Name: identification of novel regulators of plant transpiration by large-scale thermal imaging screening in helianthus annuus
Uploaded: 2020-01-30T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification of Novel Regulators of Plant Transpiration by Large-Scale Thermal Imaging Screening in Helianthus Annuus at JoVE.com

Çalışma, Pomona College Start-up Funds ve Hirsch Research Inisiation Grants Fund (FJ'ye) ve Yıldız Yaz Araştırma Görevlisi Programı (KG) aracılığıyla Pomona College Moleküler Biyoloji Programı tarafından desteklendi.

1. Bitkilerin yetiştirimi
<ol><li>Standart 10 inç x 20 in. (254 mm x 501 mm) deliksiz bitki tepsilerine 4 cm kalınlığında ince vermikülit tabakası ekleyin.</li>
	<li>Tohum tutucuları yerleştirin (bkz. Malzemeler Tablosu) 2 cm arayla bitki tepsilerine.</li>
	<li>Tohum tutucuları vermikülitle doldurun.</li>
	<li>Her tohum tutucu aşağı sivri ucu ile bir ayçiçeği tohumu yerleştirin, böylece tohum yarısı maruz kalır aşağı iterek. NOT: Ayçiçeği tohumu asimetriktir ve rakülin ...

<ol>
	<li>Basu, S., Ramegowda, V., Kumar, A., Pereira, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plant+adaptation+to+drought+stress.">Plant adaptation to drought stress.</a> F1000Research. 5, (2016).</li><li>McLachlan, D. H., Kopischke, M., Robatzek, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gate+control:+guard+cell+regulation+by+microbial+stress.">Gate control: guard cell regulation by microbial stress.</a> The New Phytologist. 203 (4), 1049-1063 (2014).</li><li>Leung, J., Bazihizina, N., Mancuso, S., Valon, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revisiting+the+Plant's+Dilemma.">Revisiting the Plant's Dilemma.</a> Molecular Plant. 9 (1), 7-9 (2016).</li><li>Macarron, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+high-throughput+screening+in+biomedical+research.">Impact of high-throughput screening in biomedical research.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 10 (3), 188-195 (2011).</li><li>Wigglesworth, M. J., Murray, D. C., Blackett, C. J., Kossenjans, M., Nissink, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increasing+the+delivery+of+next+generation+therapeutics+from+high+throughput+screening+libraries.">Increasing the delivery of next generation therapeutics from high throughput screening libraries.</a> Current Opinion in Chemical Biology. 26, 104-110 (2015).</li><li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+genetic+interrogation+of+natural+variation+uncovers+a+molecule+that+is+glycoactivated.">Chemical genetic interrogation of natural variation uncovers a molecule that is glycoactivated.</a> Nature Chemical Biology. 3 (11), 716-721 (2007).</li><li>Park, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abscisic+acid+inhibits+type+2C+protein+phosphatases+via+the+PYR/PYL+family+of+START+proteins.">Abscisic acid inhibits type 2C protein phosphatases via the PYR/PYL family of START proteins.</a> Science. 324 (5930), 1068-1071 (2009).</li><li>Ma, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulators+of+PP2C+phosphatase+activity+function+as+abscisic+acid+sensors.">Regulators of PP2C phosphatase activity function as abscisic acid sensors.</a> Science. 324 (5930), 1064-1068 (2009).</li><li>Cao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+ABA-mimicking+ligand+that+reduces+water+loss+and+promotes+drought+resistance+in+plants.">An ABA-mimicking ligand that reduces water loss and promotes drought resistance in plants.</a> Cell Research. 23 (8), 1043-1054 (2013).</li><li>Okamoto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+dimeric+ABA+receptors+elicits+guard+cell+closure,+ABA-regulated+gene+expression,+and+drought+tolerance.">Activation of dimeric ABA receptors elicits guard cell closure, ABA-regulated gene expression, and drought tolerance.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (29), 12132-12137 (2013).</li><li>Rodriguez, P. L., Lozano-Juste, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unnatural+agrochemical+ligands+for+engineered+abscisic+acid+receptors.">Unnatural agrochemical ligands for engineered abscisic acid receptors.</a> Trends in Plant Science. 20 (6), 330-332 (2015).</li><li>Kim, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+genetics+reveals+negative+regulation+of+abscisic+acid+signaling+by+a+plant+immune+response+pathway.">Chemical genetics reveals negative regulation of abscisic acid signaling by a plant immune response pathway.</a> Current Biology. 21 (11), 990-997 (2011).</li><li>Ito, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Abscisic+Acid+Antagonists+Identified+with+Chemical+Array+Screening.">Novel Abscisic Acid Antagonists Identified with Chemical Array Screening.</a> ChemBioChem. 16 (17), 2471-2478 (2015).</li><li>Ye, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Chemical+Inhibitor+of+ABA+Signaling+Targets+All+ABA+Receptors.">A Novel Chemical Inhibitor of ABA Signaling Targets All ABA Receptors.</a> Plant Physiology. 173 (4), 2356-2369 (2017).</li><li>Takeuchi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designed+abscisic+acid+analogs+as+antagonists+of+PYL-PP2C+receptor+interactions.">Designed abscisic acid analogs as antagonists of PYL-PP2C receptor interactions.</a> Nature Chemical Biology. 10 (6), 477-482 (2014).</li><li>Rauf, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+in+modification+of+sunflower+oil+to+expand+its+industrial+value.">Progress in modification of sunflower oil to expand its industrial value.</a> Journal of the Science of Food and Agriculture. 97 (7), 1997-2006 (2017).</li><li>Caraus, I., Alsuwailem, A. A., Nadon, R., Makarenkov, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detecting+and+overcoming+systematic+bias+in+high-throughput+screening+technologies:+a+comprehensive+review+of+practical+issues+and+methodological+solutions.">Detecting and overcoming systematic bias in high-throughput screening technologies: a comprehensive review of practical issues and methodological solutions.</a> Briefings in Bioinformatics. 16 (6), 974-986 (2015).</li><li>Costa, J. M., Grant, O. M., Chaves, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermography+to+explore+plant-environment+interactions.">Thermography to explore plant-environment interactions.</a> Journal of Experimental Botany. 64 (13), 3937-3949 (2013).</li><li>Merlot, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+infrared+thermal+imaging+to+isolate+Arabidopsis+mutants+defective+in+stomatal+regulation.">Use of infrared thermal imaging to isolate Arabidopsis mutants defective in stomatal regulation.</a> The Plant Journal. 30 (5), 601-609 (2002).</li></ol>

