Name: process optimization using high throughput automated micro-bioreactors in chinese hamster ovary cell cultivation
Uploaded: 2020-05-18T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Process Optimization using High Throughput Automated Micro-Bioreactors in Chinese Hamster Ovary Cell Cultivation at JoVE.com

De auteurs willen het Bundesministerium für Bildung und Forschung (BMBF), het Federale Ministerie van Onderwijs en Onderzoek, Duitsland, en het BioProcessing-team van Sartorius Stedim Biotech GmbH, Duitsland, bedanken voor hun steun.

1. Precultuurprocedure
LET OP: Voor dit protocol worden recombinante CHO DG44-cellen met een levensvatbare celconcentratie van 1 x 107 cellen/mL gebruikt.
<ol><li>Ontdooi de flacon met 1,2 mL cellen op kamertemperatuur en breng de celsuspensie onmiddellijk over op een conische centrifugebuis van 15 mL met 10 mL koudzaadmedium.</li>
	<li>Centrifugeer de conische centrifugebuis 5 minuten op 190 x g en kamertemperatuur en gooi de supernatant weg.</li>
	<li>V...

<ol>
	<li>Walsh, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biopharmaceutical+benchmarks+2018.">Biopharmaceutical benchmarks 2018.</a> Nature Biotechnology. 36, 1136 (2018).</li><li>Kim, J. Y., Kim, Y., Lee, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CHO+cells+in+biotechnology+for+production+of+recombinant+proteins:+current+state+and+further+potential.">CHO cells in biotechnology for production of recombinant proteins: current state and further potential.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 93 (3), 917-930 (2012).</li><li>Lai, T., Yang, Y., Ng, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+Mammalian+cell+line+development+technologies+for+recombinant+protein+production.">Advances in Mammalian cell line development technologies for recombinant protein production.</a> Pharmaceuticals (Basel). 6 (5), 579-603 (2013).</li><li>Carlage, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+dynamic+changes+in+the+proteome+of+a+Bcl-XL+overexpressing+Chinese+hamster+ovary+cell+culture+during+exponential+and+stationary+phases.">Analysis of dynamic changes in the proteome of a Bcl-XL overexpressing Chinese hamster ovary cell culture during exponential and stationary phases.</a> Biotechnology Progress. 28 (3), 814-823 (2012).</li><li>Hacker, D. L., de Jesus, M., Wurm, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=25+years+of+recombinant+proteins+from+reactor-grown+cells+-+where+do+we+go+from+here.">25 years of recombinant proteins from reactor-grown cells - where do we go from here.</a> Biotechnology Advances. 27 (6), 1023-1027 (2009).</li><li>Shukla, A. A., Gottschalk, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-use+disposable+technologies+for+biopharmaceutical+manufacturing.">Single-use disposable technologies for biopharmaceutical manufacturing.</a> Trends in Biotechnology. 31 (3), 147-154 (2013).</li><li>Ao, S., Gelman, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Advances in electrical engineering and computational science. Lecture notes in electrical engineering. 39, (2009).</li><li>Bareither, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+disposable+small+scale+reactor+for+high+throughput+bioprocess+development:+a+proof+of+concept+study.">Automated disposable small scale reactor for high throughput bioprocess development: a proof of concept study.</a> Biotechnology and Bioengineering. 110 (12), 3126-3138 (2013).</li><li>Kang, Y., Ludwig, D. L., Balderes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+can+cell+culture+flocculation+offer+for+antibody+purification+processes.">What can cell culture flocculation offer for antibody purification processes.</a> Pharmaceutical Bioprocessing. 2 (6), 483-485 (2014).</li><li>Choe, W., Durgannavar, T. A., Chung, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fc-Binding+Ligands+of+Immunoglobulin+G:+An+Overview+of+High+Affinity+Proteins+and+Peptides.">Fc-Binding Ligands of Immunoglobulin G: An Overview of High Affinity Proteins and Peptides.</a> Materials (Basel). 9 (12), (2016).</li><li>Sch&#228;pper, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+microbioreactors+in+fermentation+process+development:+a+review.">Application of microbioreactors in fermentation process development: a review.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 395 (3), 679-695 (2009).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbioreactors+for+Bioprocess+Development.">Microbioreactors for Bioprocess Development.</a> Journal of the Association for Laboratory Automation. 12 (3), 143-151 (2007).</li><li>Cla&#223;en, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectroscopic+sensors+for+in-line+bioprocess+monitoring+in+research+and+pharmaceutical+industrial+application.">Spectroscopic sensors for in-line bioprocess monitoring in research and pharmaceutical industrial application.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 409 (3), 651-666 (2017).</li><li>Janoschek, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+to+transfer+a+fed-batch+platform+process+into+semi-perfusion+mode:+The+benefit+of+automated+small-scale+bioreactors+compared+to+shake+flasks+as+scale-down+model.">A protocol to transfer a fed-batch platform process into semi-perfusion mode: The benefit of automated small-scale bioreactors compared to shake flasks as scale-down model.</a> Biotechnology Progress. 35 (2), 2757 (2019).</li></ol>

