Name: identification of novel regulators of plant transpiration by large-scale thermal imaging screening in helianthus annuus
Uploaded: 2020-01-30T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification of Novel Regulators of Plant Transpiration by Large-Scale Thermal Imaging Screening in Helianthus Annuus at JoVE.com

Работа была поддержана Помона колледж стартап фонды и Хирш исследований Инициация Гранты фонда (для FJ), а также Помона колледж молекулярной биологии программы через звездные летние исследования помощник программы (для KG).

1. Выращивание растений
<ol><li>Добавьте слой тонкого вермикулита толщиной 4 см к стандартным 10 дюйма х 20 дюйма (254 мм х 501 мм) подносы для растений без отверстий.</li>
	<li>Поместите держатели семян (см. Таблица Материалов) 2 см друг от друга в подносах растений.</li>
	<li>Заполните держатели ?...

<ol>
	<li>Basu, S., Ramegowda, V., Kumar, A., Pereira, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plant+adaptation+to+drought+stress.">Plant adaptation to drought stress.</a> F1000Research. 5, (2016).</li><li>McLachlan, D. H., Kopischke, M., Robatzek, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gate+control:+guard+cell+regulation+by+microbial+stress.">Gate control: guard cell regulation by microbial stress.</a> The New Phytologist. 203 (4), 1049-1063 (2014).</li><li>Leung, J., Bazihizina, N., Mancuso, S., Valon, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revisiting+the+Plant's+Dilemma.">Revisiting the Plant's Dilemma.</a> Molecular Plant. 9 (1), 7-9 (2016).</li><li>Macarron, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+high-throughput+screening+in+biomedical+research.">Impact of high-throughput screening in biomedical research.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 10 (3), 188-195 (2011).</li><li>Wigglesworth, M. J., Murray, D. C., Blackett, C. J., Kossenjans, M., Nissink, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increasing+the+delivery+of+next+generation+therapeutics+from+high+throughput+screening+libraries.">Increasing the delivery of next generation therapeutics from high throughput screening libraries.</a> Current Opinion in Chemical Biology. 26, 104-110 (2015).</li><li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+genetic+interrogation+of+natural+variation+uncovers+a+molecule+that+is+glycoactivated.">Chemical genetic interrogation of natural variation uncovers a molecule that is glycoactivated.</a> Nature Chemical Biology. 3 (11), 716-721 (2007).</li><li>Park, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abscisic+acid+inhibits+type+2C+protein+phosphatases+via+the+PYR/PYL+family+of+START+proteins.">Abscisic acid inhibits type 2C protein phosphatases via the PYR/PYL family of START proteins.</a> Science. 324 (5930), 1068-1071 (2009).</li><li>Ma, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulators+of+PP2C+phosphatase+activity+function+as+abscisic+acid+sensors.">Regulators of PP2C phosphatase activity function as abscisic acid sensors.</a> Science. 324 (5930), 1064-1068 (2009).</li><li>Cao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+ABA-mimicking+ligand+that+reduces+water+loss+and+promotes+drought+resistance+in+plants.">An ABA-mimicking ligand that reduces water loss and promotes drought resistance in plants.