Name: nucleofection and in vivo propagation of chicken eimeria parasites
Uploaded: 2020-02-14T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Nucleofection and In Vivo Propagation of Chicken Eimeria Parasites at JoVE.com

Detta arbete stöddes av National Key Research and Development Program of China (2017YFD0501200) och National Natural Science Foundation of China (31572507, 31772728 och 31873007).

Kycklingar för alla djurförsök var inrymt och underhålls enligt China Agricultural University Institutional Animal Care and Use Committee riktlinjer och följde de internationella vägledande principerna för biomedicinsk forskning som involverar djur. Experimenten godkändes av Pekingadministrationens kommitté av försöksdjur.
1. Extraktion och rening av sporozoiter av Eimeria spp. (t.ex. E. tenella)
<ol><li>Utsläpp av sporocyster<ol>
<li>Centrifug 1 x 107</sup...

<ol>
	<li>Suo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+efficacy+and+economic+benefits+of+Supercox,+a+live+anticoccidial+vaccine+in+a+commercial+trial+in+broiler+chickens+in+China.">The efficacy and economic benefits of Supercox, a live anticoccidial vaccine in a commercial trial in broiler chickens in China.</a> Veterinary Parasitology. 142 (1-2), 63-70 (2006).</li><li>Kim, K., Soldati, D., Boothroyd, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+replacement+in+Toxoplasma+gondii+with+chloramphenicol+acetyltransferase+as+selectable+marker.">Gene replacement in Toxoplasma gondii with chloramphenicol acetyltransferase as selectable marker.</a> Science. 262 (5135), 911-914 (1993).</li><li>Sibley, L. D., Messina, M., Niesman, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+DNA+transformation+in+the+obligate+intracellular+parasite+Toxoplasma+gondii+by+complementation+of+tryptophan+auxotrophy.">Stable DNA transformation in the obligate intracellular parasite Toxoplasma gondii by complementation of tryptophan auxotrophy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (12), 5508-5512 (1994).</li><li>Donald, R. G., Roos, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+molecular+transformation+of+Toxoplasma+gondii:+a+selectable+dihydrofolate+reductase-thymidylate+synthase+marker+based+on+drug-resistance+mutations+in+malaria.">Stable molecular transformation of Toxoplasma gondii: a selectable dihydrofolate reductase-thymidylate synthase marker based on drug-resistance mutations in malaria.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 90 (24), 11703-11707 (1993).</li><li>Soldati, D., Boothroyd, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+transfection+and+expression+in+the+obligate+intracellular+parasite+Toxoplasma+gondii.">Transient transfection and expression in the obligate intracellular parasite Toxoplasma gondii.</a> Science. 260 (5106), 349-352 (1993).</li><li>Goonewardene, R., Daily, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfection+of+the+malaria+parasite+and+expression+of+firefly+luciferase.">Transfection of the malaria parasite and expression of firefly luciferase.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 90 (11), 5234-5236 (1993).</li><li>Kelleher, M., Tomley, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+expression+of+beta-galactosidase+in+differentiating+sporozoites+of+Eimeria+tenella.">Transient expression of beta-galactosidase in differentiating sporozoites of Eimeria tenella.</a> Molecular and Biochemical Parasitology. 97 (1-2), 21-31 (1998).</li><li>Clark, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+toolbox+facilitating+stable+transfection+of+Eimeria+species.">A toolbox facilitating stable transfection of Eimeria species.</a> Molecular and Biochemical Parasitology. 162 (1), 77-86 (2008).</li><li>Yan, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+transfection+of+Eimeria+tenella:+Constitutive+expression+of+the+YFP-YFP+molecule+throughout+the+life+cycle.">Stable transfection of Eimeria tenella: Constitutive expression of the YFP-YFP molecule throughout the life cycle.