Name: nucleofection and in vivo propagation of chicken eimeria parasites
Uploaded: 2020-02-14T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Nucleofection and In Vivo Propagation of Chicken Eimeria Parasites at JoVE.com

Эта работа была поддержана Национальной программой исследований и разработок Китая (2017YFD0501200) и Национальным фондом естественных наук Китая (31572507, 31772728 и 31873007).

Куры для всех экспериментов на животных были размещены и поддерживается в соответствии с Китайским сельскохозяйственным университетом институционального ухода за животными и использования Комитета руководящих принципов и следуют Международным руководящим принципам для биомедици?...

<ol>
	<li>Suo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+efficacy+and+economic+benefits+of+Supercox,+a+live+anticoccidial+vaccine+in+a+commercial+trial+in+broiler+chickens+in+China.">The efficacy and economic benefits of Supercox, a live anticoccidial vaccine in a commercial trial in broiler chickens in China.</a> Veterinary Parasitology. 142 (1-2), 63-70 (2006).</li><li>Kim, K., Soldati, D., Boothroyd, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+replacement+in+Toxoplasma+gondii+with+chloramphenicol+acetyltransferase+as+selectable+marker.">Gene replacement in Toxoplasma gondii with chloramphenicol acetyltransferase as selectable marker.</a> Science. 262 (5135), 911-914 (1993).</li><li>Sibley, L. D., Messina, M., Niesman, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+DNA+transformation+in+the+obligate+intracellular+parasite+Toxoplasma+gondii+by+complementation+of+tryptophan+auxotrophy.">Stable DNA transformation in the obligate intracellular parasite Toxoplasma gondii by complementation of tryptophan auxotrophy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (12), 5508-5512 (1994).</li><li>Donald, R. G., Roos, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+molecular+transformation+of+Toxoplasma+gondii:+a+selectable+dihydrofolate+reductase-thymidylate+synthase+marker+based+on+drug-resistance+mutations+in+malaria.">Stable molecular transformation of Toxoplasma gondii: a selectable dihydrofolate reductase-thymidylate synthase marker based on drug-resistance mutations in malaria.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 90 (24), 11703-11707 (1993).</li><li>Soldati, D., Boothroyd, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+transfection+and+expression+in+the+obligate+intracellular+parasite+Toxoplasma+gondii.">Transient transfection and expression in the obligate intracellular parasite Toxoplasma gondii.</a> Science. 260 (5106), 349-352 (1993).</li><li>Goonewardene, R., Daily, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfection+of+the+malaria+parasite+and+expression+of+firefly+luciferase.">Transfection of the malaria parasite and expression of firefly luciferase.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 90 (11), 5234-5236 (1993).</li><li>Kelleher, M., Tomley, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+expression+of+beta-galactosidase+in+differentiating+sporozoites+of+Eimeria+tenella.">Transient expression of beta-galactosidase in differentiating sporozoites of Eimeria tenella.</a> Molecular and Biochemical Parasitology. 97 (1-2), 21-31 (1998).</li><li>Clark, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+toolbox+facilitating+stable+transfection+of+Eimeria+species.">A toolbox facilitating stable transfection of Eimeria species.</a> Molecular and Biochemical Parasitology. 162 (1), 77-86 (2008).</li><li>Yan, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+transfection+of+Eimeria+tenella:+Constitutive+expression+of+the+YFP-YFP+molecule+throughout+the+life+cycle.">Stable transfection of Eimeria tenella: Constitutive expression of the YFP-YFP molecule throughout the life cycle.