Belirli bir günde test edilebilen bileşiklerin sayısı çoğunlukla (i) bitkileri büyütmek ve ekranı gerçekleştirmek için mevcut olan çevre kontrollü alana ve (ii) protokolün 6. İstatistiksel tedavi den sonra sonuçların yorumlanmasını pekiştirmek için üç deneysel kopya kullanılmasını öneriyoruz. Tipik bir günde, bir ila iki kişi örneğin [60 kimyasallar + 6 negatif (DMSO) kontrolleri + 3 pozitif (ABA) kontrolleri] sabah, öğle ve öğleden sonra] test ederek zorlanmadan triplicates 60 bileşi...

Bitkilerde stres toleransı moleküler, hücresel, gelişimsel ve fizyolojik özellikleri ve mekanizmaları çeşitli etkilenmiştir polijenik bir özelliktir1. Dalgalı bir ortamda bitkiler sürekli yeterli su muhafaza ve patojen invazyonu önlerken karbon için fotosentetik talebi dengelemek için stomatal hareketlerini modüle etmek gerekir2; ancak, bu trade-off "kararlar" tarafından yapılan mekanizmalar kötü anlaşılmaktadır3. Biyoaktif moleküllerin bitkilere tanıtılması fizyolojilerini modüle edebilir ve yeni düzenleme mekanizmalarının araştırılmasına yardımcı olabilir.
Küçük moleküllerin büyük ölçekli tarama kısa bir süre içinde moleküllerin binlerce yüzlerce fizyolojik etkilerini test etmek için anti-kanser ilaç keşif ve farmakolojik tahliller kullanılan etkili birstratejidir 4,5. Bitki biyolojisinde, yüksek iş bölümü taraması örneğin sentetik molekül pyrabactin6'nın belirlenmesinde ve abscisik asit (ABA)7,8'inuzun zamandır aranan reseptörünün keşfinde etkinliğini göstermiştir. O zamandan beri, ABA reseptörlerinin agonistleri ve antagonistleri ve ABA indüklenebilir muhabir genlerin ekspresyonunu modüle edebilecek küçük moleküller tespit edilmiştir9,10,11,12,13,14,15. Stomatal diyafram ı modüle edilebilen küçük bileşikleri tanımlamak için mevcut olan yüksek iş gücü tarama yaklaşımlarının bazı sakıncaları vardır: (i) ABA sinyal yolu etrafında dönen protokoller yeni ABA-bağımsız mekanizmaların tanımlanmasını engelleyebilir ve (ii) biyoaktif küçük moleküllerin tanımlanmasında kullanılan in vivo stratejileri öncelikle tohum çimlenmesi veya tohumlama perling büyümesi üzerindeki fizyolojik etkilerine dayanır, bitki transpirasyonun düzenlenmesine değil.
Ayrıca, biyoaktif moleküller ile bitkilerin tedavisinde birçok yolu olmakla birlikte, bunların çoğu iyi stomatal hareketin büyük ölçekli bir çalışma için uygun değildir. Kısaca, üç en yaygın teknikleri püskürtme veya daldırma, kök sisteminin tedavisi ve kök sulama ile foliar uygulamasıdır. Yaprak yüzeyinde damlacıkların varlığı büyük ölçekli veri toplama ile engel olduğundan Foliar uygulaması stomatal diyafram ölçmek için en yaygın ve hızlı metodolojileri ile uyumlu değildir. Kök sulamanın başlıca sınırlamaları büyük numune hacmi gereksinimleri, bileşiklerin rizosferdeki elementler tarafından potansiyel olarak tutulması ve aktif kök alımına duyulan güvendir.
Burada, mutlaka ABA içermeyen bitki transpirasyon unu düzenleyen yeni bileşikler belirlemek için büyük ölçekli bir yöntem salıyoruz- veya bilinen kuraklık duyarlı mekanizmalar ve bitkilerin verimli ve güvenilir tedavi sağlar. Bu sistemde Helianthus annuus bitkileri, hidroponik olarak yetiştirilen fidelerin ana kökünü kesmeve kesme alanını numune çözeltisine daldırmaktan oluşan bir kök besleme yaklaşımı kullanılarak tedavi edilir. Tedavi edildikten sonra, bitkilerin transpirasyonu üzerinde her bileşiğin etkisi kızılötesi termal görüntüleme kamerası kullanılarak ölçülür. Yaprak yüzey sıcaklığının önemli bir belirleyicisi yapraktan buharlaşma oranı olduğundan, termal görüntüleme verileri stomatal iletkenlik ile doğrudan ilişkili olabilir. Kimyasal arıtma sonrasında foliar sıcaklığındaki göreceli değişim böylece bitki transpirasyon ölçmek için doğrudan bir araç sağlar.
