Name: coronary progenitor cells and soluble biomarkers in cardiovascular prognosis after coronary angioplasty
Uploaded: 2020-01-28T13:00:00
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Los autores agradecen el apoyo del Programa Institucional E015; y Fondo Sectorial FOSSIS-CONACYT, SALUD-2014-1-233947.

Este protocolo cumple con las directrices institucionales del Comité de ética de la investigación humana.
1. Angiografía coronaria, ultrasonido y muestreo de sangre
<ol><li>Solicitar información clínica y demográfica de referencia antes de la intervención coronaria. Recopilar los datos de la persona: edad, sexo, estado actual de tabaquismo, índice de masa corporal (IMC), presión arterial alta, dislipidemia, diabetes mellitus, medicamentos, y la indicación de la angiografía corona...

<ol>
	<li>Cassar, A., Holmes, D. R., Rihal, C. S., Gersh, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+coronary+artery+disease:+diagnosis+and+management.">Chronic coronary artery disease: diagnosis and management.</a> Mayo Clinic Proceedings. 84 (12), 1130-1146 (2009).</li><li>Regueiro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mobilization+of+endothelial+progenitor+cells+in+acute+cardiovascular+events+in+the+PROCELL+study:+time-course+after+acute+myocardial+infarction+and+stroke.">Mobilization of endothelial progenitor cells in acute cardiovascular events in the PROCELL study: time-course after acute myocardial infarction and stroke.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 80, 146-155 (2015).</li><li>Sen, S., McDonald, S. P., Coates, P. T., Bonder, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells:+novel+biomarker+and+promising+cell+therapy+for+cardiovascular+disease.">Endothelial progenitor cells: novel biomarker and promising cell therapy for cardiovascular disease.</a> Clinical Science (Lond). 120 (7), 263-283 (2011).</li><li>Samman Tahhan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progenitor+Cells+and+Clinical+Outcomes+in+Patients+With+Acute+Coronary+Syndromes.">Progenitor Cells and Clinical Outcomes in Patients With Acute Coronary Syndromes.</a> Circulation Research. 122 (11), 1565-1575 (2018).</li><li>Tomuli&#263;, V., Gobi&#263;, D., Luli&#263;, D., &#381;idan, D., Zaputovi&#263;, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soluble+adhesion+molecules+in+patients+with+acute+coronary+syndrome+after+percutaneous+coronary+intervention+with+drug-coated+balloon,+drug-eluting+stent+or+bare+metal+stent.">Soluble adhesion molecules in patients with acute coronary syndrome after percutaneous coronary intervention with drug-coated balloon, drug-eluting stent or bare metal stent.</a> Medical Hypotheses. 95, 20-23 (2016).</li><li>Jaumdally, R., Varma, C., Macfadyen, R. J., Lip, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+sinus+blood+sampling:+an+insight+into+local+cardiac+pathophysiology+and+treatment?.">Coronary sinus blood sampling: an insight into local cardiac pathophysiology and treatment?.</a> European Heart Journal. 28 (8), 929-940 (2007).</li><li>Kremastinos, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracoronary+cyclic-GMP+and+cyclic-AMP+during+percutaneous+transluminal+coronary+angioplasty.">Intracoronary cyclic-GMP and cyclic-AMP during percutaneous transluminal coronary angioplasty.</a> International Journal of Cardiology. 53 (3), 227-232 (1996).</li><li>Karube, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+cytokine+levels+by+coronary+sinus+blood+sampling+during+cardiac+surgery+with+cardiopulmonary+bypass.">Measurement of cytokine levels by coronary sinus blood sampling during cardiac surgery with cardiopulmonary bypass.</a> American Society for Artificial Internal Organs Journal. 42 (5), M787-M791 (1996).</li><li>Truong, Q. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+sinus+biomarker+sampling+compared+to+peripheral+venous+blood+for+predicting+outcomes+in+patients+with+severe+heart+failure+undergoing+cardiac+resynchronization+therapy:+the+BIOCRT+study.">Coronary sinus biomarker sampling compared to peripheral venous blood for predicting outcomes in patients with severe heart failure undergoing cardiac resynchronization therapy: the BIOCRT study.</a> Heart Rhythm. 11 (12), 2167-2175 (2014).</li><li>Su&#225;rez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+circulating+mononuclear+progenitor+cells+and+soluble+biomarkers+in+the+cardiovascular+prognosis+after+coronary+angioplasty.">Coronary circulating mononuclear progenitor cells and soluble biomarkers in the cardiovascular prognosis after coronary angioplasty.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23 (7), 4844-4849 (2019).</li><li>Su&#225;rez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relation+of+Coronary+Artery+Lumen+with+Baseline,+Post-angioplasty+Coronary+Circulating+Pro-Inflammatory+Cytokines+in+Patients+with+Coronary+Artery+Disease.">Relation of Coronary Artery Lumen with Baseline, Post-angioplasty Coronary Circulating Pro-Inflammatory Cytokines in Patients with Coronary Artery Disease.</a> Angiology Open Access. 7, 01 (2019).</li><li>Schmidt-Lucke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+circulating+endothelial+progenitor+cells+using+the+modified+ISHAGE+protocol.">Quantification of circulating endothelial progenitor cells using the modified ISHAGE protocol.</a> PLoS One. 5 (1), e13790 (2010).</li><li>Moyer, C. F., Sajuthi, D., Tulli, H., Williams, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+IL-1+alpha+and+IL-1+beta+by+arterial+cells+in+atherosclerosis.">Synthesis of IL-1 alpha and IL-1 beta by arterial cells in atherosclerosis.</a> American Journal of Pathology. 138 (4), 951-960 (1991).</li><li>Morales-Portano, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Echocardiographic+measurements+of+epicardial+adipose+tissue+and+comparative+ability+to+predict+adverse+cardiovascular+outcomes+in+patients+with+coronary+artery+disease.">Echocardiographic measurements of epicardial adipose tissue and comparative ability to predict adverse cardiovascular outcomes in patients with coronary artery disease.</a> International Journal of Cardiovascular Imaging. 34 (9), 1429-1437 (2018).</li><li>Huang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells+correlated+with+oxidative+stress+after+mild+traumatic+brain+injury.">Endothelial progenitor cells correlated with oxidative stress after mild traumatic brain injury.</a> Yonsei Medical Journal. 58 (5), 1012-1017 (2017).</li></ol>

