Name: process optimization using high throughput automated micro-bioreactors in chinese hamster ovary cell cultivation
Uploaded: 2020-05-18T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Process Optimization using High Throughput Automated Micro-Bioreactors in Chinese Hamster Ovary Cell Cultivation at JoVE.com

लेखक बुंदेसियम फ्यूर बिलडुंग एंड फोर्सचुंग (बीबीएएफ), संघीय शिक्षा और अनुसंधान मंत्रालय, जर्मनी और जर्मनी के सरटोरियस स्टेडिम बायोटेक जीएमबीएच, जर्मनी की बायोप्रोसेसिंग टीम को उनके समर्थन के लिए धन्यवाद देना चाहते हैं।

1. पूर्वसंस्कृति प्रक्रिया
नोट: 1 x 107 कोशिकाओं/mL की एक व्यवहार्य सेल एकाग्रता के साथ Recombinant चो DG44 कोशिकाओं को इस प्रोटोकॉल के लिए उपयोग किया जाता है ।
<ol><li>कमरे के तापमान के लिए कोशिकाओं के...

<ol>
	<li>Walsh, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biopharmaceutical+benchmarks+2018.">Biopharmaceutical benchmarks 2018.</a> Nature Biotechnology. 36, 1136 (2018).</li><li>Kim, J. Y., Kim, Y., Lee, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CHO+cells+in+biotechnology+for+production+of+recombinant+proteins:+current+state+and+further+potential.">CHO cells in biotechnology for production of recombinant proteins: current state and further potential.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 93 (3), 917-930 (2012).</li><li>Lai, T., Yang, Y., Ng, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+Mammalian+cell+line+development+technologies+for+recombinant+protein+production.">Advances in Mammalian cell line development technologies for recombinant protein production.</a> Pharmaceuticals (Basel). 6 (5), 579-603 (2013).</li><li>Carlage, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+dynamic+changes+in+the+proteome+of+a+Bcl-XL+overexpressing+Chinese+hamster+ovary+cell+culture+during+exponential+and+stationary+phases.">Analysis of dynamic changes in the proteome of a Bcl-XL overexpressing Chinese hamster ovary cell culture during exponential and stationary phases.</a> Biotechnology Progress. 28 (3), 814-823 (2012).</li><li>Hacker, D. L., de Jesus, M., Wurm, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=25+years+of+recombinant+proteins+from+reactor-grown+cells+-+where+do+we+go+from+here.">25 years of recombinant proteins from reactor-grown cells - where do we go from here.</a> Biotechnology Advances. 27 (6), 1023-1027 (2009).</li><li>Shukla, A. A., Gottschalk, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-use+disposable+technologies+for+biopharmaceutical+manufacturing.">Single-use disposable technologies for biopharmaceutical manufacturing.</a> Trends in Biotechnology. 31 (3), 147-154 (2013).</li><li>Ao, S., Gelman, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Advances in electrical engineering and computational science. Lecture notes in electrical engineering. 39, (2009).</li><li>Bareither, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+disposable+small+scale+reactor+for+high+throughput+bioprocess+development:+a+proof+of+concept+study.">Automated disposable small scale reactor for high throughput bioprocess development: a proof of concept study.</a> Biotechnology and Bioengineering. 110 (12), 3126-3138 (2013).</li><li>Kang, Y., Ludwig, D. L., Balderes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+can+cell+culture+flocculation+offer+for+antibody+purification+processes.">What can cell culture flocculation offer for antibody purification processes.</a> Pharmaceutical Bioprocessing. 2 (6), 483-485 (2014).</li><li>Choe, W., Durgannavar, T. A., Chung, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fc-Binding+Ligands+of+Immunoglobulin+G:+An+Overview+of+High+Affinity+Proteins+and+Peptides.">Fc-Binding Ligands of Immunoglobulin G: An Overview of High Affinity Proteins and Peptides.</a> Materials (Basel). 9 (12), (2016).</li><li>Sch&#228;pper, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+microbioreactors+in+fermentation+process+development:+a+review.">Application of microbioreactors in fermentation process development: a review.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 395 (3), 679-695 (2009).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbioreactors+for+Bioprocess+Development.">Microbioreactors for Bioprocess Development.</a> Journal of the Association for Laboratory Automation. 12 (3), 143-151 (2007).</li><li>Cla&#223;en, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectroscopic+sensors+for+in-line+bioprocess+monitoring+in+research+and+pharmaceutical+industrial+application.">Spectroscopic sensors for in-line bioprocess monitoring in research and pharmaceutical industrial application.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 409 (3), 651-666 (2017).</li><li>Janoschek, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+to+transfer+a+fed-batch+platform+process+into+semi-perfusion+mode:+The+benefit+of+automated+small-scale+bioreactors+compared+to+shake+flasks+as+scale-down+model.">A protocol to transfer a fed-batch platform process into semi-perfusion mode: The benefit of automated small-scale bioreactors compared to shake flasks as scale-down model.</a> Biotechnology Progress. 35 (2), 2757 (2019).</li></ol>

