Name: coronary progenitor cells and soluble biomarkers in cardiovascular prognosis after coronary angioplasty
Uploaded: 2020-01-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty at JoVE.com

Yazarlar Kurumsal Program E015 desteğine teşekkür eder; ve Fondo Sektörel FOSSIS-CONACYT, SALUD-2014-1-233947.

Bu protokol, insan araştırmaları etik komitesinin kurumsal yönergelerini karşılamaktadır.
1. Koroner Anjiyografi, Ultrason ve Kan Örneği
<ol><li>Koroner girişimden önce temel klinik ve demografik bilgi isteyin. Bireyin verilerini toplayın: yaş, cinsiyet, mevcut sigara durumu, vücut kitle indeksi (VKİ), yüksek tansiyon, dislipidemi, diabetes mellitus, ilaçlar, ve mevcut koroner anjiyografi endikasyonu.</li>
	<li>Radyal bir yaklaşım kullanarak kalp kateterizasyonu ile korone...

<ol>
	<li>Cassar, A., Holmes, D. R., Rihal, C. S., Gersh, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+coronary+artery+disease:+diagnosis+and+management.">Chronic coronary artery disease: diagnosis and management.</a> Mayo Clinic Proceedings. 84 (12), 1130-1146 (2009).</li><li>Regueiro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mobilization+of+endothelial+progenitor+cells+in+acute+cardiovascular+events+in+the+PROCELL+study:+time-course+after+acute+myocardial+infarction+and+stroke.">Mobilization of endothelial progenitor cells in acute cardiovascular events in the PROCELL study: time-course after acute myocardial infarction and stroke.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 80, 146-155 (2015).</li><li>Sen, S., McDonald, S. P., Coates, P. T., Bonder, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells:+novel+biomarker+and+promising+cell+therapy+for+cardiovascular+disease.">Endothelial progenitor cells: novel biomarker and promising cell therapy for cardiovascular disease.</a> Clinical Science (Lond). 120 (7), 263-283 (2011).</li><li>Samman Tahhan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progenitor+Cells+and+Clinical+Outcomes+in+Patients+With+Acute+Coronary+Syndromes.">Progenitor Cells and Clinical Outcomes in Patients With Acute Coronary Syndromes.</a> Circulation Research. 122 (11), 1565-1575 (2018).</li><li>Tomuli&#263;, V., Gobi&#263;, D., Luli&#263;, D., &#381;idan, D., Zaputovi&#263;, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soluble+adhesion+molecules+in+patients+with+acute+coronary+syndrome+after+percutaneous+coronary+intervention+with+drug-coated+balloon,+drug-eluting+stent+or+bare+metal+stent.">Soluble adhesion molecules in patients with acute coronary syndrome after percutaneous coronary intervention with drug-coated balloon, drug-eluting stent or bare metal stent.</a> Medical Hypotheses. 95, 20-23 (2016).</li><li>Jaumdally, R., Varma, C., Macfadyen, R. J., Lip, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+sinus+blood+sampling:+an+insight+into+local+cardiac+pathophysiology+and+treatment?.">Coronary sinus blood sampling: an insight into local cardiac pathophysiology and treatment?.</a> European Heart Journal. 28 (8), 929-940 (2007).</li><li>Kremastinos, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracoronary+cyclic-GMP+and+cyclic-AMP+during+percutaneous+transluminal+coronary+angioplasty.">Intracoronary cyclic-GMP and cyclic-AMP during percutaneous transluminal coronary angioplasty.