</a> International Journal for Parasitology. 39 (1), 109-117 (2009).</li><li>Qin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfection+of+Eimeria+mitis+with+Yellow+Fluorescent+Protein+as+Reporter+and+the+Endogenous+Development+of+the+Transgenic+Parasite.">Transfection of Eimeria mitis with Yellow Fluorescent Protein as Reporter and the Endogenous Development of the Transgenic Parasite.</a> PloS One. 9 (12), e114188 (2014).</li><li>Duan, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+transfection+of+Eimeria+necatrix+through+nucleofection+of+second+generation+merozoites.">Stable transfection of Eimeria necatrix through nucleofection of second generation merozoites.</a> Molecular and Biochemical Parasitology. , 1-5 (2019).</li><li>Li, Z. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+Eimeria+mitis+expressing+chicken+interleukin+2+stimulated+higher+cellular+immune+response+in+chickens+compared+with+the+wild-type+parasites.">Transgenic Eimeria mitis expressing chicken interleukin 2 stimulated higher cellular immune response in chickens compared with the wild-type parasites.</a> Frontiers in Microbiology. 6, 533 (2015).</li><li>Clark, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eimeria+species+parasites+as+novel+vaccine+delivery+vectors:+anti-Campylobacter+jejuni+protective+immunity+induced+by+Eimeria+tenella-delivered+CjaA.">Eimeria species parasites as novel vaccine delivery vectors: anti-Campylobacter jejuni protective immunity induced by Eimeria tenella-delivered CjaA.</a> Vaccine. 30 (16), 2683-2688 (2012).</li><li>Eckert, J., Braun, R., Shirley, M. W., Coudert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eimeria+species+and+strains+of+chickens.">Eimeria species and strains of chickens.</a> Biotechnology: Guidelines on techniques in coccidiosis research. Part. I: Eimeria and Isospora, 1-24 (1995).</li><li>Kurth, M., Entzeroth, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reporter+gene+expression+in+cell+culture+stages+and+oocysts+of+Eimeria+nieschulzi+(Coccidia,+Apicomplexa).">Reporter gene expression in cell culture stages and oocysts of Eimeria nieschulzi (Coccidia, Apicomplexa).</a> Parasitology Research. 104 (2), 303-310 (2009).</li><li>Tao, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+Eimeria+magna+Perard,+1925+Displays+Similar+Parasitological+Properties+to+the+Wild-type+Strain+and+Induces+an+Exogenous+Protein-Specific+Immune+Response+in+Rabbits+(Oryctolagus+cuniculus+L.).">Transgenic Eimeria magna Perard, 1925 Displays Similar Parasitological Properties to the Wild-type Strain and Induces an Exogenous Protein-Specific Immune Response in Rabbits (Oryctolagus cuniculus L.).</a> Frontiers in Immunology. 8, 2 (2017).</li><li>Shi, T. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+Transfection+of+Eimeria+intestinalis+and+Investigation+of+Its+Life+Cycle,+Reproduction+and+Immunogenicity.">Stable Transfection of Eimeria intestinalis and Investigation of Its Life Cycle, Reproduction and Immunogenicity.</a> Frontiers in Microbiology. 7, 807 (2016).</li><li>Wang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+telomerase-interacting+OTU+protein+of+Eimeria+tenella+and+its+telomerase-regulating+activity.">A novel telomerase-interacting OTU protein of Eimeria tenella and its telomerase-regulating activity.</a> Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 49 (8), 744-745 (2017).</li><li>Li, J. N., Zou, J., Yin, G. W., Liu, X. Y., Suo, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmid+DNA+could+be+delivered+into+Eimeria+maxima+unsporulated+oocyst+with+gene+gun+system.">Plasmid DNA could be delivered into Eimeria maxima unsporulated oocyst with gene gun system.</a> Acta Polytechnica Hungarica. 60 (4), 431-440 (2012).</li></ol>

