Name: separation of the cell envelope for gram-negative bacteria into inner and outer membrane fractions with technical adjustments for acinetobacter baumannii
Uploaded: 2020-04-10T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Separation of the Cell Envelope for Gram-negative Bacteria into Inner and Outer Membrane Fractions with Technical Adjustments for Acinetobacter baumannii at J

इस काम को पी 20GM10344 और R01AI139248 द्वारा जेड डी डेलब्रोक्स को सम्मानित किया गया था।

1. झिल्ली निष्कर्षण के लिए जनरल रिएजेंट्स और मीडिया की तैयारी
<ol><li>बैक्टीरियल ग्रोथ मीडिया: शोरबा मीडिया के 1 एल को अच्छी तरह से साफ और ऑटोक्लेव ्ड 2 एल फ्लास्क में तैयार और स्टरलाइज करें।</li>
	<li>जनरल रिस्पें...

<ol>
	<li>Silhavy, T. J., Kahne, D., Walker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+bacterial+cell+envelope.">The bacterial cell envelope.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 2, 000414 (2010).</li><li>Egan, A. J., Vollmer, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+physiology+of+bacterial+cell+division.">The physiology of bacterial cell division.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1277, 8-28 (2013).</li><li>Pazos, M., Peters, K., Vollmer, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Robust+peptidoglycan+growth+by+dynamic+and+variable+multi-protein+complexes.">Robust peptidoglycan growth by dynamic and variable multi-protein complexes.</a> Current Opinion in Microbiology. 36, 55-61 (2017).</li><li>Raetz, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enzymology,+genetics,+and+regulation+of+membrane+phospholipid+synthesis+in+Escherichia+coli.">Enzymology, genetics, and regulation of membrane phospholipid synthesis in Escherichia coli.</a> Clinical Microbiology Reviews. 42, 614-659 (1978).</li><li>Whitfield, C., Trent, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biosynthesis+and+export+of+bacterial+lipopolysaccharides.">Biosynthesis and export of bacterial lipopolysaccharides.</a> Annual Review of Biochemistry. 83, 99-128 (2014).</li><li>Needham, B. D., Trent, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fortifying+the+barrier:+the+impact+of+lipid+A+remodelling+on+bacterial+pathogenesis.">Fortifying the barrier: the impact of lipid A remodelling on bacterial pathogenesis.</a> Nature Reviews Microbiology. 11, 467-481 (2013).</li><li>Simpson, B. W., Trent, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pushing+the+envelope:+LPS+modifications+and+their+consequences.">Pushing the envelope: LPS modifications and their consequences.</a> Nature Reviews Microbiology. 17, 403-416 (2019).</li><li>Ebbensgaard, A., Mordhorst, H., Aarestrup, F. M., Hansen, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+Outer+Membrane+Proteins+and+Lipopolysaccharides+for+the+Sensitivity+of+Escherichia+coli+to+Antimicrobial+Peptides.">The Role of Outer Membrane Proteins and Lipopolysaccharides for the Sensitivity of Escherichia coli to Antimicrobial Peptides.</a> Frontiers in Microbiology. 9, 2153 (2018).</li><li>Liu, D., Reeves, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Escherichia+coli+K12+regains+its+O+antigen.">Escherichia coli K12 regains its O antigen.</a> Microbiology. 140 (1), 49-57 (1994).</li><li>Kalynych, S., Morona, R., Cygler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+in+understanding+the+assembly+process+of+bacterial+O-antigen.">Progress in understanding the assembly process of bacterial O-antigen.</a> FEMS Clinical Microbiology Reviews. 38, 1048-1065 (2014).</li><li>Osborn, M. J., Gander, J. E., Parisi, E., Carson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+assembly+of+the+outer+membrane+of+Salmonella+typhimurium.+Isolation+and+characterization+of+cytoplasmic+and+outer+membrane.">Mechanism of assembly of the outer membrane of Salmonella typhimurium. Isolation and characterization of cytoplasmic and outer membrane.</a> Journal of Biological Chemistry. 247, 3962-3972 (1972).</li><li>Osborn, M. J., Munson, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separation+of+the+inner+(cytoplasmic)+and+outer+membranes+of+Gram-negative+bacteria.">Separation of the inner (cytoplasmic) and outer membranes of Gram-negative bacteria.</a> Methods in Enzymology. 31, 642-653 (1974).</li><li>Cian, M. B., Giordano, N. P., Masilamani, R., Minor, K. E., Dalebroux, Z. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salmonella+enterica+serovar+Typhimurium+use+PbgA/YejM+to+regulate+lipopolysaccharide+assembly+during+bacteremia.">Salmonella enterica serovar Typhimurium use PbgA/YejM to regulate lipopolysaccharide assembly during bacteremia.</a> Infection and Immunity. , (2019).</li><li>Masilamani, R., Cian, M. B., Dalebroux, Z. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salmonella+Tol-Pal+Reduces+Outer+Membrane+Glycerophospholipid+Levels+for+Envelope+Homeostasis+and+Survival+during+Bacteremia.">Salmonella Tol-Pal Reduces Outer Membrane Glycerophospholipid Levels for Envelope Homeostasis and Survival during Bacteremia.</a> Infection and Immunity. 86, (2018).</li><li>Nikaido, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Outer+Membrane+of+Salmonella-Typhimurium+Transmembrane+Diffusion+of+Some+Hydrophobic+Substances.">Outer Membrane of Salmonella-Typhimurium Transmembrane Diffusion of Some Hydrophobic Substances.</a> Biochimica Et Biophysica Acta. 433, 118-132 (1976).</li><li>Dalebroux, Z. D., Matamouros, S., Whittington, D., Bishop, R. E., Miller, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PhoPQ+regulates+acidic+glycerophospholipid+content+of+the+Salmonella+Typhimurium+outer+membrane.">PhoPQ regulates acidic glycerophospholipid content of the Salmonella Typhimurium outer membrane.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111, 1963-1968 (2014).</li><li>Castanie-Cornet, M. P., Cam, K., Jacq, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RcsF+is+an+outer+membrane+lipoprotein+involved+in+the+RcsCDB+phosphorelay+signaling+pathway+in+Escherichia+coli.">RcsF is an outer membrane lipoprotein involved in the RcsCDB phosphorelay signaling pathway in Escherichia coli.</a> Journal of Bacteriology. 188, 4264-4270 (2006).</li><li>Thorne, K. J., Thornley, M. J., Glauert, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+analysis+of+the+outer+membrane+and+other+layers+of+the+cell+envelope+of+Acinetobacter+sp.">Chemical analysis of the outer membrane and other layers of the cell envelope of Acinetobacter sp.</a> Journal of Bacteriology. 116, 410-417 (1973).</li><li>Geisinger, E., Huo, W., Hernandez-Bird, J., Isberg, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acinetobacter+baumannii:+Envelope+Determinants+That+Control+Drug+Resistance,+Virulence,+and+Surface+Variability.">Acinetobacter baumannii: Envelope Determinants That Control Drug Resistance, Virulence, and Surface Variability.</a> Annual Review of Microbiology. 73, 481-506 (2019).</li><li>Kamischke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Acinetobacter+baumannii+Mla+system+and+glycerophospholipid+transport+to+the+outer+membrane.">The Acinetobacter baumannii Mla system and glycerophospholipid transport to the outer membrane.</a> Elife. 8, (2019).</li></ol>

