Name: process optimization using high throughput automated micro-bioreactors in chinese hamster ovary cell cultivation
Uploaded: 2020-05-18T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Process Optimization using High Throughput Automated Micro-Bioreactors in Chinese Hamster Ovary Cell Cultivation at JoVE.com

يود المؤلفان أن يشكرا البوندسوزيريوم فور بيلديونغ أوند فورشونج (BMBF)، والوزارة الاتحادية للتعليم والبحوث، ألمانيا، وفريق المعالجة الحيوية في سارتوريوس ستيديم للتكنولوجيا الحيوية GmbH، ألمانيا، على دعمهم.

1- إجراء الثقافة المسبقة
ملاحظة: يتم استخدام الخلايا المؤتلفة CHO DG44 مع تركيز خلية قابلة للحياة من 1 × 107 خلايا / مل لهذا البروتوكول.
<ol><li>إذابة القارورة التي تحتوي على 1.2 مل من الخلايا إلى درجة حرارة الغرفة ونقل تعليق الخلية على الفور إلى أنبوب طرد مركزي مخروطي 15 ...

<ol>
	<li>Walsh, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biopharmaceutical+benchmarks+2018.">Biopharmaceutical benchmarks 2018.</a> Nature Biotechnology. 36, 1136 (2018).</li><li>Kim, J. Y., Kim, Y., Lee, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CHO+cells+in+biotechnology+for+production+of+recombinant+proteins:+current+state+and+further+potential.">CHO cells in biotechnology for production of recombinant proteins: current state and further potential.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 93 (3), 917-930 (2012).</li><li>Lai, T., Yang, Y., Ng, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+Mammalian+cell+line+development+technologies+for+recombinant+protein+production.">Advances in Mammalian cell line development technologies for recombinant protein production.</a> Pharmaceuticals (Basel). 6 (5), 579-603 (2013).</li><li>Carlage, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+dynamic+changes+in+the+proteome+of+a+Bcl-XL+overexpressing+Chinese+hamster+ovary+cell+culture+during+exponential+and+stationary+phases.">Analysis of dynamic changes in the proteome of a Bcl-XL overexpressing Chinese hamster ovary cell culture during exponential and stationary phases.</a> Biotechnology Progress. 28 (3), 814-823 (2012).</li><li>Hacker, D. L., de Jesus, M., Wurm, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=25+years+of+recombinant+proteins+from+reactor-grown+cells+-+where+do+we+go+from+here.">25 years of recombinant proteins from reactor-grown cells - where do we go from here.</a> Biotechnology Advances. 27 (6), 1023-1027 (2009).</li><li>Shukla, A. A., Gottschalk, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-use+disposable+technologies+for+biopharmaceutical+manufacturing.">Single-use disposable technologies for biopharmaceutical manufacturing.</a> Trends in Biotechnology. 31 (3), 147-154 (2013).</li><li>Ao, S., Gelman, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Advances in electrical engineering and computational science. Lecture notes in electrical engineering. 39, (2009).</li><li>Bareither, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+disposable+small+scale+reactor+for+high+throughput+bioprocess+development:+a+proof+of+concept+study.">Automated disposable small scale reactor for high throughput bioprocess development: a proof of concept study.</a> Biotechnology and Bioengineering. 110 (12), 3126-3138 (2013).</li><li>Kang, Y., Ludwig, D. L., Balderes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+can+cell+culture+flocculation+offer+for+antibody+purification+processes.">What can cell culture flocculation offer for antibody purification processes.</a> Pharmaceutical Bioprocessing. 2 (6), 483-485 (2014).</li><li>Choe, W., Durgannavar, T. A., Chung, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fc-Binding+Ligands+of+Immunoglobulin+G:+An+Overview+of+High+Affinity+Proteins+and+Peptides.">Fc-Binding Ligands of Immunoglobulin G: An Overview of High Affinity Proteins and Peptides.</a> Materials (Basel). 9 (12), (2016).</li><li>Sch&#228;pper, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+microbioreactors+in+fermentation+process+development:+a+review.">Application of microbioreactors in fermentation process development: a review.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 395 (3), 679-695 (2009).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbioreactors+for+Bioprocess+Development.">Microbioreactors for Bioprocess Development.</a> Journal of the Association for Laboratory Automation. 12 (3), 143-151 (2007).</li><li>Cla&#223;en, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectroscopic+sensors+for+in-line+bioprocess+monitoring+in+research+and+pharmaceutical+industrial+application.">Spectroscopic sensors for in-line bioprocess monitoring in research and pharmaceutical industrial application.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 409 (3), 651-666 (2017).</li><li>Janoschek, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+to+transfer+a+fed-batch+platform+process+into+semi-perfusion+mode:+The+benefit+of+automated+small-scale+bioreactors+compared+to+shake+flasks+as+scale-down+model.">A protocol to transfer a fed-batch platform process into semi-perfusion mode: The benefit of automated small-scale bioreactors compared to shake flasks as scale-down model.</a> Biotechnology Progress. 35 (2), 2757 (2019).</li></ol>