जैव दवा उद्योग में उपज बढ़ाने की प्रक्रिया का अनुकूलन महत्वपूर्ण है। शेक फ्लास्क संभवतः तनाव की स्क्रीनिंग के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है; हालांकि, पीएच और डीओ जैसे प्रक्रिया मापदंडों की निगरानी फ्ल?...

वैश्विक बायोफार्मा बाजार 2018 में 250 बिलियन अमेरिकी डॉलर से अधिक का था और लगातार1का विस्तार कर रहा है। दवा कंपनियां लघु आणविक दवाओं के उत्पादन से दूर जा रही हैं, जो जैव प्रौद्योगिकीय रूप से उत्पादित चिकित्सा विज्ञान जैसे पुनः संयोजन प्रोटीन के लिए हैं । ये अकेले 150अरबडॉलर से अधिक के राजस्व के लिए जिम्मेदार हैं 1. स्तनधारी कोशिकाओं को अब बड़े पैमाने पर इन दवा पुनः संयोजन प्रोटीन के उत्पादन के लिए उपयोग किया जाता है। वर्तमान अवधि में, स्तनधारी कोशिकाओं द्वारा उत्पादित ६८ अनुमोदित उत्पादों में से, ५७ चीनी हम्सटर अंडाशय कोशिकाओं (चो)2द्वारा उत्पादित कर रहे हैं । चो कोशिकाओं का उपयोग विशेष रूप से पुनः संयोजन प्रोटीन के उत्पादन के लिए किया जाता है जिसके लिए ट्रांसलेशनल संशोधनों की आवश्यकता होती है। इन कोशिकाओं को प्राथमिकता दी जाती है क्योंकि ये निलंबन में वृद्धि करते हैं और इस प्रकार रासायनिक रूप से परिभाषित मध्यम3,4में प्रजनन योग्य परिणाम सक्षम होते हैं । चो कोशिकाओं का उपयोग करने का अन्य लाभ यह है कि उत्पाद की ग्लाइकन संरचना मानव मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (एमएबी) से मिलती-जुलती है और इसके परिणामस्वरूप जीन प्रवर्धन5के कारण उच्च पुनर्संयोजन प्रोटीन उपज और विशिष्ट उत्पादकता होती है।
पिछले दो दशकों में रिकॉम्बिनेंट चो (rCHO) सेल कल्चर की यील्ड में सौ गुना की बढ़ोतरी हुई है । इस सुधार को प्रक्रिया मापदंडों के अनुकूलन, खिला रणनीति और सीरम मुक्त रासायनिक परिभाषित मध्यम6के विकास के लिए जिम्मेदार ठहराया गया है । दवा उत्पादों की आवश्यकताओं में वृद्धि के साथ, उत्पादन प्रक्रिया7के विकास के लिए लागत और समय दक्षता पर दबाव बढ़ जाता है। उत्पाद की गुणवत्ता को आश्वस्त करते हुए दबाव को कम करने के लिए डिजाइन (QbD) द्वारा गुणवत्ता पर दवा उद्योग के ध्यान को पुनः निर्देशित किया है। QBD का उपयोग उत्पाद उत्पादन के साथ-साथ प्रक्रिया को समझने के लिए किया जाता है। ओडीडी में उपयोग किया जाने वाला एक महत्वपूर्ण उपकरण प्रयोग का डिजाइन (डीओई) है। यह विभिन्न इनपुट चर और परिणामस्वरूप आउटपुट डेटा के बीच संबंध ों को प्रकट करके प्रक्रिया की समझ बढ़ाने में मदद करता है। प्रक्रिया की स्थिति को आत्मसात करने और टिटर मात्रा और गुणवत्ता में वृद्धि करने में परियोजना के शुरुआती चरणों के दौरान जैव प्रक्रिया को अनुकूलित करने के लिए डीओई दृष्टिकोण लागू करना फायदेमंद है। पुराने जमाने की रणनीति की तुलना में यह दृष्टिकोण फायदेमंद है: एक कारक-एट-ए-टाइम (OFAT)। शास्त्रीय, शाइनिन या तागुची का उपयोग करके डीओई के सांख्यिकीय दृष्टिकोणओएटी 8से कहीं बेहतर हैं।
प्रक्रिया और मीडिया अनुकूलन शेक फ्लास्क में किया जा सकता है। फ्लास्क अपेक्षाकृत सस्ती हैं। हालांकि, तापमान, पीएच और घुलित ऑक्सीजन (डीओ) जैसे मापदंडों को नियंत्रित करना संभव नहीं है। इन कमियों को दूर करने के लिए, 0.5 एल से 5 एल की कार्य मात्रा से लेकर बहुउपयोग बेंच-टॉप बायोरिएक्टरों का उपयोग किया जा सकता है। रिएक्टर एक व्यापक ऑन लाइन निगरानी और प्रक्रिया नियंत्रण प्रदान करते हैं । हालांकि, मल्टीयूज बायोरिएक्टर का उपयोग समय और श्रम गहन है। इन नुकसानों को दूर करने के लिए, एक उपन्यास एकल उपयोग बायोरिएक्टर जो बेंच-टॉप बायोरिएक्टर की निगरानी की व्यापक प्रक्रिया को जोड़ती है और शेक फ्लास्क की आसान हैंडलिंग का उपयोग किया जाता है। उच्च थ्रूपुट स्क्रीनिंग प्रणाली और एकल उपयोग प्रौद्योगिकी ने प्रक्रिया प्रदर्शन और विकास9की दक्षता को बढ़ाने में योगदान दिया है।