La recolección de sangre de la arteria coronaria afectada puede ser difícil. A veces, la arteria coronaria apenas es accesible. En este caso, el muestreo del seno venoso puede ser una alternativa. Realizamos pruebas de validación comparando biomarcadores circulantes en arteria coronaria frente a seno venoso, sin diferencias significativas. Sin embargo, el rendimiento de los biomarcadores circulantes se validó únicamente para el muestreo coronario. Por lo tanto, el rendimiento de los biomarcadores obtenidos del seno ...

La angioplastia coronaria y la colocación de stents representan un procedimiento de salvamento para pacientes con enfermedad de las arterias coronarias (CAD). Sin embargo, los principales eventos cardiovasculares adversos (MACE), incluyendo muerte cardiovascular, infarto de miocardio, restenosis coronaria y episodios de angina de pecho o insuficiencia cardíaca descompensación, pueden ocurrir meses después de la intervención coronaria, lo que provoca visitas no programadas al hospital. Los MACE son comunes en todo el mundo y su morbimortalidad es alta1.
La lesión isquémica coronaria induce la respuesta vascular temprana y los mecanismos reparadores que implican la movilización de los MMP debido a su capacidad de diferenciación y/o potencial angioreparador, así como la producción de moléculas solubles como moléculas de adhesión intercelular (ICAM), metaloproteinasas de matriz (MMP), y especies reactivas de oxígeno, que reflejan la adhesión celular, la remodelación de tejidos y el estrés oxidativo. Aunque se han utilizado características vasculares intrínsecas como las características de la placa y la complejidad de las arterias coronarias para predecir macEs, algunos estudios han sugerido que los biomarcadores relacionados con los mecanismos de lesión y reparación que se producen en el endotelio coronario podrían ser muy útiles para la identificación temprana y el pronóstico de eventos cardiovasculares en pacientes con CAD sometidos a angioplastia coronaria2,3,4,5.
El interés continuo en comprender los mecanismos subyacentes a la lesión y reparación CAD ha motivado a los investigadores a estudiar los biomarcadores circulantes intracoronarios, ya que el muestreo coronario refleja más estrechamente el daño vascular y la reparación6. Sin embargo, la caracterización de biomarcadores coronarios en estudios en humanos ha sido escasa7,8,9. Por lo tanto, el propósito del presente estudio fue describir un método para determinar la cantidad de MMP circulantes coronarios y moléculas solubles, reflejando tanto la lesión vascular y la reparación, y para mostrar si estos biomarcadores están asociados con las MACEs y el pronóstico clínico de pacientes con EAC que se sometieron a una angioplastia coronaria. Este método se basa en el uso de MMP circulantes y moléculas solubles relacionadas con el vascular obtenidos por lugares de muestreo más cercanos al daño del vaso. También puede ser útil para estudios clínicos para isquemia de miembros inferiores, accidente cerebrovascular, vasculitis, trombosis venosa, y otras lesiones que implican lesión vascular y reparación.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10735086001</td>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA) as a buffering agent, stabilizer, standard and for blending.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calibration Beads</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-093-607</td>
			<td>MACQuant calibration beads are supplied in aqueous solution containing 0.05% sodium azide. 3.5 ml for up to 100 tests</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD133/1 (AC133)-PE</td>
			<td>Milteny Biotec / MACS</td>
			<td>#130-080-801</td>
			<td>Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD184 (CXCR4)-PE-VIO770</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-103-798</td>
