Name: nucleofection and in vivo propagation of chicken eimeria parasites
Uploaded: 2020-02-14T12:00:00
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Este trabajo fue apoyado por el Programa Nacional De Investigación y Desarrollo Clave de China (2017YFD0501200) y la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (31572507, 31772728 y 31873007).

Los pollos para todos los experimentos con animales fueron alojados y mantenidos de acuerdo con las directrices del Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad Agrícola de China y siguieron los Principios Rectores Internacionales para la Investigación Biomédica que involucran a los animales. Los experimentos fueron aprobados por el Comité de Animales de Laboratorio de la Administración de Beijing.
1. Extracción y purificación de esporozoítos de Eimeria s...

<ol>
	<li>Suo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+efficacy+and+economic+benefits+of+Supercox,+a+live+anticoccidial+vaccine+in+a+commercial+trial+in+broiler+chickens+in+China.">The efficacy and economic benefits of Supercox, a live anticoccidial vaccine in a commercial trial in broiler chickens in China.</a> Veterinary Parasitology. 142 (1-2), 63-70 (2006).</li><li>Kim, K., Soldati, D., Boothroyd, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+replacement+in+Toxoplasma+gondii+with+chloramphenicol+acetyltransferase+as+selectable+marker.">Gene replacement in Toxoplasma gondii with chloramphenicol acetyltransferase as selectable marker.</a> Science. 262 (5135), 911-914 (1993).</li><li>Sibley, L. D., Messina, M., Niesman, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+DNA+transformation+in+the+obligate+intracellular+parasite+Toxoplasma+gondii+by+complementation+of+tryptophan+auxotrophy.">Stable DNA transformation in the obligate intracellular parasite Toxoplasma gondii by complementation of tryptophan auxotrophy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (12), 5508-5512 (1994).</li><li>Donald, R. G., Roos, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+molecular+transformation+of+Toxoplasma+gondii:+a+selectable+dihydrofolate+reductase-thymidylate+synthase+marker+based+on+drug-resistance+mutations+in+malaria.">Stable molecular transformation of Toxoplasma gondii: a selectable dihydrofolate reductase-thymidylate synthase marker based on drug-resistance mutations in malaria.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 90 (24), 11703-11707 (1993).</li><li>Soldati, D., Boothroyd, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+transfection+and+expression+in+the+obligate+intracellular+parasite+Toxoplasma+gondii.">Transient transfection and expression in the obligate intracellular parasite Toxoplasma gondii.</a> Science. 260 (5106), 349-352 (1993).</li><li>Goonewardene, R., Daily, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfection+of+the+malaria+parasite+and+expression+of+firefly+luciferase.">Transfection of the malaria parasite and expression of firefly luciferase.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 90 (11), 5234-5236 (1993).</li><li>Kelleher, M., Tomley, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+expression+of+beta-galactosidase+in+differentiating+sporozoites+of+Eimeria+tenella.">Transient expression of beta-galactosidase in differentiating sporozoites of Eimeria tenella.</a> Molecular and Biochemical Parasitology. 97 (1-2), 21-31 (1998).</li><li>Clark, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+toolbox+facilitating+stable+transfection+of+Eimeria+species.">A toolbox facilitating stable transfection of Eimeria species.</a> Molecular and Biochemical Parasitology. 162 (1), 77-86 (2008).</li><li>Yan, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+transfection+of+Eimeria+tenella:+Constitutive+expression+of+the+YFP-YFP+molecule+throughout+the+life+cycle.">Stable transfection of Eimeria tenella: Constitutive expression of the YFP-YFP molecule throughout the life cycle.