Name: coronary progenitor cells and soluble biomarkers in cardiovascular prognosis after coronary angioplasty
Uploaded: 2020-01-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty at JoVE.com

Forfatterne takker støtte fra Institusjonelt program E015; og Fondo Sectorial FOSSIS-CONACYT, SALUD-2014-1-233947.

Denne protokollen oppfyller de institusjonelle retningslinjene fra den menneskelige forskningsetikkkomiteen.
1. Koronar angiografi, ultralyd og blodprøvetaking
<ol><li>Be om klinisk og demografisk informasjon ved baseline før koronarintervensjon. Samle individets data: alder, kjønn, nåværende røykestatus, kroppsmasseindeks (BMI), høyt blodtrykk, dyslipidemi, diabetes mellitus, medisiner og indikasjonen for gjeldende koronar angiografi.</li>
	<li>Utfør koronar angiografi gjennom hjert...

<ol>
	<li>Cassar, A., Holmes, D. R., Rihal, C. S., Gersh, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+coronary+artery+disease:+diagnosis+and+management.">Chronic coronary artery disease: diagnosis and management.</a> Mayo Clinic Proceedings. 84 (12), 1130-1146 (2009).</li><li>Regueiro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mobilization+of+endothelial+progenitor+cells+in+acute+cardiovascular+events+in+the+PROCELL+study:+time-course+after+acute+myocardial+infarction+and+stroke.">Mobilization of endothelial progenitor cells in acute cardiovascular events in the PROCELL study: time-course after acute myocardial infarction and stroke.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 80, 146-155 (2015).</li><li>Sen, S., McDonald, S. P., Coates, P. T., Bonder, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells:+novel+biomarker+and+promising+cell+therapy+for+cardiovascular+disease.">Endothelial progenitor cells: novel biomarker and promising cell therapy for cardiovascular disease.</a> Clinical Science (Lond). 120 (7), 263-283 (2011).</li><li>Samman Tahhan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progenitor+Cells+and+Clinical+Outcomes+in+Patients+With+Acute+Coronary+Syndromes.">Progenitor Cells and Clinical Outcomes in Patients With Acute Coronary Syndromes.</a> Circulation Research. 122 (11), 1565-1575 (2018).</li><li>Tomuli&#263;, V., Gobi&#263;, D., Luli&#263;, D., &#381;idan, D., Zaputovi&#263;, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soluble+adhesion+molecules+in+patients+with+acute+coronary+syndrome+after+percutaneous+coronary+intervention+with+drug-coated+balloon,+drug-eluting+stent+or+bare+metal+stent.">Soluble adhesion molecules in patients with acute coronary syndrome after percutaneous coronary intervention with drug-coated balloon, drug-eluting stent or bare metal stent.</a> Medical Hypotheses. 95, 20-23 (2016).</li><li>Jaumdally, R., Varma, C., Macfadyen, R. J., Lip, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+sinus+blood+sampling:+an+insight+into+local+cardiac+pathophysiology+and+treatment?.">Coronary sinus blood sampling: an insight into local cardiac pathophysiology and treatment?.</a> European Heart Journal. 28 (8), 929-940 (2007).</li><li>Kremastinos, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracoronary+cyclic-GMP+and+cyclic-AMP+during+percutaneous+transluminal+coronary+angioplasty.">Intracoronary cyclic-GMP and cyclic-AMP during percutaneous transluminal coronary angioplasty.</a> International Journal of Cardiology. 53 (3), 227-232 (1996).</li><li>Karube, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+cytokine+levels+by+coronary+sinus+blood+sampling+during+cardiac+surgery+with+cardiopulmonary+bypass.">Measurement of cytokine levels by coronary sinus blood sampling during cardiac surgery with cardiopulmonary bypass.</a> American Society for Artificial Internal Organs Journal. 42 (5), M787-M791 (1996).</li><li>Truong, Q. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+sinus+biomarker+sampling+compared+to+peripheral+venous+blood+for+predicting+outcomes+in+patients+with+severe+heart+failure+undergoing+cardiac+resynchronization+therapy:+the+BIOCRT+study.">Coronary sinus biomarker sampling compared to peripheral venous blood for predicting outcomes in patients with severe heart failure undergoing cardiac resynchronization therapy: the BIOCRT study.</a> Heart Rhythm. 11 (12), 2167-2175 (2014).</li><li>Su&#225;rez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+circulating+mononuclear+progenitor+cells+and+soluble+biomarkers+in+the+cardiovascular+prognosis+after+coronary+angioplasty.">Coronary circulating mononuclear progenitor cells and soluble biomarkers in the cardiovascular prognosis after coronary angioplasty.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23 (7), 4844-4849 (2019).</li><li>Su&#225;rez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relation+of+Coronary+Artery+Lumen+with+Baseline,+Post-angioplasty+Coronary+Circulating+Pro-Inflammatory+Cytokines+in+Patients+with+Coronary+Artery+Disease.">Relation of Coronary Artery Lumen with Baseline, Post-angioplasty Coronary Circulating Pro-Inflammatory Cytokines in Patients with Coronary Artery Disease.</a> Angiology Open Access. 7, 01 (2019).</li><li>Schmidt-Lucke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+circulating+endothelial+progenitor+cells+using+the+modified+ISHAGE+protocol.">Quantification of circulating endothelial progenitor cells using the modified ISHAGE protocol.</a> PLoS One. 5 (1), e13790 (2010).</li><li>Moyer, C. F., Sajuthi, D., Tulli, H., Williams, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+IL-1+alpha+and+IL-1+beta+by+arterial+cells+in+atherosclerosis.">Synthesis of IL-1 alpha and IL-1 beta by arterial cells in atherosclerosis.</a> American Journal of Pathology. 138 (4), 951-960 (1991).</li><li>Morales-Portano, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Echocardiographic+measurements+of+epicardial+adipose+tissue+and+comparative+ability+to+predict+adverse+cardiovascular+outcomes+in+patients+with+coronary+artery+disease.">Echocardiographic measurements of epicardial adipose tissue and comparative ability to predict adverse cardiovascular outcomes in patients with coronary artery disease.</a> International Journal of Cardiovascular Imaging. 34 (9), 1429-1437 (2018).</li><li>Huang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells+correlated+with+oxidative+stress+after+mild+traumatic+brain+injury.">Endothelial progenitor cells correlated with oxidative stress after mild traumatic brain injury.</a> Yonsei Medical Journal. 58 (5), 1012-1017 (2017).</li></ol>