På 1990-talet utvecklades ett transfectionsystem för apicomplexanparasiter, och det användes för studier på eimerianparasiter. Nyligen genomfördes stabil transfection i E. tenella8,9 och E. nieschulzi15. Vi uppnådde den stabila transfection av E. necatrix genom att transfecting andra generationens merozoiter11. Inokulering av transfected sporozoiter av E. acervulina genom v...

Eimeria spp. orsakar coccidiosis, vilket leder till betydande ekonomiska förluster inom boskaps- och fjäderfäindustrin. Även om antikoccidial läkemedel, och i viss mån, försvagade antikkockvacciner, har använts i stor utsträckning för kontroll av koccidios, det finns fortfarande brister när det gäller deras läkemedelsresistens, läkemedelsrester, och den potentiella spridningen av vaccin stammar som återfår virulens1. Med utvecklingen av molekylärbiologi har transfection blivit ett viktigt verktyg för att studera genfunktioner, utveckla nya vacciner och screening nya läkemedelsmål för Eimeria.
Under de senaste decennierna har transfection tillämpats framgångsrikt för apicomplexan parasiter som Plasmodium och Toxoplasma gondii2,3,4,5,6. En studie med β-gal som reporter för transfection i E. tenella lotsas sådant arbete i Eimeria7. Transfection en E. tenella8,9, E. mitis10, och E. acervulina (Zhang et al., opublicerade data) var framgångsrik i kycklingar. Nyligen uppnådde vi transfection med hjälp av merozoiter av E. necatrix genom nukleofection11.
Studier visade att Eimeria uttrycker ett heterologous antigen har potential att utvecklas som ett rekombinant vaccin, såsom de som uttrycker Campylobacter jejuni antigen A (CjaA) eller kyckling interleukin 2 (chIL-2)12,13. Därför beskriver detta protokoll en nukleofection studie av Eimeria spp. i kycklingar. Förfarandet beskriver rening av sporozoiter eller merozoiter, nukleofection med plasmid DNA, cloacal inokulering/intravenös injektion och in vivo förökning för att hjälpa forskare att starta studier om transgena Eimeria parasiter.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>ATP-disodium</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A26209</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cellulose DE-52</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>C8350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Constant Flow Pump</td>
			<td>SHANGHAI JINGKE INDUSTRIAL CO., LTD.</td>
			<td>HL-2B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>MACGENE</td>
			<td>CM15019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass beads</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Z250473-1PAK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>No. V900116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Biotopped</td>
			<td>G6200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>MACGENE</td>
			<td>CC016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>No. V900041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low Speed Centrifuge</td>
			<td>BEIJING ERA BEILI CENTRIFUGE CO., LTD.</td>
			<td>DT5-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic Mixer</td>
			<td>SCILOGEX</td>
			<td>MS-H280-Pro</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>449164</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MoFlo cell sorter</td>
			<td>BeckMan Coulter, US</td>
			<td>201309995</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>144-55-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nucleofection device</td>
			<td>LONZA/amaxa</td>
			<td>90900012 (Nucleofector II)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>P1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll (DG gradient stock solution)</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-0891-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium taurodeoxycholate hydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T0875</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorvall Legend Micro 17 Microcentrifuge</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>75002430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The composition of DMEM: 4.5 g/L glucose with sodium pyruvate, L-glutamine, and 25 mM HEPES.</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>T8150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex Mixer</td>
			<td>Beijing North TZ-Biotech Develop.co.</td>
			<td>HQ-60-II</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water Bath Thermostat</td>
			<td>Grant Instruments (Cambridge), Ltd.</td>
			<td>GD120,GM0815010</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

nucleofection and in vivo propagation of chicken eimeria parasites

Transfection är en teknisk process genom vilken genetiskt material, såsom DNA och dubbelsträngade RNA, levereras till celler för att ändra genen av intresse. För närvarande är transgen teknik blir ett oumbärligt verktyg för studier av Eimeria, orsaksmedel coccidiosis i fjäderfä och boskap. Detta protokoll ger en detaljerad beskrivning av stabil transfection i eimerian parasiter: rening och nukleofection av sporozoiter eller andra generationens merozoiter, och in vivo förökning av transfected parasiter. Med hjälp av detta protokoll uppnådde vi transfection i flera arter av Eimeria. Tillsammans är nukleofection ett användbart verktyg för att underlätta genetisk manipulation hos eimerianparasiter.

Detta protokoll har använts för att transfect eimerian parasiter. I denna studie, den2: a generationenmeronts och merozoiter av E. necatrix visades i figur 2A och figur 2B, medan figur 2C och figur 2D visade sporocyster och sporozoiter av E. tenella efter att ha använt den...

Watch this Scientific Journal Video about Nucleofection and In Vivo Propagation of Chicken Eimeria Parasites at JoVE.com

Nucleofection and In Vivo Propagation of Chicken Eimeria Parasites

Här gav vi en metod för att uppnå stabil transfection av kyckling Eimeria parasiter genom nucleofecting sporozoiter eller andra generationens merozoiter. Genetiskt modifierade eimerianparasiter som uttrycker heterologa antigena gener kan användas som vaccinleveransfordon.

Nukleofection och In Vivo förökning av kyckling eimeriaparasiter

Transfection is a technical process through which genetic material, such as DNA and double-stranded RNA, are delivered into cells to modify the gene of ...