H. annuus dünyanın en büyük beş yağlı tohum bitkileri biridir16 ve keşifler doğrudan bu bitki üzerinde yapılan teknolojinin gelecekteki transferleri kolaylaştırabilir. Buna ek olarak, H. annuus fideleri büyük ve düz cotyledons yanı sıra kalın bir birincil kök, bu protokolün geliştirilmesi için ideal olan var. Ancak, bu yöntem kolayca diğer bitkiler ve bileşiklerin çeşitli adapte edilebilir.
Bu protokol, stomatal kapanmayı tetikleyebilen molekülleri etkili bir şekilde tanımlamak veya stomatal açıklığı teşvik etmek için kullanılabilir, bu da stomatal iletkenliği ve bitki adaptasyonlarını düzenleyen sinyalleri anlamak için önemli sonuçlar doğurabilir. strese neden olabilir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1020 plastic growing trays without drain holes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Standard 10 x 20 inch trays</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.0 mL microtubes, capless</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>22-283NC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Abscisic acid (ABA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A1049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Air pump</td>
			<td>Active Aqua</td>
			<td>AAPA7.8L</td>
			<td>2 Outlets, 3W, 7.8 L/min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Airstones</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemical compound library</td>
			<td>MicroSource Discovery</td>
			<td></td>
			<td>Natural Product Collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Creative Versa-Tool (wood burning tool)</td>
			<td>Nasco</td>
			<td>9724549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylsulfoxide (DMSO), plant cell culture tested</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D4540</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dwarf Sunspot Sunflower seeds</td>
			<td>Outsidepride.com</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erythrosin B</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>200964</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydroponics fertilizer set (FloraBloom, FloraGrow, FloraMicro)</td>
			<td>General Hydroponics</td>
			<td>GL51GH1421.31.11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes Delicate Task Wipers</td>
			<td>Kimberly-Clark Professional</td>
			<td>34155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laptop</td>
			<td>Dell</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MES hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M2933</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microdissection scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium hydroxide (KOH)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5958</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ResearchIR Software</td>
			<td>FLIR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>R-Tech Rigid Polystyrene Foam Board</td>
			<td>Insulfoam</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seedholders</td>
			<td>Araponics</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super Tub (plastic utility tub)</td>
			<td>Maccourt</td>
			<td>ST3608</td>
			<td>36 x 24 x 8 inch tub used for hydroponics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T450sc LWIR (Long-Wave Infrared) Handheld Thermal Imaging Camera</td>
			<td>FLIR</td>
			<td>FLIR-T62101</td>
			<td>Comes with required charging cable and USB cable needed to connect to laptop</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vermiculite</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water filter</td>
			<td>SunSun</td>
			<td>HW-304B Pro Canister Filter</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification of novel regulators of plant transpiration by large-scale thermal imaging screening in helianthus annuus

