수리하기 때문에 관내 순환 바이오 마커를 연구하는 연구자에게 동기를 부여했습니다6. 그러나, 인간 연구에서 관상 동맥 바이오 마커의 특성화는 부족했다7,8,9. 따라서 본 연구의 목적은 관상 동맥 순환 MFC 및 가용성 분자의 양을 결정하고, 혈관 손상 및 수리를 모두 반영하는 방법을 설명하고, 이러한 바이오마커가 MACE및 관상 혈관 성형술을 받은 CAD 환자의 임상 예후와 연관되어 있는지 여부를 보여주기 위한 것이었다. 이 방법은 혈관 손상에 가장 가까운 샘플링 위치에 의해 얻어진 혈관 관련, 순환 MPC 및 수용성 분자의 사용을 기반으로합니다. 그것은 또한 하지 호 혈에 대 한 임상 연구에 대 한 유용할 수 있습니다., 스트로크, 혈관 염, 정 맥 혈전증, 그리고 혈관 부상 및 수리를 포함 하는 다른 부상.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10735086001</td>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA) as a buffering agent, stabilizer, standard and for blending.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calibration Beads</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-093-607</td>
			<td>MACQuant calibration beads are supplied in aqueous solution containing 0.05% sodium azide. 3.5 ml for up to 100 tests</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD133/1 (AC133)-PE</td>
			<td>Milteny Biotec / MACS</td>
			<td>#130-080-801</td>
			<td>Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD184 (CXCR4)-PE-VIO770</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-103-798</td>
			<td>Monoclonal, Isotype recombinant human IgG1, conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-093-601</td>
			<td>Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD34-FITC</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-081-001</td>
			<td>The monoclonal antibody clone AC136 detecs a class III epitope of the CD34</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45- VioBlue</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-092-880</td>
			<td>Monoclonal CD45 Antibody, human conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Tubes</td>
			<td>Thermo SCIENTIFIC</td>
			<td>#339651</td>
			<td>15ml conical centrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytometry Tubes</td>
			<td>FALCON Corning Brand</td>
			<td>#352052</td>
			<td>5 mL Polystyrene Round-Bottom Tube. 12x75 style. Sterile.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>#161-0729</td>
			<td>Heavy metals, (as Pb) &#60;10ppm, Fe &#60;0.01%, As &#60;1ppm, Insolubles &#60;0.005%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Improved Neubauer</td>
			<td>Without brand</td>
			<td>Without catalog number</td>
			<td>Hemocytometer for cell counting. (range 0.1000mm, 0.0025mm2)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2 EDTA Blood Collection Tubes</td>
			<td>BD Vacutainer</td>
			<td>#367863</td>
			<td>Lilac plastic vacutainer tube (K2E) 10.8mg, 6 mL.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lymphoprep</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>01-63-12-002-A</td>
			<td>Sterile and checked on the presence of endotoxins. Density: 1.077&#177;0.001g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>#SZBF0920V</td>
			<td>Fixation of biological samples, (powder, 95%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Transfer 1,3mL</td>
			<td>CRM Globe</td>
			<td>PF1016, PF1015</td>
			<td>The transfer pipette is a tool that facilitates liquid transfer with greater accuracy.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test Tubes</td>
			<td>KIMBLE CHASE</td>
			<td>45060 13100</td>
			<td>Heat-resistant test tubes. SIZE/CAP 13 x 100 mm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

coronary progenitor cells and soluble biomarkers in cardiovascular prognosis after coronary angioplasty

주요 불리한 심장 혈관 사건 (MACEs) 관상 동맥 허혈성 상해 때문에 관상 동맥 혈관 성형술을 겪고 있는 환자의 심장 혈관 예후에 부정적인 영향을 미칩니다. 관상 동맥 손상의 정도 및 혈관 수선 기전은 MACEs의 미래 발달에 영향을 미치는 요인입니다. 플라크 특성 및 관상 동맥 복잡성과 같은 본질적인 혈관 특징은 MACEs에 대한 예후 정보를 입증했습니다. 그러나 관상 동맥 내 순환 바이오마커의 사용은 관상 동맥 손상 및 수리와 관련된 동적 메커니즘을 보다 밀접하게 반영하기 때문에 MACE의 조기 식별 및 예후를 위한 편리한 방법으로 가정되었습니다. 단핵 전구 세포 (MPC)의 하위 집단의 수뿐만 아니라 염증, 세포 부착 및 수리를 반영하는 가용성 분자의 농도와 같은 혈관 성형술 중 관상 동맥 순환 바이오 마커의 결정은 향후 개발 및 MACEs의 예후 평가 6 개월 후 관상 동맥 혈관 성형술. 이 방법은 MACEs의 예측과 환자의 위험 계층화에 적용 될 수있는 심혈관 예후의 예측에 관한 말초 혈액 순환 바이오 마커보다 번역 특성과 더 나은 성능에 의해 강조된다 관상 동맥 질환이 혈관 성형술을 겪고있습니다.