إن تحسين عملية زيادة العائد أمر بالغ الأهمية في صناعة الأدوية الحيوية. يمكن استخدام قوارير الهز لفحص السلالة. ومع ذلك، مراقبة معلمات العملية مثل درجة الحموضة وDO غير متوفرة في القوارير. وللمفاعلات الحيوية الدقيقة ميزة لأنها تسمح بالرصد المستمر والسيطرة على العملية. هذه الحلقات التحكم في ا...

بلغت قيمة السوق العالمية للأدوية الحيوية أكثر من 250 مليار دولار أمريكي في عام 2018، وقد توسعت باستمرار1. شركات الأدوية تتحرك بعيدا عن إنتاج الأدوية الجزيئية الصغيرة إلى العلاجات المنتجة تكنولوجيا حيوية مثل البروتينات المؤتلفة. وهذه وحدها مسؤولة عن إيرادات تزيد على 150 بليون دولار1. وتستخدم الآن خلايا الثدييات على نطاق واسع لإنتاج هذه البروتينات الصيدلانية المؤتلفة. في الفترة الحالية ، من بين 68 منتجًا معتمدًا تنتجها خلايا الثدييات ، يتم إنتاج 57 منتجًا بواسطة خلايا مبيض الهامستر الصينية (CHO)2. وتستخدم خلايا CHO خصيصا لإنتاج البروتينات المؤتلفة التي تتطلب تعديلات ما بعد الترجمة. ويفضل هذه الخلايا لأنها تنمو في تعليق وبالتالي تمكين نتائج قابلة للاستنساخ في مصل المتوسط الحرة المحددة كيميائيا3,4. الميزة الأخرى لاستخدام خلايا CHO هي أن بنية الغليكان للمنتج تشبه بنية الأجسام المضادة أحادية النسيلة البشرية (mAb) وتؤدي إلى زيادة غلة البروتين المؤتلف والإنتاجية المحددة بسبب تضخيم الجينات5.
وقد زاد العائد من المؤتلف CHO (rCHO) ثقافة الخلية بنسبة مائة مرة في العقدين الماضيين. ويعزى هذا التحسن إلى الاستفادة المثلى من معلمات العملية، واستراتيجية التغذية وتطوير مصل خال من المتوسط المحدد كيميائيا6. مع زيادة في متطلبات المنتجات الصيدلانية ، يزيد الضغط على كفاءة التكلفة والوقت لتطوير عملية الإنتاج7. للحد من الضغط مع ضمان جودة المنتج قد أعاد توجيه تركيز صناعة الأدوية على الجودة حسب التصميم (QbD). يتم استخدام QbD لفهم إنتاج المنتج وكذلك العملية. أداة حيوية تستخدم في ObD هو تصميم التجربة (DOE). فهو يساعد على زيادة فهم العملية من خلال الكشف عن العلاقة بين متغيرات الإدخال المختلفة وبيانات الإخراج الناتجة. إن تطبيق نهج وزارة الطاقة لتحسين العملية الحيوية مفيد خلال المراحل المبكرة من المشروع في استيعاب ظروف العملية وزيادة كمية ونوعية التتر. وهذا النهج مفيد بالمقارنة مع الاستراتيجية القديمة: عامل واحد في الوقت الواحد(OFAT). النهج الإحصائية لوزارة التعليم باستخدام الكلاسيكية، الجينين أو تاغوشي هي أعلى بكثير من OFAT8.
يمكن تنفيذ العملية وتحسين الوسائط في قوارير اهتزازية. القوارير غير مكلفة نسبيا. ومع ذلك ، فإنه ليس من الممكن للسيطرة على المعلمات مثل درجة الحرارة ودرجة الحموضة والأكسجين المذاب (DO). للتغلب على هذه العيوب، يمكن استخدام المفاعلات الحيوية متعددة الإستعمالات على مقاعد البدلاء التي تتراوح بين حجم العمل من 0.5 لتر إلى 5 لتر. وتوفر المفاعلات رصدا ً واسع النطاق على الإنترنت ومراقبة للعمليات. ومع ذلك ، فإن استخدام المفاعل الحيوي متعدد الإستخدامات هو وقت كثيف وكثيف العمالة. من أجل التغلب على هذه العيوب ، يتم استخدام مفاعل حيوي جديد أحادي الاستخدام يجمع بين العملية الشاملة لمراقبة المفاعل الحيوي على أعلى مقاعد البدلاء وسهولة التعامل مع قارورة الهزة. وقد ساهم نظام فحص الإنتاجية العالية والتكنولوجيا ذات الاستخدام الواحد في تعزيز كفاءة أداء العمليةوتطويرها 9.
في هذه المقالة، يتم سرد المبادئ التوجيهية لتحميل الوصفة في برنامج المفاعل الحيوي الصغير الآلي (AMBR). يتم دراسة تأثير سرعات التحريك المختلفة ودرجة الحموضة على تركيز الخلية القابلة للحياة (VCC) وtiter أثناء هذه التجربة. يتم تنفيذ النتيجة التجريبية والتحليل مع تصميم برنامج التجارب MODDE 12. يتم إجراء تحليلات المنتج في نظام كروماتوغرافيا سائلة عالية الضغط (HPLC) مع عمود بروتين A. وهو يقوم على مبدأ أن منطقة Fc من mAb يربط إلى البروتين A مع تقارب عالية10،11. مع هذه الطريقة، فمن الممكن لتحديد وقياس mAb. يتم تنفيذ القياس الكمي على مناطق الذروة اللاوتية المقاسة في 280 نانومتر.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL disposable pipette tips, sterilized</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>A-0040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 mM L-glutamine</td>