Blodinnsamling fra den berørte koronararterien kan være vanskelig. Noen ganger er koronararterien knapt tilgjengelig. I dette tilfellet kan prøvetaking fra venøs sinus være et alternativ. Vi utførte valideringstester som sammenlignet sirkulerende biomarkører i koronararterie vs venøs sinus, uten signifikante forskjeller. Imidlertid ble ytelsen til sirkulerende biomarkører validert bare for koronarprøvetaking. Derfor gjenstår ytelsen til biomarkører hentet fra venøs sinus å bli utforsket.
<p class="jove_...

Koronar angioplastikk og stenting representerer en redningsprosedyre for pasienter med koronarsykdom (CAD). Imidlertid kan store uønskede kardiovaskulære hendelser (MACEer), inkludert kardiovaskulær død, hjerteinfarkt, koronar restenose og episoder av angina eller dekompensere hjertesvikt, oppstå måneder etter koronarintervensjon, noe som fører til uplanlagte besøk på sykehuset. MACEer er vanlige over hele verden, og deres morbi-dødelighet er høy1.
Koronar iskemisk skade induserer tidlig vaskulær respons og nedsettende mekanismer som involverer mobilisering av MPCer på grunn av deres differensieringsevne og /eller angio-reparative potensial, samt produksjon av løselige molekyler som intercellulære adhesjonmolekyler (ICAMs), matrise metalloproteinases (MMPs), og reaktive oksygenarter, reflekterer celleadhesjon, vev remodeling, og oksidativt stress. Selv om iboende vaskulære funksjoner som plakk egenskaper og koronarkompleksitet har blitt brukt til å forutsi MACEer, noen studier har antydet at biomarkører knyttet til mekanismer for skade og reparasjon som forekommer i koronar endotelet kan være svært nyttig for tidlig identifisering og prognose av kardiovaskulære hendelser hos pasienter med CAD sendt til koronar angioplastikk2,3,4,5.
Kontinuerlig interesse for å forstå mekanismene underliggende CAD skade og reparasjon har motivert etterforskere til å studere intrakoronar sirkulerende biomarkører, fordi koronar prøvetaking nærmere gjenspeiler vaskulær skade og reparasjon6. Karakterisering av koronar biomarkører i menneskelige studier har vært knappe7,8,9. Derfor var formålet med den nåværende studien å beskrive en metode for å bestemme mengden koronar sirkulerende MPCer og løselige molekyler, noe som reflekterer både vaskulær skade og reparasjon, og for å vise om disse biomarkører er forbundet med MACEer og klinisk prognose av CAD-pasienter som gjennomgikk koronar angioplastikk. Denne metoden er basert på bruk av vaskulær-relaterte, sirkulerende MPCer og løselige molekyler oppnådd ved prøvetaking steder nærmest fartøyet skade. Det kan også være nyttig for kliniske studier for nedre lem iskemi, hjerneslag, vaskulitt, venøs trombose, og andre skader som involverer vaskulær skade og reparasjon.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10735086001</td>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA) as a buffering agent, stabilizer, standard and for blending.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calibration Beads</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-093-607</td>
			<td>MACQuant calibration beads are supplied in aqueous solution containing 0.05% sodium azide. 3.5 ml for up to 100 tests</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD133/1 (AC133)-PE</td>
			<td>Milteny Biotec / MACS</td>
			<td>#130-080-801</td>
			<td>Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD184 (CXCR4)-PE-VIO770</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-103-798</td>
