Name: evaluation of t follicular helper cells and germinal center response during influenza a virus infection in mice
Uploaded: 2020-06-27T13:00:00
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우리는 흐름 세포측정 시설, ABSL2 시설 및 상하이 의 SPF 동물 시설의 직원들이 기술적 인 도움과 조언을 주셔서 감사합니다. 이 작품은 중국 과학 아카데미 (XDB29030103), 중국 국립 핵심 R & D 프로그램 (2016YFA0502202), 중국 국립 자연 과학 재단 (31570886)의 전략적 우선 순위 연구 프로그램에 의해 지원되었습니다.

동물 실험은 중국 상하이의 연구소 파스퇴르 의 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인되었습니다. 모든 실험은 기관 동물 관리 및 사용 위원회가 승인 한 동물 프로토콜에 따라 수행되었다.
참고: 마우스의 바이러스 감염 및 장기의 격리ABSL2 조건 하에서 수행되어야 합니다.
1. PR8 인플루엔자 바이러스의 접종과 마우스 무게기록
<ol><li>A...

<ol>
	<li>Johnston, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bcl6+and+Blimp-1+are+reciprocal+and+antagonistic+regulators+of+T+follicular+helper+cell+differentiation.">Bcl6 and Blimp-1 are reciprocal and antagonistic regulators of T follicular helper cell differentiation.</a> Science. 325 (5943), 1006-1010 (2009).</li><li>Nurieva, R. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bcl6+mediates+the+development+of+T+follicular+helper+cells.">Bcl6 mediates the development of T follicular helper cells.</a> Science. 325 (5943), 1001-1005 (2009).</li><li>Yu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transcriptional+repressor+Bcl-6+directs+T+follicular+helper+cell+lineage+commitment.">The transcriptional repressor Bcl-6 directs T follicular helper cell lineage commitment.</a> Immunity. 31 (3), 457-468 (2009).</li><li>Pedros, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+TRAF-like+motif+of+the+inducible+costimulator+ICOS+controls+development+of+germinal+center+TFH+cells+via+the+kinase+TBK1.">A TRAF-like motif of the inducible costimulator ICOS controls development of germinal center TFH cells via the kinase TBK1.</a> Nature Immunology. 17 (7), 825-833 (2016).</li><li>Xu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follicular+T-helper+cell+recruitment+governed+by+bystander+B+cells+and+ICOS-driven+motility.">Follicular T-helper cell recruitment governed by bystander B cells and ICOS-driven motility.</a> Nature. 496 (7446), 523-527 (2013).</li><li>Lee, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B+cell+priming+for+extrafollicular+antibody+responses+requires+Bcl-6+expression+by+T+cells.">B cell priming for extrafollicular antibody responses requires Bcl-6 expression by T cells.</a> The Journal of Experimental Medicine. 208 (7), 1377-1388 (2011).</li><li>Zotos, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-21+regulates+germinal+center+B+cell+differentiation+and+proliferation+through+a+B+cell-intrinsic+mechanism.">IL-21 regulates germinal center B cell differentiation and proliferation through a B cell-intrinsic mechanism.</a> The Journal of Experimental Medicine. 207 (2), 365-378 (2010).</li><li>Vogelzang, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+fundamental+role+for+interleukin-21+in+the+generation+of+T+follicular+helper+cells.">A fundamental role for interleukin-21 in the generation of T follicular helper cells.</a> Immunity. 29 (1), 127-137 (2008).</li><li>Ansel, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chemokine-driven+positive+feedback+loop+organizes+lymphoid+follicles.">A chemokine-driven positive feedback loop organizes lymphoid follicles.</a> Nature. 406 (6793), 309-314 (2000).</li><li>Shi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-1+Controls+Follicular+T+Helper+Cell+Positioning+and+Function.">PD-1 Controls Follicular T Helper Cell Positioning and Function.</a> Immunity. 49 (2), 264-274 (2018).</li><li>Methot, S. P., Di Noia, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Mechanisms+of+Somatic+Hypermutation+and+Class+Switch+Recombination.">Molecular Mechanisms of Somatic Hypermutation and Class Switch Recombination.</a> Advanced ImmunoChemical. 133, 37-87 (2017).</li><li>Crotty, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follicular+helper+CD4+T+cells+(TFH).">Follicular helper CD4 T cells (TFH).</a> Annual Review of Immunology. 29, 621-663 (2011).