</a> Cell Research. 23 (8), 1043-1054 (2013).</li><li>Okamoto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+dimeric+ABA+receptors+elicits+guard+cell+closure,+ABA-regulated+gene+expression,+and+drought+tolerance.">Activation of dimeric ABA receptors elicits guard cell closure, ABA-regulated gene expression, and drought tolerance.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (29), 12132-12137 (2013).</li><li>Rodriguez, P. L., Lozano-Juste, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unnatural+agrochemical+ligands+for+engineered+abscisic+acid+receptors.">Unnatural agrochemical ligands for engineered abscisic acid receptors.</a> Trends in Plant Science. 20 (6), 330-332 (2015).</li><li>Kim, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+genetics+reveals+negative+regulation+of+abscisic+acid+signaling+by+a+plant+immune+response+pathway.">Chemical genetics reveals negative regulation of abscisic acid signaling by a plant immune response pathway.</a> Current Biology. 21 (11), 990-997 (2011).</li><li>Ito, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Abscisic+Acid+Antagonists+Identified+with+Chemical+Array+Screening.">Novel Abscisic Acid Antagonists Identified with Chemical Array Screening.</a> ChemBioChem. 16 (17), 2471-2478 (2015).</li><li>Ye, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Chemical+Inhibitor+of+ABA+Signaling+Targets+All+ABA+Receptors.">A Novel Chemical Inhibitor of ABA Signaling Targets All ABA Receptors.</a> Plant Physiology. 173 (4), 2356-2369 (2017).</li><li>Takeuchi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designed+abscisic+acid+analogs+as+antagonists+of+PYL-PP2C+receptor+interactions.">Designed abscisic acid analogs as antagonists of PYL-PP2C receptor interactions.</a> Nature Chemical Biology. 10 (6), 477-482 (2014).</li><li>Rauf, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+in+modification+of+sunflower+oil+to+expand+its+industrial+value.">Progress in modification of sunflower oil to expand its industrial value.</a> Journal of the Science of Food and Agriculture. 97 (7), 1997-2006 (2017).</li><li>Caraus, I., Alsuwailem, A. A., Nadon, R., Makarenkov, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detecting+and+overcoming+systematic+bias+in+high-throughput+screening+technologies:+a+comprehensive+review+of+practical+issues+and+methodological+solutions.">Detecting and overcoming systematic bias in high-throughput screening technologies: a comprehensive review of practical issues and methodological solutions.</a> Briefings in Bioinformatics. 16 (6), 974-986 (2015).</li><li>Costa, J. M., Grant, O. M., Chaves, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermography+to+explore+plant-environment+interactions.">Thermography to explore plant-environment interactions.</a> Journal of Experimental Botany. 64 (13), 3937-3949 (2013).</li><li>Merlot, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+infrared+thermal+imaging+to+isolate+Arabidopsis+mutants+defective+in+stomatal+regulation.">Use of infrared thermal imaging to isolate Arabidopsis mutants defective in stomatal regulation.</a> The Plant Journal. 30 (5), 601-609 (2002).</li></ol>