</a> International Journal for Parasitology. 39 (1), 109-117 (2009).</li><li>Qin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfection+of+Eimeria+mitis+with+Yellow+Fluorescent+Protein+as+Reporter+and+the+Endogenous+Development+of+the+Transgenic+Parasite.">Transfection of Eimeria mitis with Yellow Fluorescent Protein as Reporter and the Endogenous Development of the Transgenic Parasite.</a> PloS One. 9 (12), e114188 (2014).</li><li>Duan, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+transfection+of+Eimeria+necatrix+through+nucleofection+of+second+generation+merozoites.">Stable transfection of Eimeria necatrix through nucleofection of second generation merozoites.</a> Molecular and Biochemical Parasitology. , 1-5 (2019).</li><li>Li, Z. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+Eimeria+mitis+expressing+chicken+interleukin+2+stimulated+higher+cellular+immune+response+in+chickens+compared+with+the+wild-type+parasites.">Transgenic Eimeria mitis expressing chicken interleukin 2 stimulated higher cellular immune response in chickens compared with the wild-type parasites.</a> Frontiers in Microbiology. 6, 533 (2015).</li><li>Clark, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eimeria+species+parasites+as+novel+vaccine+delivery+vectors:+anti-Campylobacter+jejuni+protective+immunity+induced+by+Eimeria+tenella-delivered+CjaA.">Eimeria species parasites as novel vaccine delivery vectors: anti-Campylobacter jejuni protective immunity induced by Eimeria tenella-delivered CjaA.</a> Vaccine. 30 (16), 2683-2688 (2012).</li><li>Eckert, J., Braun, R., Shirley, M. W., Coudert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eimeria+species+and+strains+of+chickens.">Eimeria species and strains of chickens.</a> Biotechnology: Guidelines on techniques in coccidiosis research. Part. I: Eimeria and Isospora, 1-24 (1995).</li><li>Kurth, M., Entzeroth, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reporter+gene+expression+in+cell+culture+stages+and+oocysts+of+Eimeria+nieschulzi+(Coccidia,+Apicomplexa).">Reporter gene expression in cell culture stages and oocysts of Eimeria nieschulzi (Coccidia, Apicomplexa).</a> Parasitology Research. 104 (2), 303-310 (2009).</li><li>Tao, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+Eimeria+magna+Perard,+1925+Displays+Similar+Parasitological+Properties+to+the+Wild-type+Strain+and+Induces+an+Exogenous+Protein-Specific+Immune+Response+in+Rabbits+(Oryctolagus+cuniculus+L.).">Transgenic Eimeria magna Perard, 1925 Displays Similar Parasitological Properties to the Wild-type Strain and Induces an Exogenous Protein-Specific Immune Response in Rabbits (Oryctolagus cuniculus L.).</a> Frontiers in Immunology. 8, 2 (2017).</li><li>Shi, T. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+Transfection+of+Eimeria+intestinalis+and+Investigation+of+Its+Life+Cycle,+Reproduction+and+Immunogenicity.">Stable Transfection of Eimeria intestinalis and Investigation of Its Life Cycle, Reproduction and Immunogenicity.</a> Frontiers in Microbiology. 7, 807 (2016).</li><li>Wang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+telomerase-interacting+OTU+protein+of+Eimeria+tenella+and+its+telomerase-regulating+activity.">A novel telomerase-interacting OTU protein of Eimeria tenella and its telomerase-regulating activity.</a> Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 49 (8), 744-745 (2017).</li><li>Li, J. N., Zou, J., Yin, G. W., Liu, X. Y., Suo, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmid+DNA+could+be+delivered+into+Eimeria+maxima+unsporulated+oocyst+with+gene+gun+system.">Plasmid DNA could be delivered into Eimeria maxima unsporulated oocyst with gene gun system.</a> Acta Polytechnica Hungarica. 60 (4), 431-440 (2012).</li></ol>