Optimalisatie van het proces om de opbrengst te verhogen is van cruciaal belang in de biofarmaceutische industrie. Schudkolven kunnen mogelijk worden gebruikt voor het screenen van de stam; De bewaking van de procesparameters zoals pH en DO zijn echter niet beschikbaar in de kolven. De microbioreactoren hebben een voordeel omdat ze continue monitoring en controle van het proces mogelijk maken. Deze controlelussen in de microbioreactor bieden ook een toestand die vergelijkbaar is met die op grotere schaal en leveren dus r...

De wereldwijde biofarmaceutische markt was in 2018 meer dan US $250 miljard waard en is voortdurend gegroeid1. Farmaceutische bedrijven gaan af van de productie van kleine moleculaire geneesmiddelen naar biotechnologisch geproduceerde therapieën zoals recombinante eiwitten. Deze alleen al zijn verantwoordelijk voor een omzet van meer dan $ 150 miljard1. Zoogdiercellen worden nu op grote schaal gebruikt voor de productie van deze farmaceutische recombinante eiwitten. In de huidige periode worden onder de 68 goedgekeurde producten die door zoogdiercellen worden geproduceerd, 57 geproduceerd door Chinese hamstereierstokcellen (CHO)2. CHO cellen worden specifiek gebruikt voor de productie van recombinante eiwitten die post-translationele wijzigingen vereisen. Deze cellen hebben de voorkeur omdat ze in een suspensie groeien en daardoor reproduceerbare resultaten mogelijk maken in een serumvrij chemisch gedefinieerd medium3,4. Het andere voordeel van het gebruik van CHO-cellen is dat de glycanstructuur van het product lijkt op die van het menselijke monoklonale antilichaam (mAb) en resulteert in een hogere recombinante eiwitopbrengst en specifieke productiviteit als gevolg van genversterking5.
De opbrengst van recombinant CHO (rCHO) celcultuur is de afgelopen twee decennia met honderd keer toegenomen. Deze verbetering wordt toegeschreven aan de optimalisatie van de procesparameters, voedingsstrategie en ontwikkeling van serumvrij chemisch gedefinieerd medium6. Met de toename van de eisen van de farmaceutische producten neemt de druk toe op kosten- en tijdefficiëntie voor de ontwikkeling van het productieproces7. Om de druk te verminderen en tegelijkertijd de productkwaliteit te waarborgen, heeft de focus van de farmaceutische industrie op Quality by Design (QbD) verschoven. QbD wordt gebruikt om de productproductie en het proces te begrijpen. Een essentieel hulpmiddel dat in obd wordt gebruikt is het Ontwerp van Experiment (DOE). Het helpt het begrip van het proces te vergroten door de relatie tussen verschillende invoervariabelen en resulterende uitvoergegevens te onthullen. Het toepassen van de DOE-aanpak om het bioproces te optimaliseren is nuttig in de vroege stadia van het project bij het assimileren van de procesomstandigheden en het verhogen van de titer kwantiteit en kwaliteit. Deze aanpak is gunstig in vergelijking met de ouderwetse strategie: one-factor-at-a-time (OFAT). De statistische benaderingen van DOE met behulp van Klassieke, Shainin of Taguchi zijn veel beter dan de OFAT8.
Het proces en de media optimalisatie kan worden uitgevoerd in shake kolven. De kolven zijn relatief goedkoop. Het is echter niet mogelijk om parameters zoals temperatuur, pH en opgeloste zuurstof (DO) te regelen. Om deze nadelen te overwinnen, kunnen multifunctionele bench-top bioreactoren, variërend van werkvolume van 0,5 L tot 5 L, worden gebruikt. De reactoren zorgen voor een uitgebreide on-line monitoring en procescontrole. Het gebruik van de multifunctionele bioreactor is echter tijd- en arbeidsintensief. Om deze nadelen te overwinnen, wordt een nieuwe bioreactor voor eenmalig gebruik gebruikt die het uitgebreide proces van het monitoren van de bench-top bioreactor en het eenvoudig hanteren van de schudkolf combineert. Het screeningsysteem met een hoge doorvoer en de technologie voor eenmalig gebruik hebben bijgedragen tot een verbetering van de efficiëntie van procesprestaties en -ontwikkeling9.
In dit artikel worden de richtlijnen voor het laden van het recept in de geautomatiseerde microbioreactor (AMBR) software vermeld. De invloed van verschillende roerdersnelheden en pH op de levensvatbare celconcentratie (VCC) en titer wordt in de loop van dit experiment bestudeerd. Het experimentele resultaat en de analyse worden uitgevoerd met ontwerp van experimentsoftware MODDE 12. De productanalyses worden uitgevoerd in een hplc-systeem (hoge druk vloeistofchromatografie) met een Protein A-kolom. Het is gebaseerd op het principe dat het Fc-gebied van de mAb bindt aan eiwit A met hoge affiniteit10,11. Met deze methode is het mogelijk om de mAb te identificeren en te kwantificeren. De kwantificering vindt plaats boven de gemeten elutiepiekgebieden met 280 nm.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL disposable pipette tips, sterilized</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>A-0040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 mM L-glutamine</td>