			<td>Monoclonal, Isotype recombinant human IgG1, conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-093-601</td>
			<td>Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD34-FITC</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-081-001</td>
			<td>The monoclonal antibody clone AC136 detecs a class III epitope of the CD34</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45- VioBlue</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-092-880</td>
			<td>Monoclonal CD45 Antibody, human conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Tubes</td>
			<td>Thermo SCIENTIFIC</td>
			<td>#339651</td>
			<td>15ml conical centrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytometry Tubes</td>
			<td>FALCON Corning Brand</td>
			<td>#352052</td>
			<td>5 mL Polystyrene Round-Bottom Tube. 12x75 style. Sterile.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>#161-0729</td>
			<td>Heavy metals, (as Pb) &#60;10ppm, Fe &#60;0.01%, As &#60;1ppm, Insolubles &#60;0.005%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Improved Neubauer</td>
			<td>Without brand</td>
			<td>Without catalog number</td>
			<td>Hemocytometer for cell counting. (range 0.1000mm, 0.0025mm2)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2 EDTA Blood Collection Tubes</td>
			<td>BD Vacutainer</td>
			<td>#367863</td>
			<td>Lilac plastic vacutainer tube (K2E) 10.8mg, 6 mL.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lymphoprep</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>01-63-12-002-A</td>
			<td>Sterile and checked on the presence of endotoxins. Density: 1.077&#177;0.001g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>#SZBF0920V</td>
			<td>Fixation of biological samples, (powder, 95%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Transfer 1,3mL</td>
			<td>CRM Globe</td>
			<td>PF1016, PF1015</td>
			<td>The transfer pipette is a tool that facilitates liquid transfer with greater accuracy.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test Tubes</td>
			<td>KIMBLE CHASE</td>
			<td>45060 13100</td>
			<td>Heat-resistant test tubes. SIZE/CAP 13 x 100 mm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

coronary progenitor cells and soluble biomarkers in cardiovascular prognosis after coronary angioplasty

Los principales eventos cardiovasculares adversos (MACEs) afectan negativamente el pronóstico cardiovascular de los pacientes sometidos a angioplastia coronaria debido a una lesión isquémica coronaria. El alcance del daño coronario y los mecanismos de reparación vascular son factores que influyen en el desarrollo futuro de los MACEs. Las características vasculares intrínsecas como las características de la placa y la complejidad de las arterias coronarias han demostrado información de pronóstico para las MACEs. Sin embargo, el uso de biomarcadores circulantes intracoronarios se ha postulado como un método conveniente para la identificación temprana y el pronóstico de mace, ya que reflejan más de cerca los mecanismos dinámicos que implican daño coronario y reparación. La determinación de biomarcadores circulantes coronarios durante la angioplastia, como el número de subpoblaciones de células progenitoras mononucleares (MCC), así como la concentración de moléculas solubles que reflejan inflamación, adhesión celular y reparación, permite evaluación de la evolución futura y el pronóstico de MACEs 6 meses después de la angioplastia coronaria. Este método se destaca por su naturaleza traslacional y mejor rendimiento que los biomarcadores de circulación de sangre periférica con respecto a la predicción de los MACE y su efecto en el pronóstico cardiovascular, que puede aplicarse para la estratificación del riesgo de los pacientes con enfermedad de las arterias coronarias sometida a angioplastia.