Biyotik ve abiyotik streslere bitki adaptasyonu çeşitli faktörler tarafından yönetilir, aralarında su açığı veya patojenlere yanıt olarak stomatal diyafram düzenlenmesi önemli bir rol oynar. Bu nedenle stomatal hareketi düzenleyen küçük moleküllerin tanımlanması, bitkilerin çevrelerine uyum sağlamalarının fizyolojik temelini anlamalarına katkıda bulunabilir. Stomatal hareketin düzenleyicilerini tanımlamak için kullanılan büyük ölçekli tarama yaklaşımlarının potansiyel sınırlamaları vardır: bazıları abscisik asit (ABA) hormon sinyal yolu üzerinde yoğun olarak dayanır, bu nedenle ABA-bağımsız mekanizmalar hariç, diğerleri ise bitki büyümesi ve gelişimi gibi dolaylı, uzun vadeli fizyolojik etkilerin gözlemine dayanır. Burada sunulan tarama yöntemi, bitkilerin kimyasal bir kütüphane ile büyük ölçekli tedavi termal görüntüleme ile transpirasyon doğrudan bir nicelik selektib ile birleştiğinde sağlar. Yaprak yüzeyinin soğuması ile transpirasyon yoluyla suyun buharlaşması ndan, termal görüntüleme zaman içinde stomatal iletkenlik değişiklikleri araştırmak için non-invaziv bir yaklaşım sağlar. Bu protokolde Helianthus annuus fideleri hidroponik olarak yetiştirilir ve daha sonra kök besleme ile tedavi edilir, birincil kök kesilir ve test edilen kimyasal içine batırılır. Zaman içindeki kotoledoner sıcaklık değişikliklerinin istatistiksel analizini takip eden termal görüntüleme, stomatal diyafram açıklığını modüle eden biyoaktif moleküllerin tanımlanmasına olanak sağlar. Kavram kanıtı deneylerimiz, bir kimyasalın kesik kökten ayçiçeği fidesinin karyolasına 10 dakika içinde taşınabileceğini göstermektedir. Buna ek olarak, bitkiler olumlu bir kontrol olarak ABA ile tedavi edildiğinde, yaprak yüzey sıcaklığında bir artış birkaç dakika içinde tespit edilebilir. Böylece yöntemimiz stomatal diyafram açıklığını düzenleyen yeni moleküllerin etkin ve hızlı bir şekilde tanımlanmasını sağlar.