</a> International Journal for Parasitology. 39 (1), 109-117 (2009).</li><li>Qin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfection+of+Eimeria+mitis+with+Yellow+Fluorescent+Protein+as+Reporter+and+the+Endogenous+Development+of+the+Transgenic+Parasite.">Transfection of Eimeria mitis with Yellow Fluorescent Protein as Reporter and the Endogenous Development of the Transgenic Parasite.</a> PloS One. 9 (12), e114188 (2014).</li><li>Duan, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+transfection+of+Eimeria+necatrix+through+nucleofection+of+second+generation+merozoites.">Stable transfection of Eimeria necatrix through nucleofection of second generation merozoites.</a> Molecular and Biochemical Parasitology. , 1-5 (2019).</li><li>Li, Z. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+Eimeria+mitis+expressing+chicken+interleukin+2+stimulated+higher+cellular+immune+response+in+chickens+compared+with+the+wild-type+parasites.">Transgenic Eimeria mitis expressing chicken interleukin 2 stimulated higher cellular immune response in chickens compared with the wild-type parasites.</a> Frontiers in Microbiology. 6, 533 (2015).</li><li>Clark, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eimeria+species+parasites+as+novel+vaccine+delivery+vectors:+anti-Campylobacter+jejuni+protective+immunity+induced+by+Eimeria+tenella-delivered+CjaA.">Eimeria species parasites as novel vaccine delivery vectors: anti-Campylobacter jejuni protective immunity induced by Eimeria tenella-delivered CjaA.</a> Vaccine. 30 (16), 2683-2688 (2012).</li><li>Eckert, J., Braun, R., Shirley, M. W., Coudert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eimeria+species+and+strains+of+chickens.">Eimeria species and strains of chickens.</a> Biotechnology: Guidelines on techniques in coccidiosis research. Part. I: Eimeria and Isospora, 1-24 (1995).</li><li>Kurth, M., Entzeroth, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reporter+gene+expression+in+cell+culture+stages+and+oocysts+of+Eimeria+nieschulzi+(Coccidia,+Apicomplexa).">Reporter gene expression in cell culture stages and oocysts of Eimeria nieschulzi (Coccidia, Apicomplexa).</a> Parasitology Research. 104 (2), 303-310 (2009).</li><li>Tao, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+Eimeria+magna+Perard,+1925+Displays+Similar+Parasitological+Properties+to+the+Wild-type+Strain+and+Induces+an+Exogenous+Protein-Specific+Immune+Response+in+Rabbits+(Oryctolagus+cuniculus+L.).">Transgenic Eimeria magna Perard, 1925 Displays Similar Parasitological Properties to the Wild-type Strain and Induces an Exogenous Protein-Specific Immune Response in Rabbits (Oryctolagus cuniculus L.).</a> Frontiers in Immunology. 8, 2 (2017).</li><li>Shi, T. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+Transfection+of+Eimeria+intestinalis+and+Investigation+of+Its+Life+Cycle,+Reproduction+and+Immunogenicity.">Stable Transfection of Eimeria intestinalis and Investigation of Its Life Cycle, Reproduction and Immunogenicity.</a> Frontiers in Microbiology. 7, 807 (2016).</li><li>Wang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+telomerase-interacting+OTU+protein+of+Eimeria+tenella+and+its+telomerase-regulating+activity.">A novel telomerase-interacting OTU protein of Eimeria tenella and its telomerase-regulating activity.</a> Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 49 (8), 744-745 (2017).</li><li>Li, J. N., Zou, J., Yin, G. W., Liu, X. Y., Suo, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmid+DNA+could+be+delivered+into+Eimeria+maxima+unsporulated+oocyst+with+gene+gun+system.">Plasmid DNA could be delivered into Eimeria maxima unsporulated oocyst with gene gun system.</a> Acta Polytechnica Hungarica. 60 (4), 431-440 (2012).</li></ol>