यह विधि बैक्टीरियल फिजियोलॉजी और रोगजनन में सेल लिफाफे की भूमिका को समझने में शोधकर्ताओं की सहायता जारी रखेगी। अनुक्रमिक अल्ट्रासेंट्रोइफिज़न के बाद एक शुद्ध कुल, आंतरिक और ओम अंश प्राप्त किया जा सक...

ग्राम-नकारात्मक बैक्टीरिया दो झिल्ली का उत्पादन करते हैं जो एक परिपिलेमिक स्थान और पेप्टिडोग्लिकन सेल दीवार1से अलग होते हैं। आंतरिक झिल्ली (आईएम) साइटोसोल को घेरती है और फॉस्फोलिपिड का एक सममित बाइलेयर है। पेप्टिडोग्लिक्स टर्गोर दबाव से बचाता है और जीवाणु को कोशिका आकार प्रदान करता है, और लिपोप्रोटीन2,,3द्वारा बाहरी झिल्ली (ओम) से जुड़ा होता है। ॐ परिसिपल को घेरे हुए है और मुख्य रूप से असममित है। आंतरिक पत्रक में फॉस्फोलिपिड होते हैं और बाहरी पत्रक में ग्लाइकोलिपिड होते हैं, जिसे लिपूलिगोसैकराइड्स (एलओएस) या लिपोपॉलीसैकराइड्स (एलपीएस)4,,5के रूप में जाना जाता है। लिपिड विषमता और बाहरी पत्रक में लॉस/एलपीएस अणुओं की जैव रसायन कोशिका सतह को बाधा गुण प्रदान करता है जो जीवाणु को अपने पर्यावरण6,7में खतरों से बचाता है ।
एलपीएस अणुओं में तीन घटक शामिल हैं: लिपिड ए डिसैचरोलिपिड, कोर ओलिगोसाक्धारी, और ओ-पॉलीसैकराइड या ओ-एंटीजन। लिपिड ए एक गुणा acylated disaccharolipid है। कोर-ओलिगोसैकराइड्स में 10-15 शर्करा होती है जिसे रफ एलपीएस या आर-एलपीएस के नाम से जाना जाता है। कोर को आंतरिक क्षेत्र में विभाजित किया गया है, जो 2-कीटो-3-डिऑक्सी-डी-मैनो-ऑक्टुलोसोनिक एसिड (केडीओ) और एक या अधिक हेपेटोज अवशेषों से बना है, और एक बाहरी क्षेत्र जिसमें आम तौर पर हेक्सोज़ (ग्लूकोज या गैलक्टोज) और हेपेटोस, या एसीटामिडो शर्करा5शामिल हैं। बाहरी कोर क्षेत्र आंतरिक कोर की तुलना में इसके घटकों और संरचना में अधिक परिवर्तनशील है। साल्मोनेला sppमें, केवल एक कोर संरचना का वर्णन किया गया है; हालांकि, एस्चेरिचिया कोलाई में पांच अलग-अलग कोर संरचनाएं (नामित K-12, R1, R2, R3, और R4)8हैं। ई. कोलाई कश्मीर-12 DH5α, जो हम इस प्रक्रिया में उपयोग एक उत्परिवर्तन है कि उत्पादन आर एलपीएस9में परिणाम किया जाता है । आर-एलपीएस अणुओं में ओ-एंटीजन मोईटी की कमी होती है और लॉस अणुओं के समान आणविक वजन होता है ।
आर-एलपीएस के लिए ओ एंटीजन के अलावा चिकनी एलपीएस, या एस एलपीएस में इस अणु बदल जाता है । ओ-एंटीजन छोटे 3-4 कार्बोहाइड्रेट उपइकाइयों से बनाए जाते हैं और इसमें अलग-अलग चेन लम्हों10के साथ कई तौर-तरीके शामिल होते हैं। कुछ एलपीएस उत्पादक बैक्टीरिया, जैसे साल्मोनेला आंत्रिका सेरोवर टाइथिमुरियम(एस। टाइपिमुरिनियम,10,11की सतह पर एलपीएस अणुओं का एक त्रिमंडल वितरण प्रदर्शित करता है। बहुत लंबी श्रृंखला ओ-एंटीजन में एक सौ से अधिक उपइकाइयां हो सकती हैं और एक सौ किलोसे अधिक वजन हो सकती हैं। ओ-एंटीजन जीवाणु को सतह गुण प्रदान करते हैं जो एंटीबायोटिक दवाओं का विरोध करने, बैक्टीरियोफेज द्वारा पर्प्रिशन से बचने और बीमारी का कारण बनने के लिए आवश्यक हैं।
कैम्पिलोबैक्टर, बोर्डेटेला, एसिनेटोबैक्टर, हीमोफिलस, नेसेरिया और अन्य की प्रजातियां12की सतह पर एलपीएस अणुओं के बजाय लॉस अणु उत्पन्न करती हैं । लॉस अणुओं लिपिड ए और कोर ओलिगोसैकराइड्स से मिलकर बनता है लेकिन ओ-एंटीजन की कमी है। इस प्रकार के ग्राम-नकारात्मक बैक्टीरिया अपने कोर ओलिगोसैकराइड्स को अतिरिक्त शर्करा और शर्करा के संयोजन के साथ सतह गुणों को बदलने के लिए संशोधित करते हैं12। लॉस और एलपीएस-उत्पादक रोगाणु दोनों लिपिड ए और कोर अणुओं पर फॉस्फेट को सीनिक मोईकेट्स7के साथ प्राप्त करते हैं। इन परिवर्धन में फॉस्फोथेनॉलमाइन, गैलेक्टोसामाइन और अमीनोराबिनोज प्रतिस्थापन शामिल हैं, जो एनीनिक सतह आवेश को बेअसर करके कार्य करते हैं और इस तरह सीनिक एंटीमाइक्रोबियल पेप्टाइड्स से रक्षा करते हैं। ग्राम-नकारात्मक बैक्टीरिया शर्करा, या अतिरिक्त केडो अणुओं के चर गैर-स्टोइचियोमेट्रिक प्रतिस्थापन के साथ कोर ओलिगोसैक्राइड संरचना को भी संशोधित करते हैं, और लिपिड-ए डिचरोलिपिड्स7पर एसीसाइल चेन की संख्या को बदल देते हैं।
आईएम को ग्राम-नकारात्मक बैक्टीरिया के ॐ से अलग करने की क्षमता रोगाणुरोधी प्रतिरोध और रोगरोगजनक1111,12में कोशिका लिफाफे की भूमिका को समझने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाई है । इस दृष्टिकोण के व्युत्पन्नका का उपयोग ओम के लिए असेंबली, रखरखाव और प्रोटीन, फॉस्फोलिपिड और ग्लाइकोलिपिड घटकों के तंत्र को कम करने के लिए किया गया है।
हमारी प्रयोगशाला नियमित रूप से ग्राम-नकारात्मक प्रजातियों की एक किस्म में प्रोटीन मध्यस्थता लिपिड विनियमन और लिपिड समारोह का अध्ययन करने के लिए बैक्टीरियल लिपिडोमिक विश्लेषण करती है । प्रोटोकॉल में उपयोग की जाने वाली मात्रा पतली परत क्रोमेटोग्राफी और तरल क्रोमेटोग्राफी टैंडेमरी13,,14द्वारा गैर-रेडियोलेबल फॉस्फोलिपिड का विश्लेषण करने के लिए इस प्रक्रिया के नियमित उपयोग को दर्शाती है।
प्रोटोकॉल ग्राम-नकारात्मक बैक्टीरिया के एक ठंडा निलंबन को सुक्रोज के उच्च ओस्मोलर समाधान के लिए उजागर करने और अंतर्निहित पेप्टिडोग्लिकन परत(चित्र ा 1)12से ओम को अलग करने के लिए lysozyme जोड़ने से शुरू होता है । इसके बाद EDTA को lysozyme के प्रवेश की सुविधा के लिए जोड़ा जाता है, क्योंकि डाइवेलेंट cation ज़ब्ती आसन्न लॉस/एलपीएस अणुओं15के बीच पार्श्व इलेक्ट्रोस्टैटिक ब्रिजिंग इंटरैक्शन को बाधित करता है । मूल प्रोटोकॉल जिसमें से हमारा अनुकूलित किया गया है, वह स्पेरोप्लास्ट के गठन की आवश्यकता है, एक ग्राम-नकारात्मक जीवाणु कोशिका रूप जिसमें प्लाज्मा झिल्ली और साइटोसोल शामिल है, लेकिन पेप्टिडोग्लिकन परत और एक ओम का अभाव है। यह संभव है कि गोलाकार अनुकूलित विधि द्वारा उत्पादित किए जाते हैं; हालांकि, तकनीक सफलता के लिए उनके गठन पर भरोसा या इरादा नहीं है। इसके बजाय, lysozyme-EDTA इलाज बैक्टीरिया तेजी से केंद्रीकरण द्वारा काटा जाता है और दबाव lysis से पहले कम एकाग्रता के एक सुक्रोज समाधान में फिर से निलंबित कर दिया जाता है । ओएमएस जो स्पॉरोप्लास्ट बनाकर जारी किया गया हो सकता है, सिद्धांत रूप में इलाज कोशिकाओं के सुपरनेटेंट से कटाई योग्य होना चाहिए, लेकिन यह दृष्टिकोण यहां विस्तृत नहीं है। अंततः, उपचारित कोशिकाओं को पारंपरिक समरूपता और लिसिस के अधीन किया जाता है, जो झिल्ली पृथक्करण प्रक्रिया16की दक्षता और प्रजनन क्षमता को बढ़ाता है।
लिसिस के बाद, कुल झिल्ली अल्ट्रासेंट्रोफैगेशन द्वारा एकत्र की जाती है और आईएमएस और ओएमएस को आंशिक करने के लिए एक असतत सुक्रोज घनत्व ढाल पर लागू होती है। शास्त्रीय दृष्टिकोण में अधिक निरंतर ढाल का उपयोग किया जाता है जिसमें कम से कम पांच विभिन्न सुक्रोज समाधान होते हैं11,12. हमारे प्रोटोकॉल में असतत ढाल में तीन सुक्रोज समाधान होते हैं और बिलेयरों को दो अलग अंशों में विभाजित किया जाता है17। ग्राम-नकारात्मक बैक्टीरिया के ओएमएस के भीतर लॉस और एलपीएस अणु लिफाफे को एक ऊपरी भूरे रंग के कम घनत्व आईएम अंश और एक कम सफेद उच्च घनत्व ओम अंश(चित्रा 1 और चित्रा 2)में विभाजित करने के लिए ड्राइव करते हैं।