इस आर्टिकल में ऑटोमेटेड माइक्रो बायोरिएक्टर (एएमबीआर) सॉफ्टवेयर में रेसिपी लोड करने के दिशा-निर्देश लिस्टेड हैं। इस प्रयोग के दौरान व्यवहार्य सेल एकाग्रता (वीसीसी) और टिटर पर विभिन्न सरगर्मी गति और पीएच के प्रभाव का अध्ययन किया जाता है। प्रयोग सॉफ्टवेयर MODDE 12 के डिजाइन के साथ प्रयोगात्मक परिणाम और विश्लेषण किया जाता है। उत्पाद एनालिटिक्स प्रोटीन ए कॉलम के साथ हाई प्रेशर लिक्विड क्रोमेटोग्राफी (एचपीएलसी) सिस्टम में किया जाता है। यह इस सिद्धांत पर आधारित है कि एमएबी का एफसी क्षेत्र प्रोटीन ए को उच्च आत्मीयता10,11के साथ बांधता है । इस विधि से, एमएबी की पहचान करना और उसकी मात्रा निर्धारित करना संभव है। क्वांटिफिकेशन 280 एनएम पर मापा एलुशन पीक क्षेत्रों पर किया जाता है।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL disposable pipette tips, sterilized</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>A-0040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 mM L-glutamine</td>
			<td>Corning, Merck</td>
			<td>25-005-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 Well deep well plates</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>A-0038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL disposable pipette tips, sterilized</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>A-0039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ambr 15 automated microbioreactor system</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>001-2804</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ambr 15 Cell Culture 24 Disposable Bioreactors - Sparged</td>
			<td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td>001-1B86</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antifoam C Emulsion</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>A8011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottle Top Sterile filter</td>
			<td>Corning, Merck</td>
			<td>CLS431474</td>
			<td>0.1 &#956;m pore size</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CEDEX Detergent (3% Mucosol)</td>
			<td>Roche Innovatis AG</td>
			<td>05-650-658-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counter</td>
			<td>Roche Innovatis AG</td>
			<td>05-650-216-001</td>
			<td>CEDEX HiRes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHO DG44 cell line</td>
			<td>Cellca, Sartorius Stedim Biotech GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHOKO Feed Media A (FMA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>CR80025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHOKO Feed Media B (FMB)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>CR80026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHOKO Production Medium</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>CR80027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHOKO Stock Culture Meium</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Merck</td>
			<td>CR80028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chromaster high pressure liquid chromatography system</td>
			<td>VWR International</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Centrifuge tube</td>
			<td>Corning, Merck</td>
			<td>SIAL0790</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1070179026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>56-40-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPLC Vials</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>SUPLSU860181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Merck</td>
			<td>P4417</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein A Column</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>1502226</td>
			<td>POROS&#8482; A 1.7&#160;mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Merck</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic anhydrous</td>
			<td>Sigma-Aldrich,Merck</td>
			<td>7558-79-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>VWRVK940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>YSI</td>
			<td>YSI Inc</td>
			<td>2900D</td>
			<td>YSI 2900 Select</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