</a> International Journal of Cardiology. 53 (3), 227-232 (1996).</li><li>Karube, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+cytokine+levels+by+coronary+sinus+blood+sampling+during+cardiac+surgery+with+cardiopulmonary+bypass.">Measurement of cytokine levels by coronary sinus blood sampling during cardiac surgery with cardiopulmonary bypass.</a> American Society for Artificial Internal Organs Journal. 42 (5), M787-M791 (1996).</li><li>Truong, Q. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+sinus+biomarker+sampling+compared+to+peripheral+venous+blood+for+predicting+outcomes+in+patients+with+severe+heart+failure+undergoing+cardiac+resynchronization+therapy:+the+BIOCRT+study.">Coronary sinus biomarker sampling compared to peripheral venous blood for predicting outcomes in patients with severe heart failure undergoing cardiac resynchronization therapy: the BIOCRT study.</a> Heart Rhythm. 11 (12), 2167-2175 (2014).</li><li>Su&#225;rez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+circulating+mononuclear+progenitor+cells+and+soluble+biomarkers+in+the+cardiovascular+prognosis+after+coronary+angioplasty.">Coronary circulating mononuclear progenitor cells and soluble biomarkers in the cardiovascular prognosis after coronary angioplasty.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23 (7), 4844-4849 (2019).</li><li>Su&#225;rez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relation+of+Coronary+Artery+Lumen+with+Baseline,+Post-angioplasty+Coronary+Circulating+Pro-Inflammatory+Cytokines+in+Patients+with+Coronary+Artery+Disease.">Relation of Coronary Artery Lumen with Baseline, Post-angioplasty Coronary Circulating Pro-Inflammatory Cytokines in Patients with Coronary Artery Disease.</a> Angiology Open Access. 7, 01 (2019).</li><li>Schmidt-Lucke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+circulating+endothelial+progenitor+cells+using+the+modified+ISHAGE+protocol.">Quantification of circulating endothelial progenitor cells using the modified ISHAGE protocol.</a> PLoS One. 5 (1), e13790 (2010).</li><li>Moyer, C. F., Sajuthi, D., Tulli, H., Williams, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+IL-1+alpha+and+IL-1+beta+by+arterial+cells+in+atherosclerosis.">Synthesis of IL-1 alpha and IL-1 beta by arterial cells in atherosclerosis.</a> American Journal of Pathology. 138 (4), 951-960 (1991).</li><li>Morales-Portano, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Echocardiographic+measurements+of+epicardial+adipose+tissue+and+comparative+ability+to+predict+adverse+cardiovascular+outcomes+in+patients+with+coronary+artery+disease.">Echocardiographic measurements of epicardial adipose tissue and comparative ability to predict adverse cardiovascular outcomes in patients with coronary artery disease.</a> International Journal of Cardiovascular Imaging. 34 (9), 1429-1437 (2018).</li><li>Huang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells+correlated+with+oxidative+stress+after+mild+traumatic+brain+injury.">Endothelial progenitor cells correlated with oxidative stress after mild traumatic brain injury.</a> Yonsei Medical Journal. 58 (5), 1012-1017 (2017).</li></ol>