</li><li>Calame, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+cells:+finding+new+light+at+the+end+of+B+cell+development.">Plasma cells: finding new light at the end of B cell development.</a> Nature Immunology. 2 (12), 1103-1108 (2001).</li><li>Yoo, J. K., Fish, E. N., Braciale, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LAPCs+promote+follicular+helper+T+cell+differentiation+of+Ag-primed+CD4++T+cells+during+respiratory+virus+infection.">LAPCs promote follicular helper T cell differentiation of Ag-primed CD4+ T cells during respiratory virus infection.</a> The Journal of Experimental Medicine. 209 (10), 1853-1867 (2012).</li><li>Leon, B., Bradley, J. E., Lund, F. E., Randall, T. D., Ballesteros-Tato, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FoxP3++regulatory+T+cells+promote+influenza-specific+Tfh+responses+by+controlling+IL-2+availability.">FoxP3+ regulatory T cells promote influenza-specific Tfh responses by controlling IL-2 availability.</a> Nature Communications. 5, 3495 (2014).</li><li>He, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix+protein+1+promotes+follicular+helper+T+cell+differentiation+and+antibody+production.">Extracellular matrix protein 1 promotes follicular helper T cell differentiation and antibody production.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (34), 8621-8626 (2018).</li><li>Le&#243;n, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+TH2+development+by+CXCR5++dendritic+cells+and+lymphotoxin-expressing+B+cells.">Regulation of TH2 development by CXCR5+ dendritic cells and lymphotoxin-expressing B cells.</a> Nature Immunology. 13 (7), 681-690 (2012).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transcription+factor+Foxp1+is+a+critical+negative+regulator+of+the+differentiation+of+follicular+helper+T+cells.">The transcription factor Foxp1 is a critical negative regulator of the differentiation of follicular helper T cells.</a> Nature Immunology. 15 (7), 667-675 (2014).</li><li>Bouvier, N. M., Lowen, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+Models+for+Influenza+Virus+Pathogenesis+and+Transmission.">Animal Models for Influenza Virus Pathogenesis and Transmission.</a> Viruses. 2 (8), 1530-1563 (2010).</li><li>Miyauchi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+neutralizing+influenza+antibody+response+in+the+absence+of+T+follicular+helper+cells.">Protective neutralizing influenza antibody response in the absence of T follicular helper cells.</a> Nature Immunology. 17 (12), 1447-1458 (2016).</li><li>Rodriguez, L., Nogales, A., Martinez-Sobrido, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influenza+A+Virus+Studies+in+a+Mouse+Model+of+Infection.">Influenza A Virus Studies in a Mouse Model of Infection.</a> Journal of Visualized Experiments. (127), (2017).</li><li>Kitano, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bcl6+protein+expression+shapes+pre-germinal+center+B+cell+dynamics+and+follicular+helper+T+cell+heterogeneity.">Bcl6 protein expression shapes pre-germinal center B cell dynamics and follicular helper T cell heterogeneity.</a> Immunity. 34 (6), 961-972 (2011).</li><li>Yusuf, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germinal+center+T+follicular+helper+cell+IL-4+production+is+dependent+on+signaling+lymphocytic+activation+molecule+receptor+(CD150).">Germinal center T follicular helper cell IL-4 production is dependent on signaling lymphocytic activation molecule receptor (CD150).</a> The Journal of Immunology. 185 (1), 190-202 (2010).</li><li>Sun, J., Dodd, H., Moser, E. K., Sharma, R., Braciale, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD4++T+cell+help+and+innate-derived+IL-27+induce+Blimp-1-dependent+IL-10+production+by+antiviral+CTLs.">CD4+ T cell help and innate-derived IL-27 induce Blimp-1-dependent IL-10 production by antiviral CTLs.</a> Nature Immunology. 12 (4), 327-334 (2011).</li></ol>

높은 친화성 항체를 생성하기 위한 B 세포 도움을 제공하는 전문화한 역할 때문에 Tfh 세포는 백신 설계를 위한 새로운 전략을 제공하기 위하여 분화 및 조작의 기계장치에서 광범위하게 공부되었습니다. 인플루엔자 바이러스 감염은 활발한 Tfh 및 GC B 세포 반응을 유도하여 이 연구 분야에 적합한 모델이 됩니다. 본 논문에서, 우리는 비강 내 접종에 의한 인플루엔자 바이러스 감염의 프로토콜을 ?...