process optimization using high throughput automated micro-bioreactors in chinese hamster ovary cell cultivation

बायोफार्मा उद्योग में वांछित उत्पादों की उपज बढ़ाने के लिए बायोप्रोसेस का अनुकूलन महत्वपूर्ण है। यह तनाव चयन और जैव प्रक्रिया मापदंडों को विकसित करके प्राप्त किया जा सकता है। इसके लिए शेक फ्लास्क का इस्तेमाल किया गया है। हालांकि, उनके पास पीएच और घुलित ऑक्सीजन (डीओ) जैसे प्रक्रिया मापदंडों को नियंत्रित करने की क्षमता की कमी है। इस सीमा को एक स्वचालित माइक्रो-बायोरिएक्टर की मदद से दूर किया जा सकता है। ये बायोरिएक्टर बड़े पैमाने पर खेती की नकल करते हैं। इस प्रणाली के प्रमुख फायदों में से एक सॉफ्टवेयर में डिजाइन ऑफ एक्सपेरिमेंट (डीओई) का एकीकरण है। यह एकीकरण एक डिजाइन स्थापित करने में सक्षम बनाता है जहां कई प्रक्रिया मापदंडों को एक साथ भिन्न किया जा सकता है। सॉफ्टवेयर के भीतर महत्वपूर्ण प्रक्रिया मापदंडों और इष्टतम जैव प्रक्रिया स्थितियों का विश्लेषण किया जा सकता है। यहां प्रस्तुत काम का ध्यान उपयोगकर्ता को सॉफ्टवेयर में प्रक्रिया डिजाइन में शामिल कदमों और खेती चलाने के भीतर डीओई के समावेश से परिचित कराना है।

इस अध्ययन में की गई खेती का अवलोकन चित्र ा 2में प्रस्तुत किया गया है ।
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60577/60577fig02.jpg"> चित्रा 2: संस्कृति स्टेशनों में पीएच और रटर गति प्रोफाइल का परी...