			<td>Corning, Merck</td>
			<td>25-005-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 Well deep well plates</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>A-0038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL disposable pipette tips, sterilized</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>A-0039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ambr 15 automated microbioreactor system</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>001-2804</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ambr 15 Cell Culture 24 Disposable Bioreactors - Sparged</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>001-1B86</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antifoam C Emulsion</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>A8011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottle Top Sterile filter</td>
			<td>Corning, Merck</td>
			<td>CLS431474</td>
			<td>0.1 &#956;m pore size</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CEDEX Detergent (3% Mucosol)</td>
			<td>Roche Innovatis AG</td>
			<td>05-650-658-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counter</td>
			<td>Roche Innovatis AG</td>
			<td>05-650-216-001</td>
			<td>CEDEX HiRes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHO DG44 cell line</td>
			<td>Cellca, Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHOKO Feed Media A (FMA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>CR80025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHOKO Feed Media B (FMB)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>CR80026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHOKO Production Medium</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>CR80027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHOKO Stock Culture Meium</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>CR80028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chromaster high pressure liquid chromatography system</td>
			<td>VWR International</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Centrifuge tube</td>
			<td>Corning, Merck</td>
			<td>SIAL0790</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1070179026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>56-40-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPLC Vials</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>SUPLSU860181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Merck</td>
			<td>P4417</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein A Column</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1502226</td>
			<td>POROS&#8482; A 1.7&#160;mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Merck</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic anhydrous</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Merck</td>
			<td>7558-79-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>VWRVK940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>YSI</td>
			<td>YSI Inc</td>
			<td>2900D</td>
			<td>YSI 2900 Select</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