			<td>Corning, Merck</td>
			<td>25-005-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 Well deep well plates</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>A-0038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL disposable pipette tips, sterilized</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>A-0039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ambr 15 automated microbioreactor system</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>001-2804</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ambr 15 Cell Culture 24 Disposable Bioreactors - Sparged</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>001-1B86</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antifoam C Emulsion</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>A8011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottle Top Sterile filter</td>
			<td>Corning, Merck</td>
			<td>CLS431474</td>
			<td>0.1 &#956;m pore size</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CEDEX Detergent (3% Mucosol)</td>
			<td>Roche Innovatis AG</td>
			<td>05-650-658-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counter</td>
			<td>Roche Innovatis AG</td>
			<td>05-650-216-001</td>
			<td>CEDEX HiRes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHO DG44 cell line</td>
			<td>Cellca, Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHOKO Feed Media A (FMA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>CR80025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHOKO Feed Media B (FMB)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>CR80026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHOKO Production Medium</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>CR80027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHOKO Stock Culture Meium</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>CR80028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chromaster high pressure liquid chromatography system</td>
			<td>VWR International</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Centrifuge tube</td>
			<td>Corning, Merck</td>
			<td>SIAL0790</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1070179026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>56-40-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPLC Vials</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>SUPLSU860181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Merck</td>
			<td>P4417</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein A Column</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1502226</td>
			<td>POROS&#8482; A 1.7&#160;mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Merck</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic anhydrous</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Merck</td>
			<td>7558-79-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>VWRVK940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>YSI</td>
			<td>YSI Inc</td>
			<td>2900D</td>
			<td>YSI 2900 Select</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

process optimization using high throughput automated micro-bioreactors in chinese hamster ovary cell cultivation

Optimalisatie van bioprocessen om de opbrengst van gewenste producten te verhogen is van belang in de biofarmaceutische industrie. Dit kan worden bereikt door stamselectie en door bioprocesparameters te ontwikkelen. Hiervoor zijn schudkolven gebruikt. Ze missen echter de mogelijkheid om de procesparameters zoals pH en opgeloste zuurstof (DO) te controleren. Deze beperking kan worden overwonnen met behulp van een geautomatiseerde micro-bioreactor. Deze bioreactoren bootsen de teelt op grotere schaal na. Een van de grote voordelen van dit systeem is de integratie van het Design of Experiment (DOE) in de software. Deze integratie maakt het mogelijk om een ontwerp te maken waarbij meerdere procesparameters tegelijkertijd kunnen worden gevarieerd. De kritische procesparameters en optimale bioprocesomstandigheden kunnen binnen de software worden geanalyseerd. De focus van het werk hier gepresenteerd is om de gebruiker kennis te laten maken met de stappen die betrokken zijn bij procesontwerp in de software en integratie van de DOE binnen de teelt run.