최근 10 년 동안, 수많은 연구는 새로 확인 된 CD4+ T 세포 서브 세트에 초점을 맞추고있다, Tfh 세포 하위 집합, 발아 센터 (GC) B 개발에 필수적인 역할에 대한. B세포 림프종 6(Bcl6)은 주로 유전자 억압자로 간주되는, Bcl6의 자궁외 발현이 Tfh 분화를 유도하기에 충분하다는 증거를 위해 Tfh 세포의 계보-정의 인자이며 Bcl6의 결핍으로 인해 Tfh 분화1,2,3이사라졌다. 다른 CD4+ T 도우미 서브세트가 염증 부위로 이동하여 이펙터 기능을 수행하는 것과 달리, Tfh 세포는 주로 비장 및 림프절의 B 세포 여포 영역에서 B 세포 도움을 제공한다. 공동 자극 분자 ICOS 및 CD40L, Tfh와 GC B 세포 사이의 상호 작용에 중요한 역할을한다. Tfh 분화 동안, ICOS는 코그네이트 B 세포로부터 필요한 신호를 전송하고 또한 B 세포 영역국소화4,5에대한 방관자 B 세포로부터 이동 신호를 수신 수용체 역할을한다. CD40L은 B 세포 증식 및 생존6을위한 Tfh 세포로부터의 신호 의 중재자이다. CD40L과 유사한 역할을 하는 또 다른 요인은 주로 Tfh 세포에 의해 분비되는 사이토카인 IL21이다. IL21은 GCB 세포의 개발 및 고친화항체의 생산을 직접 규제하지만 Tfh 분화에서의 역할은 여전히 논란의 여지가있는7,8. 현재 유동 세포 분석에서 Tfh 세포를 식별하는 데 가장 빈번하게 사용되는 PD-1 및 CXCR5는 이 하위 집합의 분화 및 기능에 중요한 역할을 합니다. CXCR5는 B 세포 여포 케모키인의 수용체이며 B 세포 여포9에서Tfh 세포의 국소화를 중재한다. PD-1은 이제 여포 유도 기능을 가질 뿐만 아니라 GC B 세포 친화 성숙 과정에서 중요한 신호를 전송하는 것으로 확인된다10. 이러한 사실 인정에 근거하여, 이 분자의 발현을 평가하는 것은 기본적으로 Tfh 세포의 성숙 그리고 기능을 반영할 수 있었습니다.
GC는 이차 림프구 기관에서 유도된 일시적인 미세 해부학 구조이며 Tfh 세포에 크게 의존하므로 Tfh 반응을 평가하기에 완벽한 판독값입니다. GC에서, 세포사화학 및 공동 자극 분자에 의해 매개되는 신호를 수신한 후, B 세포는고친화항체(11)를생성하기 위해 클래스 스위칭 및 체세포 초열의 대상이 된다. 차동 항체 클래스 스위칭은 INγ가 IgG2 급 스위칭12를유도하는 동안 IL4 및 IL21이 IgG1 급 스위칭을 유도하는 차동 사이토카인 틈새 시장에서 발생한다. 혈장 세포는 분비 항체의 생산자이며 말단 분화 세포입니다. Tfh 세포 같이, GC에 있는 B 세포의 발달은 많은 중요한 분자의 동적 발현과 연관됩니다. 현재 연구에 기초하여, GC B 세포는 B220+PNA+Fas+ 또는 B220+GL7+Fas+ 세포 및 혈장 세포로 식별 될 수있다, 자신의 전구체에 비해, B220의 표현을 다운 조절 및 UPregulate CD138 발현13. 더 구체적으로, 이들 특성은 유동 세포측정 및 면역형광 분석에서 검출될 수 있으므로 GC 반응의 적절한 평가가 된다.
강력한 세포 및 유머 반응은 인플루엔자 바이러스 감염에서 유도되며, Tfh 및 Th1 세포가 CD4+ T 세포 반응14를지배하여 Tfh 세포 분화 연구를위한 완벽한 모델입니다. 인플루엔자 A/푸에르토리코/8/34 H1N1(PR8)은 일반적으로 사용되는 마우스 적응 균주이며, 이 연구에서 자주 사용된다14,15,16. 여기에서, 우리는 인플루엔자 바이러스 감염에 있는 Tfh 연구 관련 분석의 몇몇 기본적인 프로토콜을 기술합니다: 1) PR8 바이러스의 비강 내 접종; 2) 항원 특이적 Tfh 세포, GC B 및 혈장 세포 및 유동 세포측정을 갖는 IL21 검출; 3) GC의 조직학적 시각화; 4) ELISA와 혈청에서 항원 특이적 항체 티터의 검출. 이 프로토콜은 Tfh 관련 연구 결과에 있는 새로운 연구원을 위한 필요한 기술을 제공합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Immunostaining of Tfh cells, NP-specific Tfh cells and Bcl-6</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37% formaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F1635</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD16/32 mouse</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14-0161-86</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-conjugated-IAbNP311-325 MHC class II tetramer</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bcl-6 PE</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>358504</td>
			<td>clone:7D1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin-CXCR5</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>13-7185-82</td>
			<td>clone: SPRCL5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD4 Percp-eFluor 710</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>46-0041-82</td>
			<td>clone:GK1.5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD44 eVolve 605</td>
			<td>Thermo Fisher Scientifi</td>
			<td>83-0441-42</td>
			<td>clone:IM7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD44 FITC</td>
			<td>Thermo Fisher Scientifi</td>
			<td>11-0441-82</td>
			<td>clone:IM7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD62L FITC</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>553150</td>
			<td>clone:MEL-14</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ICOS BV421</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>564070</td>
			<td>clone:7E.17G9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PD1 PE/Cy7</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>135216</td>
			<td>clone:29F.1A12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptavidin BV421</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>563259</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptavidin PE</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>554081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intracelluar staining of IL21</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37% formaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F1635</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-human IgG</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch Laboratories</td>
			<td>109-605-098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brefeldin A</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B6542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>human FCc IL-21 receptor</td>
			<td>R&#38;D System</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ionomycin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I0634</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Live/Dead Fixable Aqua Dead Cell staining kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>L34966</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P1585</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saponin</td>
			<td>MP</td>
			<td>102855</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GC B and plasma cells staining</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B220 APC</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17-0452-81</td>
			<td>clone:RA3-6B2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD138 PE</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>561070</td>
			<td>clone:281-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD95 (FAS) PE/Cy7</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>557653</td>
			<td>clone:Jo2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgD eFluor 450</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>48-5993-82</td>
			<td>clone:11-26c</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PNA FITC</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L7381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Assay of HA-specific antibody titer with ELISA</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PR8-HA</td>
			<td>Sino Biological</td>
			<td>11684-V08H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>SSBC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti mouse Ig (SBA Clonotyping System-HRP)</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>5300-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti mouse IgM (SBA Clonotyping System-HRP)</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>5300-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti mouse IgG1 (SBA Clonotyping System-HRP)</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>5300-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti mouse IgG2b (SBA Clonotyping System-HRP)</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>5300-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti mouse IgG2c (SBA Clonotyping System-HRP)</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>5300-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TMB Substrate Reagent Set</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>555214</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histology</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 555-Goat-anti rat IgG</td>
			<td>Life Technology</td>
			<td>A21434</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse IgD</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>405702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated PNA</td>
			<td>Vector laboratories</td>
			<td>B-1075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dilute Alexa Fluor 488-streptavidin</td>
			<td>Life Technology</td>
			<td>S11223</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>normal goat serum</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>0060-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pro-long gold antifade reagent</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>P3630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>STREPTAVIDIN/BIOTIN blocking kit</td>
			<td>Vector laboratories</td>
			<td>SP-2002</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluation of t follicular helper cells and germinal center response during influenza a virus infection in mice