			<td>Monoclonal, Isotype recombinant human IgG1, conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-093-601</td>
			<td>Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD34-FITC</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-081-001</td>
			<td>The monoclonal antibody clone AC136 detecs a class III epitope of the CD34</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45- VioBlue</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-092-880</td>
			<td>Monoclonal CD45 Antibody, human conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Tubes</td>
			<td>Thermo SCIENTIFIC</td>
			<td>#339651</td>
			<td>15ml conical centrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytometry Tubes</td>
			<td>FALCON Corning Brand</td>
			<td>#352052</td>
			<td>5 mL Polystyrene Round-Bottom Tube. 12x75 style. Sterile.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>#161-0729</td>
			<td>Heavy metals, (as Pb) &#60;10ppm, Fe &#60;0.01%, As &#60;1ppm, Insolubles &#60;0.005%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Improved Neubauer</td>
			<td>Without brand</td>
			<td>Without catalog number</td>
			<td>Hemocytometer for cell counting. (range 0.1000mm, 0.0025mm2)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2 EDTA Blood Collection Tubes</td>
			<td>BD Vacutainer</td>
			<td>#367863</td>
			<td>Lilac plastic vacutainer tube (K2E) 10.8mg, 6 mL.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lymphoprep</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>01-63-12-002-A</td>
			<td>Sterile and checked on the presence of endotoxins. Density: 1.077&#177;0.001g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>#SZBF0920V</td>
			<td>Fixation of biological samples, (powder, 95%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Transfer 1,3mL</td>
			<td>CRM Globe</td>
			<td>PF1016, PF1015</td>
			<td>The transfer pipette is a tool that facilitates liquid transfer with greater accuracy.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test Tubes</td>
			<td>KIMBLE CHASE</td>
			<td>45060 13100</td>
			<td>Heat-resistant test tubes. SIZE/CAP 13 x 100 mm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

coronary progenitor cells and soluble biomarkers in cardiovascular prognosis after coronary angioplasty

Store uønskede kardiovaskulære hendelser (MACEer) påvirker den kardiovaskulære prognosen til pasienter som gjennomgår koronar angioplastikk på grunn av koronar iskemisk skade. Omfanget av koronarskade og mekanismene for vaskulær reparasjon er faktorer som påvirker den fremtidige utviklingen av MACEer. Iboende vaskulære egenskaper som plakkegenskaper og koronarkompleksitet har vist prognostisk informasjon for MACEer. Imidlertid har bruken av intrakoronar sirkulerende biomarkører blitt postulert som en praktisk metode for tidlig identifisering og prognose av MACEer, da de tettere reflekterer dynamiske mekanismer som involverer koronarskade og reparasjon. Bestemmelse av koronar sirkulerende biomarkører under angioplastikk, for eksempel antall underpopulasjoner av mononukleære stamceller (MPCer) samt konsentrasjonen av løselige molekyler som reflekterer betennelse, cellevedheft og reparasjon, gir mulighet for vurdering av fremtidigutvikling og prognosen for MACEs 6 måneder etter koronar angioplastikk. Denne metoden fremheves av sin translasjonelle natur og bedre ytelse enn perifert blod sirkulerende biomarkører om prediksjon av MACEer og dens effekt på kardiovaskulær prognose, som kan brukes for risikostratifisering av pasienter med koronarsykdom gjennomgår angioplastikk.

