Name: nucleofection and in vivo propagation of chicken eimeria parasites
Uploaded: 2020-02-14T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Nucleofection and In Vivo Propagation of Chicken Eimeria Parasites at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af Kinas nationale centrale forsknings- og udviklingsprogram (2017YFD0501200) og National Natural Science Foundation of China (31572507, 31772728 og 31873007).

Kyllinger til alle dyreforsøg blev opstaldet og vedligeholdt i henhold til China Agricultural University Institutional Animal Care and Use Committee retningslinjer og fulgte de internationale vejledende principper for biomedicinsk forskning, der involverer dyr. Forsøgene blev godkendt af Beijing administration udvalg af laboratoriedyr.
1. Udvinding og rensning af sporozoitter af Eimeria spp. (f.eks. 
<ol><li>Frigivelse af sporocyster<ol>
<li>Centrifuge 1 x 107s...

<ol>
	<li>Suo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+efficacy+and+economic+benefits+of+Supercox,+a+live+anticoccidial+vaccine+in+a+commercial+trial+in+broiler+chickens+in+China.">The efficacy and economic benefits of Supercox, a live anticoccidial vaccine in a commercial trial in broiler chickens in China.</a> Veterinary Parasitology. 142 (1-2), 63-70 (2006).</li><li>Kim, K., Soldati, D., Boothroyd, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+replacement+in+Toxoplasma+gondii+with+chloramphenicol+acetyltransferase+as+selectable+marker.">Gene replacement in Toxoplasma gondii with chloramphenicol acetyltransferase as selectable marker.</a> Science. 262 (5135), 911-914 (1993).</li><li>Sibley, L. D., Messina, M., Niesman, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+DNA+transformation+in+the+obligate+intracellular+parasite+Toxoplasma+gondii+by+complementation+of+tryptophan+auxotrophy.">Stable DNA transformation in the obligate intracellular parasite Toxoplasma gondii by complementation of tryptophan auxotrophy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (12), 5508-5512 (1994).</li><li>Donald, R. G., Roos, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+molecular+transformation+of+Toxoplasma+gondii:+a+selectable+dihydrofolate+reductase-thymidylate+synthase+marker+based+on+drug-resistance+mutations+in+malaria.">Stable molecular transformation of Toxoplasma gondii: a selectable dihydrofolate reductase-thymidylate synthase marker based on drug-resistance mutations in malaria.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 90 (24), 11703-11707 (1993).</li><li>Soldati, D., Boothroyd, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+transfection+and+expression+in+the+obligate+intracellular+parasite+Toxoplasma+gondii.">Transient transfection and expression in the obligate intracellular parasite Toxoplasma gondii.</a> Science. 260 (5106), 349-352 (1993).</li><li>Goonewardene, R., Daily, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfection+of+the+malaria+parasite+and+expression+of+firefly+luciferase.">Transfection of the malaria parasite and expression of firefly luciferase.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 90 (11), 5234-5236 (1993).</li><li>Kelleher, M., Tomley, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+expression+of+beta-galactosidase+in+differentiating+sporozoites+of+Eimeria+tenella.">Transient expression of beta-galactosidase in differentiating sporozoites of Eimeria tenella.</a> Molecular and Biochemical Parasitology. 97 (1-2), 21-31 (1998).</li><li>Clark, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+toolbox+facilitating+stable+transfection+of+Eimeria+species.">A toolbox facilitating stable transfection of Eimeria species.</a> Molecular and Biochemical Parasitology. 162 (1), 77-86 (2008).</li><li>Yan, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+transfection+of+Eimeria+tenella:+Constitutive+expression+of+the+YFP-YFP+molecule+throughout+the+life+cycle.">Stable transfection of Eimeria tenella: Constitutive expression of the YFP-YFP molecule throughout the life cycle.