Een overzicht van de teelt die in deze studie wordt uitgevoerd, wordt gepresenteerd in figuur 2.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60577/60577fig02.jpg"> Figuur 2: Schematische weergave van de experimentele omstandigheden om pH- en roerstaafsnelheidsprofielen in de cultuurstations te testen. De figuur vertegenwoordigt ook de juiste lay-out om de schepen te plaatsen. <a href="https://www....

Watch this Scientific Journal Video about Process Optimization using High Throughput Automated Micro-Bioreactors in Chinese Hamster Ovary Cell Cultivation at JoVE.com

Process Optimization using High Throughput Automated Micro-Bioreactors in Chinese Hamster Ovary Cell Cultivation

Hier presenteren we een gedetailleerde procedure om een ontwerp van experiment uit te voeren in een geautomatiseerde micro-bioreactor gevolgd door celoogst en eiwitkwantificering met behulp van een Protein A-kolom.

Proces optimalisatie met behulp van high throughput geautomatiseerde micro-bioreactoren in de Chinese Hamster Eierstok celteelt

Optimization of bioprocesses to increase the yield of desired products is of importance in the biopharmaceutical industry. This can be achieved by strain ...

In deze video, de gebruikers geïntroduceerd in de micro bioreactor software met de planning en uitvoering van het ontwerp van experimenten of DOE. De analyzers hulpkleppen worden ook gedemonstreerd om de procesconditie te optimaliseren. De integratie van modet in de geautomatiseerde micro bioreactor software is officieel voor de data-analyse.Een groot aantal experimenten kan tegelijkertijd op kleine schaal worden gepland en uitgevoerd. Het aantonen van de procedure zal Tamanna Nagraik, een promovendus uit mijn laboratorium. Begin met de pre-cultuurprocedure in de hoofdteelt zoals beschreven in het tekstprotocol.Als u een nieuw experiment wilt maken, opent u de Amber-zelfcultuursoftware en klikt u in het tabblad introductie op nieuw experiment. Voer in het nieuwe experimenttabblad de naam van het experiment in, samen met de datum waarop het wordt uitgevoerd. Activeer de controlepost voor het kweekstation in de schepen die tijdens de teelt moeten worden gebruikt.De doe-tags automatisch worden ook geactiveerd voor een eenvoudige overgang tijdens de programmering van het DOE-experiment. Klik op volgende"om over te schakelen naar het volgende tabblad. Als u informatie wilt instellen over het toevoegen van media in het vat, samen met antischuim, entmateriaal, feed en glucose, activeert u de controlepost voor media-toevoegen.Definieer het plaattype, de naam en de locatie van de plaat met het medium. Klik op media toevoegen aan schepen. Voer het volume van de media in die in de vaten moeten worden toegevoegd.Definieer het in kaart brengen van mediaoverdracht van de plaat naar de schepen. Klik op volgende"om over te schakelen naar het volgende tabblad. Nadat de media-informatie in de software is ingevoerd, wijst u de teeltomstandigheden toe.Klik op conditie media, en vul de temperatuur, doel DO, bovenste PH limiet, en roeren RPM. Klik vervolgens op Op roeren"of naar beneden roeren. Als u de toevoeging van entmateriaal in de vaten wilt plaatsen, activeert u de celplaat toevoegen.Definieer het plaattype, de naam en de locatie van de plaat met het medium. Klik op cellen toevoegen aan bloedvaten. Voer het tijdstip van de inenting en het volume van de media toe te voegen aan de schepen.Definieer het pad dat de vloeistofafhandelaar bewandelt om de cel van de plaat naar de vaten over te brengen. Klik op volgende"om over te schakelen naar het volgende tabblad. Als u de toevoeging van voer, glucose en het antischuim wilt instellen, activeert u de invoerplaat toevoegen en definieert u het plaattype, de naam en de locatie.Klik op voer toevoegen aan vaartuigen en voer het volume van het voer in dat aan de vaten moet worden toegevoegd. Voeg afhankelijk van de teelt het aantal voertoevoelen toe. Voor deze teelt wordt de reactor na 72 uur elke 24 uur gevoed.Voeg handmatig de vertraging tussen de voeding door het invoeren van de gegevens in vertraging van cellen toegevoegd. De eerste dag van het voeden is na 72 uur inenting, de volgende is na 96 uur, enzovoort. Definieer het in kaart brengen van de overdracht van het voer van de plaat naar de vaten.Als u de bemonstering tijdens de teelt wilt instellen, activeert u de add sample plate"en definieert u het plaattype, de naam en de locatie. Controleer het monster van de vaartuigen"en voer het volume van het monster in dat uit de vaten moet worden verwijderd. Zorg ervoor dat het volume niet daalt tot onder de 10 mililiters tijdens