Watch this Scientific Journal Video about Process Optimization using High Throughput Automated Micro-Bioreactors in Chinese Hamster Ovary Cell Cultivation at JoVE.com

Process Optimization using High Throughput Automated Micro-Bioreactors in Chinese Hamster Ovary Cell Cultivation

यहां, हम एक स्वचालित माइक्रो-बायोरिएक्टर में प्रयोग के डिजाइन को चलाने के लिए एक विस्तृत प्रक्रिया पेश करते हैं जिसके बाद प्रोटीन ए कॉलम का उपयोग करके सेल हार्वेस्ट और प्रोटीन क्वांटिफिकेशन होता है।

चीनी हम्सटर अंडाशय सेल खेती में उच्च थ्रूपुट स्वचालित माइक्रो-बायोरिएक्टरों का उपयोग करके अनुकूलन प्रक्रिया

Optimization of bioprocesses to increase the yield of desired products is of importance in the biopharmaceutical industry. This can be achieved by strain ...

इस वीडियो में, उपयोगकर्ताओं ने प्रयोगों या डीओई के डिजाइन की योजना और निष्पादन के साथ माइक्रो बायोरिएक्टर सॉफ्टवेयर में पेश किया। प्रक्रिया की स्थिति को अनुकूलित करने के लिए एनालाइजर सहायक वाल्व का भी प्रदर्शन किया जाता है। स्वचालित माइक्रो बायोरिएक्टर सॉफ्टवेयर में मॉडेट का समावेश डेटा विश्लेषण के लिए आधिकारिक रहा है।बड़ी संख्या में प्रयोगों की योजना बनाई जा सकती है और छोटे पैमाने पर एक साथ निष्पादित किया जा सकता है। प्रक्रिया का प्रदर्शन तमन्ना नागराइक, मेरी प्रयोगशाला से पीएचडी की छात्रा करेंगी । पाठ प्रोटोकॉल में वर्णित मुख्य खेती में पूर्व-संस्कृति प्रक्रिया के साथ शुरू करें।एक नया प्रयोग बनाने के लिए, एंबर आत्म संस्कृति सॉफ्टवेयर खोलने के लिए, और परिचय टैब में, पर क्लिक करें, नया प्रयोग बनाएं । नए प्रयोग टैब में प्रयोग का नाम उस तारीख के साथ दर्ज करें, जिस तारीख को इसे संचालित किया जाएगा । खेती के दौरान उपयोग किए जाने वाले जहाजों में संस्कृति स्टेशन के लिए चौकी को सक्रिय करें।डीओई प्रयोग की प्रोग्रामिंग के दौरान एक आसान संक्रमण के लिए ऑटो-ऐड डीओई टैग भी सक्रिय हो जाएंगे। अगले टैब पर स्विच करने के लिए "अगले पर क्लिक करें। पोत में मीडिया के अलावा के बारे में जानकारी निर्धारित करने के लिए, विरोधी फोम, inoculum, फ़ीड, और ग्लूकोज के साथ, जोड़ने मीडिया प्लेट "चौकी को सक्रिय करें ।माध्यम युक्त प्लेट के प्रकार, नाम और स्थान को परिभाषित करें। जहाजों के लिए ऐड मीडिया पर क्लिक करें । जहाजों में जोड़े जाने वाले मीडिया की मात्रा दर्ज करें।प्लेट से जहाजों के लिए मीडिया हस्तांतरण के मानचित्रण को परिभाषित करें। अगले टैब पर स्विच करने के लिए "अगले पर क्लिक करें। मीडिया की जानकारी सॉफ्टवेयर में फीड होने के बाद खेती की शर्तें असाइन करें।कंडीशन मीडिया पर क्लिक करें, और तापमान, लक्ष्य डीओ, ऊपरी पीएच सीमा, और सरगर्मी आरपीएम में भरें। फिर सरगर्मी "या नीचे सरगर्मी पर क्लिक करें। जहाजों में इनोकुलम के अलावा सेट करने के लिए, सेल प्लेट जोड़ें सक्रिय करें।