</a> International Journal for Parasitology. 39 (1), 109-117 (2009).</li><li>Qin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfection+of+Eimeria+mitis+with+Yellow+Fluorescent+Protein+as+Reporter+and+the+Endogenous+Development+of+the+Transgenic+Parasite.">Transfection of Eimeria mitis with Yellow Fluorescent Protein as Reporter and the Endogenous Development of the Transgenic Parasite.</a> PloS One. 9 (12), e114188 (2014).</li><li>Duan, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+transfection+of+Eimeria+necatrix+through+nucleofection+of+second+generation+merozoites.">Stable transfection of Eimeria necatrix through nucleofection of second generation merozoites.</a> Molecular and Biochemical Parasitology. , 1-5 (2019).</li><li>Li, Z. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+Eimeria+mitis+expressing+chicken+interleukin+2+stimulated+higher+cellular+immune+response+in+chickens+compared+with+the+wild-type+parasites.">Transgenic Eimeria mitis expressing chicken interleukin 2 stimulated higher cellular immune response in chickens compared with the wild-type parasites.</a> Frontiers in Microbiology. 6, 533 (2015).</li><li>Clark, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eimeria+species+parasites+as+novel+vaccine+delivery+vectors:+anti-Campylobacter+jejuni+protective+immunity+induced+by+Eimeria+tenella-delivered+CjaA.">Eimeria species parasites as novel vaccine delivery vectors: anti-Campylobacter jejuni protective immunity induced by Eimeria tenella-delivered CjaA.</a> Vaccine. 30 (16), 2683-2688 (2012).</li><li>Eckert, J., Braun, R., Shirley, M. W., Coudert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eimeria+species+and+strains+of+chickens.">Eimeria species and strains of chickens.</a> Biotechnology: Guidelines on techniques in coccidiosis research. Part. I: Eimeria and Isospora, 1-24 (1995).</li><li>Kurth, M., Entzeroth, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reporter+gene+expression+in+cell+culture+stages+and+oocysts+of+Eimeria+nieschulzi+(Coccidia,+Apicomplexa).">Reporter gene expression in cell culture stages and oocysts of Eimeria nieschulzi (Coccidia, Apicomplexa).</a> Parasitology Research. 104 (2), 303-310 (2009).</li><li>Tao, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+Eimeria+magna+Perard,+1925+Displays+Similar+Parasitological+Properties+to+the+Wild-type+Strain+and+Induces+an+Exogenous+Protein-Specific+Immune+Response+in+Rabbits+(Oryctolagus+cuniculus+L.).">Transgenic Eimeria magna Perard, 1925 Displays Similar Parasitological Properties to the Wild-type Strain and Induces an Exogenous Protein-Specific Immune Response in Rabbits (Oryctolagus cuniculus L.).</a> Frontiers in Immunology. 8, 2 (2017).</li><li>Shi, T. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+Transfection+of+Eimeria+intestinalis+and+Investigation+of+Its+Life+Cycle,+Reproduction+and+Immunogenicity.">Stable Transfection of Eimeria intestinalis and Investigation of Its Life Cycle, Reproduction and Immunogenicity.</a> Frontiers in Microbiology. 7, 807 (2016).</li><li>Wang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+telomerase-interacting+OTU+protein+of+Eimeria+tenella+and+its+telomerase-regulating+activity.">A novel telomerase-interacting OTU protein of Eimeria tenella and its telomerase-regulating activity.</a> Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 49 (8), 744-745 (2017).</li><li>Li, J. N., Zou, J., Yin, G. W., Liu, X. Y., Suo, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmid+DNA+could+be+delivered+into+Eimeria+maxima+unsporulated+oocyst+with+gene+gun+system.">Plasmid DNA could be delivered into Eimeria maxima unsporulated oocyst with gene gun system.</a> Acta Polytechnica Hungarica. 60 (4), 431-440 (2012).</li></ol>