Etkilenen koroner arterden kan toplanması zor olabilir. Bazen koroner artere zar zor ulaşılabiliyor. Bu durumda venöz sinüsten örnekleme alternatif olabilir. Koroner arter ile venöz sinüste dolaşan biyobelirteçleri karşılaştıran doğrulama testleri yaptık ve anlamlı bir farklılık olmadı. Ancak, dolaşan biyobelirteçlerin performansı sadece koroner örnekleme için doğrulandı. Bu nedenle venöz sinüsten elde edilen biyobelirteçlerin performansı araştırılacak.
Kan to...

Koroner anjiyoplasti ve stent, koroner arter hastalığı (CAD) olan hastalar için bir kurtarma prosedürünü temsil eder. Ancak kardiyovasküler ölüm, miyokard infarktüsü, koroner restenoz ve anjin veya dekompanse kalp yetmezliği atakları da dahil olmak üzere majör advers kardiyovasküler olaylar (MACE) koroner girişimden aylar sonra ortaya çıkabilir ve bu da hastaneye planlanmamış ziyaretlere yol açabilir. MAC'ler dünya çapında yaygındır ve morbi-mortaliteleri1'dir.
Koroner iskemik yaralanma erken vasküler yanıt ve reparative mekanizmaları onların farklılaşma yeteneği ve / veya anjiyo-reparative potansiyeli nedeniyle MPC'lerin mobilizasyonu içeren yanı sıra hücreler arası yapv molekülleri (ICAM), matris metalloproteinases (MDP) ve reaktif oksijen türleri gibi çözünür moleküllerin üretimi, hücre adezyonu yansıtan, doku remodeling, ve okside okside edici. Plak özellikleri ve koroner arter karmaşıklığı gibi içsel vasküler özellikler MACE'leri tahmin etmek için kullanılmış olsa da, bazı çalışmalar koroner endotel'de meydana gelen yaralanma ve onarım mekanizmalarına bağlı biyobelirteçlerin koroner anjiyoplasti2,3,4,5'egönderilen CAD'li hastalarda kardiyovasküler olayların erken teşhisi ve prognozu için çok yararlı olabileceğini ileri sürmüştür.
CAD yaralanma ve onarım altında yatan mekanizmaları anlamak sürekli ilgi intrakoroner sirkülasyon biyobelirteçleri çalışmaya araştırmacılar motive etti, koroner örnekleme daha yakından vasküler hasar yansıtır çünkü ve onarım6. Ancak, insan çalışmalarında koroner biyobelirteçlerin karakterizasyonu kıt olmuştur7,8,9. Bu nedenle, bu çalışmanın amacı koroner sirkülasyon MpC'ler ve çözünür moleküllerin miktarını belirlemek için bir yöntem tanımlamak için, hem vasküler yaralanma ve onarım yansıtan, ve bu biyobelirteçler MACE ve koroner anjiyoplasti uygulanan CAD hastalarının klinik prognoz ile ilişkili olup olmadığını göstermek için. Bu yöntem damar hasarına en yakın yerleri örnekleme ile elde edilen vasküler ilgili, sirkülasyon mpc'leri ve çözünür moleküllerin kullanımına dayanmaktadır. Ayrıca alt ekstremite iskemi, inme, vaskülit, ventromboz ve vasküler yaralanma ve onarım içeren diğer yaralanmalar için klinik çalışmalar için yararlı olabilir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10735086001</td>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA) as a buffering agent, stabilizer, standard and for blending.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calibration Beads</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-093-607</td>
			<td>MACQuant calibration beads are supplied in aqueous solution containing 0.05% sodium azide. 3.5 ml for up to 100 tests</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD133/1 (AC133)-PE</td>
			<td>Milteny Biotec / MACS</td>
			<td>#130-080-801</td>
			<td>Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD184 (CXCR4)-PE-VIO770</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-103-798</td>
			<td>Monoclonal, Isotype recombinant human IgG1, conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-093-601</td>
			<td>Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD34-FITC</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-081-001</td>
			<td>The monoclonal antibody clone AC136 detecs a class III epitope of the CD34</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45- VioBlue</td>
			<td>Miltenyi Biotec / MACS</td>
			<td>#130-092-880</td>
			<td>Monoclonal CD45 Antibody, human conjugated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Tubes</td>
			<td>Thermo SCIENTIFIC</td>
			<td>#339651</td>
			<td>15ml conical centrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytometry Tubes</td>
			<td>FALCON Corning Brand</td>
			<td>#352052</td>
			<td>5 mL Polystyrene Round-Bottom Tube. 12x75 style. Sterile.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>#161-0729</td>
			<td>Heavy metals, (as Pb) &#60;10ppm, Fe &#60;0.01%, As &#60;1ppm, Insolubles &#60;0.005%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Improved Neubauer</td>
			<td>Without brand</td>
			<td>Without catalog number</td>
			<td>Hemocytometer for cell counting. (range 0.1000mm, 0.0025mm2)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2 EDTA Blood Collection Tubes</td>
			<td>BD Vacutainer</td>
			<td>#367863</td>
			<td>Lilac plastic vacutainer tube (K2E) 10.8mg, 6 mL.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lymphoprep</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>01-63-12-002-A</td>
			<td>Sterile and checked on the presence of endotoxins. Density: 1.077&#177;0.001g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>#SZBF0920V</td>
			<td>Fixation of biological samples, (powder, 95%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Transfer 1,3mL</td>
			<td>CRM Globe</td>
			<td>PF1016, PF1015</td>
			<td>The transfer pipette is a tool that facilitates liquid transfer with greater accuracy.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test Tubes</td>
			<td>KIMBLE CHASE</td>
			<td>45060 13100</td>
			<td>Heat-resistant test tubes. SIZE/CAP 13 x 100 mm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