관상동맥, 정맥부비동 및 말초혈액을 52명의 환자로부터 채취하여 관상동맥혈관조영술을 시행하였다(도1)와고혈압 및 이상지질혈증의 높은 유병률을 보였다. 임상 후속 조치에서 11명(21.1%)이 MACEs는 관상 동맥 혈관 조영술 후 6 개월 발생 : 죽음 (n = 1), 병원 출석을 필요로하는 협심증 (n = 6), 심근 경색 (n = 2), 및 / 또는 심부전의 증거 (n = 4).
<p class="j...

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Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty

관상 동맥 혈관 성형술 후 심장 혈관 예후에 영향을 미치는 주요 불리한 심혈관 사건의 개발은 관상 동맥 손상 및 혈관 수리의 정도에 의해 영향을 받습니다. 새로운 관상 동맥 세포 및 수용성 바이오 마커의 사용은 혈관 손상 및 수리에 반응성으로 MACEs 및 예후의 발달을 예측하는 데 유용합니다.

관상 동맥 혈관 성형술 후 심혈관 예후의 관상 동맥 전구 세포 및 수용성 바이오마커

Major adverse cardiovascular events (MACEs) negatively impact the cardiovascular prognosis of patients undergoing coronary angioplasty due to coronary ...

혈관 성형술은 관상 동맥 질환을 가진 환자를 돕지만, 심혈관 사건은 여전히 절차 후에 발생할 수 있습니다. CPC와 수용성 분자가 관상 동맥 순환에서 얻어지므로 혈관 손상 및 수리 정도와 상관관계가 있을 수 있습니다. 관상 동맥 MPC 및 수용성 중재자 수준은 그러므로 관상 동맥 혈관 성형술을 겪고 있는 관상 동맥 질병을 가진 환자에 있는 심장 혈관 사건 및 예후를 추정하기 위하여 이용될 수 있습니다.MPC 및 수용성 분자는 또한 재발사지 허혈성 치기와 같은 다른 허혈성 조정에서 생기는 합병증 및 예후를 추정하기 위하여 이용될 수 있습니다. 절차를 시연하는 것은 에두아르도 베라 고메즈와 알레한드로 에르난데스-파트리시오, 실험실 기술자, 카렌 드 라 베가 모레노, 카를로스 자모라-알레만, 학부 생학생이 될 것입니다. 또한 가브리엘라 알렉산드라 도밍게즈 페레즈, 과학 학생의 석사, 알베르토 멜코르 로페즈, 박사 과정 학생, 마리오 안토니오 텔레즈 곤잘레스, 과학 협력자 의 석사입니다.수집 1 시간 이내에 수확 된 혈액 샘플의 6 밀리리터를 15 밀리리터 원뿔 관으로 옮기고 PBS에서 1 대 1 비율로 혈액을 희석시하십시오. 밀도 그라데이션 배지 2밀리리터를 3개의 시험관에 추가하고 희석된 혈액의 3개의 동일한 알리쿼트를 각 밀도 그라데이션 배지 튜브에 조심스럽게 전달합니다. 원심분리로 세포를 분리하고 인터페이스에서 세포를 새로운 튜브로 옮긴다.수집된 세포를 PBS 2밀리리터에서 6분간 1회 세척한 후, 2분간 세척당 신선한 PBS 2밀리리터로 6개의 세척을 세척합니다. 마지막 세척 후, 계산을 위해 PBS의 1 밀리리터에 MPC 함유 세포 펠릿을 다시 중단하고 5 밀리리터 유동 세포 측정 튜브에 1회 10을 추가한다. 원심분리에 의해 세포를 펠렛하고 각 튜브에 항체 배양 용액에 희석된 적절한 관심 항체의 100 마이크로리터를 첨가한다.세포를 추가한 항체 칵테일과 10초 간 부드럽게 섞고, 샘플을 빛으로부터 보호한 섭씨 4도에 20분간 배치합니다. 인큐베이션의 끝에서, 원심 분리하고 2 밀리머 EDTA로 보충 PBS의 500 마이크로 리터에서 펠릿을 다시 중단. 등색성 일치 컨트롤을 사용하여 배경 염색을 설정하고, 표준 프로토콜에 따라 혈류 세포측정에 의해 샘플을 분석하고, 나란히 분산 된 플롯으로 앞으로 림프구를 게이팅하여 잔류 과립구, 세포 이물질 및 기타 입자를 배제합니다.CD45 양성 CD34 양성 표현형을 가진 많은 수의 세포를 포함하는 게이트를 설정합니다. 다음으로, CD45 양성 CD34 양성 게이트를 사용하여 키나아제 삽입 도메인 수용체 CD133 또는 CD184 양성 세포를 선택한다. MPC 하위 모집단은 특정 세포 표면 마커에 의해 식별되고 게이트된 이벤트의 백분율로 보고될 수 있습니다.