process optimization using high throughput automated micro-bioreactors in chinese hamster ovary cell cultivation

التحسين من العمليات الحيوية لزيادة غلة المنتجات المطلوبة هو من الأهمية في صناعة الأدوية الحيوية. ويمكن تحقيق ذلك عن طريق اختيار السلالة وتطوير معلمات المعالجة الحيوية. وقد استخدمت قوارير الهز لهذا الغرض. ومع ذلك، فإنها تفتقر إلى القدرة على التحكم في معلمات العملية مثل درجة الحموضة والأكسجين المذاب (DO). ويمكن التغلب على هذا القيد بمساعدة مفاعل حيوي صغير آلي. هذه المفاعلات الحيوية تحاكي الزراعة على نطاق أوسع. واحدة من المزايا الرئيسية لهذا النظام هو دمج تصميم التجربة (وزارة التجارة) في البرنامج. يتيح هذا التكامل إنشاء تصميم حيث يمكن تنوع معلمات العملية المتعددة في وقت واحد. يمكن تحليل معلمات العملية الحرجة وظروف المعالجة الحيوية المثلى داخل البرنامج. التركيز على العمل المعروض هنا هو تعريف المستخدم على الخطوات التي ينطوي عليها تصميم العملية في البرمجيات ودمج وزارة الزراعة ضمن تشغيل الزراعة.

ويرد في الشكل 2لمحة عامة عن الزراعة التي أجريت في هذه الدراسة.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60577/60577fig02.jpg"> الشكل 2: التمثيل التخطيطي للظروف التجريبية لاختبار pH وملامح سرعة التحريك في محطات الثقافة. يمثل الشكل أيضًا التخطيط الصحي...

Watch this Scientific Journal Video about Process Optimization using High Throughput Automated Micro-Bioreactors in Chinese Hamster Ovary Cell Cultivation at JoVE.com

Process Optimization using High Throughput Automated Micro-Bioreactors in Chinese Hamster Ovary Cell Cultivation

هنا، نقدم إجراء مفصل لتشغيل تصميم التجربة في مفاعل حيوي صغير آلي يليه حصاد الخلايا وقياس البروتين باستخدام عمود البروتين A.

عملية التحسين باستخدام الإنتاجية العالية الإنتاجية المفاعلات الحيوية الدقيقة الآلية في زراعة الخلايا المبيض الهامستر الصينية

Optimization of bioprocesses to increase the yield of desired products is of importance in the biopharmaceutical industry. This can be achieved by strain ...