En la década de 1990, se desarrolló un sistema de transfección para parásitos apicomplexanos, y se utilizó para estudios sobre parásitos eimerianos. Recientemente, se llevó a cabo un transfectado estable en E. tenella8,9 y E. nieschulzi15. Logramos la transfección estable de E. necatrix transfectando merozoites de segunda generación11. La inoculación de esporozoitas transtrofadas...

Eimeria spp. causa coccidiosis, lo que conduce a pérdidas económicas sustanciales en la industria ganadera y avícola. Aunque los medicamentos anticoccidiales, y en cierta medida, las vacunas anticoccidiales atenuadas, se han utilizado ampliamente para el control de la coccidiosis, todavía existen deficiencias con respecto a su resistencia a los medicamentos, residuos de drogas y la posible difusión de cepas vacunales que recuperan la virulencia1. Con el desarrollo de la biología molecular, la transfección se ha convertido en una herramienta vital para estudiar las funciones genéticas, desarrollar nuevas vacunas y detectar nuevas dianas farmacológicas para Eimeria.
En las últimas décadas, la transfección se ha aplicado con éxito para parásitos apicomplexianos como Plasmodium y Toxoplasma gondii2,3,4,5,6. Un estudio con la galone como reportero para la transfección en E. tenella pilotó tal trabajo en Eimeria7. La transfección de E. tenella8,9, E. mitis10,y E. acervulina (Zhang et al., datos inéditos) tuvo éxito en pollos. Recientemente, logramos la transfección utilizando merozoitas de E. necatrix a través de la nucleofección11.
Los estudios mostraron que Eimeria que expresa un antígeno hetrólogo tiene el potencial de desarrollarse como una vacuna recombinante, como las que expresan el antígeno A de Campylobacter jejuni (CjaA) o la interleucina de pollo 2 (chIL-2)12,13. Por lo tanto, este protocolo describe un estudio de nucleofección de Eimeria spp. en pollos. El procedimiento describe la purificación de esporozoítos o merozoitos, nucleofección con plasma, inoculación cloacal/inyección intravenosa y propagación in vivo para ayudar a los investigadores a iniciar estudios sobre parásitos transgénicos de Eimeria.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>ATP-disodium</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A26209</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cellulose DE-52</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>C8350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Constant Flow Pump</td>
			<td>SHANGHAI JINGKE INDUSTRIAL CO., LTD.</td>
			<td>HL-2B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>MACGENE</td>
			<td>CM15019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass beads</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Z250473-1PAK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>No. V900116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Biotopped</td>
			<td>G6200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>MACGENE</td>
			<td>CC016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>No. V900041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low Speed Centrifuge</td>
			<td>BEIJING ERA BEILI CENTRIFUGE CO., LTD.</td>
			<td>DT5-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic Mixer</td>
			<td>SCILOGEX</td>
			<td>MS-H280-Pro</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>449164</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MoFlo cell sorter</td>
			<td>BeckMan Coulter, US</td>
			<td>201309995</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>144-55-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nucleofection device</td>
			<td>LONZA/amaxa</td>
			<td>90900012 (Nucleofector II)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>P1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll (DG gradient stock solution)</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-0891-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium taurodeoxycholate hydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T0875</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorvall Legend Micro 17 Microcentrifuge</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>75002430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The composition of DMEM: 4.5 g/L glucose with sodium pyruvate, L-glutamine, and 25 mM HEPES.</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>T8150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex Mixer</td>
			<td>Beijing North TZ-Biotech Develop.co.</td>
			<td>HQ-60-II</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water Bath Thermostat</td>
			<td>Grant Instruments (Cambridge), Ltd.</td>
			<td>GD120,GM0815010</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

nucleofection and in vivo propagation of chicken eimeria parasites

La transfección es un proceso técnico a través del cual el material genético, como el ADN y el ARN de doble cadena, se entregan en las células para modificar el gen de interés. Actualmente, la tecnología transgénica se está convirtiendo en una herramienta indispensable para el estudio de Eimeria,los agentes causales de la coccidiosis en aves de corral y ganado. Este protocolo proporciona una descripción detallada de la transfección estable en parásitos eimerianos: purificación y nucleofección de esporozoítos o merozoitos de segunda generación, y propagación in vivo de parásitos transinfectados. Utilizando este protocolo, logramos la transfección en varias especies de Eimeria. En conjunto, la nucleofección es una herramienta útil para facilitar la manipulación genética en parásitos eimerianos.

Este protocolo se ha utilizado para transfectar parásitos eimeicos. En este estudio, los merontes y merozoites de2a generación de E. necatrix se mostraron en la Figura 2A y la Figura 2B,mientras que la Figura 2C y la Figura 2D mostraron los esporoquistes y esporozoitos de E. ten...

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Nucleofection and In Vivo Propagation of Chicken Eimeria Parasites

Aquí, proporcionamos un método para lograr la transfección estable de parásitos de pollo Eimeria mediante la nucleofectación de esporozoitos o merozoites de segunda generación. Los parásitos eimerianos modificados genéticamente que expresen genes antigénicos hetrólogos podrían utilizarse como vehículos de administración de vacunas.

Nucleofección y Propagación In Vivo de Parásitos de La Eimeria de Pollo

Transfection is a technical process through which genetic material, such as DNA and double-stranded RNA, are delivered into cells to modify the gene of ...