coronary progenitor cells and soluble biomarkers in cardiovascular prognosis after coronary angioplasty

Majör advers kardiyovasküler olaylar (MACE) koroner iskemik yaralanmaya bağlı koroner anjiyoplasti geçiren hastaların kardiyovasküler prognozunu olumsuz etkiler. Koroner hasarın boyutu ve vasküler onarım mekanizmaları MACE'lerin gelecekteki gelişimini etkileyen faktörlerdir. Plak özellikleri ve koroner arter kompleksi gibi içsel vasküler özellikler MACE'ler için prognostik bilgi göstermiştir. Ancak, intrakoroner sirkülasyon biyobelirteçlerinin kullanımı, koroner hasar ve onarımı içeren dinamik mekanizmaları daha yakından yansıttığı için MAC'lerin erken teşhisi ve prognozu için uygun bir yöntem olarak öne sürülmemiştir. Anjiyoplasti sırasında koroner sirkülasyon biyobelirteçlerinin belirlenmesi, mononükleer progenitor hücrelerinin alt popülasyonlarının sayısı (MpCs) yanı sıra inflamasyon yansıtan çözünür moleküllerin konsantrasyonu gibi, hücre yapışması, ve onarım, sağlar gelecekteki gelişmelerin değerlendirilmesi ve MACE'lerin prognozu 6 ay sonrası koroner anjiyoplasti. Bu yöntem, çEL'lerin tahmini ve hastaların risk tabakalaşması için uygulanabilecek kardiyovasküler prognoz üzerindeki etkisi ile ilgili periferik kan dolaşımı biyobelirteçlerinden daha iyi performans ve çevirisel yapısı ile vurgulanmıştır. anjiyoplasti geçiren koroner arter hastalığı ile.

Koroner anjiyografi yapılan 52 hastadan koroner, venöz sinüs ve periferik kan toplandı ve hipertansiyon ve dislipidemi prevalansı yüksek tiyatuvar ı gösterdi. Klinik takipte 11 (%21.1) MAC'ler koroner anjiyografiden 6 ay sonra meydana geldi: ölüm (n = 1), hastaneye devam gerektiren anjina (n = 6), miyokard enfarktüsü (n = 2) ve/veya kalp yetmezliği bulgusu (n = 4).
Çoğu MpC'nin temel ...

Watch this Scientific Journal Video about Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty at JoVE.com

Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty

Koroner anjiyoplasti sonrası kardiyovasküler prognozu etkileyen majör advers kardiyovasküler olayların gelişimi koroner hasar ve vasküler onarım ın boyutundan etkilenir. Yeni koroner hücresel ve çözünür biyobelirteçlerin kullanımı, vasküler hasar ve onarım reaktif, MACE ve prognoz gelişimini tahmin etmek için yararlıdır.

Koroner Anjiyoplasti Sonrası Kardiyovasküler Prognozda Koroner Progenitor Hücreleri ve Çözünür Biyobelirteçler

Major adverse cardiovascular events (MACEs) negatively impact the cardiovascular prognosis of patients undergoing coronary angioplasty due to coronary ...