माध्यम युक्त प्लेट के प्रकार, नाम और स्थान को परिभाषित करें। जहाजों के लिए कोशिकाओं को जोड़ने पर क्लिक करें । टीका के समय दर्ज करें और मीडिया की मात्रा जहाजों में जोड़ा जाएगा।प्लेट से जहाजों को सेल स्थानांतरित करने के लिए तरल हैंडलर द्वारा कूच पथ को परिभाषित करें। अगले टैब पर स्विच करने के लिए "अगले पर क्लिक करें। फ़ीड, ग्लूकोज और एंटी-फोम के अलावा सेट करने के लिए, ऐड फीड प्लेट को सक्रिय करें, और प्लेट प्रकार, नाम और स्थान को परिभाषित करें।जहाजों में फ़ीड जोड़ने पर क्लिक करें, और जहाजों में जोड़े जाने वाले फ़ीड की मात्रा दर्ज करें। खेती के आधार पर, फ़ीड अतिरिक्त की संख्या जोड़ें। इस खेती के लिए रिएक्टर को हर 24 घंटे में 72 घंटे के बाद खिलाया जाता है।मैन्युअल रूप से जोड़ा कोशिकाओं से देरी में डेटा में प्रवेश करके खिला के बीच समय देरी जोड़ें । भोजन का पहला दिन टीका के 72 घंटे के बाद होता है, अगला 96 घंटे के बाद होता है, और इसी तरह। प्लेट से जहाजों के लिए फ़ीड के हस्तांतरण के मानचित्रण को परिभाषित करें।खेती के दौरान नमूना सेट करने के लिए, ऐड सैंपल प्लेट को सक्रिय करें "और प्लेट प्रकार, नाम और स्थान को परिभाषित करें। जहाजों से नमूना लेने की जांच करें "और जहाजों से हटाए जाने वाले नमूने की मात्रा दर्ज करें। सुनिश्चित करें कि खेती के पूरे पाठ्यक्रम के दौरान मात्रा 10 मिलीलीटर से नीचे कम न हो।खेती के दौरान लिए जाने वाले नमूनों की संख्या जोड़ें। खिलाने के समान, प्रत्येक इनपुट नमूना बिंदु के लिए पोत से निकाले जा रहे नमूने का समय जोड़ें। प्रक्रिया को बचाएं।अब इसके निष्पादन की तैयारी है। अंत में, जहाजों से प्लेट में नमूने के हस्तांतरण की मैपिंग को परिभाषित करें। एंबर 15 डीओई सॉफ्टवेयर खोलें।जांच पर क्लिक करें "और नए का चयन करें। नई डीओई जांच का नाम बनाएं जांच "डायलॉग बॉक्स में दर्ज करें। डीओई जांच के लिए एक प्रयोग आवंटित करने के लिए, विभिन्न मापदंडों का अध्ययन करने के लिए बनाई गई नुस्खा खोलें।ब्राउज़ पर क्लिक करें, और संबंधित प्रयोग का चयन करें। पोत टैग पहले से ही कॉलम में सूचीबद्ध हैं। वांछित डीओई कारक को परिभाषित करने के लिए, पैरामीटर का चयन करें और लेबल किए गए कॉलम, डीओई कारक पर क्लिक करें।नए का चयन करें "और इकाइयों, संक्षिप्त नाम, साथ ही कारकों की निचली और ऊपरी सीमा जोड़ें। प्रतिक्रियाओं टैब में, डेटा के विश्लेषण के लिए विचार किए जाने वाले मूल्यों को परिभाषित करें। डीओई प्रतिक्रियाओं को संपादित करें, और प्रतिक्रिया, संक्षिप्त नाम, इकाइयों और न्यूनतम और अधिकतम सीमाओं के नाम को परिभाषित करें।एक बार प्रतिक्रियाओं को परिभाषित कर रहे हैं, प्रत्येक प्रतिक्रिया के लिए एंबर चर का चयन करें, और परिभाषित । एक प्रतिक्रिया स्वचालित रूप से एक माइक्रोब बायोरिएक्टर चर के साथ जुड़ा हो सकता है। ड्रॉपडाउन सूची से आवश्यक चर चुनें।