Количество соединений, которые могут быть протестированы в данный день, в основном зависит от i) экологически контролируемого пространства, доступного для выращивания растений и выполнения экрана, а также (ii) числа лиц, которые могут быть вовлечены в шестой шаг протокола. Мы рекомендуем...

Стрессоустойчивость растений является полигенное признаки под влиянием различных молекулярных, клеточных, развития и физиологических особенностей и механизмов1. Растения в колеблющейся среде должны постоянно модулировать свои стомататные движения, чтобы сбалансировать фотосинтетический спрос на углерод, сохраняя при этом достаточную воду и предотвращая вторжение патогенов2; однако механизмы, с помощью которых принимаются эти компромиссные "решения", плохо изучены3. Внедрение биологически активных молекул в растения может модулировать их физиологию и помочь в зондирования новых механизмов регулирования.
Крупномасштабный скрининг малых молекул является эффективной стратегией, используемой в открытии противораковых препаратов и фармакологических анализов для проверки физиологических эффектов сотен и тысяч молекул в течение короткого периода времени4,5. В биологии растений, высокой пропускной скрининг показал свою эффективность, например, в выявлении синтетической молекулы пирабактина6, а также открытие долгожданного рецептора абсциновой кислоты (АБА)7,8. С тех пор, агонисты и антагонисты рецепторов ABA, и небольшие молекулы, способные модулировать выражение ABA-индуцируемых генов репортера были определены9,10,11,12,13,14,15. Высокопроизводительные подходы скрининга в настоящее время доступны для выявления небольших соединений, которые могут модулировать стоматальной диафрагмы имеют некоторые недостатки: (i) протоколы, вращающиеся вокруг ABA сигнальный путь может предотвратить выявление новых ABA-независимых механизмов, и (ii) в виво стратегии, используемые для идентификации биоактивных малых молекул полагаться в первую очередь на их физиологическое воздействие на прорастания или саженство.
Кроме того, хотя существует множество способов лечения растений биологически активными молекулами, большинство из них не очень хорошо подходят для крупномасштабного исследования стоматарального движения. Короче говоря, три наиболее распространенных метода являются применение листвятки путем распыления или погружения, обработки корневой системы и корневого орошения. Приложение Foliar не совместимо с наиболее распространенными и быстрыми методологиями для измерения стоматаральной диафрагмы, так как наличие капель на поверхности листа мешает крупномасштабному сбору данных. Основными ограничениями корневого орошения являются большие потребности в объеме выборки, потенциальное удержание соединений элементами в ризосфере и зависимость от активного усвоения корней.
Здесь мы представляем крупномасштабный метод выявления новых соединений, регулирующих транспирацию растений, который не обязательно включает в себя аБА или известные механизмы реагирования на засуху и позволяет эффективно и надежно очищая растения. В этой системе, Helianthus annuus растения обрабатываются с использованием корневого кормления подход, который состоит из резки основного корня саженцев, выращенных гидропонно и погружения разреза в образец решения. После обработки влияние каждого соединения на транспирацию растений измеряется с помощью инфракрасной тепловизионной камеры. Поскольку основным фактором, определяющим температуру поверхности листьев, является скорость испарения из листа, тепловизионные данные могут быть непосредственно коррелированы с стоматальной проводимостью. Таким образом, относительное изменение температуры листа после химической обработки обеспечивает прямое средство количественной оценки транспирации растений.
H. annuus является одним из пяти крупнейших масличных культур в мире16 и открытий, сделанных непосредственно на этом заводе может облегчить будущие передачи технологии. Кроме того, H. annuus саженцы имеют большие и плоские котиледоны, а также толстый первичный корень, который был идеальным для развития этого протокола. Тем не менее, этот метод может быть легко адаптированы к другим растениям и различных соединений.
Этот протокол может быть использован для эффективной идентификации молекул, способных вызвать стоматальное закрытие или способствовать стоматальному открытию, что имеет серьезные последствия для понимания сигналов, которые регулируют стоматальную проводимость и адаптацию растений к окружающей среде Напряжения.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1020 plastic growing trays without drain holes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Standard 10 x 20 inch trays</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.0 mL microtubes, capless</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>22-283NC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Abscisic acid (ABA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A1049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Air pump</td>
			<td>Active Aqua</td>
			<td>AAPA7.8L</td>
			<td>2 Outlets, 3W, 7.8 L/min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Airstones</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemical compound library</td>
			<td>MicroSource Discovery</td>
			<td></td>
			<td>Natural Product Collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Creative Versa-Tool (wood burning tool)</td>
			<td>Nasco</td>
			<td>9724549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylsulfoxide (DMSO), plant cell culture tested</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D4540</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dwarf Sunspot Sunflower seeds</td>
			<td>Outsidepride.com</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erythrosin B</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>200964</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydroponics fertilizer set (FloraBloom, FloraGrow, FloraMicro)</td>
			<td>General Hydroponics</td>
			<td>GL51GH1421.31.11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes Delicate Task Wipers</td>
			<td>Kimberly-Clark Professional</td>
			<td>34155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laptop</td>
			<td>Dell</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MES hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M2933</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microdissection scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium hydroxide (KOH)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5958</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ResearchIR Software</td>
			<td>FLIR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>R-Tech Rigid Polystyrene Foam Board</td>
			<td>Insulfoam</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seedholders</td>
			<td>Araponics</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super Tub (plastic utility tub)</td>
			<td>Maccourt</td>
			<td>ST3608</td>
			<td>36 x 24 x 8 inch tub used for hydroponics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T450sc LWIR (Long-Wave Infrared) Handheld Thermal Imaging Camera</td>
			<td>FLIR</td>
			<td>FLIR-T62101</td>
			<td>Comes with required charging cable and USB cable needed to connect to laptop</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vermiculite</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water filter</td>
			<td>SunSun</td>
			<td>HW-304B Pro Canister Filter</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification of novel regulators of plant transpiration by large-scale thermal imaging screening in helianthus annuus