एसिनेटोबैक्टर बौमैनी महत्वपूर्ण मल्टीड्रग प्रतिरोधी मानव रोगजनक हैं जो अपने ओम में लॉस अणुओं का उत्पादन करते हैं और एक कोशिका लिफाफा खड़ा करते हैं जिसे18,19को अलग करना मुश्किल होता है । हाल के कार्य से पता चलता है कि हम यहां मौजूद प्रोटोकॉल के एक व्युत्पन्न का उपयोग इन जीवों के बाइलेयर ों को20के विभाजित करने के लिए किया जा सकता है । इसलिए, हमने ए बौमनी 17978 पर अपने प्रोटोकॉल का परीक्षण किया। प्रारंभ में प्रक्रिया अपर्याप्त थी। हालांकि, हमने मध्य घनत्व समाधान की सुक्रोज एकाग्रता को संशोधित किया और बहुत बेहतर अलगाव(चित्रा 2)। एक NADH dehydrogenase परख और एक लॉस/एलपीएस निष्कर्षण और पता लगाने की प्रक्रिया ए baumannii,जंगली प्रकार एस के लिए जुदाई की पुष्टि करने के लिए इस्तेमाल किया गया था । टाइथिमुरियाम और दो ओ-एंटीजन की कमी आंत्रजीवाणु जीनोटाइप; अर्थात्, गाले-उत्परिवर्ती एस. Typhimurium और एक प्रयोगशाला तनाव, ई. कोलाई DH5α(चित्रा 3 और चित्रा 4)।
इस काम का उद्देश्य ग्राम-नकारात्मक बैक्टीरिया की झिल्ली को पुन: उत्पन्न करने के लिए एक सुव्यवस्थित दृष्टिकोण की आपूर्ति करना है। प्रोटोकॉल का उपयोग इन रोगाणुओं के लिए कई प्रकार के झिल्ली से जुड़े अणुओं का अध्ययन करने के लिए किया जा सकता है।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 L Centrifuge bottles, PC/PPCO, super speed, with sealing cap, Nalgene</td>
			<td>VWR</td>
			<td>525-0466</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 L Pyrex Media Storage Bottle with High Temperature Cap</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10416-312</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2000 mL Erlenmeyer Flask, Narrow Mouth</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10545-844</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-20% mini PROTEAN Precast Protein Gels, 12 well</td>
			<td>BIORAD</td>
			<td>4561095</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4x Laemmli Sample Buffer 10 mL</td>
			<td>BIORAD</td>
			<td>1610747</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL sterile polypropylene centrifuge tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89049-174</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7 mL Dounce Tissue Homogenizer with Two Glass Pestles</td>
			<td>VWR</td>
			<td>71000-518</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 mL polycarbonate bottle assembly</td>
			<td>Beckman Coulter Life Sciences</td>
			<td>355622</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar Powder</td>
			<td>VWR</td>
			<td>A10752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B10P Benchtop pH Meter with pH Probe</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89231-664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barnstead GenPure xCAD Plus UV/UF - TOC (bench version)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>50136146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzonase Nuclease</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>70746-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA disodium salt dihydrate 99.0-101.0%, crystals, ultrapure Bioreagent Molecular biology grade, J.T. Baker</td>
			<td>VWR</td>
			<td>4040-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EmulsiFlex-C3</td>
			<td>Avestin, Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiberlite F13-14 x 50cy Fixed Angle Rotor</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>75006526</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid 6.0 N</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH7204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IBI Scientific Orbital Platform Shaker</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>15-453-211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Broth Miller</td>
			<td>VWR</td>
			<td>214906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lysozyme, Egg White, Ultra Pure Grade</td>
			<td>VWR</td>
			<td>VWRV0063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride hexahydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M2670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NADH</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>10107735001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optima XPN-80 - IVD</td>
			<td>Beckman Coulter Life Sciences</td>
			<td>A99839</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pharmco Products&#160;PURE ALCOHOL 200 PROOF GL 4/CS&#160;</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>NC1624582</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol Solution, Equilibrated with 10 mM Tris HCl, pH 8.0, 1 mM EDTA, BioReagent, for molecular biology</td>
			<td>Sigma - Millipore</td>
			<td>P4557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce Coomassie Plus (Bradford) Assay Kit</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>23238</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pro-Q emerald 300 Lipopolysaccharide Gel Stain Kit</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>P20495</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteacease -50, EDTA free</td>
			<td>G Biosciences</td>
			<td>786-334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K, Molecular Biology Grade</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>P8107S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide &#8805;99.99%</td>
			<td>VWR</td>
			<td>AA45780-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorval RC 6 Plus Centrifuge</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>36-101-0816</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>SX1075-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SW 41 Ti Swinging-Bucket Rotor</td>
			<td>Beckman Coulter Life Sciences</td>
			<td>331362</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(hydroxymethyl)aminomethane (TRIS, Trometamol) &#8805;99.9% (dried basis), ultrapure Bioreagent Molecular biology grade, J.T. Baker</td>
			<td>VWR</td>
			<td>JT4109-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Type 45 Ti Fixed-Angle Titanium Rotor</td>
			<td>Beckman Coulter Life Sciences</td>
			<td>339160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-Clear Tube ,14 x 89mm</td>
			<td>Beckman Coulter Life Sciences</td>
			<td>344059</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex-Genie 2</td>
			<td>VWR</td>
			<td>102091-234</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
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separation of the cell envelope for gram-negative bacteria into inner and outer membrane fractions with technical adjustments for acinetobacter baumannii