수집된 혈액 샘플에서 수용성 바이오마커의 농도를 결정하기 위해 먼저, 키트 제공 세척 버퍼로 적절한 미리 코팅된 ELISA 플레이트를 두 번 세척하고 표준, 시료 및 제어 튜브에 라벨을 부착한다. 혈액 샘플을 원심분리하여 혈액 성분을 분리하고 혈장들을 샘플 튜브로 알리쿼트합니다. 표준, 샘플 및 컨트롤을 적절한 우물로 옮기고 플레이트를 90분 동안 섭씨 37도에서 인큐베이션합니다.인큐베이션의 끝에서, 우물 내용을 버리고 각각의 우물에 비오틴 검출 항체를 추가한다. 섭씨 37도에서 1시간 동안 인큐베이션한 후, 접시 내용물들을 버리고 세척당 신선한 세척 버퍼로 우물을 세 번 씻습니다. 마지막 세척 후, 입증 된 바와 같이, 37섭씨37도에서 30 분 동안 스트렙타비딘 작업 용액으로 샘플을 배양하고 세 세척.마지막 세척 후, 37섭씨에서 30분 동안 테트라메틸벤지딘 기판으로 샘플을 치료하십시오. 색상이 개발되면 키트에서 정지 용액을 추가하고 마이크로 플레이트 ELISA 판독기에서 광학 밀도 흡광도를 읽습니다. 종양 괴사 인자 알파및 인터류킨-1 베타의 농도를 결정하기 위해 면역자기 멀티플렉스를 사용하여 표준, 샘플 및 제어 튜브에 라벨을 부착하고 자기 비드 바이알을 30초 동안 소용돌이시다.멀티플렉싱 분석 플레이트의 적절한 웰에 구슬을 추가합니다. 모든 구슬이 추가되면 핸드헬드 마그네틱 플레이트 와셔를 단단히 삽입하고 구슬이 각각의 바닥에 축적될 때까지 2분 정도 기다린 후 핸드헬드 마그네틱 플레이트 와셔와 플레이트 어셈블리를 폐기물 용기 위에 신속하게 반전시한다. 다음으로, 각 우물에 150 마이크로리터의 세척 버퍼를 추가하고 30초를 기다려야 구슬이 바닥에 축적될 수 있도록 합니다.방금 설명한 대로 내용을 다시 폐기하고 준비된 표준, 샘플 및 컨트롤의 25 마이크로리터와 범용 분석 버퍼 25 마이크로리터를 추가합니다. 플레이트를 실내 온도에서 빛으로부터 보호하고 분당 500회 회전하여 최소 60분 간 배양할 수 있습니다. 인큐베이션이 끝나면 각 웰에 150 마이크로리터의 세척 버퍼를 추가하고 구슬이 30초 동안 정착할 수 있도록 합니다.이어서, 플레이트 와셔를 사용하여 잘 내용물들을 버리고 각각 25마이크로리터의 검출 항체 혼합물을 잘 표시하고, 2개의 세척을 선행하여 입증한다. 두 번째 세척 후, 실온에서 30 분 동안 스트렙타비딘 PE의 25 마이크로 리터와 샘플을 배양. 인큐베이션이 끝나면 각 우물에 120마이크로리터의 판독 버퍼를 추가하고 실온에서 빛으로부터 보호되는 5분 간 플레이트를 밀봉하여 분당 500회 회전합니다.그런 다음, 멀티플렉스 분석 판독기에 플레이트를 로드하고 각 분석체에 따라 판독 매개 변수를 조정합니다. 관상 동맥, 금성 부비동 및 말초 혈액은 관상 동맥 혈관 조영술을 받은 52명의 환자로부터 수집되었으며 고혈압과 이상지질혈증의 높은 유병률을 입증하였다. 대부분의 MpC의 기준선 관상 동맥 농도는 MPC 하위 집단 CD34 양성 CD133 양성, CD45 양성, CD34 양성, CD133 양성, CD184 양성에서 더 큰 감소와 함께, 주요 불리한 심장 혈관 이벤트를 개발 한 환자에서 상당히 낮았다.마찬가지로, 주요 불리 한 심장 혈관 이벤트를 개발 하는 환자는 수용 성 ICAM-1의 관상 동맥 금액에 증가 기준선 및 금속 로 매트릭스 단백질의 낮은 금액 9. 관상 동맥 MPC및 수용성 ICAM-1은 주요 불리한 심장 혈관 이벤트 없는 생존을 위한 예후 능력을 보여주었습니다. 흥미롭게도, 종양 괴사 인자 알파의 발현은 동일한 관상 동맥에서 상이한 루멘 영역의 비교에 기초하여 측정 시간 및 관상 동맥 샘플링의 위치에 따라 변이를 시연하여 내래 초음파를 사용한다.MPC 격리 하는 동안, 밀도 그라데이션에 혈액을 전송 하 고 원심 분리 후 인터페이스에서 세포를 수집 해야 합니다. 주기적인 소용돌이는 비드 강수량을 방지하고 마그네틱 플레이트 와셔를 사용하면 세척 중에 구슬을 우물 안에 보관하는 데 도움이 됩니다. 관상 동맥 MPC 및 수용성 분자는 혈관 성형술 후 후속 시 심혈관 이벤트의 위험을 계층화하는 데 유용하며,이 기술은 용액 의 중단 중에 발생하는 병리학 적 과정을 반영하기 때문에 고위험 개인에게 이차 예방을 제공하는 데 도움을 주며 혈관 생물학이 역할을하는 조건에 유용 할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Medicine

Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

경색의 Murine 모델에서 관상 동맥 내고과 Intramyocardial 사출

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo.  With the advent of genetic modifications to ...

연구

의학

Modified Technique for Coronary Artery Ligation in Mice

마우스의 관상 동맥 결합에 대한 수정 기술

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI ...

Retrograde Perfusion and Filling of Mouse Coronary Vasculature as Preparation for Micro Computed Tomography Imaging

마이크로 계산된 Tomography 이미징을위한 준비로서 역행 관류 및 마우스 관상 Vasculature의 작성

Visualization of the vasculature is becoming increasingly important for understanding many different disease states. While several techniques exist for ...

Permanent Ligation of the Left Anterior Descending Coronary Artery in Mice: A Model of Post-myocardial Infarction Remodelling and Heart Failure

마우스의 왼쪽 전방 내림차순 관상 동맥의 영구 결찰 : 심근 경색 리모델링과 심장 마비의 모델

Heart failure is a syndrome in which the heart fails to pump blood at a rate commensurate with cellular oxygen requirements at rest or during stress. It ...

Ultrasound Based Assessment of Coronary Artery Flow and Coronary Flow Reserve Using the Pressure Overload Model in Mice

마우스의 압력 과부하 모델을 사용하여 관상 동맥 흐름 및 관상 동맥 흐름 준비 제도 이사회의 초음파를 바탕으로 평가

Transthoracic Doppler echocardiography (TTDE) is a clinically useful, noninvasive tool for studying coronary artery flow velocity and coronary flow ...

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery (ALCAPA)

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery ALCAPA

폐 동맥에서 좌측 관상 동맥의 변칙 기원과 성인에서 대동맥으로 왼쪽 관상 동맥의 직접 재 주입 (좌 관상 동맥 폐동맥 이상 연결 증)

Anomalous origin of the left coronary artery from the pulmonary artery (ALCAPA) is a rare congenital anomaly which is one of leading causes of myocardial ...

Identifying Coronary Artery Calcification on Non-gated Computed Tomography Scans

단층 촬영 검사 계산 문이 비에 관상 동맥 석 회화를 식별

Coronary artery calcification (CAC) provides an objective measure of coronary artery disease and can readily be identified on non-gated computed ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

쥐의 심근 허혈 재관류 후 관상 동맥 흐름 예비의 평가

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

In Vitro Model of Coronary Angiogenesis

관상 동맥 혈관 신생의 체외 모델

Here, we describe an in vitro culture assay to study coronary angiogenesis. Coronary vessels feed the heart muscle and are of clinical importance. Defects ...

Novel Percutaneous Approach for Deployment of 3D Printed Coronary Stenosis Implants in Swine Models of Ischemic Heart Disease

허혈성 심장 질환의 돼지 모델에 3D 인쇄 관상 동맥 협착 임플란트의 배포를위한 새로운 경피적 인 접근 방식

Minimally invasive methods for creating models of focal coronary narrowing in large animals are challenging. Rapid prototyping using three-dimensionally ...