El establecimiento de protocolos de transfección para las especies de Eimeria ayudaría a avanzar en el estudio de las funciones genéticas, el desarrollo de nuevas vacunas y la detección de nuevas dianas farmacológicas para Eimeria. Utilizando esta técnica, logramos la transfección de varias especies de Eimeria, y la nucleofección es una herramienta útil para facilitar la aplicación de la manipulación genética en parásitos eimerios. La nucleofección de Eimeria proporciona una referencia para la transfección de otros parásitos que no se pueden cultivar in vitro y acelerarán el estudio de su manipulación genética.Si prueba esta técnica por primera vez, debe preparar bien todos los reactivos y sus instrumentos antes del inicio de la transfección para evitar la revuelta durante el experimento. La realización de este método ayuda a las personas que se centran en la transfección de Eimeria a ver los detalles intrincados de este experimento. Para comenzar con la liberación de esporocitos, centrifugar una vez 10 a los siete ovocitos esporulados en solución de dicromato potáreo a 2.300 veces g durante cinco minutos.Lávelos con PBS tres veces. Resuspender el pellet con un mililitro de PBS, y transferir la mezcla a un tubo de 15 mililitros. Añade un volumen igual de perlas de vidrio de un milímetro de diámetro, y oscila la suspensión del ovocitos usando un mezclador de vórtice para liberar los esporocitos.Cada minuto, monitoree la liberación de esporocitos por microscopía. Cuando más del 90% de los ovocitos están rotos, deje de vórtice. Transfiera la suspensión del esporocitos a nuevos tubos de 1,5 mililitros y centrifuga a 1.600 veces g durante cinco minutos.Resuspender el precipitado con un mililitro de 50% de solución de gradiente de densidad, y centrífuga a 10.000 g durante un minuto. Para liberar esporozoitos, resuspender el precipitado con tampón de excystation, e incubar en un baño de agua Celsius de 42 grados durante 40 a 60 minutos para liberar los esporozoitos. Agitar los tubos una vez cada cinco minutos durante la excisancia.Cuando se libere más del 90% de los esporozoitos, deje de incubar. Centrifugar a 600 veces g durante 10 minutos. Resuspender la precipitación con un mililitro de 55% de solución de gradiente de densidad, y centrifugar el tubo a 10.000 g durante un minuto.Resuspender la precipitación con un mililitro de PBS, y contar los esporozoitos usando un hemocicómetro. Para recoger las merozoitas de segunda generación de Eimeria necatrix, corte el intestino de pollo longitudinalmente del tallo de la yema al orificio ileocécal, y lávelo con PBS o HBSS suavemente tres veces en un plato de Petri. Cortar el intestino en pedazos, y colocarlos en un matraz cónico con un tampón de digestión.Coloque el matraz en un mezclador magnético a 37 grados Celsius con una barra de agitación durante 30 a 60 minutos para liberar merozoítos. Después de 30 minutos de incubación, monitoree la liberación de merozoítos mediante examen microscópico cada cinco minutos. Para purificar los merozoítos, verter la suspensión que contiene merozoítos digeridos sobre cuatro capas de gasa para filtrar en tubos de 50 mililitros, y centrifugar los tubos a 600 veces g durante 10 minutos.Después de la centrifugación, deseche el sobrenadante que contiene restos intestinales. Transfiera la precipitación con merozoítos purificados a tubos de 1,5 mililitros. Resuspender la precipitación con un mililitro de PBS, y contar los merozoítos usando un hemocicómetro.En primer lugar, centrifugar la suspensión de esporozoito o merozoita a 600 veces g durante 10 minutos. A continuación, deseche el sobrenadante. En el siguiente orden, añada 85 microlitros de tampón de transfección nuclear, 10 microgramos de plásmido y 25 unidades de enzima de restricción en el tubo de 1,5 mililitros que contiene esporozoitos o merozoites.Transfiera la suspensión a una taza de transfección nuclear. Ponga la copa en una ranura de transferencia nuclear. Encienda el dispositivo de nucleofección con el botón de encendido y seleccione el procedimiento de transfección U-033.Cuando finalice el programa, pulse el botón X del dispositivo de nucleofección y la pantalla mostrará OK, lo que indica que la nucleofección se ha realizado correctamente. Añadir 0,5 a un mililitros del medio de águila modificada de Dulbecco a la copa de nucleofección para detener la reacción. Después de mezclar suavemente, transfiera la suspensión a un tubo de 1,5 mililitros.Inocular los parásitos nucleo infectados en pollos de siete días de edad. Inocular los merozoitos de Eimeria necatrix o los esporozoitos de Eimeria tenella a través de la vía cloacal, pero inocular Eimeria acervulina sporozoites mediante inyección intravenosa. Después de recolectar ovocitos de las heces, utilice la clasificación celular activada por fluoresceína y 150 miligramos por kilogramo de pirimetamina para aumentar la proporción de población transgénica.Este protocolo se ha utilizado para transfecitar parásitos eimerios. En este estudio, aquí se muestran los meronts y merozoites de Eimeria necatrix, así como los esporocitos y esporozoitos de la tenella de Eimeria después de utilizar las soluciones de gradiente de densidad. Las imágenes de los ovocitos de Eimeria necatrix después de infectar con los merozoitos nucleo infectados y los ovocitos de Eimeria tenella después de infectar con espozoitos nucleo infectados indican una nucleofección exitosa.Lo más importante al intentar este procedimiento es asegurarse de que la purificación de los esporozoitos y los merozoitos sean exitosos y utilizar la solución de gradiente de densidad del 50% para eliminar el OS2 mientras se asegura de que los esporocitos y los esporozoitos estén más purificados. Después de este procedimiento, puede optimizar este protocolo, como transfectar o espoquisto para simplificar los procedimientos de transfección de los parásitos de Eimeria en el futuro. Con el desarrollo de la transfección en Eimeria, la tecnología CRISPR-Cas9 en Eimeria será previsible para presentar significativamente la manipulación genética cautelosa de Eimeria y ser aplicada como un vehículo de administración de vacunas adecuado.