Se recogieron senos coronarios, senos venosos y sangre periférica de 52 pacientes que se sometieron a angiografía coronaria(Figura 1)y mostraron una alta prevalencia de hipertensión y dislipidemia. En el seguimiento clínico, 11 (21,1%) Los MACE se produjeron 6 meses después de la angiografía coronaria: muerte (n.o 1), angina de pecho que requirió asistencia hospitalaria (n.o 6), infarto de miocardio (n.o 2) y/o evidencia de insuficiencia cardíaca (n.o...

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Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty

El desarrollo de grandes eventos cardiovasculares adversos, que afectan el pronóstico cardiovascular después de la angioplastia coronaria, está influenciado por la extensión del daño coronario y la reparación vascular. El uso de nuevos biomarcadores celulares y solubles coronarios, reactivos al daño vascular y la reparación, son útiles para predecir el desarrollo de MACE y pronóstico.

Células progenitoras coronarias y biomarcadores solubles en pronóstico cardiovascular después de la angioplastia coronaria

Major adverse cardiovascular events (MACEs) negatively impact the cardiovascular prognosis of patients undergoing coronary angioplasty due to coronary ...

Aunque la angioplastia ayuda a los pacientes con enfermedad de las arterias coronarias, los eventos cardiovasculares todavía pueden ocurrir después del procedimiento. Como los MPC y las moléculas solubles se obtienen de la circulación coronaria, pueden estar correlacionados con el grado de daño vascular y reparación. Por lo tanto, el MPC coronario y los niveles de mediador soluble se pueden utilizar para estimar eventos cardiovasculares y pronóstico en pacientes con enfermedad de las arterias coronarias sometidos a angioplastia coronaria.Los MPC y las moléculas solubles también se pueden utilizar para estimar las complicaciones y pronósticos que se producen en diferentes entornos isquémicos, como el accidente cerebrovascular isquemio de las extremidades recurrentes. Demostrando el procedimiento serán Eduardo Vera-Gomez y Alejandro Hernández-Patricio, técnicos de laboratorio, y Karen De La Vega-Moreno y Carlos Zamora-Aleman, estudiantes de grado. También se manifestará Gabriela Alexandra Domínguez-Pérez, estudiante de Maestría en Ciencias, Alberto Melchor-López, estudiante de doctorado, y Mario Antonio Tellez-Gonzalez, colaborador de Maestría en Ciencias.Dentro de una hora de recolección, transfiera seis mililitros de la muestra de sangre cosechada a un tubo cónico de 15 mililitros y diluya la sangre en una proporción de uno a uno en PBS. Agregue dos mililitros de gradiente de densidad medio a tres tubos de ensayo y transfiera cuidadosamente tres alícuotas iguales de sangre diluida a cada tubo de gradiente de densidad medio. Separe las células por centrifugación y transfiera las células en la interfaz a un nuevo tubo.Lavar las células recogidas una vez en dos mililitros de PBS durante seis minutos, seguidos de seis lavados en dos mililitros de PBS fresco por lavado durante dos minutos. Después del último lavado, vuelva a suspender el pellet celular que contiene MPC en un mililitro de PBS para contar y agregue una por diez a las seis células para etiquetar los tubos de citometría de flujo de cinco mililitros. Pelecila las células por centrifugación y añada 100 microlitros del anticuerpo de interés adecuado, diluidos en solución de incubación de anticuerpos a cada tubo.Mezcle suavemente las células con cada cóctel de anticuerpos añadido durante 10 segundos, y coloque las muestras a cuatro grados centígrados, protegidos de la luz, durante 20 minutos. Al final de la incubación, centrifugar las muestras y volver a suspender los pellets en 500 microlitros de PBS complementados con dos EDTA milimolares. Usando controles de coincidencia de isotipos para configurar la tinción de fondo, analice las muestras por citometría de flujo de acuerdo con los protocolos estándar, gating en los linfocitos en una gráfica de dispersión hacia adelante por lado, para excluir granulocitos residuales, desechos celulares y otras partículas.Establezca una puerta para que contenga un alto número de celdas con un fenotipo CD34 positivo en CD45. A continuación, utilice la puerta CD45 positiva CD34-positiva para seleccionar las células cd133 o CD184-positivas del receptor de dominio de inserción de quinasa. Las subpúmeros MPC pueden ser identificadas por sus marcadores de superficie celular específicos y reportadas como el porcentaje de eventos bloqueados.Para determinar la concentración de biomarcadores solubles en las muestras de sangre recogidas, primero, lave dos veces las placas ELISA pre-recubiertas apropiadas con el tampón de lavado proporcionado por el kit y etiquete los tubos estándar, de muestra y de control. Centrifugar la muestra de