Anjiyoplasti koroner arter hastalığı olan hastalara yardımcı olsa da, kardiyovasküler olaylar hala işlemden sonra oluşabilir. MpC'ler ve çözünür moleküller koroner dolaşımdan elde edildikçe, vasküler hasar ve onarım derecesi ile ilişkili olabilir. Bu nedenle koroner anjiyoplasti geçiren koroner arter hastalığı olan hastalarda kardiyovasküler olaylar ve prognoz tahmin etmek için koroner MPC ve çözünür mediator düzeyleri kullanılabilir.MpC'ler ve çözünür moleküller de tekrarlayan ekstremite iskemi inme gibi farklı iskemik ayarları altında meydana gelen komplikasyonları ve prognozları tahmin etmek için kullanılabilir. Prosedürü gösteren Eduardo Vera-Gomez ve Alejandro Hernandez-Patricio, laboratuvar teknisyenleri ve Karen De La Vega-Moreno ve Carlos Zamora-Aleman, lisans öğrencileri olacaktır. Ayrıca Gabriela Alexandra Dominguez-Perez, Bir Master Bilim öğrencisi, Alberto Melchor-Lopez, doktora öğrencisi ve Mario Antonio Tellez-Gonzalez, Bilim işbirlikçi yüksek lisans olacaktır.Toplama bir saat içinde, 15 mililitre konik tüp için hasat kan örneği altı mililitre transfer ve PBS bir oran bir-bir oranda kan seyreltmek. Üç test tüpüne iki mililitre yoğunluk gradyan orta ekleyin ve her yoğunluk gradyan ortamı tüpüne üç eşit seyreltilmiş kan aktarın. Hücreleri santrifüj le ayırın ve arabirimdeki hücreleri yeni bir tüpe aktarın.Toplanan hücreleri altı dakika boyunca iki mililitre PBS'de bir kez yıkayın, ardından iki dakika boyunca yıkama başına iki mililitre taze PBS'de altı yıkama. Son yıkamadan sonra, sayma için PBS bir mililitre MPC içeren hücre pelet yeniden askıya ve beş mililitre akış sitometri tüpleri etiketli altı hücrelere bir kez on ekleyin. Santrifüj ile hücreleri pelet ve ilgi uygun antikor 100 mikrolitre ekleyin, her tüp için antikor kuluçka çözeltisi seyreltilmiş.Hücreleri 10 saniye boyunca eklenen her bir antikor kokteyliyle hafifçe karıştırın ve numuneleri ışıktan korunan dört santigrat dereceye 20 dakika yerleştirin. Kuluçka sonunda, örnekleri santrifüj ve pbs 500 mikrolitre iki milimolar EDTA ile birlikte pelet yeniden askıya. Arka plan boyama kurmak için izotip uyumlu kontrolleri kullanarak, standart protokollere göre akış sitometri tarafından örnekleri analiz, yan dağılım arsa bir ileri lenfositler üzerinde gating, artık granülositler dışlamak için, hücresel enkaz, ve diğer parçacıklar.CD45-pozitif CD34-pozitif fenotip içeren yüksek sayıda hücre içerecek bir geçit ayarlayın. Daha sonra, kizaz eklemek etki alanı reseptörcd133 veya CD184-pozitif hücreleri seçmek için CD45-pozitif CD34-pozitif kapı kullanın. MPC alt popülasyonları daha sonra kendi özel hücre yüzey idacarı ile tanımlanabilir ve geçitli olayların yüzdesi olarak raporlanabilir.Toplanan kan örneklerinde çözünür biyobelirteçlerin konsantrasyonunun belirlenmesi için, öncelikle, kit tarafından sağlanan yıkama tamponu ile uygun önceden kaplanmış ELISA plakaları iki kez yıkayın ve standart, numune ve kontrol tüplerini etiketleyin. Kan bileşenlerini ayırmak için kan örneğini santrifüj edin ve plazmayı örnek tüplere aktarın. Standartları, numuneleri ve kontrolleri uygun kuyulara aktarın ve plakayı 90 dakika boyunca 37 derecede mühürleyin ve kuluçkaya yatırın.Kuluçka sonunda, iyi içeriğini atın ve her kuyuya biotin algılama antikor ekleyin. 