आवश्यकता के आधार पर प्रत्येक प्रतिक्रिया के लिए समीकरण बदलें। न्यूनतम, अधिकतम, पहले, अंतिम और औसत डेटा के बीच विकल्प। एक डिजाइन बनाने के लिए, प्रयोगात्मक डिजाइन के प्रकार का चयन करने के लिए और प्रतिकृति और केंद्र बिंदुओं की संख्या को जोड़ने या हटाने के लिए स्टार्ट डिजाइन जादूगर का उपयोग करें।उद्देश्य का चयन करें, जो डिजाइन और मॉडल की पसंद निर्धारित करता है। खत्म करें और काम के पैकेट बनाएं जिन्हें टेक्स्ट प्रोटोकॉल में वर्णित एंबर सेल्फ-कल्चर सॉफ्टवेयर में आयात किया जा सकता है। प्रयोग टैब में, डीओई प्रयोग बनाने पर क्लिक करें, और डीओई सॉफ्टवेयर का उपयोग करके बनाए गए कार्य पैकेट के लिए ब्राउज़ करें।स्टार्ट पर क्लिक करके प्रक्रिया को शुरू करें। एक बार प्रयोग निष्पादित हो जाने के बाद, निर्यात डीओई परिणामों का उपयोग करके डेटा का निर्यात करें। निर्यात डो परिणाम "खिड़की खुलता है, और संस्कृति पोत और स्टेशन का संकेत पंक्तियों मेज में सूचीबद्ध हैं ।वांछित पंक्तियों का चयन करें, और निर्यात चयनित पंक्तियों पर क्लिक करें "या निर्यात प्रयोगात्मक डेटा" सभी परिणामों को स्टोर करने और आगे के विश्लेषण के लिए फ़ाइल को बचाने के लिए । परिणामों पर स्विच करके और आयात परिणामों का चयन करके एंबर डीओई मॉड्यूल में डेटा आयात करें। वांछित डेटा फ़ाइल के लिए ब्राउज़ करें, और परिणामों का विश्लेषण करने पर क्लिक करें।स्वचालित माइक्रोब बायोरिएक्टर में सेल वृद्धि बहुउपयोग बायोरिएक्टर के साथ तुलनीय है। तीन अलग-अलग पैमानों से सेल एकाग्रता की तुलना में, यह देखा गया है कि 15 मिलीलीटर स्वचालित माइक्रोब बायोरिएक्टर दो लीटर ग्लास बायोरिएक्टर की नकल करता है। शेक फ्लास्क से परिणाम भी एंबर के लाभ का प्रदर्शन करने के लिए तुलना कर रहे हैं ।स्वचालित माइक्रोब बायोरिएक्टरों में विभिन्न हलचल गति और पीएच के प्रभाव का अध्ययन किया जाता है। यहां दिखाया गया है कि व्यवहार्य कोशिका एकाग्रता, या वीसीसी, और विभिन्न माइक्रोब बायोरिएक्टरों में मोनोक्लोनल एंटीबॉडी एकाग्रता की तुलना की जाती है। वीसीसी पर पीएच 6.9 का नकारात्मक प्रभाव देखा जा सकता है।इसके अतिरिक्त, पीएच 7.1 की तुलना में पीएच 7.3 पर संस्कृति के तहत कोशिकाओं की वृद्धि में काफी सुधार हुआ। यहां दिखाया गया है वीसीसी और मोनोक्लोनल एंटीबॉडी एकाग्रता के प्रतिक्रिया समोच्च भूखंड हैं। मान एक ही पीएच और विभिन्न उभारक गति के साथ जहाजों में तुलनीय हैं, यह दर्शाता है कि इस प्रक्रिया के लिए एकत्र की गई उभारक गति का प्रक्रिया उत्पादन पर कोई महत्वपूर्ण प्रभाव नहीं पड़ता है।प्रयोग के निष्पादन के दौरान त्रुटि से बचने के लिए मशीन को दिए गए हर निर्देश को ध्यान से लिखा जाना चाहिए। सॉफ्टवेयर लचीला है और यह एक बार में कई प्रयोग चला सकता है, जिससे किसी प्रक्रिया को अनुकूलित करने में लगने वाले समय की मात्रा कम हो जाती है। प्रयोग का डिजाइन बायोप्रोसेस के क्षेत्र में उपयोगी है, क्योंकि परिणाम ज्ञान आधारित प्रक्रिया समझ देते हैं, जिसे कुछ हद तक अन्य जीवों तक बढ़ाया जा सकता है।