T 여포 도우미 (Tfh) 세포는 발아 센터 (GC) 개발 및 높은 친화도 항체의 생성에 대한 도움을 제공하는 데 전문화 된 독립적 인 CD4+ T 세포 하위 집합이다. 인플루엔자 바이러스 감염에서, 강력한 Tfh 및 GC B 세포 반응은 Tfh 관련 연구를 위한 자격을 갖춘 마우스 모형을 부여하는 효과적인 바이러스 박멸을 촉진하기 위하여 유도됩니다. 이 논문에서, 우리는 마우스에 있는 인플루엔자 바이러스 감염 도중 기본적인 Tfh 관련 면역 반응의 검출에 있는 프로토콜을 기술했습니다. 이러한 프로토콜포함: 인플루엔자 바이러스의 비강 내 접종; 폴리클론 및 항원 특이적 Tfh 세포, GC B 세포 및 혈장 세포의 유동 세포 피진 및 분석; GC의 면역 형광 검출; 혈청에서 인플루엔자 바이러스 특이적 항체의 효소-연결된 면역흡혈구 분석(ELISA). 이러한 분석체는 기본적으로 인플루엔자 바이러스 감염에서 Tfh 세포의 분화 및 기능을 정량화하여 분화 메커니즘 및 조작 전략을 해명하는 연구에 도움을 제공합니다.