في هذا الفيديو ، وعرض المستخدمين في البرمجيات الدقيقة الحيوية مع التخطيط والتنفيذ لتصميم التجارب أو وزارة الطاقة. كما أظهرت الصمامات المساعدة المحللين لتحسين حالة العملية. وكان إدراج نظام التشغيل في برنامجيات المفاعلات الحيوية الدقيقة الآلي رسمياً في تحليل البيانات.ويمكن تخطيط عدد كبير من التجارب وتنفيذها في وقت واحد على نطاق صغير. التظاهر الإجراء سيكون تامانا ناغريك، طالبة دكتوراه من مختبري. تبدأ مع إجراء ما قبل الثقافة في زراعة الرئيسية كما هو موضح في بروتوكول النص.لإنشاء تجربة جديدة، افتح برنامج الثقافة الذاتية الكهرماني، وفي علامة التبويب مقدمة، انقر فوق، إنشاء تجربة جديدة. في علامة التبويب التجربة الجديدة، أدخل اسم التجربة مع التاريخ الذي سيتم إجراؤها فيه. تنشيط نقطة التفتيش لمحطة الثقافة في الأوعية لاستخدامها أثناء الزراعة.سيتم أيضا تنشيط العلامات التلقائية لـ DOE للانتقال السهل أثناء برمجة تجربة DOE. انقر على التالي "للتبديل إلى علامة التبويب التالية. لتعيين معلومات حول إضافة وسائل الإعلام في السفينة، جنبا إلى جنب مع المضادة للرغوة، inoculum، تغذية، والجلوكوز، وتفعيل لوحة وسائل الإعلام إضافة "نقطة تفتيش.حدد نوع اللوحة واسمها وموقعها الذي يحتوي على الوسيطة. انقر على إضافة وسائل الإعلام إلى السفن. أدخل حجم الوسائط التي سيتم إضافتها إلى الأوعية.تحديد رسم خرائط نقل الوسائط من اللوحة إلى الأوعية. انقر على التالي "للتبديل إلى علامة التبويب التالية. بعد أن تم تغذية المعلومات الإعلامية في البرنامج ، تعيين شروط الزراعة.انقر على وسائل الإعلام شرط، وملء في درجة الحرارة، هدف DO، الحد الأقصى PH، واثارة دورة في الدقيقة. ثم انقر فوق التحريك "أو أسفل التحريك. لتعيين إضافة inoculums في الأوعية، وتفعيل إضافة لوحة الخلية.حدد نوع اللوحة واسمها وموقعها الذي يحتوي على الوسيطة. انقر على إضافة خلايا إلى السفن. أدخل وقت التلقيح وحجم الوسائط التي سيتم إضافتها إلى الأوعية.حدد المسار الذي ينتقل إليه المعالج السائل لنقل الخلية من اللوحة إلى الأوعية. انقر على التالي "للتبديل إلى علامة التبويب التالية. لتعيين إضافة الأعلاف والجلوكوز والرغوة المضادة، قم بتنشيط لوحة التغذية المضافة، وتحديد نوع اللوحة والاسم والموقع.انقر على إضافة تغذية إلى السفن، وأدخل حجم الأعلاف التي سيتم إضافتها إلى السفن. اعتمادا على زراعة، إضافة عدد من إضافة الأعلاف. ولهذا الزراعة، يتغذى المفاعل بعد 72 ساعة كل 24 ساعة.إضافة تأخير الوقت بين التغذية يدويا عن طريق إدخال البيانات في تأخير من الخلايا المضافة. اليوم الأول من التغذية هو بعد 72 ساعة من التطعيم ، التالي هو بعد 96 ساعة ، وهلم جرا. تحديد رسم خرائط لنقل الأعلاف من الصفيحة إلى الأوعية.لتعيين أخذ العينات أثناء الزراعة، قم بتنشيط لوحة العينة "إضافة" وتحديد نوع اللوحة واسمها وموقعها. فحص أخذ عينة من السفن"وأدخل حجم العينة التي سيتم إزالتها من السفن. تأكد من أن حجم لا ينخفض إلى أقل من 10 mililiters خلال دورة كاملة من الزراعة.إضافة عدد العينات التي سيتم أخذها أثناء الزراعة. على غرار التغذية، يضاف وقت إزالة العينة من الوعاء لكل نقطة عينة من المدخلات. حفظ العملية.وهي الآن جاهزة للتنفيذ. وأخيراً، حدد خريطة نقل العينة من السفن إلى الصفيحة. افتح برنامج Amber 15 DOE.انقر على التحقيق"وحدد جديدة. أدخل اسم التحقيق الجديد وزارة العمل في مربع الحوار إنشاء التحقيق". من أجل تعيين تجربة للتحقيق DOE، افتح الوصفة التي تم إنشاؤها لدراسة المعلمات المختلفة.