I 1990'erne blev der udviklet et transfektionssystem til apicomplexanske parasitter, og det blev brugt til undersøgelser af eimeriske parasitter. For nylig blev der gennemført stabil transfection i E. tenella8,9 og E. nieschulzi15. Vi opnåede den stabile transfection af E. necatrix ved at transfecting anden generation merozoitter11. Inokulering af transfected sporozoitter af E. acer...

Eimeria spp. forårsager coccidiose, hvilket fører til betydelige økonomiske tab i husdyr- og fjerkræindustrien. Selv om anticoccidiale lægemidler, og til en vis grad, svækket anticoccidial vacciner, er blevet anvendt bredt til kontrol af coccidiose, der er stadig mangler med hensyn til deres resistens over for lægemidler, lægemiddelrester, og den potentielle spredning af vaccine stammer, der genvindeviencerul1. Med udviklingen af molekylærbiologi, omformning er blevet et vigtigt redskab til at studere genfunktioner, udvikle nye vacciner, og screening nye lægemiddelmål for Eimeria.
I de seneste årtier er omladning blevet anvendt med succes for apicomplexanske parasitter som Plasmodium og Toxoplasma gondii2,3,4,5,6. En undersøgelse, der anvender β-gal som reporter for omladningen i E. tenella, afprøvede et sådant arbejde i Eimeria7. Omladningen af E. tenella8,9, E. mitis10, og E. acervulina (Zhang et al., ikke offentliggjorte data) var en succes i kyllinger. For nylig opnåede vi transfection ved hjælp af merozoites af E. necatrix gennem nucleofection11.
Undersøgelser viste, at Eimeria, der udtrykker et heterolog antigen, har potentiale til at blive udviklet som en rekombinantvaccine, såsom dem, der udtrykker Campylobacter jejuni antigen A (CjaA) eller kylling interleukin 2 (chIL-2)12,13. Derfor beskriver denne protokol en nucleofection undersøgelse af Eimeria spp. hos kyllinger. Proceduren beskriver rensning af sporozoitter eller merozoitter, kerner med plasmid DNA, cloacal podning / intravenøs injektion og in vivo formering for at hjælpe forskere starter undersøgelser af transgene Eimeria parasitter.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>ATP-disodium</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A26209</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cellulose DE-52</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>C8350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Constant Flow Pump</td>
			<td>SHANGHAI JINGKE INDUSTRIAL CO., LTD.</td>
			<td>HL-2B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>MACGENE</td>
			<td>CM15019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass beads</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Z250473-1PAK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>No. V900116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Biotopped</td>
			<td>G6200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>MACGENE</td>
			<td>CC016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>No. V900041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low Speed Centrifuge</td>
			<td>BEIJING ERA BEILI CENTRIFUGE CO., LTD.</td>
			<td>DT5-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic Mixer</td>
			<td>SCILOGEX</td>
			<td>MS-H280-Pro</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>449164</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MoFlo cell sorter</td>
			<td>BeckMan Coulter, US</td>
			<td>201309995</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>144-55-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nucleofection device</td>
			<td>LONZA/amaxa</td>
			<td>90900012 (Nucleofector II)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>P1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll (DG gradient stock solution)</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-0891-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium taurodeoxycholate hydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T0875</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorvall Legend Micro 17 Microcentrifuge</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>75002430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The composition of DMEM: 4.5 g/L glucose with sodium pyruvate, L-glutamine, and 25 mM HEPES.</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>T8150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex Mixer</td>
			<td>Beijing North TZ-Biotech Develop.co.</td>
			<td>HQ-60-II</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water Bath Thermostat</td>
			<td>Grant Instruments (Cambridge), Ltd.</td>
			<td>GD120,GM0815010</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

nucleofection and in vivo propagation of chicken eimeria parasites

Omladning er en teknisk proces, hvorigennem genetisk materiale, såsom DNA og dobbeltstrenget RNA, leveres til celler for at ændre genet af interesse. I øjeblikket er transgene teknologi ved at blive et uundværligt redskab til studiet af Eimeria, de forårsagende midler af coccidiose hos fjerkræ og husdyr. Denne protokol giver en detaljeret beskrivelse af stabil transfektion i eimeriske parasitter: rensning og nuklerofection af sporozoitter eller anden generations merozoitter, og in vivo formering af transfundere parasitter. Ved hjælp af denne protokol opnåede vi omladning i flere arter af Eimeria. Tilsammen er nukleofection et nyttigt redskab til at lette genetisk manipulation i eimeriske parasitter.

Denne protokol er blevet brugt til transfect eimerian parasitter. I denne undersøgelse blev 2nd generation meronts og merozoites af E. necatrix vist i figur 2A og figur 2B, mens figur 2C og figur 2D viste sporocyster og sporozoitter af E. tenella efter brug af tæthedgradien...

Watch this Scientific Journal Video about Nucleofection and In Vivo Propagation of Chicken Eimeria Parasites at JoVE.com

Nucleofection and In Vivo Propagation of Chicken Eimeria Parasites

Her har vi givet en metode til at opnå stabil omladning af kylling Eimeria parasitter ved nucleofecting sporozoitter eller anden generation merozoitter. Genetisk modificerede eimeriske parasitter, der udtrykker heterologe antigengene, kan anvendes som vaccinefremføringskøretøjer.