यह विधि ग्राम-नकारात्मक बैक्टीरिया के लिफाफे को कुल, आंतरिक और बाहरी झिल्ली (ॐ) अंशों में विभाजित करके काम करती है और बाइलेयर की शुद्धता का आकलन करने के लिए परखों के साथ समाप्त होती है। ओम में आंतरिक झिल्ली की तुलना में समग्र घनत्व में वृद्धि हुई है, मुख्यतः बाहरी पत्रक के भीतर लिपूलीगोसैकराइड्स (एलओएस) और लिपोपॉलीसैकराइड्स (एलपीएस) की उपस्थिति के कारण। लॉस और एलपीएस अणु एम्फीपैथिक ग्लाइकोलिपिड होते हैं जिनमें एक समान संरचना होती है, जिसमें लिपिड-ए अलग-अलग और कोर-ओलिगोसाक्राइड प्रतिस्थापन होते हैं। हालांकि, केवल एलपीएस अणुओं को ओ-पॉलीसैकराइड, या ओ-एंटीजन के रूप में जाना जाता है एक तीसरी उपइकाई के साथ सजाया जाता है। मौजूद ग्लाइकोलिपिड का प्रकार और मात्रा किसी जीव के ओम घनत्व को प्रभावित करेगी। इसलिए, हमने परीक्षण किया कि क्या विभिन्न ग्लाइकोलिपिड सामग्री वाले बैक्टीरिया की झिल्ली को हमारी तकनीक का उपयोग करके इसी तरह अलग किया जा सकता है। एलपीएस उत्पादक जीवों, साल्मोनेला आंत्रिका सेरोवर टाइथिमुरियम और एस्चेरिचिया कोलाईके लिए, झिल्ली आसानी से अलग-थलग पड़ गई थी और एलपीएस ओ-एंटीजन मोईटी ने बाइलेयर विभाजन को प्रभावित नहीं किया। एसिनेटोबैक्टर बौमैनी लॉस अणुओं का उत्पादन करता है, जिसमें ओ-एंटीजन की कमी वाले एलपीएस अणुओं का समान द्रव्यमान होता है; हालांकि, इन रोगाणुओं की झिल्ली को शुरू में अलग नहीं किया जा सका। हमने तर्क दिया कि ए बौमनी का ओम एंट्रोबैक्टीरिया की तुलना में कम घना था, इसलिए सुक्रोज ढाल को समायोजित किया गया और झिल्ली अलग-थलग पड़ गई। इसलिए तकनीक को अन्य जीवों के साथ उपयोग के लिए अनुकूलित और संशोधित किया जा सकता है।