Адаптация растений к биотическим и абиотическим стрессам регулируется целым рядом факторов, среди которых решающую роль играет регуляция стоматальной диафрагмы в ответ на дефицит воды или патогенные микроорганизмы. Выявление малых молекул, которые регулируют стоматального движения, может способствовать пониманию физиологической основы, с помощью которой растения адаптируются к окружающей среде. Крупномасштабные подходы скрининга, которые были использованы для выявления регуляторов стоматального движения, имеют потенциальные ограничения: некоторые в значительной степени полагаются на абскизиновой кислоты (ABA) гормональный сигнальный путь, поэтому исключая ABA-независимые механизмы, в то время как другие полагаются на наблюдение косвенных, долгосрочных физиологических эффектов, таких как рост и развитие растений. Представленный здесь метод скрининга позволяет проводить масштабную обработку растений библиотекой химических веществ в сочетании с прямой количественной оценкой их транспирации с помощью тепловизоров. Поскольку испарение воды через транспирацию приводит к охлаждению поверхности листьев, тепловизор обеспечивает неинвазивный подход к исследованию изменений в стоматальной проводимости с течением времени. В этом протоколе, Helianthus annuus саженцы выращиваются гидропонно, а затем лечение корневых кормления, в котором первичный корень вырезать и окунается в химическое вещество, тестируемое. Тепловизорс, за которым следует статистический анализ изменения температуры колидора с течением времени, позволяет выявить биоактивные молекулы, модулирующие стоматальную диафрагму. Наши эксперименты по проверке концепции показывают, что химическое вещество можно переносить из вырезанного корня в котиледон саженца подсолнечника в течение 10 минут. Кроме того, когда растения обрабатываются ABA в качестве положительного контроля, повышение температуры поверхности листьев может быть обнаружено в течение нескольких минут. Таким образом, наш метод позволяет эффективно и быстро идентифицировать новые молекулы, регулирующие стоматальную диафрагму.

Эксперимент с использованием красного красителя Эритрозин B (0,8 kDa) демонстрирует способность химических веществ, чтобы быть заметно поглощается через корень разреза в cotyledons саженца подсолнечника в течение 10 минут(рисунок 1).
<p class="jove_content" fo:keep-together.withi...

Watch this Scientific Journal Video about Identification of Novel Regulators of Plant Transpiration by Large-Scale Thermal Imaging Screening in Helianthus Annuus at JoVE.com

Identification of Novel Regulators of Plant Transpiration by Large-Scale Thermal Imaging Screening in Helianthus Annuus

Мы предоставляем метод для выявления модуляторов перепирания листа путем масштабного скрининга сложной библиотеки.

Идентификация новых регуляторов транспирации растений путем масштабного теплового скрининга в Helianthus Annuus

Plant adaptation to biotic and abiotic stresses is governed by a variety of factors, among which the regulation of stomatal aperture in response to water ...