Koronar, venøs sinus og perifert blod ble samlet inn fra 52 pasienter som gjennomgikk koronarangiografi (figur 1) og viste en høy forekomst av hypertensjon og dyslipidemi. Ved klinisk oppfølging var 11 (21,1 %) MACE-er skjedde 6 måneder etter koronarangiografi: død (n = 1), angina som krever sykehusoppmøte (n = 6), hjerteinfarkt (n = 2), og/eller bevis på hjertesvikt (n = 4).
Den baseline kor...

Watch this Scientific Journal Video about Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty at JoVE.com

Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty

Utvikling av store uønskede kardiovaskulære hendelser, som påvirker kardiovaskulær prognose etter koronar angioplastikk, påvirkes av omfanget av koronarskade og vaskulær reparasjon. Bruken av nye koronar cellulære og løselige biomarkører, reaktive for vaskulær skade og reparasjon, er nyttige for å forutsi utviklingen av MACEer og prognose.

Koronar stamceller og løselige biomarkører i kardiovaskulær prognose etter koronar Angioplastikk

Major adverse cardiovascular events (MACEs) negatively impact the cardiovascular prognosis of patients undergoing coronary angioplasty due to coronary ...

Selv om angioplastikk hjelper pasienter med koronarsykdom, kan kardiovaskulære hendelser fortsatt oppstå etter prosedyren. Som MPCer og løselige molekyler er hentet fra koronar sirkulasjon, kan de korreleres til graden av vaskulær skade og reparasjon. Koronar MPC og løselige mediatornivåer kan derfor brukes til å estimere kardiovaskulære hendelser og prognose hos pasienter med koronarsykdom som gjennomgår koronar angioplasties.MPCer og løselige molekyler kan også brukes til å estimere komplikasjoner og prognoser som oppstår under forskjellige iskemiske innstillinger, for eksempel tilbakevendende lem iskemisk slag. Demonstrere prosedyren vil være Eduardo Vera-Gomez og Alejandro Hernandez-Patricio, lab teknikere, og Karen De La Vega-Moreno og Carlos Zamora-Aleman, undergrad studenter. Også demonstrere vil være Gabriela Alexandra Dominguez-Perez, en Master's of Science student, Alberto Melchor-Lopez, en ph.d.-student, og Mario Antonio Tellez-Gonzalez, en Master's of Science samarbeidspartner.Innen en time etter innsamling, overføre seks milliliter av høstet blodprøve til en 15 milliliter konisk rør og fortynne blodet på en en til en ratio i PBS. Tilsett to milliliter med tetthet gradient medium til tre testrør og nøye overføre tre like aliquots av fortynnet blod inn i hvert rør av tetthet gradient medium. Skill cellene ved sentrifugering og overfør cellene i grensesnittet til et nytt rør.Vask de oppsamlede cellene en gang i to milliliter PBS i seks minutter, etterfulgt av seks vasker i to milliliter frisk PBS per vask i to minutter. Etter siste vask, re-suspendere MPC-inneholdende celle pellet i en milliliter PBS for telling og legge til en ganger ti til de seks cellene til merket fem milliliter flyt cytometri rør. Pellet cellene ved sentrifugering og tilsett 100 mikroliter av riktig antistoff av interesse, fortynnet i antistoffinkubasjonsoppløsning til hvert rør.Bland forsiktig cellene med hver ekstra antistoffcocktail i 10 sekunder, og plasser prøvene på fire grader Celsius, beskyttet mot lys, i 20 minutter. På slutten av inkubasjonen sentrifuger prøvene og re-suspendere pellets i 500 mikroliter pbs supplert med to millimolar EDTA. Ved hjelp av isotype-matchede kontroller for å sette opp bakgrunnsfargingen, analyser prøvene ved strømningscytometri i henhold til standardprotokoller, gating på lymfocytter i en fremover ved side scatter plot, for å utelukke gjenværende granulocytter, cellulære rusk og andre partikler.Sett en port for å inneholde et høyt antall celler med en CD45-positiv CD34-positiv fenotype. Deretter bruker du den CD45-positive CD34-positive porten til å velge for kinase insert domain receptor CD133 eller CD184-positive celler. MPC-underpopulasjonene kan deretter identifiseres av deres spesifikke celleoverflatemarkører og rapporteres som prosentandelen av inngjerdede hendelser.For å bestemme konsentrasjonen av løselige biomarkører i de innsamlede blodprøvene, vask først de riktige forhåndsbelagte ELISA-platene to ganger med den kit-tilfølgende