यह तकनीक ग्राम-नकारात्मक बैक्टीरिया के लिए आईएमएस और ओएमएस को अलग-थलग करने का एक प्रभावी साधन प्रदान करती है। पूरी प्रक्रिया की एक रूपरेखा सचित्र है(चित्रा 1)। सामान्य तौर पर, मीडिया के 1 एल म?...

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Separation of the Cell Envelope for Gram-negative Bacteria into Inner and Outer Membrane Fractions with Technical Adjustments for Acinetobacter baumannii

ग्राम-नकारात्मक बैक्टीरिया दो स्थानिक रूप से अलग झिल्ली का उत्पादन करते हैं। बाहरी झिल्ली को आंतरिक झिल्ली से एक परिधीय और पेप्टिडोग्लिकन परत द्वारा विभाजित किया जाता है। इन रोगाणुओं के दोहरे बाइलेयर को अलग करने की क्षमता उनके शरीर विज्ञान और रोगजनन को समझने के लिए महत्वपूर्ण रही है।

एसिनेटोबैक्टर बौमैनी के लिए तकनीकी समायोजन के साथ इनर और बाहरी झिल्ली अंशों में ग्राम-नकारात्मक बैक्टीरिया के लिए सेल लिफाफे का पृथक्करण

This method works by partitioning the envelope of Gram-negative bacteria into total, inner, and outer membrane (OM) fractions and concludes with assays to ...