В 1990-х годах была разработана трансфекционная система для паразитов-апикомплексных, и она использовалась для исследований эймерских паразитов. Недавно, стабильная трансфекция была проведена в E. tenella8,9 и E. nieschulzi15. Мы достигли стабил...

Eimeria spp. вызывает кокцидиоз, что приводит к значительным экономическим потерям в животноводстве и птицеводстве. Хотя антикоккидные препараты, и в определенной степени, ослабленные антикокцидиальные вакцины, были широко использованы для контроля кокцидиоза, Есть еще недостатки в отношении их лекарственной устойчивости, остатков наркотиков, а также потенциальное распространение вакцин штаммов, которые восстанавливают вирулентность1. С развитием молекулярной биологии, трансфекция стала жизненно важным инструментом для изучения функций генов, разработки новых вакцин, а также скрининга новых целей наркотиков для Эймерии.
В последние десятилетия, трансфекция была успешно применена для апикомплексных паразитов, таких как Plasmodium и Toxoplasma gondii2,3,4,5,6. Исследование с использованием З-гал в качестве репортера для трансфекции в E. tenella пилотировал такую работу в Эймерии7. Трансфекция E. tenella8,9, E. mitis10, и E. acervulina (Чжан и др., неопубликованные данные) была успешной в кур. Недавно мы достигли трансфекции с использованием мерозоитов E. necatrix через нуклеофэкцию11.
Исследования показали, что Eimeria, выражающая гетерологический антиген, имеет потенциал для разработки в качестве рекомбинантной вакцины, например, тех, кто выражает Campylobacter jejuni antigen A (CjaA) или куриный интерлейкин 2 (chIL-2)12,13. Таким образом, этот протокол описывает нуклеофэкционное исследование Eimeria spp. у кур. Процедура описывает очищение спорозоитов или мерозоитов, нуклеофекцию с плазмидной ДНК, клоакальной прививки/внутривенную инъекцию и распространение виво, чтобы помочь исследователям начать исследования трансгенных паразитов Эймерии.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>ATP-disodium</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A26209</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cellulose DE-52</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>C8350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Constant Flow Pump</td>
			<td>SHANGHAI JINGKE INDUSTRIAL CO., LTD.</td>
			<td>HL-2B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>MACGENE</td>
			<td>CM15019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass beads</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Z250473-1PAK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>No. V900116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Biotopped</td>
			<td>G6200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>MACGENE</td>
			<td>CC016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>No. V900041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low Speed Centrifuge</td>
			<td>BEIJING ERA BEILI CENTRIFUGE CO., LTD.</td>
			<td>DT5-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic Mixer</td>
			<td>SCILOGEX</td>
			<td>MS-H280-Pro</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>449164</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MoFlo cell sorter</td>
			<td>BeckMan Coulter, US</td>
			<td>201309995</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>144-55-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nucleofection device</td>
			<td>LONZA/amaxa</td>
			<td>90900012 (Nucleofector II)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>P1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll (DG gradient stock solution)</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-0891-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium taurodeoxycholate hydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T0875</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorvall Legend Micro 17 Microcentrifuge</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>75002430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The composition of DMEM: 4.5 g/L glucose with sodium pyruvate, L-glutamine, and 25 mM HEPES.</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>T8150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex Mixer</td>
			<td>Beijing North TZ-Biotech Develop.co.</td>
			<td>HQ-60-II</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water Bath Thermostat</td>
			<td>Grant Instruments (Cambridge), Ltd.</td>
			<td>GD120,GM0815010</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

nucleofection and in vivo propagation of chicken eimeria parasites

Трансфекция является техническим процессом, с помощью которого генетический материал, такой как ДНК и двухцепочечная РНК, поставляются в клетки для изменения гена, представляющего интерес. В настоящее время трансгенная технология становится незаменимым инструментом для изучения Эймерии,возбудительов кокцидиоза у птицы и скота. Этот протокол содержит подробное описание стабильной трансфекции у эймерских паразитов: очищение и нуклеофеирование спорозоитов или мерозоитов второго поколения, а также виво-распространение транс-инфицированных паразитов. Используя этот протокол, мы достигли трансфекции в нескольких видах Эймерии. В совокупности нуклеофикция является полезным инструментом для облегчения генетических манипуляций с эймерскими паразитами.

Этот протокол был использован для трансфектирующих эймерских паразитов. В этом исследовании,2-го поколения меронты и merozoites E. necatrix были показаны на рисунке 2A и Рисунок 2B, в то время как рисунок 2</stro...

Watch this Scientific Journal Video about Nucleofection and In Vivo Propagation of Chicken Eimeria Parasites at JoVE.com

Nucleofection and In Vivo Propagation of Chicken Eimeria Parasites

Здесь мы предоставили метод для достижения стабильной трансфекции куриных паразитов Эймерии нуклеэктингом спорозоитов или мерозоитов второго поколения. Генетически модифицированные эймерийские паразиты, выражающие гетерологические антигенные гены, могут быть использованы в качестве средств доставки вакцин.

Нуклеофикция и В Виво Распространение куриных эймерийных паразитов

Transfection is a technical process through which genetic material, such as DNA and double-stranded RNA, are delivered into cells to modify the gene of ...