sangre para separar los componentes sanguíneos y alicuar el plasma en los tubos de muestra. Transfiera las normas, muestras y controles a los pozos apropiados y selle e incuba la placa a 37 grados centígrados durante 90 minutos.Al final de la incubación, deseche el contenido del pozo y agregue el anticuerpo de detección de biotina a cada pocóylo. Después de una incubación de una hora a 37 grados Centígrados, deseche el contenido del plato y lave los pozos tres veces con tampón de lavado fresco por lavado. Después del último lavado, incubar las muestras con solución de trabajo de Streptavidin durante 30 minutos a 37 grados centígrados seguidos de tres lavados, como se ha demostrado.Después del último lavado, tratar las muestras con sustrato de tetrametilbenzidina durante 30 minutos a 37 grados Centígrados. Cuando se desarrolle el color, añada la solución stop del kit y lea la absorción de densidad óptica en un lector ELISA de microplaca. Para determinar la concentración del factor de necrosis tumoral alfa, e interleucina-1 beta, utilizando multiplexación inmunomagnética, etiquete los tubos estándar, de muestra y de control y vórtice los viales de cuentas magnéticas durante 30 segundos.Agregue perlas a los pozos apropiados de la placa de ensayo de multiplexación. Cuando se hayan añadido todas las perlas, inserte de forma segura la arandela de placa magnética de mano y espere dos minutos para que las perlas se acumulen en la parte inferior de cada pozo, antes de invertir rápidamente tanto la arandela de placa magnética de mano, como el ensamblaje de la placa sobre un contenedor de residuos. A continuación, agregue 150 microlitros de tampón de lavado a cada pozo y espere 30 segundos para permitir que las perlas se acumulen en la parte inferior.Deseche el contenido de nuevo como se acaba de demostrar y añada 25 microlitros de búfer de ensayo universal y 25 microlitros de las normas, muestras y controles preparados. Selle la placa durante al menos 60 minutos de incubación, protegida de la luz a temperatura ambiente, y 500 rotaciones por minuto. Al final de la incubación, añadir 150 microlitros de tampón de lavado a cada pocóteo y dejar que las cuentas se asienten durante 30 segundos.A continuación, utilice la arandela de placas para desechar el contenido del pozo y etiquetar cada pozo con 25 microlitros de mezcla de anticuerpos de detección seguidos de dos lavados, como se ha demostrado. Después del segundo lavado, incubar las muestras con 25 microlitros de Streptavidin PE durante 30 minutos a temperatura ambiente. Al final de la incubación, añadir 120 microlitros de tampón de lectura a cada pocillo y sellar la placa para una incubación de cinco minutos, protegida de la luz a temperatura ambiente, para 500 rotaciones por minuto.A continuación, cargue la placa en un lector de ensayo de multiplexación y ajuste los parámetros de lectura de acuerdo con cada analito. Se recogieron sangre coronaria, venus-sinus y periférica de 52 pacientes que se sometieron a angiografía coronaria y demostraron una alta prevalencia de hipertensión y dislipidemia. La concentración coronaria basal de la mayoría de los CPC fue significativamente menor en pacientes que desarrollaron eventos cardiovasculares adversos importantes, con una mayor disminución de las subpoblaciones MPC CD34 positivas CD133 positivos, y CD45 positivo, CD34 positivo, CD133 positivo, CD184 positivo.Del mismo modo, los pacientes que desarrollaron eventos cardiovasculares adversos importantes tuvieron un mayor valor basal en cantidades coronarias de ICAM-1 soluble y cantidades más bajas de proteína metallomatrix 9. Los MPC coronarios y el ICAM-1 soluble demostraron una capacidad de pronóstico para una supervivencia importante libre de eventos cardiovasculares adversos. Curiosamente, la expresión del factor de necrosis tumoral alfa demostró variaciones según el tiempo de medición y la ubicación del muestreo coronario basado en una comparación de diferentes áreas de lumen en la misma arteria coronaria, utilizando ultrasonido intravascular.Durante el aislamiento MPC, asegúrese de transferir la sangre al gradiente de densidad, y recoger las células de la interfaz después de la centrifugación cuidadosamente. El vórtice periódico previene la precipitación del cordón y el uso de una arandela de placa magnética ayuda a mantener las perlas dentro de los pozos durante los lavados. Los CPP coronarios y las moléculas solubles son útiles para estratificar el riesgo de eventos cardiovasculares durante el seguimiento después de la angioplastia, ayudando en la provisión de prevenciones secundarias a individuos de alto riesgo ya que esta técnica refleja el proceso fisiopatológico que se produce durante el cese de la solución, podría ser útil para condiciones en las que la biología vascular juega un papel.