vaskebufferen og merk standard, prøve og kontrollrør. Sentrifuger blodprøven for å skille blodkomponentene og aliquot plasmaet i prøverørene. Overfør standarder, prøver og kontroller til de aktuelle brønnene og forsegle og inkubere platen ved 37 grader Celsius i 90 minutter.På slutten av inkubasjonen, kast brønninnholdet og legg til biotindeteksjonsantistoffet til hver brønn. Etter en time inkubasjon ved 37 grader Celsius, kast plateinnholdet og vask brønnene tre ganger med fersk vaskebuffer per vask. Etter siste vask inkubere prøvene med Streptavidin arbeidsløsning i 30 minutter ved 37 grader Celsius etterfulgt av tre vasker, som vist.Etter siste vask, behandle prøvene med tetrametylbenzidin substrat i 30 minutter ved 37 grader Celsius. Når fargen utvikler seg, legg til stoppløsning fra settet og les den optiske tetthetsabsorbansen i en MIKROPLATE ELISA-leser. For å bestemme konsentrasjonen av tumornekrose faktor alfa, og interleukin-1 beta, ved hjelp av immunomagnetisk multipleksing, merke standard, prøve og kontrollrør og virvel de magnetiske perle hetteglassene i 30 sekunder.Legg perler til de riktige brønnene til multipleksingsanalyseplaten. Når alle perlene er lagt til, sett inn den håndholdte magnetiske plateskiven sikkert, og vent to minutter på at perlene skal samle seg på bunnen av hver brønn, før du raskt inverterer både den håndholdte magnetiske platevaskeren og plateenheten over en avfallsbeholder. Deretter legger du til 150 mikroliter vaskebuffer til hver brønn og venter 30 sekunder for å la perlene akkumuleres på bunnen.Kast innholdet igjen som nettopp demonstrert og tilsett 25 mikroliter med universell analysebuffer og 25 mikroliter av de forberedte standarder, prøver og kontroller. Forsegle platen i minst 60 minutters inkubasjon, beskyttet mot lys ved romtemperatur og 500 rotasjoner per minutt. På slutten av inkubasjonen legger du til 150 mikroliter vaskebuffer til hver brønn og la perlene bosette seg i 30 sekunder.Deretter bruker du platevaskeren til å kaste brønninnholdet og merke hver brønn med 25 mikroliter på deteksjonsantistoffblanding etterfulgt av to vasker, som vist. Etter den andre vasken inkuber prøvene med 25 mikroliter Streptavidin PE i 30 minutter ved romtemperatur. På slutten av inkubasjonen, tilsett 120 mikroliter lesebuffer til hver brønn og forsegle platen i en fem minutters inkubasjon, beskyttet mot lys ved romtemperatur, i 500 rotasjoner per minutt.Deretter legger du platen på en multipleksanalyseleser og justerer leseparametrene i henhold til hver analyse. Koronar, venus-sinus og perifert blod ble samlet inn fra 52 pasienter som gjennomgikk koronar angiografi og viste en høy forekomst av hypertensjon og dyslipidemi. Den baseline koronarkonsentrasjonen av de fleste MPCer var signifikant lavere hos pasienter som utviklet store uønskede kardiovaskulære hendelser, med en større reduksjon i MPC-underpopulasjoner CD34-positiv CD133-positiv, og CD45-positiv, CD34-positiv, CD133-positiv, CD184-positiv.På samme måte hadde pasienter som utviklet store kardiovaskulære hendelser en økt baseline i koronarmengder av løselig ICAM-1 og lavere mengder metallomatrixprotein 9. Koronar MPCer og oppløselige ICAM-1 viste en prognostisk evne til alvorlig skade kardiovaskulær hendelsesfri overlevelse. Interessant, uttrykket av tumornekrose faktor alfa demonstrerte variasjoner i henhold til måletiden og plasseringen av koronarprøvetaking basert på en sammenligning av forskjellige lumen områder ved samme koronararterie, ved hjelp av intravaskulær ultralyd.Under MPC isolasjon, sørg for å overføre blodet til tetthet gradient, og å samle cellene fra grensesnittet etter sentrifugering nøye. Periodisk vortexing forhindrer perleutfelling og bruk av en magnetisk platevaskemiddel bidrar til å holde perlene inne i brønnene under vasker. Koronar MPCer og løselige molekyler er nyttige for å stratifisere risikoen for kardiovaskulære hendelser under oppfølging etter angioplastikk, og bistår i levering av sekundære forebygginger til høyrisikopersoner, da denne teknikken gjenspeiler den patofysiologiske prosessen som oppstår under løsningen, det kan være nyttig for forhold der vaskulær biologi spiller en rolle.