Kırmızı boya Eritrosin B (0.8 kDa) kullanılarak yapılan bir deney, kimyasalların 10 dakika içinde bir ayçiçeği fidesinin karyolalarına kesilmiş bir kök yoluyla gözle görülür bir şekilde emilme yeteneğini göstermektedir(Şekil 1).
Bitkiler ABA ile tedavi edildiğinde, birkaç dakika içinde ayçiçeği kotonlarında yaprak sıcaklığında bir artış tespit edilir. Yaprak sıcakl...

Watch this Scientific Journal Video about Identification of Novel Regulators of Plant Transpiration by Large-Scale Thermal Imaging Screening in Helianthus Annuus at JoVE.com

Identification of Novel Regulators of Plant Transpiration by Large-Scale Thermal Imaging Screening in Helianthus Annuus

Bir bileşik kitaplığın büyük ölçekli taraması ile foliar transpirasyon modülatörlerini tanımlamak için bir yöntem salıyoruz.

Helianthus Annuus'ta Büyük Ölçekli Termal Görüntüleme Taraması ile Bitki Transpirasyonunun Yeni Regülatörlerinin Belirlenmesi

Plant adaptation to biotic and abiotic stresses is governed by a variety of factors, among which the regulation of stomatal aperture in response to water ...

Bu protokol, bitki transpirasyonunu düzenleyebilen yeni bileşikleri belirlemek için termal görüntüleme kullanır. Bu teknik, test edilebilen bitki türleri, bileşiğin doğası ve görüntüleme türü açısından çok yönlüdür. Ekimiçin bitkiler kurmak için, ilk standart 10 tarafından 20 inç bitki tepsileri hiçbir delik ile ince vermikülit dört santimetre kalınlığında tabaka ekleyin ve tepsiler arasında iki santimetre ayrı tohum tutucuları yerleştirin.Vermikülit ile tohum tutucuları doldurun ve tohum yarısı maruz kalır, böylece her tutucu içine sivri bir ayçiçeği tohumu aşağı yerleştirin. Tüm tohumlar kaplandığında, üstten su ile ince vermikülit ve sis ek iki santimetre ile kaplayın. Bir saat sonra, kapaklar ile tepsiler kapağı ve bir sera bir büyüme odasında bitkiler yerleştirin.Hidroponik sistemi kurmak için, distile su ile hidroponik büyüyen bitkiler için uygun bir uygun büyüklükte konteyner doldurun ve üretici tarafından belirtildiği gibi genel hydroponics gübre ekleyin. Daha sonra sürekli hareket ile ortaya çıkan hidroponik çözeltisi havalandırmak için hava ve su pompaları kullanın. Hydroponics floaters hazırlamak için, konteyner boyutlarına iki santimetre kalınlığında genişletilmiş polistiren köpük bir levha kesilmiş ve köpük bir ila iki santimetre çapında delikler yapmak için ahşap yakma aracı kullanın.Sonra yüzenleri hidroponik sisteme yerleştirin. Dikimden beş gün sonra, fideler vermikülitin dışına hafifçe çekin. Hemen fazla vermikülit kaldırmak ve kalan perikarps yumuşatmak için 30 dakika su bir kap ta fideler yerleştirin.Ortaya çıkan birincil kökler görünür olduğunda, gerektiğinde perikarps elle kaldırın. Tohum tutucular içindeki fideleri hidroponik sistemde hazırlanmış polistiren köpük şamandıralara aktarın. Iki gün boyunca hidroponik bitkiler büyümek.Küçük bileşik kütüphaneden kimyasallar oda sıcaklığında çözülsün. Negatif kontrol tedavisi için altı kapaksız iki mililitre mikrotüpler, ABA tedavisi için üç tüp ve triplicate ilgi 20 kimyasalların etkilerinin analizi için son 60 tüpler etiket. Test tüplerinin her birine 10 mikrolitre, üç ABA tüpüne 10 mikrolitre, üç ABA tüpüne 10 mikrolitre ve