Research

JoVE Journal

Medicine

Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

Ligadura de las arterias coronarias y la inyección intramiocárdica en un modelo murino de infarto

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo.  With the advent of genetic modifications to ...

Investigación

Medicina

Modified Technique for Coronary Artery Ligation in Mice

Técnica modificada para la ligadura de la arteria coronaria en ratones

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI ...

Retrograde Perfusion and Filling of Mouse Coronary Vasculature as Preparation for Micro Computed Tomography Imaging

Perfusión retrógrada y llenado de la vasculatura coronaria del ratón, como preparación para la Micro tomografía computarizada

Visualization of the vasculature is becoming increasingly important for understanding many different disease states. While several techniques exist for ...

Permanent Ligation of the Left Anterior Descending Coronary Artery in Mice: A Model of Post-myocardial Infarction Remodelling and Heart Failure

La ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior en ratones: un modelo de remodelación post infarto de miocardio e insuficiencia cardiaca

Heart failure is a syndrome in which the heart fails to pump blood at a rate commensurate with cellular oxygen requirements at rest or during stress. It ...

Ultrasound Based Assessment of Coronary Artery Flow and Coronary Flow Reserve Using the Pressure Overload Model in Mice

Evaluación Ultrasonido base de la arteria coronaria de flujo y la reserva coronaria Utilizando la sobrecarga Modelo Presión en ratones

Transthoracic Doppler echocardiography (TTDE) is a clinically useful, noninvasive tool for studying coronary artery flow velocity and coronary flow ...

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery (ALCAPA)

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery ALCAPA

Directa reimplantación de la arteria coronaria izquierda en la aorta en adultos con origen anómalo de la arteria coronaria izquierda desde la arteria pulmonar (ALCAPA)

Anomalous origin of the left coronary artery from the pulmonary artery (ALCAPA) is a rare congenital anomaly which is one of leading causes of myocardial ...

Identifying Coronary Artery Calcification on Non-gated Computed Tomography Scans

Identificación de la calcificación coronaria en cerrada no computado exploraciones de la tomografía

Coronary artery calcification (CAC) provides an objective measure of coronary artery disease and can readily be identified on non-gated computed ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Evaluación de la Reserva de Flujo Coronario Después de la Reperfusión de Isquemia Miocárdica en Ratas

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

In Vitro Model of Coronary Angiogenesis

Modelo In Vitro de Angiogénesis Coronaria

Here, we describe an in vitro culture assay to study coronary angiogenesis. Coronary vessels feed the heart muscle and are of clinical importance. Defects ...

Novel Percutaneous Approach for Deployment of 3D Printed Coronary Stenosis Implants in Swine Models of Ischemic Heart Disease

Nuevo enfoque percutáneo para el despliegue de implantes de estenosis coronaria impresa en 3D en modelos porcinos de cardiopatía isquémica

Minimally invasive methods for creating models of focal coronary narrowing in large animals are challenging. Rapid prototyping using three-dimensionally ...