37 santigrat derece bir saat kuluçka sonra, plaka içeriğini atın ve yıkama başına taze yıkama tampon ile kuyuları üç kez yıkayın. Son yıkamadan sonra, 37 santigrat derece streptavidin çalışma çözeltisi ile örnekleri kuluçkaya 37 santigrat derece, gösterildiği gibi üç yıkama takip.Son yıkamadan sonra, 37 santigrat derece tetrametilbenzidin substrat ile 30 dakika boyunca örnekleri tedavi. Renk geliştiğinde, kitten stop çözeltisi ekleyin ve bir mikroplaka ELISA okuyucuda optik yoğunluk emiciliğini okuyun. İmmünmanyetik multiplekskullanarak tümör nekroz faktör alfa ve interlökin-1 beta konsantrasyonu belirlemek için, standart etiket, örnek, ve kontrol tüpleri ve girdap manyetik boncuk şişeleri için 30 saniye.Çoklama test plakasının uygun kuyularına boncuk ekleyin. Tüm boncuklar eklendiğinde, güvenli bir şekilde el manyetik plaka yıkağı ekleyin ve boncuklar her kuyunun altında birikmesi için iki dakika bekleyin, hızlı bir şekilde hem el manyetik plaka yıkayıcılık ters önce, ve bir atık konteyner üzerinde plaka montaj. Daha sonra, her kuyuya 150 mikrolitre yıkama tamponu ekleyin ve boncukların alt tabakada birikmesine izin vermek için 30 saniye bekleyin.İçeriği, az önce gösterildiği gibi atın ve 25 mikrolitre evrensel test arabelleği ve hazırlanan standartlar, numuneler ve kontrollerden 25 mikrolitre ekleyin. Plakayı oda sıcaklığında ışıktan korunan en az 60 dakikalık bir kuluçka için ve dakikada 500 dönüş için kapatın. Kuluçka sonunda, her kuyuya 150 mikrolitre yıkama tamponu ekleyin ve boncukların 30 saniyeye yerleşmesine izin verin.Daha sonra, iyi içeriğini atmak ve tespit antikor karışımı 25 mikrolitre ile her iyi etiket için plaka yıkağı kullanın iki yıkama takip, gösterildiği gibi. İkinci yıkamadan sonra, oda sıcaklığında 30 dakika boyunca Streptavidin PE 25 mikrolitre ile örnekleri kuluçkaya yatırın. Kuluçka sonunda, her kuyuya 120 mikrolitre okuma tamponu ekleyin ve plakayı oda sıcaklığında ışıktan korunan beş dakikalık bir kuluçka için dakikada 500 dönüş için kapatın.Daha sonra plakayı çoklayıcı bir test okuyucusuna yükleyin ve okuma parametrelerini her analize göre ayarlayın. Koroner anjiyografi yapılan 52 hastadan koroner, venüs-sinüs ve periferik kan toplandı ve hipertansiyon ve dislipidemi prevalansı yüksekti. Çoğu MpC'nin temel koroner konsantrasyonu majör advers kardiyovasküler olaylar gelişen hastalarda anlamlı olarak daha düşüktü, MPC alt popülasyonlarında CD34-pozitif CD133-pozitif ve CD45-pozitif, CD34-pozitif, CD133-pozitif, CD184-pozitif.Aynı şekilde, majör advers kardiyovasküler olaylar gelişen hastalarda çözünür ICAM-1 koroner miktarlarda ve daha düşük miktarda metallomatrix protein 9'da bazal inanCa sahip olundu. Koroner MpC'ler ve çözünür ICAM-1 majör advers kardiyovasküler olaysız sağkalım için prognostik bir yetenek gösterdi. İlginçtir, tümör nekroz faktör alfa ekspresyonu, intravasküler ultrason kullanarak, aynı koroner arterfarklı lümen alanlarının karşılaştırılmasıdayalı ölçüm süresi ve koroner örnekleme konumuna göre varyasyonları gösterdi.MPC yalıtımı sırasında, kanı yoğunluk gradyan Üzerine aktardıktan ve santrifüjden sonra hücreleri arayüzden dikkatlice topladığınızdan emin olun. Periyodik girdap boncuk yağışı önler ve manyetik bir plaka yıkAma kullanarak yıkar sırasında kuyular içinde boncuk tutmaya yardımcı olur. Koroner MpC'ler ve çözünür moleküller anjiyoplasti sonrası takip sırasında kardiyovasküler olayların riskini tabakalaştırmak için yararlıdır, bu teknik çözeltinin durdurulması sırasında meydana gelen patofizyolojik süreci yansıttığı için yüksek riskli bireylere ikincil önlemelerin sağlanmasına yardımcı olmak, vasküler biyolojinin rol oynadığı durumlar için yararlı olabilir.