अध्ययन कैसे रोगाणुओं व्यक्तिगत bilayers की रासायनिक संरचना को विनियमित एंटीबायोटिक हत्या, रोगाणुरोधी प्रतिरोध और रोग रोगजनकता के तंत्र के बारे में हमारे ज्ञान को सूचित करेगा । यह तकनीक डिटर्जेंट का उपयोग किए बिना ग्राम-नकारात्मक बैक्टीरिया के सेल लिफाफे को दो परिभाषित अंशों में विभाजित करती है। इसलिए, लिपिड, प्रोटीन और शर्करा का आकलन अर्ध-देशी वातावरण में किया जा सकता है।कुछ कदम समय पर निर्भर हैं और इसके लिए ध्यान और समन्वय की आवश्यकता है । प्रारंभ में, एक या दो नमूनों का उपयोग करें। जब किसी का आराम स्तर बढ़ जाता है, तो अधिक नमूने जोड़े जा सकते हैं।एक बार में छह से अधिक नमूनों को नहीं संभाला जाना चाहिए। यह एक बहु-दिवसीय प्रक्रिया है और दृश्य चौकियां प्रभावकारिता और त्रुटि का आकलन करने में सहायक होती हैं। इस प्रदर्शन से पहले कभी कभी अंतिम कदम.ताजा आगर प्लेटों पर जमे हुए ग्लिसरोल स्टॉक से बैक्टीरिया लकीर । एक बार उपनिवेशों का विकास, चार डिग्री सेल्सियस पर प्लेटों को स्टोर करें । एक ही कॉलोनी का उपयोग करने के लिए एक पांच मिलीलीटर शोरबा मीडिया और संस्कृति के रूप में वांछित रातोंरात बैक्टीरिया से भरा ट्यूब टीका ।वापस पसंदीदा शोरबा मीडिया के एक लीटर में रातोंरात जीवाणु संस्कृति पतला और फ्लास्क इनक्यूबेट । जब वांछित ऑप्टिकल घनत्व प्राप्त हो गया है, तो इनक्यूबेटर से फ्लैक्स निकालें और उन्हें बर्फ पर रखें। 600 नैनोमीटर पर संस्कृति के ऑप्टिकल घनत्व को मापें और संस्कृति की मात्रा की गणना करें जो ग्यारहवें बैक्टीरियल कॉलोनी बनाने वाली इकाइयों के लिए छह से आठ गुना 10 के बराबर है।संस्कृति की इस मात्रा को एक अपकेंद्रित्र ट्यूब में जोड़ें और यह सुनिश्चित करें कि शेष संस्कृतियां बर्फ पर तब तक रहें जब तक कि उनका उपयोग न किया जाए। 10 मिनट के लिए अपकेंद्रित्र द्वारा बैक्टीरिया गोली एक निश्चित कोण, उच्च गति अपकेंद्रित्र 7, 000 से 10, 000 बार जी और चार डिग्री सेल्सियस पर। सुपरनेट को सावधानी से डिकंट करें और उसे त्याग दें।बफर ए के 12.5 मिलीलीटर में प्रत्येक सेल गोली को फिर से रखें सेल निलंबन में एक चुंबकीय हलचल पट्टी जोड़ें। प्रत्येक सेल रिसोपेनसेशन में 10 मिलीग्राम प्रति मिलीलीटर लिसोजिमे के 180 माइक्रोलीटर जोड़ें। lysozyme EDTA अपकेंद्रित्र द्वारा बैक्टीरिया का इलाज इकट्ठा करने के बाद, जल्दी से बैक्टीरिया के लिए प्रोटीज अवरोधक, मैग्नीशियम क्लोराइड और नाभिक जोड़ें और तेजी से बफर बी में कोशिकाओं को फिर से खर्च करते हैं, बर्फ पर निलंबन रखते हुए ।इसके बाद, प्रत्येक सेल री-सस्पेंशन में 1.5 मिलीमोलर ईडीटीए समाधान के 12.5 मिलीलीटर जोड़ें और अतिरिक्त सात मिनट के लिए बर्फ पर सरगर्मी जारी रखें। 15 मिलीलीटर शंकु नलियों में निलंबन को डिकेंट करें। सस्पेंशन को 9, 000 से 11, 000 बार जी पर 10 मिनट के लिए चार डिग्री सेल्सियस पर सस्पेंशन ।सुपरनेटैंट्स को बायोहैजार्ड अपशिष्ट कंटेनर में फेंकें और बर्फ पर छर्रों को बनाए रखें। प्रत्येक सेल पेलेट में बफर बी के 25 मिलीलीटर जोड़ें। इसके बाद एक मोलर मैग्नीशियम क्लोराइड के 55 माइक्रोलीटर, आरएनस/डीएनएस/न्यूक्लियेज रीएजेंट का एक माइक्रोलीटर और प्रोटीज अवरोधक कॉकटेल का एक माइक्रोलीटर डालें।मिश्रण में छर्रों को फिर से खर्च करें। जब तक समाधान समरूप दिखाई देते हैं तब तक सख्ती से पिपेट और भंवर। बर्फ पर निलंबन स्टोर करें।होमोजेनाइजर सैंपल सिलेंडर में सैंपल डालें और सेल को 20 हजार पीएसआई पर लाएं। रोगजनकों के एयरोसोलाइजेशन से बचने के लिए, बफर बी में दबाव तंत्र की स्थिति और बैक्टीरियल निलंबन जोड़ने से पहले दबाव के स्तर को समायोजित करें। एहतियात के रूप में दबाव सेल और ब्लर बी के 10 मिलीलीटर को शामिल करें।बर्फ पर 50 मिलीलीटर शंकु नलियों में सेल को ले लीजिए, जबकि बर्फ पर नमूने भी रखे जाते हैं। पूर्ण रूप से प्राप्त करने के लिए, इस प्रक्रिया को तीन से पांच बार दोहराएं। शेष, बरकरार, सेल सामग्री, 6, 169 बार जी और 10 मिनट के लिए चार डिग्री सेल्सियस पर lysed जीवाणु नमूनों को गोली करने के लिए।अतिकेंद्री के लिए पॉलीकार्बोनेट बोतलों में, जो अब समरूप झिल्ली होते हैं, जो सुपरनेटेंट वितरित करें। अल्ट्रासेंट्रफ्यूज सेल 184, 500 बार जी और चार डिग्री सेल्सियस कम से कम एक घंटे के लिए होता है। सुपरनेटेंट को त्यागें और बर्फ पर झिल्ली छर्रों को बनाए रखें।