Inrättandet av transfektionsprotokoll för Eimeria-arter skulle bidra till att främja studier av genfunktioner, utveckla nya vacciner och screening av nya läkemedelsmål för Eimeria. Med hjälp av denna teknik uppnådde vi transfektionen av flera arter av Eimeria, och nukleofection är ett användbart verktyg för att underlätta tillämpningen av genetisk manipulation i eimerian parasiter. Nukleofection av Eimeria ger en referens för transfection av andra parasiter som inte kan odlas in vitro och kommer att påskynda studien av deras genetiska manipulation.Om du försöker denna teknik för första gången, bör du förbereda väl alla reagenser och deras instrument innan starten av transfection för att undvika rusning under experimentet. Förverkligandet av denna metod hjälper människor som fokuserar på transfection av Eimeria att se de invecklade detaljerna i detta experiment. Till att börja med frisättning av sporocysts, centrifug en gånger 10 till de sju sporulerade oocysts i kaliumdichromat lösning på 2, 300 gånger g i fem minuter.Tvätta dem med PBS tre gånger. Resuspend pelleten med en milliliter PBS, och överföra blandningen till en 15-milliliter tub. Tillsätt en lika stor volym av en millimeters glaspärlor, och sväng oocyst suspensionen med hjälp av en virvelblandare för att frigöra sporocysts.Varje minut, övervaka utsläpp av sporocyster genom mikroskopi. När mer än 90% av oocystsna är brutna, stopp virvel. Överför sporocystupphängningen till nya 1,5-milliliterrör, och centrifug vid 1, 600 gånger g i fem minuter.Resuspend fällningen med en milliliter av 50%densitet gradient lösning, och centrifug vid 10, 000 gånger g i en minut. För att frigöra sporozoiter, resuspend fällningen med excystation buffert, och inkubera i en 42-graders Celsius vattenbad i 40 till 60 minuter för att släppa sporozoiterna. Skaka rören en gång var femte minut under excystationen.När mer än 90% av sporozoiterna släpps, sluta ruva. Centrifugera vid 600 gånger g i 10 minuter. Resuspend nederbörden med en milliliter av 55%densitet gradient lösning, och centrifug röret på 10, 000 gånger g i en minut.Resuspend nederbörden med en milliliter pbs, och räkna sporozoites med hjälp av en hemocytometer. För att samla andra generationens merozoiter av Eimeria necatrix, skär kycklingtarmen längsgående från äggula stjälken till ileocecal kroppsöppning, och tvätta den med PBS eller HBSS försiktigt tre gånger i en Petri-skål. Skär tarmen i bitar, och placera dem i en konisk kolv med en matsmältningsbuffert.Placera kolven på en magnetisk blandare i 37 grader Celsius med en omrörningsstång i 30 till 60 minuter för att släppa ut merozoiter. Efter 30 minuters inkubation, övervaka frisättningen av merozoiter genom mikroskopisk undersökning var femte minut. För att rena merozoiterna, häll suspensionen som innehåller rötade merozoiter över fyra lager gasväv för att filtrera i 50-milliliterrör, och centrifugrören vid 600 gånger g i 10 minuter.Efter centrifugeringen kasserar du supernatanten som innehåller tarmskräp. Överför nederbörden med renat merozoites till 1.5-milliliter rör. Resuspend nederbörden med en milliliter av PBS, och räkna merozoitesna som använder en hemocytometer.Först centrifugera sporozoit eller merozoit suspension vid 600 gånger g i 10 minuter. Kassera sedan supernatanten. I följande ordning, tillsätt 85 mikroliter av kärntransfektionsbuffert, 10 mikrogram plasmid och 25 enheter av restriktionsenzym i 1,5-milliliterröret som innehåller sporozoiter eller merozoiter.Överför suspensionen till en kärn-transfection kopp. Sätt koppen i ett kärnvapentransferspår. Slå på nukleofection enheten genom att använda strömbrytaren, och välj transfektionsproceduren U-033.När programmet är klart trycker du på knappen X för nukleofection enheten, och skärmen visar OK, vilket visar att nukleofectionen är framgångsrik. Lägg till 0,5 till en milliliter av Dulbeccos Modified Eagle's Medium till nukleofection koppen för att stoppa reaktionen. Efter blandning försiktigt, överför suspensionen till en 1,5-milliliter tub.Inokulera de nukleosmitterade parasiterna i sju dagar gamla kycklingar. Inokulera eimerianekaciternas merozoiter eller eimeria tenellas sporozoiter via kloacalrutten, men inokulerar Eimeria acervulina-sporozoiter via intravenös injektion. Efter att ha samlat oocysts från avföring, använd fluorescein-aktiverad cellsortering och 150 milligram per kilo pyrimetamin för att öka transgena befolkningsförhållandet.Detta protokoll har använts för att transfekt eimerian parasiter. I denna studie visas här eimerianekatrix andra generationens meronter och merozoiter, liksom de sporocysts och sporozoiterna i Eimeria tenella efter att ha använt densitetsgradientlösningarna. Bilderna av oocysts av Eimeria necatrix efter smitta med nucleofected merozoites och oocysts av Eimeria tenella efter infektera med nucleofected sporozoites indikerar framgångsrika nucleofection.Det viktigaste samtidigt som man försöker detta förfarande är att se till att reningen av sporozoiter och merozoiter är framgångsrika och att använda 50%densitetsgradientlösningen för att ta bort OS2 samtidigt som man ser till att sporocysterna och sporozoiterna är mer renade. Efter denna procedur kan du optimera detta protokoll, till exempel transfecting oocyst eller sporocyst för att förenkla transfektionsförfarandena för Eimeria parasiter i framtiden. Med utvecklingen av transfection i Eimeria, CRISPR-Cas9 teknik i Eimeria kommer att vara förväntansbar att avsevärt lägga fram den försiktiga genetiska manipulation av Eimeria och att tillämpas som en lämplig vaccin leverans fordon.