het gehele verloop van de teelt.Voeg het aantal monsters toe dat tijdens de teelt moet worden genomen. Voeg, net als bij het voederen, de tijd toe waarop het monster uit het vaartuig wordt verwijderd voor elk invoermonsterpunt. Sla het proces op.Het is nu klaar voor executie. Tot slot, definieer het in kaart brengen van de overdracht van het monster van de vaten naar de plaat. Open de Amber 15 DOE Software.Klik op onderzoek"en selecteer nieuw. Voer de naam van het nieuwe DOE-onderzoek in het kader van de dialoog voor onderzoek in. Om een experiment toe te wijzen aan het DOE-onderzoek, opent u het recept dat is gemaakt om de verschillende parameters te bestuderen.Klik op bladeren en selecteer het betreffende experiment. De vaartuigtags zijn al in de kolom opgenomen. Als u de gewenste DOE-factor wilt definiëren, selecteert u de parameter en klikt u op de kolom met het label DOE-factor.Selecteer nieuwe"en voeg de eenheden, afkorting, evenals de onderste en bovengrens van de factoren. Definieer op het tabblad Antwoorden de waarden die in aanmerking moeten worden genomen voor de analyse van de gegevens. Klik op DOE-antwoorden bewerken en definieer de naam van het antwoord, de afkorting, eenheden en minimum- en maximumlimieten.Zodra de antwoorden zijn gedefinieerd, selecteert u de oranje variabele voor elke reactie en definieert u. Een reactie kan automatisch worden gekoppeld aan een microbe bioreactor variabele. Kies de vereiste variabele in de vervolgkeuzelijst.Wijzig de vergelijking voor elke reactie, afhankelijk van de vereiste. De keuzes tussen de minimale, maximale, eerste, laatste en gemiddelde gegevens. Als u een ontwerp wilt maken, gebruikt u de wizard Ontwerp starten om het type experimenteel ontwerp te selecteren en het aantal replica's en middelpunten toe te voegen of te verwijderen.Selecteer de doelstelling, die de keuze van ontwerpen en modellen bepaalt. Werkpakketten voltooien en maken die kunnen worden geïmporteerd in de Amber-zelfcultuursoftware zoals beschreven in het tekstprotocol. Klik op het tabblad experiment op doe-experiment maken en blader naar het werkpakket dat is gemaakt met de DOE-software.Initialiseer het proces door op Start te klikken. Zodra het experiment is uitgevoerd, exporteert u de gegevens met behulp van doe-resultaten exporteren. Het venster export doe-resultaten wordt geopend en de rijen met vermelding van het kweekschip en het station worden in de tabel vermeld.Selecteer de gewenste rijen en klik op geselecteerde rijen exporteren of exporteer experimentele gegevens om alle resultaten op te slaan en het bestand op te slaan voor verdere analyse. Importeer de gegevens in de Amber DOE-module door over te schakelen naar het tabblad resultaten en importresultaten te selecteren. Blader naar het gewenste gegevensbestand en klik op resultaten analyseren.De celgroei in de geautomatiseerde microbe bioreactoren is vergelijkbaar met de multiuse bioreactoren. Bij het vergelijken van de celconcentratie van drie verschillende schalen, wordt opgemerkt dat de 15 milliliter geautomatiseerde microbe bioreactor bootst de twee liter glas bioreactor. De resultaten van de schudkolf worden ook vergeleken om het voordeel van Amber tentoon te stellen.De invloed van verschillende roersnelheid en PH wordt bestudeerd in de geautomatiseerde microbe bioreactoren. Hier is een vergelijking van de levensvatbare celconcentratie, of VCC, en monoklonale antilichaamconcentratie in de verschillende microbe bioreactoren. De negatieve invloed van PH 6.9 op de VCC kan worden waargenomen.Bovendien verbeterde de groei van de cellen aanzienlijk onder de cultuur bij PH 7.3 in vergelijking met PH 7.1. Hier zijn de respons contour percelen van VCC en monoklonale antilichaam concentratie. De waarden zijn vergelijkbaar in de vaten met dezelfde PH- en verschillende roersnelheid, wat aangeeft dat de voor dit proces verzamelde roerrsnelheid geen significante invloed heeft op de procesoutput.Elke instructie die aan de machine wordt gegeven, moet zorgvuldig worden geschreven om fouten tijdens de uitvoering van het experiment te voorkomen. De software is flexibel en kan een aantal experimenten tegelijk uitvoeren, waardoor de tijd die nodig is om een proces te optimaliseren, wordt verminderd. Het ontwerp van experiment is nuttig op het gebied van bioproces, omdat de resultaten kennisgebaseerd procesbegrip geven, dat tot op zekere hoogte kan worden uitgebreid tot andere organismen.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Developing Custom Chinese Hamster Ovary-host Cell Protein Assays using Acoustic Membrane Microparticle Technology