Research

JoVE Journal

Biology

Nucleofection and In Vivo Propagation of Chicken Eimeria Parasites

Propagation of Human Embryonic Stem (ES) Cells

Propagation of Human Embryonic Stem ES Cells

Propagación de la madre embrionarias humanas (ES) Células

Investigación

Biología

Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies

Los huevos de ventanas de pollo para Estudios del Desarrollo

The study of development has been greatly aided by the use of the chick embryo as an experimental model.  The ease of accessibility of the embryo has ...

Placing Growth Factor-Coated Beads on Early Stage Chicken Embryos

La colocación de crecimiento recubierto Factor-bolas en los embriones tempranos de la etapa de pollo

The neural tube expresses many proteins in specific spatiotemporal patterns during development.   These proteins have been shown to be critical for cell ...

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

En Electroporations Ovo de embriones de pollo HH Etapa 10

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

In vivo and in vitro Studies of Adaptor-clathrin Interaction

In vivo and in vitro Studies of Adaptor-clathrin Interaction

In vivo e in vitro de adaptador de clatrina-Interacción

A major endocytic pathway initiates with the formation of clathrin-coated vesicles (CCVs) that transport cargo from the cell surface to endosomes1-6. CCVs ...

Mechanical Stimulation-induced Calcium Wave Propagation in Cell Monolayers: The Example of Bovine Corneal Endothelial Cells

Mecánica estimulación inducida por calcio Propagación de Ondas en monocapas de células: el ejemplo de las especies bovina células endoteliales corneales

Intercellular communication is essential for the coordination of physiological processes between cells in a variety of organs and tissues, including the ...

Stimulation of Cytoplasmic DNA Sensing Pathways In Vitro and In Vivo

Stimulation of Cytoplasmic DNA Sensing Pathways In Vitro and In Vivo

La estimulación de citoplasmáticos de ADN Sensing Pathways<em&gt; In Vitro</em&gt; Y<em&gt; En Vivo</em

In order to efficiently stimulate an innate immune response, DNA must be of sufficient length and purity. We present a method where double stranded DNA ...

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

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En Vivo microinyección y electroporación del mouse Testis

This video and article contribution gives a comprehensive description of microinjection and electroporation of mouse testis in vivo. This particular ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

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La medición de la rigidez de<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Ratón aortas Usando microscopía de fuerza atómica

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

Preparation and Observation of Thick Biological Samples by Scanning Transmission Electron Tomography

Preparación y observación de muestras biológicas mediante el escaneo de grueso Electrónica de Transmisión de Positrones

This report describes a protocol for preparing thick biological specimens for further observation using a scanning transmission electron microscope. It ...