altı kontrol tüpüne 10 mikrolitre dimetil sülfoksit ekleyin.Daha sonra her tüpe 990 mikrolitre 10 milimolar MES potasyum hidroksit karıştırın. Tüpleri, pozisyonla ilgili önyargıyı hesaba katmak için raf içinde eşit olarak dağıtılan pozitif ve negatif kontrol ve deneysel tüplerle bir tüp rafına yerleştirin. Termal görüntüleme kamerasını kurmak için önce kamerayı bir fotokopi standına monte edin ve tüm kabloları dizüstü bilgisayara bağlayın.Dizüstü bilgisayarı açmadan önce kamerayı açın ve termal görüntüleme analiz yazılımını açın. Kayıt parametrelerini ayarlamak için, Kayıt Ayarları altında anahtar simgesinin seçilmesine izin vermek için fareyi Kayıt düğmesinin üzerine yuvarlayın ve uygun kayıt modunu ve seçeneklerini seçin. Fidelerin tedavisi için, dikkatlice tohum tutucu yutun ve hızla su içeren sığ çanak içine kök daldırma.Her fidenin ana kökünü, tohum tutucunun en bazal ucunun 0,8 ila bir santimetre altında kesin ve taze kesilmiş bitkiyi bir kimyasal tüpe yerleştirin. Tüm fideler aktarıldığında, bitkileri termal görüntüleme kamerasının altına yerleştirin ve tüm bitkilerin kameranın görüş alanı içinde olduğunu doğrulayın. Kamerayı cotyledonların yüzeyine odaklamak için Control Alt A tuşuna basın ve Film Kaydet'e tıklayın.Kaydı onaylayan yeni bir pencere açılır. 1-2 saat sonra kaydı durdurun. Veri analizi için doğru seq dosyalarını açın ve filmi duraklatın.İlgi alanı üçe üç piksel simgesinin bir ölçüm imleci bölgesini tıklatın ve fareyi ilk bitkinin bir karyolasının ortasına taşıyın. Cotyledon'u etiketlemek için resmin üzerine sol tıklayın. İlk bitkinin ikinci karonunu aynı şekilde etiketlayın.Tüm bitkiler iki imleçle etiketlendiğinde, ilgi alanı simgesinin düzenleme bölgelerini tıklatın ve sol tıklatın basılı tutun ve tüm ilgi çekici bölgeleri seçmek için kaydırın. Ardından, fareyi istatistik görüntüleyici simgesinin üzerine yuvarlayın ve zamansal çizimi seçin. Yeni bir pencere açılacak.Filmi çalıştırın, bir grafik verilerle dolacak. Ardından grafik penceresinde, yeni bir menü açmak için çift oku tıklatın ve verileri kaydetmek için kaydet simgesini tıklatın. Kırmızı boya eritrosin B kullanımı kimyasalların gözle görülür bir kesilmiş kök yoluyla bir ayçiçeği fidesi cotyledons içine 10 dakika içinde absorbe yeteneğini göstermektedir.Bitkiler ABA ile tedavi edildiğinde, stomatal diyafram azalması ve stomatal iletkenlik ile ilişkili 30 dakika içinde ayçiçeği kotoledonlarında yaprak sıcaklığında bir artış tespit edilir. Buna ek olarak, 10 mikromolar ABA ile tedaviden 15 dakika sonra, beş mikromolar ABA ile tedaviden 20 dakika sonra ısıl görüntüleme ile yaprak sıcaklığının ölçülmesinin stomatal diyafram ve iletkenliğin ölçülmesi için iyi bir proxy olduğunu gösteren foliar sıcaklığının arttığı görülmektedir. Bu temsili deneyde, standart puan tabanlı istatistiksel tedavi, stomatal kapanma veya açılması teşvik kimyasalların tanımlanmasına olanak sağlar.Bileşiklerin transpirasyon üzerindeki etkilerini ölçmek için, bitkilerin en uygun ışık, nem ve sıcaklık koşullarında yetişmeleri önemlidir. Bu protokol çoğu dicots uygulanabilir. Ayrıca fotosentetik performans yeni bileşiklerin etkisini değerlendirmek için kullanılabilir, örneğin klorofil floresan ölçerek.