Nuklerofection og In Vivo Formering af kylling Eimeria Parasitter

Transfection is a technical process through which genetic material, such as DNA and double-stranded RNA, are delivered into cells to modify the gene of ...

Etablering af transfektionsprotokoller for Eimeria-arter vil bidrage til at fremme studiet af genfunktioner, udvikle nye vacciner og screening af nye lægemiddelmål for Eimeria. Ved hjælp af denne teknik opnåede vi transinfektion af flere arter af Eimeria, og nukleofection er et nyttigt redskab til at lette anvendelsen af genetisk manipulation i eimerian parasitter. Nukleofection af Eimeria giver en reference til transinfektion af andre parasitter, der ikke kan dyrkes in vitro og vil fremskynde studiet af deres genetiske manipulation.Hvis du prøver denne teknik for første gang, bør du forberede godt alle reagenser og deres instrumenter før starten af transfektion for at undgå scramble under forsøget. Realiseringen af denne metode hjælper folk, der fokuserer på transftion af Eimeria at se de indviklede detaljer i dette eksperiment. Til at begynde med frigivelse af sporocyster, centrifuge en gange 10 til de syv sporulerede oocyster i kalium dichromat opløsning ved 2, 300 gange g i fem minutter.Vask dem med PBS tre gange. Pelletsuspendrer pellet med en milliliter PBS, og overfør blandingen til et 15-milliliterrør. Tilføj et tilsvarende volumen af en millimeter diameter glasperler, og oscillate oocyst suspension ved hjælp af en vortex mixer til at frigive sporocysts.Hvert minut, overvåge frigivelsen af sporocysts ved mikroskopi. Når mere end 90% af oocysts er brudt, stop vortexing. Overfør sporocyst suspensionen til nye 1,5-milliliter rør, og centrifuge ved 1, 600 gange g i fem minutter.Ophæld bundfaldet med en milliliter 50% tæthedsgradientopløsning og centrifuge ved 10.000 gange g i et minut. For at frigive sporozoitter, resuspend bundfaldet med excystation buffer, og inkubere i en 42-graders Celsius vandbad i 40 til 60 minutter for at frigive sporozoitter. Ryst rørene en gang hvert femte minut under ekscystationen.Når mere end 90% af sporozoitterne frigives, skal du stoppe inkubationen. Centrifuge ved 600 gange g i 10 minutter. Opsaltningen af udfældningen med en milliliter 55% tæthedsgradientopløsning, og centrifuge røret ved 10.000 gange g i et minut.Opsplitning af udfældningen med en milliliter PBS, og tæl sporozoitterne ved hjælp af et hæmocytometer. For at indsamle anden generation merozoitter af Eimeria necatrix, skære kylling tarmen langsgående fra æggeblomme stilk til ileocecal åbning, og vask det med PBS eller HBSS forsigtigt tre gange i en petriskål. Skær tarmen i stykker, og læg dem i en konisk kolbe med en fordøjelsesbuffer.Kolben anbringes på en magnetisk mixer ved 37 grader Celsius med en omrøringsstang i 30 til 60 minutter for at frigive merozoitter. Efter 30 minutters inkubation overvåges frigivelsen af merozoitter ved mikroskopisk undersøgelse hvert femte minut. For at rense merozoitterne hældes suspensionen indeholdende fordøjede merozoitter over fire lag gaze for at filtrere i 50-milliliterrør og centrifuge rørene ved 600 gange g i 10 minutter.Efter centrifugering kasseres supernatanten indeholdende tarmrester. Overfør udfældningen med rensede merozoitter til 1,5 milliliterrør. Opsplitning af udfældningen med en milliliter PBS, og tæl merozoitterne ved hjælp af et hæmocytometer.Først centrifuge sporozoit eller merozoit suspension på 600 gange g i 10 minutter. Kassér derefter supernatanten. I den følgende rækkefølge tilsættes 85 mikroliter nuklear transfektionsbuffer, 10 mikrogram plasmid og 25 enheder restriktionsenzym i det 1,5 milliliterrør, der indeholder sporozoitter eller merozoitter.Overfør suspensionen til en nuklear transfektionskop. Sæt koppen i en nuklear overførsel rille. Tænd for nukleofection-enheden ved hjælp af tænd/sluk-knappen, og vælg transfection procedure U-033.Når programmet er færdigt, skal du trykke på X-knappen på nukleofection-enheden, og skærmen viser OK, hvilket indikerer, at nukleofection er vellykket. Tilføj 0,5 til en milliliter af Dulbecco's Modified Eagle's Medium til nukleofection kop for at stoppe reaktionen. Efter at have blandet forsigtigt, overføres suspensionen til et 1,5 milliliterrør.Inokuler de nukleofected parasitter i syv dage gamle kyllinger. Inokuler merozoitterne eimeria necatrix eller sporozoitterne af Eimeria tenella via den cloacal-rute, men inokeret Eimeria acervulina sporozoitter via intravenøs injektion. Efter indsamling oocysts fra afføring, bruge fluorescein-aktiveret celle sortering og 150 milligram pr kg pyrimethamin at øge den transgene befolkningsforhold.Denne protokol er blevet brugt til transfect eimerian parasitter. I denne undersøgelse, anden generation meronts og merozoites af Eimeria necatrix er vist her, samt sporocysts og sporozoitter af Eimeria tenella efter brug af tætheden gradient løsninger. Billederne af oocysts af Eimeria necatrix efter at have inficeret med nukleofected merozoites og oocysts af Eimeria tenella efter at inficere med nukleofected sporozoitter indikerer vellykket nukleofection.Det vigtigste under forsøget på denne procedure er at sikre rensning af sporozoitter og merozoitter er en succes, og at bruge 50% tæthed gradient løsning til at fjerne OS2 og samtidig sikre sporocysts og sporozoitter er mere renset. Efter denne procedure, du kan optimere denne protokol, såsom transfecting oocyst eller sporocyst at forenkle transfection procedurer eimeria parasitter i fremtiden. Med udviklingen af transfektion i Eimeria vil CRISPR-Cas9-teknologien i Eimeria kunne forventes at fremføre den forsigtige genetiske manipulation af Eimeria betydeligt og anvendes som et egnet vaccineleveringskøretøj.