انقر على الاستعراض، وحدد التجربة المعنية. علامات السفينة تم إدراجها بالفعل في العمود. لتحديد عامل DOE المطلوب، حدد المعلمة وانقر على العمود المسمى، عامل DOE.حدد جديد"وإضافة الوحدات، اختصار، وكذلك الحد الأدنى والعليا من العوامل. في علامة التبويب الاستجابات، حدد القيم التي سيتم أخذها في الاعتبار لتحليل البيانات. انقر على تعديلات على استجابات DOE، وحدد اسم الاستجابة، الاختصار، الوحدات، والحدود الدنيا والأقصى.بمجرد تحديد الاستجابات، حدد متغير الكهرمان لكل استجابة، وحدد. يمكن ربط الاستجابة تلقائيًا بمتغير مُنَوَرِم بيولوجي. اختر المتغير المطلوب من القائمة المنسدلة.تغيير المعادلة لكل استجابة اعتماداً على المتطلبات. الاختيارات بين البيانات الدنيا والأقصىية والأولى والأخيرة والمتوسطة. لإنشاء تصميم، استخدم "معالج تصميم البدء" لتحديد نوع التصميم التجريبي وإضافة أو إزالة عدد النسخ المتماثلة ونقاط الوسط.حدد الهدف، الذي يحدد اختيار التصاميم والنماذج. قم بإنهاء حزم العمل التي يمكن استيرادها إلى برنامج الثقافة الذاتية الكهرماني وإنشاءها كما هو موضح في بروتوكول النص. في علامة التبويب التجربة، انقر على إنشاء تجربة DOE، واستعرض حزمة العمل التي تم إنشاؤها باستخدام برنامج DOE.تهيئة العملية بالنقر فوق بدء. بمجرد تنفيذ التجربة، قم بتصدير البيانات باستخدام نتائج DOE التصدير. يتم فتح إطار نتائج DOE التصدير" و الصفوف التي تشير إلى وعاء الثقافة و محطة مسرودة في الجدول.حدد الصفوف المطلوبة، وانقر على تصدير الصفوف المحددة "أو تصدير البيانات التجريبية"لتخزين جميع النتائج وحفظ الملف لمزيد من التحليل. استيراد البيانات إلى الوحدة النمطية DOE العنبر عن طريق التبديل إلى النتائج "علامة التبويب وتحديد نتائج الاستيراد. استعرض بحثاً عن ملف البيانات المطلوب، وانقر فوق تحليل النتائج.نمو الخلايا في المفاعلات الحيوية الميكروب الآلي قابلة للمقارنة مع المفاعلات الحيوية متعددة الاستخدامات. في مقارنة تركيز الخلايا من ثلاثة مقاييس مختلفة، ويلاحظ أن 15 milliliter 15 مللتر مفاعل حيوي ميكروبائي يحاكي اثنين لتر من مفاعل حيوي زجاجي. كما تتم مقارنة النتائج من قارورة اهتزاز لعرض فائدة العنبر.يتم دراسة تأثير سرعة التحريك المختلفة و PH في المفاعلات الحيوية الميكروبية الآلية. يظهر هنا مقارنة لتركيز الخلايا القابلة للحياة، أو VCC، وتركيز الأجسام المضادة أحادية النسيلة في المفاعلات الحيوية الميكروبية المختلفة. ويمكن ملاحظة التأثير السلبي لـ PH 6.9 على VCC.بالإضافة إلى ذلك، تحسن نمو الخلايا بشكل ملحوظ في ظل الثقافة في PH 7.3 مقارنة مع PH 7.1. يظهر هنا هي مخططات كفاف الاستجابة لتركيز VCC ولأجسام مضادة أحادية النسيلة. القيم قابلة للمقارنة في السفن مع نفس PH وسرعة مختلفة، مما يدل على أن سرعة المُحرك التي تم جمعها لهذه العملية ليس لها تأثير كبير على مخرجات العملية.يجب أن تكون مكتوبة بعناية كل تعليمات تعطى للآلة لتجنب الخطأ أثناء تنفيذ التجربة. البرنامج مرن ويمكنه تشغيل عدد من التجارب في وقت واحد ، وبالتالي تقليل مقدار الوقت المُتَخَذ لتحسين العملية. إن تصميم التجربة مفيد في مجال المعالجة البيولوجية، حيث أن النتائج تعطي فهماً للعملية القائمة على المعرفة، والتي يمكن أن تمتد إلى كائنات أخرى إلى حد ما.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Developing Custom Chinese Hamster Ovary-host Cell Protein Assays using Acoustic Membrane Microparticle Technology