Создание протоколов трансфекции для видов эймерий будет способствовать продвижению изучения генных функций, разработке новых вакцин и скринингу новых целевых показателей в отношении лекарств для Эймерии. Используя этот метод, мы достигли трансфекции нескольких видов Эймерии, и нуклеофекция является полезным инструментом для облегчения применения генетических манипуляций у эймерианских паразитов. Нуклеофекция Эймерии дает рекомендацию для трансфекции других паразитов, которые не могут быть откоужденные в пробирке и ускорит изучение их генетических манипуляций.Если вы попробуете этот метод в первый раз, вы должны хорошо подготовить все реагенты и их инструменты до начала трансфекции, чтобы избежать схватки во время эксперимента. Реализация этого метода помогает людям, которые сосредотачиваются на трансфекции Эймерии, увидеть сложные детали этого эксперимента. Для начала с высвобождением спороцистов, центрифуга один раз от 10 до семи спорулированных ойцист в растворе дихромата калия в 2300 раз г в течение пяти минут.Вымойте их с PBS три раза. Переусердуйте гранулы с одним миллилитром PBS, и передать смесь в 15-миллилитровую трубку. Добавьте равный объем стеклянных бусин диаметром один миллиметр и потрохаться в подвеске oocyst с помощью вихревого миксера для выпуска sporocysts.Каждую минуту следите за высвобождением спороцистов с помощью микроскопии. Когда более 90% oocysts сломаны, остановить вихри. Перенесите подвеску sporocyst на новые 1,5-миллилитровые трубки и центрифугу при 1600 г в течение пяти минут.Повторное осаждение с одним миллилитром 50%плотность градиентного раствора, и центрифуга на 10000 раз г в течение одной минуты. Чтобы освободить sporozoites, resuspend осадок с excystation буфера, и инкубировать в 42-градусной водяной бане по Цельсию в течение 40 до 60 минут, чтобы освободить sporozoites. Встряхните трубки один раз в пять минут во время excystation.Когда более 90% sporozoites освобождены, прекратить инкубацию. Центрифуга по 600 раз г в течение 10 минут. Повторное выпадение осадков с одним миллилитром 55%плотность градиентного раствора, и центрифуга трубки на 10000 раз г в течение одной минуты.Resuspend осадков с одним миллилитром PBS, и рассчитывать sporozoites с помощью гемоцитометра. Чтобы собрать мерозоиты второго поколения Eimeria necatrix, вырезать куриный кишечник продольно от стебля желтка до илиеоцекалевого отверстия, и мыть его с PBS или HBSS осторожно три раза в чашке Петри. Разрежьте кишечник на кусочки и поместите их в коническую колбу с буфером пищеварения.Поместите колбу на магнитный миксер при 37 градусах по Цельсию с перемешиванием бар в течение 30 до 60 минут, чтобы освободить мерозоитов. После 30 минут инкубации следите за высвобождением мерозоитов с помощью микроскопического исследования каждые пять минут. Чтобы очистить мерозоиты, залить суспензией, содержащей переваренные мерозоиты в течение четырех слоев марли, чтобы фильтровать в 50-миллилитровые трубки, и центрифугировать трубки при 600 раз г в течение 10 минут.После центрифугации выбросьте супернатант, содержащий кишечник мусора. Перенесите осадки с очищенными мерозоитами на 1,5-миллилитровые трубки. Resuspend осадков с одним миллилитром PBS, и рассчитывать merozoites с помощью гемоцитометра.Во-первых, центрифуга sporozoite или мерозоит подвески на 600 раз g в течение 10 минут. Затем отбросьте супернатант. В следующем порядке добавьте 85 микролитров буфера ядерной трансфекции, 10 микрограммов плазмиды и 25 единиц фермента ограничения в 1,5-миллилитровую трубку, содержащую сорозоиты или мерозоиты.Перенесите подвеску на ядерную трансфекцию. Положите чашку в ядерный канавку передачи. Включите устройство нуклеофекции с помощью кнопки питания и выберите процедуру трансфекции U-033.Когда программа закончится, нажмите кнопку X устройства нуклеофекции, и экран отображается нормально, указывая, что нуклеофекция успешна. Добавьте 0,5 к одному миллилитров модифицированной иглы Dulbecco's Medium в чашку нуклеофекции, чтобы остановить реакцию. После мягкого смешивания перенесите подвеску в 1,5-миллилитровую трубку.Прививать нуклеофицированных паразитов в семидневных цыплят. Прививки мерозоитов Eimeria necatrix или sporozoites Эймерии тенелла через клоакал маршрут, но привить Eimeria acervulina sporozoites через внутривенные инъекции. После сбора ооцист из кала, используйте флуорессейн активированной сортировки клеток и 150 миллиграммов на килограмм пириметамина для увеличения трансгенного соотношения населения.Этот протокол был использован для трансфектных эймерских паразитов. В этом исследовании, второе поколение меронтов и мерозоитов Eimeria necatrix показаны здесь, а также sporocysts и sporozoites Eimeria tenella после использования плотности градиентных растворов. Изображения oocysts Eimeria necatrix после заражения нуклеофицированными мерозоитами и ооцистами Eimeria tenella после заражения нуклеофицированными сполозоитами указывают на успешное нуклеофекцию.Самое главное при попытке этой процедуры, чтобы убедиться, что очистка сорозоитов и мерозоитов являются успешными и использовать 50%плотность градиентного решения для удаления OS2, убедившись, что sporocysts и sporozoites более очищены. Следуя этой процедуре, вы можете оптимизировать этот протокол, такие как трансфектирующий oocyst или sporocyst, чтобы упростить процедуры трансфекции паразитов Eimeria в будущем. С развитием трансфекции в Эймерии, crispR-Cas9 технологии в Эймерии можно будет ожидать, чтобы значительно выдвинуть осторожные генетические манипуляции Eimeria и быть применены в качестве подходящего средства доставки вакцины.