Research

JoVE Journal

Biology

Nucleofection and In Vivo Propagation of Chicken Eimeria Parasites

Propagation of Human Embryonic Stem (ES) Cells

Propagation of Human Embryonic Stem ES Cells

Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies

The study of development has been greatly aided by the use of the chick embryo as an experimental model.  The ease of accessibility of the embryo has ...

Placing Growth Factor-Coated Beads on Early Stage Chicken Embryos

The neural tube expresses many proteins in specific spatiotemporal patterns during development.   These proteins have been shown to be critical for cell ...

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

In vivo and in vitro Studies of Adaptor-clathrin Interaction

In vivo and in vitro Studies of Adaptor-clathrin Interaction

A major endocytic pathway initiates with the formation of clathrin-coated vesicles (CCVs) that transport cargo from the cell surface to endosomes1-6. CCVs ...

Mechanical Stimulation-induced Calcium Wave Propagation in Cell Monolayers: The Example of Bovine Corneal Endothelial Cells

Mekanisk Stimulation-induceret Calcium bølgeudbredelse i cellemonolag: eksempel med Bovin hornhindeendothelceller

Intercellular communication is essential for the coordination of physiological processes between cells in a variety of organs and tissues, including the ...

Stimulation of Cytoplasmic DNA Sensing Pathways In Vitro and In Vivo

Stimulation of Cytoplasmic DNA Sensing Pathways In Vitro and In Vivo

Stimulering af Cytoplasmatiske DNA Sensing Pathways<em&gt; In Vitro</em&gt; Og<em&gt; In Vivo</em

In order to efficiently stimulate an innate immune response, DNA must be of sufficient length and purity. We present a method where double stranded DNA ...

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In vivo Mikroinjektion og Elektroporation af Mouse Testis

This video and article contribution gives a comprehensive description of microinjection and electroporation of mouse testis in vivo. This particular ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Måling stivheden af<em&gt; Ex vivo</em&gt; Mus Aortas Brug Atomic force mikroskopi

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

Preparation and Observation of Thick Biological Samples by Scanning Transmission Electron Tomography

Forberedelse og Observation af Thick Biologiske prøver ved scanning Transmission Electron Tomography

This report describes a protocol for preparing thick biological specimens for further observation using a scanning transmission electron microscope. It ...