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Developing Custom Chinese Hamster Ovary-host Cell Protein Assays using Acoustic Membrane Microparticle Technology

विकासशील कस्टम चीनी हैम्स्टर अंडाशय मेजबान सेल प्रोटीन ध्वनिक झिल्ली microparticle प्रौद्योगिकी का उपयोग कर Assays

Custom assays for unique proteins are often limited to time consuming manual detection and quantitation techniques such as ELISA or Western blots due to ...

High Throughput Single-cell and Multiple-cell Micro-encapsulation

उच्च Throughput एकल - कक्ष और एकाधिक - कक्ष सूक्ष्म encapsulation

Microfluidic encapsulation methods have been previously utilized to capture cells in picoliter-scale aqueous, monodisperse drops, providing confinement ...

Using Tomoauto: A Protocol for High-throughput Automated Cryo-electron Tomography

Tomoauto का प्रयोग: एक प्रोटोकॉल उच्च throughput स्वचालित क्रायो इलेक्ट्रॉन टोमोग्राफी के लिए

Cryo-electron tomography (Cryo-ET) is a powerful three-dimensional (3-D) imaging technique for visualizing macromolecular complexes in their native ...

Generic Protocol for Optimization of Heterologous Protein Production Using Automated Microbioreactor Technology

Heterologous प्रोटीन उत्पादन के अनुकूलन के लिए जेनेरिक प्रोटोकॉल स्वचालित Microbioreactor प्रौद्योगिकी का उपयोग

A core business in industrial biotechnology using microbial production cell factories is the iterative process of strain engineering and optimization of ...

Automated Slide Scanning and Segmentation in Fluorescently-labeled Tissues Using a Widefield High-content Analysis System

स्वचालित स्लाइड स्कैनिंग और एक Widefield उच्च सामग्री विश्लेषण प्रणाली का उपयोग कर फ्लोरोसेंट-लेबल ऊतकों में विभाजन

Automated slide scanning and segmentation of fluorescently-labeled tissues is the most efficient way to analyze whole slides or large tissue sections. ...

Comprehensive Evaluation of the Effectiveness and Safety of Placenta-Targeted Drug Delivery Using Three Complementary Methods

तीन पूरक विधियों का उपयोग करके अपरा-लक्षित औषध सुपुर्दगी की प्रभावशीलता और सुरक्षा का व्यापक मूल्यांकन

No effective treatments currently exist for placenta-associated pregnancy complications, and developing strategies for the targeted delivery of drugs to ...

Use of High-Throughput Automated Microbioreactor System for Production of Model IgG1 in CHO Cells

चो कोशिकाओं में मॉडल IgG1 के उत्पादन के लिए उच्च प्रवाह स्वचालित Microbioreactor प्रणाली का उपयोग

Automated microscale bioreactors (15 mL) can be a useful tool for cell culture engineers. They facilitate the simultaneous execution of a wide variety of ...

Purification and Analytics of a Monoclonal Antibody from Chinese Hamster Ovary Cells Using an Automated Microbioreactor System

चीनी हम्सटर अंडाशय कोशिकाओं से एक मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का शोधन और विश्लेषण एक स्वचालित माइक्रोबायोरिएक्टर सिस्टम का उपयोग करते हुए

Monoclonal antibodies (mAbs) are one of the most popular and well-characterized biological products manufactured today. Most commonly produced using ...

Generation of Dynamical Environmental Conditions using a High-Throughput Microfluidic Device

एक उच्च थ्रूपुट माइक्रोफ्लुइडिक डिवाइस का उपयोग करके गतिशील पर्यावरणीय स्थितियों का उत्पादन

Mimicking in vivo environmental conditions is crucial for in vitro studies on complex life machinery. However, current techniques targeting live cells and ...