Research

JoVE Journal

Biology

Nucleofection and In Vivo Propagation of Chicken Eimeria Parasites

Propagation of Human Embryonic Stem (ES) Cells

Propagation of Human Embryonic Stem ES Cells

Распространение человеческих эмбриональных стволовых (ЭС) клеток

Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies

Windowing куриные яйца целях развития исследований

The study of development has been greatly aided by the use of the chick embryo as an experimental model.  The ease of accessibility of the embryo has ...

Placing Growth Factor-Coated Beads on Early Stage Chicken Embryos

Размещение фактор роста покрытием бисер на ранних эмбрионов куриного этап

The neural tube expresses many proteins in specific spatiotemporal patterns during development.   These proteins have been shown to be critical for cell ...

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

В Ovo Electroporations Его Святейшества Стадия 10 эмбрионов куриного

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

In vivo and in vitro Studies of Adaptor-clathrin Interaction

In vivo and in vitro Studies of Adaptor-clathrin Interaction

В естественных условиях и в пробирке исследования Адаптер-клатрин Взаимодействие

A major endocytic pathway initiates with the formation of clathrin-coated vesicles (CCVs) that transport cargo from the cell surface to endosomes1-6. CCVs ...

Mechanical Stimulation-induced Calcium Wave Propagation in Cell Monolayers: The Example of Bovine Corneal Endothelial Cells

Механическое раздражение индуцированных кальция Распространение волн в монослоев клеток: Пример бычьего эндотелиальных клеток роговицы

Intercellular communication is essential for the coordination of physiological processes between cells in a variety of organs and tissues, including the ...

Stimulation of Cytoplasmic DNA Sensing Pathways In Vitro and In Vivo

Stimulation of Cytoplasmic DNA Sensing Pathways In Vitro and In Vivo

Стимуляция цитоплазматической ДНК зондирования Пути<em&gt; In Vitro</em&gt; И<em&gt; В Vivo</em

In order to efficiently stimulate an innate immune response, DNA must be of sufficient length and purity. We present a method where double stranded DNA ...

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

В Vivo микроинъекции и электропорации мыши яичка

This video and article contribution gives a comprehensive description of microinjection and electroporation of mouse testis in vivo. This particular ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Измерение Жесткость<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Аорте при помощи мыши атомно-силовой микроскопии

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

Preparation and Observation of Thick Biological Samples by Scanning Transmission Electron Tomography

Подготовка и наблюдение Толстые биологических образцов с помощью сканирующего трансмиссионной электронной томографии

This report describes a protocol for preparing thick biological specimens for further observation using a scanning transmission electron microscope. It ...