Этот протокол использует тепловизионные изображения для выявления новых соединений, способных регулировать транспирацию растений. Этот метод является универсальным в отношении видов растений, которые могут быть проверены, характер соединения, и тип изображения. Чтобы настроить растения для выращивания, сначала добавьте слой тонкого вермикулита толщиной в четыре сантиметра в стандартные 10 на 20 дюймов растительные подносы без отверстий и поместите держатели семян на два сантиметра друг от друга в лотках.Заполните держатели семян вермикулитом и поместите одно семя подсолнечника указал конец вниз в каждом держателе так, что половина семян остается открытым. Когда все семена были покрыты, накройте их дополнительными двумя сантиметрами тонкого вермикулита и тумана водой сверху. Через час накройте лотки крышками и поместите растения в камеру роста в теплице.Для настройки системы гидропоники заполните контейнер соответствующего размера, пригодный для выращивания растений гидропонно с дистиллированной водой, и добавьте общие гидропоники удобрений, как указано производителем. Затем используйте воздушные и водяные насосы, чтобы аэрировать полученный раствор гидропоники с постоянным движением. Для подготовки гидропоники плавающие, вырезать лист толщиной два сантиметра расширенной полистирола пены до размеров контейнера и использовать дровяной инструмент, чтобы сделать один-два сантиметра диаметром отверстия в пене.Затем поместите плавающие в систему гидропоники. Через пять дней после посадки аккуратно вытащите саженцы из вермикулита. Немедленно поместите саженцы в контейнер с водой на 30 минут, чтобы удалить избыток вермикулита и смягчить оставшиеся перикарпы.Когда появляются первичные корни видны, удалить перикарпы вручную по мере необходимости. Перенесите саженцы в держатели семян в подготовленные пенопластовые поплавки полистирола в гидропоники. Выращиваем растения в гидропонике в течение двух дней.Пусть химические вещества из небольшой библиотеки соединения оттепели при комнатной температуре. Этикетка шесть capless два миллилитров микротрубки для негативного лечения контроля, три трубки для лечения ABA, и окончательные 60 труб для анализа последствий 20 химических веществ, представляющих интерес в тройной. Добавьте 10 микролитров каждого химического вещества в каждую из пробирок, 10 микролитров 10 миллимолярной ABA и диметилового сульфоксида в три трубки ABA и 10 микролитров диметилсульфоксида в шесть контрольных труб.Затем тщательно перемешайте 990 микролитров 10 миллимолярной гидроксида калия МЕС в каждую трубку. Поместите трубки в трубчатую стойку с положительным и отрицательным контролем и экспериментальными трубками, равномерно распределенными внутри стойки, чтобы учесть предвзятость, связанную с положением. Чтобы настроить тепловизионную камеру, сначала установите камеру на копировальный стенд и соедините все кабели с ноутбуком.Включите камеру перед включением ноутбука и откройте программное обеспечение для тепловизионного анализа. Чтобы настроить параметры записи, переверните мышь над кнопкой Запись, чтобы выбрать значок гаечного ключа под настройками записи и выбрать соответствующий режим записи и параметры. Для обработки саженцев осторожно поднимите держатель семян и быстро окуните корень в неглубокую тарелку, содержащую воду.Вырезать основной корень каждого рассады под водой от 0,8 до одного сантиметра под наиболее базальный конец держателя семян, чтобы предотвратить выброс и вставить свежесрезанные растения в одну трубку химических веществ. Когда все саженцы были переданы, поместите растения под тепловизионную камеру и подтвердите, что все растения находятся в поле зрения камеры. Чтобы сфокусировать камеру на поверхности котилендонов, нажмите Control Alt A и нажмите Запись фильма.Откроется новое окно, подтверждающее запись. Через один-два часа прекратите запись. Для анализа данных откройте правильные файлы seq и приохтять фильм.Нажмите добавить область курсора измерения, представляющий интерес три на три пикселя значок и переместить мышь над центром cotyledon первого растения. Слева нажмите на изображение, чтобы обозначить котилендон. Таким же образом наклеить этикетку на второй котилендон первого растения.Когда все растения были помечены двумя курсорами, нажмите значок редактирования, представляющие интерес, и нажмите кнопку "Удерживайте" и прокрутите, чтобы выбрать все области, представляющие интерес. Затем переверните мышь над значок статистического зрителя и выберите временной участок. Откроется новое окно.Запустите фильм, график заполнится данными. Затем в окне графика щелкните двойную стрелку, чтобы открыть новое меню, и нажмите значок сохранения, чтобы сохранить данные. Использование красного красителя эритрозина B демонстрирует способность химических веществ быть заметно всасывается через корень разреза в cotyledons саженца подсолнечника в течение 10 минут.При лечении растений АБА в течение 30 минут в котилендонах подсолнечника обнаруживается повышение температуры листьев, что связано со снижением стоматальной диафрагмы и стоматальной проводимости. Кроме того, повышенная температура листвы наблюдается через 15 минут после обработки 10 микромоляной ABA и через 20 минут после обработки пятью микромоляными ABA, демонстрирующими, что измерение температуры листьев тепловизора является хорошим прокси для измерения стоматальной диафрагмы и проводимости. В ходе этого репрезентативного эксперимента стандартная статистическая обработка на основе оценки позволяет идентифицировать химические вещества, которые способствуют закрытию или открытию стоматальной системы.Для измерения влияния соединений на транспирацию важно выращивать растения в оптимальных условиях света, влажности и температуры. Этот протокол может быть применен к большинству дикотов. Он также может быть использован для оценки влияния новых соединений на фотосинтетические характеристики, например, путем измерения флуоресценции хлорофилла.