Research

JoVE Journal

Medicine

Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo.  With the advent of genetic modifications to ...

Modified Technique for Coronary Artery Ligation in Mice

Modifisert Teknikk for koronar hemorroider i Mus

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI ...

Retrograde Perfusion and Filling of Mouse Coronary Vasculature as Preparation for Micro Computed Tomography Imaging

Retrograd perfusjon og Fylling av Mouse Coronary blodkar som forberedelse for Micro Datatomografiscanning Imaging

Visualization of the vasculature is becoming increasingly important for understanding many different disease states. While several techniques exist for ...

Permanent Ligation of the Left Anterior Descending Coronary Artery in Mice: A Model of Post-myocardial Infarction Remodelling and Heart Failure

Permanent Ligation av Venstre Anterior Synkende Coronary Artery i Mus: En modell av Post-hjerteinfarkt Remodelling og hjertesvikt

Heart failure is a syndrome in which the heart fails to pump blood at a rate commensurate with cellular oxygen requirements at rest or during stress. It ...

Ultrasound Based Assessment of Coronary Artery Flow and Coronary Flow Reserve Using the Pressure Overload Model in Mice

Ultralyd Basert Vurdering av Coronary Artery Flow og Coronary Flow Reserve Bruke Trykkload Model i Mus

Transthoracic Doppler echocardiography (TTDE) is a clinically useful, noninvasive tool for studying coronary artery flow velocity and coronary flow ...

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery (ALCAPA)

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery ALCAPA

Direkte Re-implantasjon av Venstre koronar inn i aorta hos voksne med Anomalous opprinnelse Venstre koronar fra lungearterien (ALCAPA)

Anomalous origin of the left coronary artery from the pulmonary artery (ALCAPA) is a rare congenital anomaly which is one of leading causes of myocardial ...

Identifying Coronary Artery Calcification on Non-gated Computed Tomography Scans

Identifisere koronar forkalkninger på beregnet ikke-gated tomografi skanner

Coronary artery calcification (CAC) provides an objective measure of coronary artery disease and can readily be identified on non-gated computed ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Evaluering av koronar Flow Reserve etter hjerteinfarkt ischemia reperfusion i rotter

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

In Vitro Model of Coronary Angiogenesis

In Vitro Modell av Koronar Angiogenese

Here, we describe an in vitro culture assay to study coronary angiogenesis. Coronary vessels feed the heart muscle and are of clinical importance. Defects ...

Novel Percutaneous Approach for Deployment of 3D Printed Coronary Stenosis Implants in Swine Models of Ischemic Heart Disease

Roman Perkutan Tilnærming for distribusjon av 3D trykt koronar Stenose implantater i Swine Modeller av iskemisk hjertesykdom

Minimally invasive methods for creating models of focal coronary narrowing in large animals are challenging. Rapid prototyping using three-dimensionally ...