Research

JoVE Journal

Medicine

Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

Enfarktüsü bir murin Model Koroner Arter ligasyon ve intramiyokardiyal Enjeksiyon

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo.  With the advent of genetic modifications to ...

Modified Technique for Coronary Artery Ligation in Mice

Fare Koroner Arter Ligasyonu için Modifiye Tekniği

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI ...

Retrograde Perfusion and Filling of Mouse Coronary Vasculature as Preparation for Micro Computed Tomography Imaging

Mikro Bilgisayarlı Tomografi Görüntüleme için hazırlık olarak retrograd perfüzyon ve Fare Koroner damarları doldurulması

Visualization of the vasculature is becoming increasingly important for understanding many different disease states. While several techniques exist for ...

Permanent Ligation of the Left Anterior Descending Coronary Artery in Mice: A Model of Post-myocardial Infarction Remodelling and Heart Failure

Farelerde Sol Ön İnen Koroner Arter Daimi ligasyonu: Post-miyokard Enfarktüs Remodelling ve Kalp Yetmezliği Bir Model

Heart failure is a syndrome in which the heart fails to pump blood at a rate commensurate with cellular oxygen requirements at rest or during stress. It ...

Ultrasound Based Assessment of Coronary Artery Flow and Coronary Flow Reserve Using the Pressure Overload Model in Mice

Farelerde Basınç Aşırı Modeli Koroner Arter Akış ve Koroner Akım Rezervi Ultrason Dayalı Değerlendirme

Transthoracic Doppler echocardiography (TTDE) is a clinically useful, noninvasive tool for studying coronary artery flow velocity and coronary flow ...

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery (ALCAPA)

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery ALCAPA

Pulmoner Arter Left Koroner arter çıkış anomalileri Erişkin Aort içine Sol Koroner Arter Doğrudan Yeniden implantasyon (ALCAPA)

Anomalous origin of the left coronary artery from the pulmonary artery (ALCAPA) is a rare congenital anomaly which is one of leading causes of myocardial ...

Identifying Coronary Artery Calcification on Non-gated Computed Tomography Scans

Koroner arter kalsifikasyon tespit sigara geçitli hesaplanan tomografi inceden inceye gözden geçirmek

Coronary artery calcification (CAC) provides an objective measure of coronary artery disease and can readily be identified on non-gated computed ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Farelerde miyokardiyal Iskemi reperfüzyon sonrası koroner akış rezervi değerlendirilmesi

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

In Vitro Model of Coronary Angiogenesis

Koroner Anjiyogenezin In Vitro Modeli

Here, we describe an in vitro culture assay to study coronary angiogenesis. Coronary vessels feed the heart muscle and are of clinical importance. Defects ...

Novel Percutaneous Approach for Deployment of 3D Printed Coronary Stenosis Implants in Swine Models of Ischemic Heart Disease

İskemik Kalp Hastalığının Domuz Modellerinde 3D Baskılı Koroner Stenoz İmplantlarının Konuşlandırılmasında Yeni Perkütan Yaklaşım

Minimally invasive methods for creating models of focal coronary narrowing in large animals are challenging. Rapid prototyping using three-dimensionally ...