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Biology

Identification of Novel Regulators of Plant Transpiration by Large-Scale Thermal Imaging Screening in Helianthus Annuus

Plant Biology

Plant Structure, Growth, and Nutrition

SCIENTISTS IN ACTION

Large-Scale Screens of Metagenomic Libraries

Metagenomic Kütüphaneler Büyük Ölçekli Ekranlar

Metagenomic libraries archive large fragments of contiguous genomic sequences from microorganisms without requiring prior cultivation.  Generating a ...

Batch Immunostaining for Large-Scale Protein Detection in the Whole Monkey Brain

Tüm Maymun Beyin Büyük Ölçekli Protein Algılama için Toplu immün

Immunohistochemistry (IHC) is one of the most widely used laboratory techniques for the detection of target proteins in situ. Questions concerning the ...

Identification of Growth Inhibition Phenotypes Induced by Expression of Bacterial Type III Effectors in Yeast

Büyüme inhibisyonu fenotipleri tanımlanması Mayalarda bakteriyel Tip III Efektör İfade İndüklenmiş

Many Gram-negative pathogenic bacteria use a type III secretion system to translocate a suite of effector proteins into the cytosol of host cells. Within ...

Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen

Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen

Büyük Ölçekli Zebra balığı Tabanlı In vivo Küçük Molekül Ekran

Given their small embryo size, rapid development, transparency, fecundity, and numerous molecular, morphological and physiological similarities to ...

Fluorescence-microscopy Screening and Next-generation Sequencing: Useful Tools for the Identification of Genes Involved in Organelle Integrity

Floresans-mikroskopi Tarama ve nesil Sekanslama: organel Bütünlüğü ile ilgilendim Genlerin belirlenmesi için Faydalı Araçlar

This protocol describes a fluorescence microscope-based screening of Arabidopsis seedlings and describes how to map recessive mutations that alter the ...

A Quantitative Assay to Study Protein:DNA Interactions, Discover Transcriptional Regulators of Gene Expression, and Identify Novel Anti-tumor Agents

Gen İfadesi DNA etkileşimleri, Discover Transkripsiyonlu Regülatörleri ve Roman Anti-tümör Ajanlar tanımlayın: Protein Eğitim için Kantitatif Testi

Many DNA-binding assays such as electrophoretic mobility shift assays (EMSA), chemiluminescent assays, chromatin immunoprecipitation (ChIP)-based assays, ...

Infinium Assay for Large-scale SNP Genotyping Applications

Büyük ölçekli SNP Genotiplendirme Uygulamaları için infinium Tahlili

Genotyping variants in the human genome has proven to be an efficient method to identify genetic associations with phenotypes. The distribution of ...

Identification of Post-translational Modifications of Plant Protein Complexes

Plant protein kompleksleri, çevirim sonrası değişikliklerin belirlenmesi

Plants adapt quickly to changing environments due to elaborate perception and signaling systems. During pathogen attack, plants rapidly respond to ...

A Strategy for Sensitive, Large Scale Quantitative Metabolomics

Hassas, Büyük Ölçekli Kantitatif metabolomik için bir strateji

Metabolite profiling has been a valuable asset in the study of metabolism in health and disease. However, current platforms have different limiting ...

siRNA Screening to Identify Ubiquitin and Ubiquitin-like System Regulators of Biological Pathways in Cultured Mammalian Cells

Kültür Memeli Hücrelerde Biyolojik tanımında ubikitin ve Ubiquitin benzeri Sistemi Regülatörleri tanımak siRNA Eleme

Post-translational modification of proteins with ubiquitin and ubiquitin-like molecules (UBLs) is emerging as a dynamic cellular signaling network that ...