एक गिलास, Dounce समरूपता का उपयोग करना, कम घनत्व आइसोपिक सुक्रोज ढाल समाधान के एक मिलीलीटर में झिल्ली छर्रों को फिर से खर्च करें। फिर, नमूना समरूप को 1.5 मिलीलीटर माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब में स्थानांतरित करने और ट्यूब को बर्फ पर रखने के लिए एक ग्लास, पाश्चुर पिपेट का उपयोग करें। सुक्रोज ढाल तैयार करने के लिए, थोड़ी झुकी हुई स्थिति में पॉलीप्रोपाइलीन या अल्ट्रा-क्लियर ओपन-टॉप ट्यूब रखें।धीरे-धीरे उच्च घनत्व सुक्रोज समाधान के दो मिलीलीटर जोड़ें। फिर कम घनत्व सुक्रोज समाधान के चार मिलीलीटर जोड़ें। घनत्व ढाल तैयार करते समय, परतों को मिलाने से बचने के लिए धीरे-धीरे सुक्रोज समाधान जोड़ें।सुक्रोज परतों को थोड़ा दिखाई देना चाहिए और आम तौर पर परिभाषित दिखाई देना चाहिए। इसके बाद, कुल झिल्ली अंश जोड़ें जिसे पहले कम घनत्व, आइसोप्निक सुक्रोज समाधान के एक मिलीलीटर में पुनः निलंबित कर दिया गया था। अंत में, कम घनत्व, आइसोप्निक सुक्रोज ग्रेडिएंट समाधान के लगभग छह मिलीलीटर जोड़कर ट्यूब के शेष को भरें।अल्ट्रासेंट्रफ्यूज नमूनों में 288, 000 बार जी और चार डिग्री सेल्सियस पर झूलती बाल्टी रोटर का उपयोग करके 16 से 23 घंटे तक किया जाता है। बिंदु से पांच मिलीलीटर के बारे में एक P1000 पिपेट टिप बंद अंत काटें। अपकेंद्रित्र पूरा होने के बाद, ट्यूब से ऊपरी, भूरे रंग की परत को हटाने के लिए पिपेट का उपयोग करें।इस परत को स्थानांतरित करें, जिसमें आंतरिक झिल्ली अंश होता है, अल्ट्रासेंट्रफ्यूगेशन के लिए पॉलीकार्बोनेट बोतल में। 53% सुक्रोज और 73% सुक्रोज के बीच इंटरफ़ेस के ऊपर सुक्रोज समाधान के बारे में दो मिलीलीटर छोड़ दें ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि निचले, सफेद, बाहरी झिल्ली अंश आंतरिक झिल्ली अंश को पार नहीं करता है। फिर से अंत के साथ एक P1000 पिपेट टिप का उपयोग करके, बाहरी झिल्ली परत को हटा दें और इसे पॉली कार्बोनेट बोतल में स्थानांतरित करें।पॉली कार्बोनेट बोतल के शेष शून्य को अलग झिल्ली भंडारण बफर के साथ भरें और उलटा या पिपेटिंग द्वारा मिलाएं। बर्फ पर नमूनों को बनाए रखें। झिल्ली एकत्र करने के लिए, एक घंटे के लिए 184, 500 गुना जी और चार डिग्री सेल्सियस पर पॉलीकार्बोनेट की बोतलों को अल्ट्रासेंट्रफ्यूज करें।अंत में, सुपरनेटेंट को त्यागें और स्टोरेज बफर के 500 से 1, 000 माइक्रोलीटर जोड़ें। 2यूंस समरूपता द्वारा झिल्ली को फिर से खर्च करें। दो मिलीलीटर माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूबों में नमूने एकत्र करें।आंतरिक और बाहरी झिल्ली को अलग करने के लिए कुल झिल्ली छर्रों को स्क्रैप किया गया था, डोरोस समरूप और अल्ट्रासेंट्रफ्यूज किया गया था। कुछ जीवाणु उपभेदों को विभाजित करने के लिए 20% 53% 73% का सुक्रोज घनत्व ढाल पर्याप्त था। लेकिन A.baumannii जो सफलतापूर्वक एक 20% 45% 73% ढाल का उपयोग कर विभाजित किया गया विभाजन के लिए नहीं।पृथक्करण की दक्षता का आकलन करने के लिए, झिल्ली के नमूनों का परीक्षण एनएचएच डिहाइड्रोजनेज के लिए किया गया था, जो जीवाणु आंतरिक झिल्ली में स्थित एंजाइम था। 340 नैनोमीटर पर ऑप्टिकल घनत्व में कमी ने एंजाइम की उपस्थिति का संकेत दिया। ऑप्टिकल घनत्व जंगली प्रकार S.typhimurium, ई. कोलाई K12 DH5a और galE उत्परिवर्ती S.typhimurium से आंतरिक और बाहरी झिल्ली अंशों के ५० माइक्रोग्राम नमूनों के लिए मापा गया था ।ए. बॉमनी झिल्ली अंशों की शुद्धता को बताते समय प्रोटीन की उच्च एकाग्रता जोड़ी गई थी क्योंकि 50 माइक्रोग्राम का उपयोग करके एक प्रारंभिक परख ने सुझाव दिया था कि अन्य जीवाणु उपभेदों की तुलना में एनएचएच डिहाइड्रोजनेज़ का सापेक्ष स्तर ए. बाउमैनी के लिए कम था। बाहरी झिल्ली अंशों के साथ आंतरिक झिल्ली अंशों के पार संदूषण का आकलन करने के लिए, एलपीएस और लॉस निकाले गए और कल्पना की गई। अर्क एक पॉलीएक्रीलामाइड जेल पर लोड किए गए थे और प्रो-क्यू एमराल्ड 300 के साथ दाग दिए गए थे।Acinetobacter baumannii एक सर्वोच्च प्राथमिकता है, बहु दवा प्रतिरोधी, मानव रोगजनक है । इस प्रोटोकॉल को शोधकर्ताओं को इस अनूठे और महत्वपूर्ण रोगजनक के प्रतिरोध और उग्रता तंत्र में लिपूलिगोसाकराइड्स, फॉस्फोलिपिड्स और लिपोप्रोटीन की भूमिकाओं को समझने में सहायता करनी चाहिए। यह विधि फॉस्फोलिपिड्स, ग्लाइकोलिपिड्स कार्बोहाइड्रेट, प्रोटीन और छोटे अणुओं के डाउनस्ट्रीम विश्लेषण के लिए आदर्श है जो आमतौर पर ग्राम-नकारात्मक बैक्टीरिया की दोहरी झिल्ली के भीतर मौजूद होते हैं।