인플루엔자 바이러스 감염에서 마우스 이환율의 특성화 인플루엔자 바이러스 감염 후, 마우스는 질병으로 인해 덜 활동적이고 식욕 부진이며, 이는 심각한 체중 감소에 의해 반영되며, 마우스 이환율을 모니터링하는 데 일반적으로 사용되는증상(19). 도 1에도시된 바와 같이, PR8 바이러스 감염 마우스는 6일째에 체중 감량을 시?...

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Evaluation of T Follicular Helper Cells and Germinal Center Response During Influenza A Virus Infection in Mice

이 논문은 인플루엔자 바이러스 감염의 마우스 모형에 있는 Tfh 및 GC B 반응을 평가하는 프로토콜을 기술합니다.

인플루엔자 A 바이러스 감염 중 T 여포 도우미 세포 및 발아 센터 반응 평가

T Follicular Helper (Tfh) cells are an independent CD4+&#160;T cell subset specialized in providing help for germinal center (GC) development and ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

사이 Synergism을 맡은 이후로 발광 생물 이미징을 사용하여 연쇄상 구균 pneumoniae</em유아 마우스에서>와 인플루엔자 바이러스

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

연구

면역학 및 감염병학

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

웨스트 나일 바이러스 돌연변이 균주의 감염에에서 MyD88 매개 세포 면역 반응의 생체 외 분석

An attenuated West Nile virus (WNV), a nonstructural (NS) 4B-P38G mutant, induced higher innate cytokine and T cell responses than the wild-type WNV in ...

Influenza Virus Propagation in Embryonated Chicken Eggs

인간 백신 닭 계란에 인플루엔자 바이러스 전파

Influenza infection is associated with about 36,000 deaths and more than 200,000 hospitalizations every year in the United States. The continuous ...

Co-immunoprecipitation of the Mouse Mx1 Protein with the Influenza A Virus Nucleoprotein

인플루엔자 A 바이러스의 핵 단백질과 마우스 MX1 단백질의 공동 면역 침전

Studying the interaction between proteins is key in understanding their function(s). A very powerful method that is frequently used to study interactions ...

Measuring Attachment and Internalization of Influenza A Virus in A549 Cells by Flow Cytometry

유동 세포 계측법에 의해 A549 세포의 부착 및 국제화 인플루엔자의 바이러스를 측정

Attachment to target cells followed by internalization are the very first steps of the life cycle of influenza A virus (IAV). We provide here a detailed ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

호중구의 분리 및 분석 치료제에 림프종 세포 감도에서 자신의 역할을 확인하는 방법

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

In Vitro Disassembly of Influenza A Virus Capsids by Gradient Centrifugation

In Vitro Disassembly of Influenza A Virus Capsids by Gradient Centrifugation

그라데이션 원심 분리에 의해 인플루엔자 A 바이러스 캡시드의 생체 외 분해에

Acid-triggered molecular processes closely control cell entry of many viruses that enter through the endocytic system. In the case of influenza A virus ...

Influenza A Virus Studies in a Mouse Model of Infection

감염 마우스 모델에서 인플루엔자 A 바이러스 연구

Influenza viruses cause over 500,000 deaths worldwide1 and are associated with an annual cost of 12 - 14 billion USD in the United States alone ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

마비 및 비주얼 시스템 부상 Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4에 대 한 T 세포 관련 하 여 쥐에서의 유도

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

Evaluation of Extracellular Vesicle Function During Malaria Infection

말라리아 감염 시 세포 외 기 기능의 평가

Malaria is a life-threatening disease caused by Plasmodium parasites, with P. falciparum being the most prevalent on the African continent and responsible ...