مخصص الصينية النامية الهامستر بروتين الخلية المبيض في استضافة فحوصات باستخدام التكنولوجيا الصوتية Microparticle الغشائية

Custom assays for unique proteins are often limited to time consuming manual detection and quantitation techniques such as ELISA or Western blots due to ...

High Throughput Single-cell and Multiple-cell Micro-encapsulation

ارتفاع الإنتاجية وحيدة الخلية ومتعددة الخلية الصغيرة التغليف

Microfluidic encapsulation methods have been previously utilized to capture cells in picoliter-scale aqueous, monodisperse drops, providing confinement ...

Using Tomoauto: A Protocol for High-throughput Automated Cryo-electron Tomography

باستخدام Tomoauto: بروتوكول لإنتاجية عالية الآلي البرد الإلكترون التصوير المقطعي

Cryo-electron tomography (Cryo-ET) is a powerful three-dimensional (3-D) imaging technique for visualizing macromolecular complexes in their native ...

Generic Protocol for Optimization of Heterologous Protein Production Using Automated Microbioreactor Technology

بروتوكول عام للاستفادة المثلى إنتاج البروتين مغايرة باستخدام تقنية ميكروبيوريكتور الآلي

A core business in industrial biotechnology using microbial production cell factories is the iterative process of strain engineering and optimization of ...

Automated Slide Scanning and Segmentation in Fluorescently-labeled Tissues Using a Widefield High-content Analysis System

مسح الشرائح الآلي وتجزئة في الأنسجة المسمى فلوريسسينتلي باستخدام نظام تحليل ويديفيلد عالية-المحتوى

Automated slide scanning and segmentation of fluorescently-labeled tissues is the most efficient way to analyze whole slides or large tissue sections. ...

Comprehensive Evaluation of the Effectiveness and Safety of Placenta-Targeted Drug Delivery Using Three Complementary Methods

تقييم شامل لفعالية وسلامة إيصال الأدوية المستهدفة للمشيمة باستخدام ثلاثة أساليب تكميلية

No effective treatments currently exist for placenta-associated pregnancy complications, and developing strategies for the targeted delivery of drugs to ...

Use of High-Throughput Automated Microbioreactor System for Production of Model IgG1 in CHO Cells

نظام ميكروبيوريكتور لإنتاج IgG1 النموذجي في الخلايا شو الآلي استخدام الفائق

Automated microscale bioreactors (15 mL) can be a useful tool for cell culture engineers. They facilitate the simultaneous execution of a wide variety of ...

Purification and Analytics of a Monoclonal Antibody from Chinese Hamster Ovary Cells Using an Automated Microbioreactor System

تنقية وتحليل الأجسام المضادة أحادية النسيلة من خلايا المبيض الهامستر الصينية باستخدام نظام مفاعل ميكروبيوم الآلي

Monoclonal antibodies (mAbs) are one of the most popular and well-characterized biological products manufactured today. Most commonly produced using ...

Generation of Dynamical Environmental Conditions using a High-Throughput Microfluidic Device

توليد الظروف البيئية الديناميكية باستخدام جهاز Microfluidic عالي الإنتاجية

Mimicking in vivo environmental conditions is crucial for in vitro studies on complex life machinery. However, current techniques targeting live cells and ...