Research

JoVE Journal

Biology

Nucleofection and In Vivo Propagation of Chicken Eimeria Parasites

Propagation of Human Embryonic Stem (ES) Cells

Propagation of Human Embryonic Stem ES Cells

Spridning av mänskliga embryonala stamceller (ES-celler)

Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies

Windowing hönsägg för utvecklingsstudier

The study of development has been greatly aided by the use of the chick embryo as an experimental model.  The ease of accessibility of the embryo has ...

Placing Growth Factor-Coated Beads on Early Stage Chicken Embryos

Placering Growth Factor-Coated Pärlor på tidiga embryon Stage Kyckling

The neural tube expresses many proteins in specific spatiotemporal patterns during development.   These proteins have been shown to be critical for cell ...

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

I Ovo Electroporations av HH Stage 10 kycklingembryon

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

In vivo and in vitro Studies of Adaptor-clathrin Interaction

In vivo and in vitro Studies of Adaptor-clathrin Interaction

In vivo och in vitro studier av Adapter-clathrin Interaktion

A major endocytic pathway initiates with the formation of clathrin-coated vesicles (CCVs) that transport cargo from the cell surface to endosomes1-6. CCVs ...

Mechanical Stimulation-induced Calcium Wave Propagation in Cell Monolayers: The Example of Bovine Corneal Endothelial Cells

Mekanisk stimulering-inducerad Kalcium vågutbredning i cellmonoskikt: exemplet Nötkreatur hornhinnan endotelceller

Intercellular communication is essential for the coordination of physiological processes between cells in a variety of organs and tissues, including the ...

Stimulation of Cytoplasmic DNA Sensing Pathways In Vitro and In Vivo

Stimulation of Cytoplasmic DNA Sensing Pathways In Vitro and In Vivo

Stimulering av Cytoplasmatiska DNA Sensing Pathways<em&gt; In Vitro</em&gt; Och<em&gt; In Vivo</em

In order to efficiently stimulate an innate immune response, DNA must be of sufficient length and purity. We present a method where double stranded DNA ...

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In vivo mikroinjektion och elektroporation av Mus Testikel

This video and article contribution gives a comprehensive description of microinjection and electroporation of mouse testis in vivo. This particular ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Mätning av styvheten hos<em&gt; Ex vivo</em&gt; Mus Aorta Använda atomkraftsmikroskopi

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

Preparation and Observation of Thick Biological Samples by Scanning Transmission Electron Tomography

Beredning och övervakning av Thick Biologiska Prover av Scanning transmissionselektronmikroskopi Tomography

This report describes a protocol for preparing thick biological specimens for further observation using a scanning transmission electron microscope. It ...