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Separation of the Cell Envelope for Gram-negative Bacteria into Inner and Outer Membrane Fractions with Technical Adjustments for Acinetobacter baumannii

Purification and Visualization of Lipopolysaccharide from Gram-negative Bacteria by Hot Aqueous-phenol Extraction

ग्राम नकारात्मक जीवाणुओं से शोधन और गरम निकालना जलीय - फिनोल द्वारा Lipopolysaccharide का विजुअलाइज़ेशन

Lipopolysaccharide (LPS)  is a major component of Gram-negative bacterial outer membranes. It is a tripartite molecule consisting of  lipid A, which is ...

Tractable Mammalian Cell Infections with Protozoan-primed Bacteria

विनयशील प्रोटोजोआ primed जीवाणु के साथ स्तनधारी सेल संक्रमणों

Many intracellular bacterial pathogens use freshwater protozoans as a natural reservoir for proliferation in the environment. Legionella pneumophila, the ...

Fluorescence Microscopy Methods for Determining the Viability of Bacteria in Association with Mammalian Cells

स्तनधारी कोशिकाओं के सहयोग से बैक्टीरिया की व्यवहार्यता का निर्धारण के लिए प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी तरीके

Central to the field of bacterial pathogenesis is the ability to define if and how microbes survive after exposure to eukaryotic cells. Current protocols ...

Rapid Identification of Gram Negative Bacteria from Blood Culture Broth Using MALDI-TOF Mass Spectrometry

MALDI-TOF मास स्पेक्ट्रोमेट्री का उपयोग रक्त संस्कृति शोरबा से ग्राम नकारात्मक जीवाणुओं की तेजी से पहचान

An important role of the clinical microbiology laboratory is to provide rapid identification of bacteria causing bloodstream infection. Traditional ...

In Vivo Investigation of Antimicrobial Blue Light Therapy for Multidrug-resistant Acinetobacter baumannii Burn Infections Using Bioluminescence Imaging

In Vivo Investigation of Antimicrobial Blue Light Therapy for Multidrug-resistant Acinetobacter baumannii Burn Infections Using Bioluminescence Imaging

बहुदबा प्रतिरोधी के लिए रोगाणुरोधी ब्लू लाइट थेरेपी के विवो जांच असिनेतोबक्टेर संक्रमण जला bioluminescence इमेजिंग का उपयोग करना

Burn infections continue to be an important cause of morbidity and mortality. The increasing emergence of multidrug-resistant (MDR) bacteria has led to ...

Legionella pneumophila Outer Membrane Vesicles: Isolation and Analysis of Their Pro-inflammatory Potential on Macrophages

Legionella pneumophila Outer Membrane Vesicles: Isolation and Analysis of Their Pro-inflammatory Potential on Macrophages

लीजोनेला pneumophila बाहरी झिल्ली Vesicles: अलगाव और मैक्रोफेज पर उनके समर्थक भड़काऊ संभावित का विश्लेषण

Bacteria are able to secrete a variety of molecules via various secretory systems. Besides the secretion of molecules into the extracellular space or ...

Application of Consistent Massage-Like Perturbations on Mouse Calves and Monitoring the Resulting Intramuscular Pressure Changes

माउस Calves पर लगातार मालिश की तरह perturbations के आवेदन और परिणामी इंट्रामस्क्युलर दबाव परिवर्तन की निगरानी

Massage is generally recognized to be beneficial for relieving pain and inflammation. Although previous studies have reported anti-inflammatory effects of ...

Separation of Rat Epidermis and Dermis with Thermolysin to Detect Site-Specific Inflammatory mRNA and Protein

साइट-विशिष्ट भड़काऊ एमआरएनए और प्रोटीन का पता लगाने के लिए थर्मोलिसिन के साथ चूहा एपिडर्मिस और डर्मिस का पृथक्करण

Easy-to-use and inexpensive techniques are needed to determine the site-specific production of inflammatory mediators and neurotrophins during skin ...

A Neonatal Imaging Model of Gram-Negative Bacterial Sepsis

ग्राम-नकारात्मक बैक्टीरियल सेप्सिस का एक नवजात इमेजिंग मॉडल

Neonates are at an increased risk of bacterial sepsis due to the unique immune profile they display in the first months of life. We have established a ...

A Non-Coding Small RNA MicC Contributes to Virulence in Outer Membrane Proteins in Salmonella Enteritidis

A Non-Coding Small RNA MicC Contributes to Virulence in Outer Membrane Proteins in Salmonella Enteritidis

एक गैर-कोडिंग छोटे आरएनए मिकी साल्मोनेला एंटरिटिडिस में बाहरी झिल्ली प्रोटीन में विषाणु में योगदान देता है

A non-coding small RNA (sRNA) is a new factor to regulate gene expression at the post-transcriptional level. A kind of sRNA MicC, known in Escherichia ...