Het ontwikkelen van aangepaste Chinese hamster ovarium-host Cell Protein Testen met behulp van akoestisch vlies micropartikel Technology

Custom assays for unique proteins are often limited to time consuming manual detection and quantitation techniques such as ELISA or Western blots due to ...

High Throughput Single-cell and Multiple-cell Micro-encapsulation

High Throughput Single-cel en Multiple-cel Micro-encapsulatie

Microfluidic encapsulation methods have been previously utilized to capture cells in picoliter-scale aqueous, monodisperse drops, providing confinement ...

Using Tomoauto: A Protocol for High-throughput Automated Cryo-electron Tomography

Met behulp van Tomoauto: Een protocol voor High-throughput Automated Cryo-electron tomography

Cryo-electron tomography (Cryo-ET) is a powerful three-dimensional (3-D) imaging technique for visualizing macromolecular complexes in their native ...

Generic Protocol for Optimization of Heterologous Protein Production Using Automated Microbioreactor Technology

Generic-Protocol voor optimalisatie van heterologe eiwitproductie met behulp van geautomatiseerde Microbioreactor technologie

A core business in industrial biotechnology using microbial production cell factories is the iterative process of strain engineering and optimization of ...

Automated Slide Scanning and Segmentation in Fluorescently-labeled Tissues Using a Widefield High-content Analysis System

Geautomatiseerde dia scannen en segmentatie in Fluorescently-geëtiketteerden weefsels met behulp van een analysesysteem Widefield High-inhoud

Automated slide scanning and segmentation of fluorescently-labeled tissues is the most efficient way to analyze whole slides or large tissue sections. ...

Comprehensive Evaluation of the Effectiveness and Safety of Placenta-Targeted Drug Delivery Using Three Complementary Methods

Uitgebreide evaluatie van de effectiviteit en veiligheid van Placenta-gerichte Drug Delivery met behulp van drie aanvullende methoden

No effective treatments currently exist for placenta-associated pregnancy complications, and developing strategies for the targeted delivery of drugs to ...

Use of High-Throughput Automated Microbioreactor System for Production of Model IgG1 in CHO Cells

Gebruik van High-Throughput geautomatiseerd Microbioreactor-systeem voor de productie van Model IgG1 in CHO cellen

Automated microscale bioreactors (15 mL) can be a useful tool for cell culture engineers. They facilitate the simultaneous execution of a wide variety of ...

Purification and Analytics of a Monoclonal Antibody from Chinese Hamster Ovary Cells Using an Automated Microbioreactor System

Zuivering en analyse van een monoklonaal antilichaam van Chinese Hamster Ovariumcellen met behulp van een geautomatiseerd Microbioreactor systeem

Monoclonal antibodies (mAbs) are one of the most popular and well-characterized biological products manufactured today. Most commonly produced using ...

Generation of Dynamical Environmental Conditions using a High-Throughput Microfluidic Device

Generatie van dynamische omgevingsomstandigheden met behulp van een microfluïdisch apparaat met hoge doorvoer

Mimicking in vivo environmental conditions is crucial for in vitro studies on complex life machinery. However, current techniques targeting live cells and ...