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Biology

Identification of Novel Regulators of Plant Transpiration by Large-Scale Thermal Imaging Screening in Helianthus Annuus

Plant Biology

Plant Structure, Growth, and Nutrition

SCIENTISTS IN ACTION

Large-Scale Screens of Metagenomic Libraries

Крупномасштабная Экраны метагеномных библиотеки

Metagenomic libraries archive large fragments of contiguous genomic sequences from microorganisms without requiring prior cultivation.  Generating a ...

Batch Immunostaining for Large-Scale Protein Detection in the Whole Monkey Brain

Пакетный Иммуноокрашивание крупномасштабных белка Обнаружение в весь мозг обезьяны

Immunohistochemistry (IHC) is one of the most widely used laboratory techniques for the detection of target proteins in situ. Questions concerning the ...

Identification of Growth Inhibition Phenotypes Induced by Expression of Bacterial Type III Effectors in Yeast

Идентификация фенотипов ингибирование роста индуцированной экспрессии бактериального типа создания эффектов III в Дрожжи

Many Gram-negative pathogenic bacteria use a type III secretion system to translocate a suite of effector proteins into the cytosol of host cells. Within ...

Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen

Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen

Крупномасштабные данио рерио основе В естественных условиях Малый экран Молекула

Given their small embryo size, rapid development, transparency, fecundity, and numerous molecular, morphological and physiological similarities to ...

Fluorescence-microscopy Screening and Next-generation Sequencing: Useful Tools for the Identification of Genes Involved in Organelle Integrity

Флуоресценции микроскопии Скрининг и следующего поколения секвенирования: Полезные инструменты для идентификации генов, вовлеченных в органелл Integrity

This protocol describes a fluorescence microscope-based screening of Arabidopsis seedlings and describes how to map recessive mutations that alter the ...

A Quantitative Assay to Study Protein:DNA Interactions, Discover Transcriptional Regulators of Gene Expression, and Identify Novel Anti-tumor Agents

Количественный Анализ по изучению белок: ДНК взаимодействий, Discover транскрипционных регуляторов экспрессии генов, и идентифицировать новые противоопухолевых средств

Many DNA-binding assays such as electrophoretic mobility shift assays (EMSA), chemiluminescent assays, chromatin immunoprecipitation (ChIP)-based assays, ...

Infinium Assay for Large-scale SNP Genotyping Applications

Infinium Анализ на крупномасштабных SNP генотипирования приложений

Genotyping variants in the human genome has proven to be an efficient method to identify genetic associations with phenotypes. The distribution of ...

Identification of Post-translational Modifications of Plant Protein Complexes

Идентификация пост-трансляционных модификаций растительных белковых комплексов

Plants adapt quickly to changing environments due to elaborate perception and signaling systems. During pathogen attack, plants rapidly respond to ...

A Strategy for Sensitive, Large Scale Quantitative Metabolomics

Стратегия для чувствительной, крупномасштабного Количественные Metabolomics

Metabolite profiling has been a valuable asset in the study of metabolism in health and disease. However, current platforms have different limiting ...

siRNA Screening to Identify Ubiquitin and Ubiquitin-like System Regulators of Biological Pathways in Cultured Mammalian Cells

миРНК Скрининг для идентификации Убиквитин и Убиквитин-подобной системе регуляторов биологических путей в культивируемых клетках млекопитающих

Post-translational modification of proteins with ubiquitin and ubiquitin-like molecules (UBLs) is emerging as a dynamic cellular signaling network that ...